CD71荧光抗体和PI染色的微核流式细胞术检测研究

目的探索CD71荧光抗体和PI染色的微核流式细胞术自动化检测方法。方法采用-85℃甲醇固定细胞,CD71荧光抗体和PI染色,以伯氏疟原虫感染小鼠血细胞为微核模式生物调校流式细胞仪,建立微核流式细胞术检测方法,并对秋水仙素(COL)诱导的小鼠外周血含微核网织红细胞进行了检测。结果所建立的方法能明确分辨外周血含与不含微核的网织红细胞和成熟红细胞,COL处理小鼠的外周血含微核网织红细胞率呈明显的剂量依赖性升高,流式细胞术与显微镜检测的外周血含微核网织红细胞率有良好相关性(r=098)。结论微核流式细胞术检测方法能准确地检测小鼠外周血含微核网织红细胞。     

镉染毒小鼠网织红细胞微核流式细胞术研究

目的通过流式细胞术(FCM)检测外周血微核方法，研究氯化镉(CdCl2)染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率，评价流式细胞术在微核检测中的应用价值及探讨氯化镉的致突变作用。方法采用转铁蛋白受体CD71荧光抗体和碘化丙啶(PI)染色，并以疟原虫感染小鼠外周血红细胞为微核模式生物调校流式细肛仪．检测10～60mg／kg环磷酰胺染毒和50～400μg／kg氯化镉染毒对小鼠的外周血含微核网织红细胞率的变化。结果不同剂量环磷酰胺染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率和骨髓含微核网织红细胞率均明显高于对照组小鼠，且二者之间相关性良好(r=0．955)；不同剂量氯化镉染毒小鼠外周血含微核网织红细胞率未见明显升高。结论FCM测定外周血含微核网织红细胞率可替代传统显微镜检查骨髓含微核网织红细胞率用于遗传毒性评价；在本研究条件下未观察到氯化镉有明显的诱导小鼠外周血含微核网织红细胞形成的作用。     

体外微核技术及其进展

近年来，随着分子生物学技术（荧光原位杂交、抗着丝粒抗体染色等）的引进和自动化检测等研究的完善，大大拓展了微核试验的检测和应用范围。微核试验从早期建立的只能判断染色体断片而不能区分其来源的常规试验现已发展成为不仅能检测细胞微核率，还能分析微核来源为非整倍体毒剂还是断裂剂，并快速精确检测到非整倍体等多种遗传损害终点的新微核试验，并且其方法也由体内发展到体外。体外微核技术的研究将具有广阔的应用前景。     

氯化镍染毒对小鼠外周血网织红细胞微核形成的影响

目的研究氯化镍(NiCl2)诱导小鼠外周血网织红细胞微核形成的作用.方法将30只健康的成年雄性NIH小鼠随机分为6组,设生理盐水对照组、秋水仙素阳性对照组(剂量为0.75 mg/kg)、环磷酰胺阳性对照组(剂量为40.0mg/kg)和NiCl2染毒组(剂量分别为5.0、10.0、20.0 mg/kg),分2次腹腔注射染毒,间隔24 h,每次按0.1 ml/10 g体重腹腔注射.采用转铁蛋白受体荧光抗体和碘化丙碇染色,以疟原虫感染小鼠外周血红细胞为微核生物模型,调校流式细胞仪,检测秋水仙素、环磷酰胺和0、5.0、10.0、20.0 mg/kg NiCl2染毒后小鼠外周血含微核网织红细胞率的变化.结果秋水仙素和环磷酰胺染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率均明显高于对照组小鼠(P＜0.01),但不同剂量NiCl2染毒小鼠外周血含微核网织红细胞率均未见明显升高(P＞0.05).结论该研究条件下未观察到氯化镍有明显的诱导小鼠外周血网织红细胞微核形成的作用.     

秋水仙素和环磷酰胺诱发微核的多色荧光原位杂交研究

目的 分析秋水仙素和环磷酰胺诱导的小鼠骨髓红细胞微核的染色体组成。方法 用着丝粒和端粒ＤＮＡ探针多色荧光原位杂交检测微核的染色体组成。结果 水仙素诱导的微核８３．５％既含着丝粒信号又含端粒信号,环磷酰胺诱导的微核７４．５％只含端粒信号。结论秋水仙素诱导的微核主要由整条染色体组成,环磷酰胺诱导的微核则主要由染色体继片组成。着丝粒和端粒ＤＮＡ探针多色荧光原位杂交是一种较为精确的分析微核染色体组成的方法     

不同采样时间小鼠网织红细胞微核率变化的流式细胞术研究

目的：应用流式细胞术研究两次给药后不同采样时间小鼠外周血网织红细胞微核率的变化，探讨流式细胞术检测微核方法的应用性。方法：NIH小鼠两次腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide，CP)40mg／kg BW(两次给药间隔24h)，于第二次给药后6、12、18、24、30、36、48h和72h采外周血-85℃甲醇固定、PI和CD71染色进行流式细胞术检测，每个样本分析10000个网织细胞，同时进行外周血涂片，Giemsa染色显微镜检测，每个样本分析1000个网织红细胞。结果：两次CP给药后6h即可观察到网织红细胞微核率增高，分别在两次给药后24h达到高峰，此后逐渐下降。应用流式细胞术检测外周血网织红细胞微核与外周血涂片显微镜检测敏感性相同，两者并具有良好的相关性。流式细胞术检测方法具有高通量、省时、省力等优势。结论：在检测化合物遗传毒性方面，流式细胞术检测方法值得推广应用。     

Y染色体微缺失和精子染色体非整倍体与不育关系的探讨

目的：探讨Y染色体AZF区微缺失和精子染色体非整倍体与男性不育的关系。方法：采用多重PCR-凝胶电泳技术对32例男性不育患者AZF4个区15个序列标签位点（STS）进行微缺失检测,并应用X、Y、18号染色体探针对其中16例弱精子症患者和8例健康男性进行三色荧光原位杂交,分析精子染色体非整倍体。结果：32例患者中4例在AZF区有微缺失,缺失率12.5%。病例组计数47691个精子,对照组计数28952个精子,杂交率分别为99.53%和99.93%。非整倍体主要类型为YY18、XX18、XY18、Y1818和X1818。病例组依次为（0.102±0.154）%、（0.103±0.073）%、（0.273±0.278）%、（0.381±0.493）%和（0.318±0.585）%,非整倍体率为5.64%;对照组则为（0.050±0.040）%、（0.030±0.031）%、（0.098±0.080）%、（0.093±0.087）%和（0.085±0.106）%,非整倍体率为4.28%,两组之间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：Y染色体AZF区域发生微缺失和精子染色体非整倍体增加可能是男性不育的重要病因之一。     

基于流式细胞术的大鼠外周血网织红细胞微核试验方法的建立

目的建立基于流式细胞术的大鼠外周血网织红细胞微核试验,检测阳性诱变剂甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulphonate,EMS)和环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)在所建立的试验方法中的表现。方法使用CD71-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记大鼠外周血网织红细胞,核酸染料DRAQ5标记DNA,建立流式细胞术检测方案。采用该方案测定EMS和CP的遗传毒性时,将40只雄性SD大鼠随机分为8组,EMS染毒剂量为0、50、100、200mg/kg.bw,CP为0、5、10、15 mg/kg.bw,间隔24 h2次经口染毒。在给药前1 d和给药后24、48、72、96、120 h取尾静脉血,使用流式细胞术测定外周血网织红细胞和成熟红细胞微核率。结果本试验方法所得历史阴性对照成熟红细胞和网织红细胞背景微核率均数分别为0.04‰和0.42‰,标准差分别为0.02‰和0.18‰。在所建立的试验系统中观察到EMS及CP可诱导外周血网织红细胞微核显著升高。结论本实验室建立的基于CD71-FITC和DRAQ5双染的外周血流式微核技术操作简便快捷,背景微核率较低,检测结果稳定,在化学物的遗传毒性评价方面具有较大的推广价值和良好的应用前景。     

铁路危险品货运站空气颗粒污染有机提取物的小鼠外周血网织红细胞微核试验

目的 探讨铁路危险品货运站空气颗粒污染物对小鼠外周血网织红细胞微核的诱导作用。方法 选用雌性BALB／c小鼠随机分为实验组和对照组,空气颗粒污染物的丙酮提取物按20、40、80、160mg/kg的剂量,以腹腔注射方式一次性染毒。同时进行低剂量（10mg/kg）腹腔注射重复式染毒,每天1次共5天,于染毒后24、48、72h采集尾血进行网织红细胞微核分析。结果 外周血网织红细胞微核率呈现出良好的时间－反应关系,微核的高峰出现在染毒后47h,此时各剂量组微核率均高于对照组。低剂量重复染毒试验结果表明,在24－72h内网织红细胞微核率始终处于较高水平,与对照组相比差异有显著性（P＜0．05）。结论 铁路危险品货运站空气颗粒污染物对雌性小鼠外周血网织红细胞微核具有明显的诱导作用。     

Sysmex XN-10(B3)血液分析仪检测网织红细胞参数对鉴别诊断贫血性疾病的应用价值

目的：探讨贫血性疾病鉴别诊断中Sysmex XN-10(B3)血液分析仪检测网织红细胞参数的应用价值。方法：回顾性选取2019年2月～2021年2月本院贫血性疾病患者80例作为贫血组、健康体检人员80例作为健康组。统计分析两组网织红细胞参数检测结果，并统计分析缺铁性贫血诊断中网织红细胞参数的效能。结果：贫血组巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、肾性贫血、缺铁性贫血、再生障碍性贫血患者的网织红细胞血红蛋白（RETHe）、未成熟网织红细胞比率（IRF%）、网织红细胞百分率（RET%）、中荧光强度网织红细胞百分率（MFR%）、高荧光强度网织红细胞百分率（HFR%）均逐渐降低（P<0.05）,RET%均高于健康组（P<0.05），低荧光强度网织红细胞百分率（LFR%）逐渐升高（P<0.05），均低于健康组（P<0.05）。巨幼细胞性贫血患者的RET-He高于健康组（P<0.05），溶血性贫血、肾性贫血、缺铁性贫血、再生障碍性贫血患者的RET-He均低于健康组（P<0.05）；巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、肾性贫血、缺铁性贫血患者的IRF%、MFR%、HFR%均高于健康...     

白藜芦醇对60Coγ射线离体照射人周围血淋巴细胞保护作用研究

目的 探讨白藜芦醇(RES)对60Coγ射线离体照射人周围血淋巴细胞的保护作用.方法 采集男性健康志愿者周围血分离培养淋巴细胞,设不加RES的照射对照组,照射前30 min分别给予RES 0.1、0.2和0.4 mmol/L的3个照射前给药组,及照射后立即分别给予RES 0.1、0.2和0.4 mmol/L的3个照射后给药组.用4 Gy60Coγ射线进行照射,采用淋巴细胞胞质分裂阻滞(CB)法和Annexin V-FITC/PI双染法分析淋巴细胞微核率和凋亡率的变化.结果 ①3个照射前给药组的微核率及凋亡率比照射对照组低(P ＜0.01 ～P＜0.001);②0.2、0.4 mmol/L照射后给药组微核率比照射对照组低(P＜0.05,P＜0.01),3个照射后给药组凋亡率比照射对照组低(P＜0.05～P＜0.01);③3个照射前给药组微核率均比3个照射后给药组低(P＜0.01～P＜0.001),0.4 mmol/L照射前给药组在抑制凋亡率方面强于0.4mmol/L照射后给药组(P＜0.05).结论 RES可以通过抑制60Coγ射线离体照射引起的人周围血淋巴细胞的微核率和凋亡率的升高,对辐射诱导的淋巴细胞DNA损伤起到防护作用,其辐射防护效果与RES的给药时间及给药剂量有关.     

程序性坏死阻断剂对铝致神经细胞凋亡的影响及其机制

目的 了解程序性坏死阻断剂necrostatin(Nee-1)对铝诱导的神经细胞凋亡的影响,并探讨Nec-1对Caspases凋亡通路的作用机制.方法 用4 mmol/L铝染毒神经母细胞瘤细胞株(SH-SYSY)制备铝致神经细胞死亡模型,在不同浓度铝和(或)Nec-1作用下检测细胞活力的变化,用Heochst 33342/碘丙啶(PI)双染法观察细胞的凋亡和坏死现象,Annexin V/PI双染法定量细胞的凋亡率和坏死率.用Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶活力的变化检测凋亡通路,用免疫细胞化学法检测核转录因子(NF-κB)和细胞色素c(Cyt-c)蛋白表达的变化.结果 随着铝染毒剂量的加大,细胞活力明显下降;但加入60 μmol/L Nec-1后,细胞活力明显增强.差异有统计学意义(P<0.05). Nec-1浓度的提高使细胞活力明显上升,表现了明显的促进神经细胞生长、抑制细胞死亡的作用.凋亡和坏死的荧光显微镜观察及流式细胞术定量检测结果 表明,随着铝染毒剂量的增加,神经细胞的凋亡率与坏死率明显上升,但在0～90μmol/L Nec-1作用下,Nec-1浓度越高,细胞的坏死率降低越明显,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).同时,虽然Nec-1是程序性坏死的阻断剂,但其对凋亡率也有明显的影响,可以使染铝细胞的凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).对Nec-1作用后细胞的凋亡相关酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活力变化检测结果 表明,Nec-1对Caspase-9活力的影响不明显,且对线粒体通路的凋亡诱导分子Cry-c的作用也不明显;但对Caspase-8活力的影响明显,表现在可以明显降低各染铝细胞的Caspase-8活力,提高NF-κB蛋白表达量和在高剂量染铝细胞中降低Caspase-3的活力.结论 Nec-1可以降低铝诱导的神经细胞凋亡,并通过死亡受体通路Caspase-8上调NF-κB表达,降低细胞凋亡率.     

Comparison of 4', 6'-diamidino-2-phenylindole and Giemsa stainings in preimplantation mouse embryos micronucleus assay including a triple dose study

Analysis of micronuclei (MN) in preimplantation embryos is a good method for the evaluation of cytogenetic damage induced by occupational and environmental mutagen during early pregnancy. To examine whether conventional Giemsa staining produced the same accuracy of micronuclei as the DNA-specific 4', 6'-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining in preimplantation embryo induced by maternal exposure to chlorpyrifos, we conducted assays on 469 mouse (3 groups) preimplantation embryos micronucleus. Slides were stained with DAPI. After DAPI staining, the slides were de-stained and restained with Giemsa. Giemsa staining showed similar frequencies in MN to DNA-specific DAPI staining in all three groups. Both staining techniques revealed significant increases in frequency of MN in the treated group in comparison to the control group. Both methods showed a statistically significant correlation between MN frequency and the dose of chlorpyrifos. Compared with DAPI staining, the sensitivity of Giemsa staining was 85.0%, 86.0% and 90.9% for control, 40 mg/kg, and 80 mg/kg chlorpyrifos treated group, respectively. The specificity was 97.9%, 91.4% and 96.5% for control, 40 mg/kg, and 80 mg/kg chlorpyrifos treated group, respectively. Thus, we recommend that Giemsa staining technique be a standard staining method in detecting MN of preimplantation embryos induced by occupational or environmental hazards.     

活性氧在4-HPR诱导膀胱癌细胞T24凋亡中的作用

目的研究4-HPR诱导的膀胱癌细胞凋亡，探讨DNA氧化损伤与修复在其中的作用。方法以4-HPR处理T24细胞后，检测其生长抑制情况，用荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)含量，用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况，用Western blot法检测DNA修复蛋白XRCC1的表达。结果4-HPR能诱导细胞发生凋亡，2．5、5．0、10．0μmol／L4-HPR引起的凋亡率分别达到1．8％、4．0％和10．5％，在此过程中伴随着细胞内ROS水平升高(最高达到3倍)，并使DNA修复蛋白XRCC1的表达下降，使caspase-3激活。抗氧化物质维生素C能有效地抑制4-HPR引起的ROS升高，并能部分抑制其引起的细胞生长抑制、凋亡及XRCC1蛋白表达的下降。结论ROS的生成并造成DNA损伤可能是4-HPR诱导膀胱癌细胞凋亡的主要机制。     

Antimicrobial Effects of Sodium Metasilicate Against Listeria monocytogenes

Abstract Sodium metasilicate (SMS) is a U.S. Department of Agriculture-approved antimicrobial for use in meat and poultry processing and has been known to be effective against various foodborne pathogens. However, its antimicrobial mechanism has not yet been revealed. In this study, we attempted to elucidate the mechanism by which SMS inactivates Listeria monocytogenes, a Gram-positive bacterial pathogen encountered commonly in ready-to-eat meat and poultry products. L. monocytogenes (Scott A) cells were treated with different concentrations of SMS (1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, and 6.0% [wt/vol]) and compared with high pH treatment (0.1, 0.2, and 0.3N NaOH solutions) for 1, 10, and 30?min. SMS exhibited concentration and time effects on inactivation of L. monocytogenes. The effect of SMS on the membrane integrity and viability of L. monocytogenes was determined by use of propidium iodide (PI) and SYTO9 nucleic acid stains with subsequent flow cytometry. The breakage in membrane integrity was observed by uptake of PI by cells treated with SMS with subsequent flow cytometry. Ultrastructural changes from corresponding transmission electron micrographs further revealed the disruption in the cytoplasmic membrane and changes in the morphology of the cells treated with SMS and high pH. The results from flow cytometry experiment and transmission electron microscopy study indicated that following SMS treatment, the membrane integrity of L. monocytogenes was compromised leading to leakage of intracellular contents and subsequent cell death.     

舒林酸抑制结肠癌细胞株增殖及其转移机制的研究

目的 研究非选择性COX抑制荆舒林酸对结肠癌细胞株HT-29生长的影响及其参与引起细胞死亡的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制,激光共聚焦显微镜(LSM)及荧光显微镜观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 MTT显示舒林酸能呈剂量和浓度依赖性抑制HT-29的增殖.TUNEL染色荧光显微镜下观察凋亡细胞呈棕褐色,AnnexinV/PI染色后LSM观察凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色,FCM显示此药促进细胞的凋亡,使处于G0/G1期的细胞比例显著降低.结论 舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长,促进其凋亡,其机制可能与其阻止细胞周期的进展有关.     

死亡受体途径在丙烯酰胺致PC12细胞凋亡中的影响

[目的]研究丙烯酰胺诱导神经细胞凋亡及其神经毒作用机制。[方法]不同浓度水平(0.5mmol/L,1mmol/L,5mmol/L,10mmol/L)的丙烯酰胺染毒后,用免疫细胞化学法检测PC12细胞Fas、Fas-L、TNFR1蛋白表达情况;流式细胞仪定量检测Fas、Fas-L、TNFR1蛋白含量及PC12细胞凋亡情况。[结果]丙烯酰胺各剂量染毒后PC12细胞凋亡率及Fas、Fas-L、TNFR1蛋白表达与对照组比较差异均有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]丙烯酰胺可能通过死亡受体Fas诱导PC12细胞调亡。