幽门螺杆菌cagA基因 PCR检测方法初探

目的 建立敏感性高的幽门螺杆菌菌株cagA基因PCR检测方法,为客观评价CagA在我国幽门螺杆菌感染致病中的作用提供基础。方法 通过分析比较GenBank中已知的cagA基因序列,设计了一对针对cagA基因保守序列,可扩增297bp片段的PCR引物,用PCR方法检测幽门螺杆菌的cagA基因,与SDS-PAGE检测CagA蛋白的结果进行比较。结果 PCR检测82株国内幽门螺菌杆菌的cagA基因,77株为cagA阳性,阳性率为93.9%,SDS-PAGE显示包括所有PCR扩增阴性菌株在内的74株幽门螺杆菌均表达CagA,阳性率为100%,PCR检测cagA基因的敏感性为93.2%。结论 建立了敏感性高的幽门螺杆菌cagA基因PCR检测方法。     

不同采样时间小鼠网织红细胞微核率变化的流式细胞术研究

目的：应用流式细胞术研究两次给药后不同采样时间小鼠外周血网织红细胞微核率的变化，探讨流式细胞术检测微核方法的应用性。方法：NIH小鼠两次腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide，CP)40mg／kg BW(两次给药间隔24h)，于第二次给药后6、12、18、24、30、36、48h和72h采外周血-85℃甲醇固定、PI和CD71染色进行流式细胞术检测，每个样本分析10000个网织细胞，同时进行外周血涂片，Giemsa染色显微镜检测，每个样本分析1000个网织红细胞。结果：两次CP给药后6h即可观察到网织红细胞微核率增高，分别在两次给药后24h达到高峰，此后逐渐下降。应用流式细胞术检测外周血网织红细胞微核与外周血涂片显微镜检测敏感性相同，两者并具有良好的相关性。流式细胞术检测方法具有高通量、省时、省力等优势。结论：在检测化合物遗传毒性方面，流式细胞术检测方法值得推广应用。     

烫伤后早期肠道喂养对骨骼肌蛋白质分解代谢影响的研究

目的 探讨烫伤后早期肠道喂养（ＥＥＦ）能否抑制骨骼肌蛋白质分解代谢。方法 给予３７％ＴＢ－ＳＡⅢ度烫伤大鼠早期（伤后２ｈ）或延迟（伤后２４ｈ）肠道喂养安素营养液，观察伤后第５天经目鱼肌总Ｔｙｒ释放率及２０Ｓ蛋白酶复合体的活性，以及血中ＴＮＦ、皮质酶水平。结果 烫伤后ＥＥＦ大鼠比目鱼肌总Ｔｙｒ释放率及２０Ｓ蛋白酶复合体活性，血中ＴＮＦ、皮质醇水平的升高程度均显著低于延迟肠道喂养组大鼠。结论 烧伤后Ｅ     

酒精性肝病发生机制研究进展

酒精性肝病是一种常见的可预防性疾病 ,主要由于长期过度饮酒引起。世界各国酒精性肝病发病率和随之带来的经济负担均随着社会经济发展呈上升趋势 ,因此关于酒精性肝病的研究受到广泛关注。尽管现在有关酒精性肝病的病理形态学变化已基本清楚 ,但其发病机制仍不十分明了。近年来 ,随分子生物学技术在酒精性肝病研究中的广泛应用 ,人们对酒精性肝病的认识有了长足进步。1　酒精性肝病的动物模型Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ等〔1〕所建立的胃瘘管灌注含酒精液体饲料大鼠模型在酒精性肝病研究中有重要地位 ,有研究甚至认为这一动物模型的建立是酒精性肝…     

CD71荧光抗体和PI染色的微核流式细胞术检测研究

目的探索CD71荧光抗体和PI染色的微核流式细胞术自动化检测方法。方法采用-85℃甲醇固定细胞,CD71荧光抗体和PI染色,以伯氏疟原虫感染小鼠血细胞为微核模式生物调校流式细胞仪,建立微核流式细胞术检测方法,并对秋水仙素(COL)诱导的小鼠外周血含微核网织红细胞进行了检测。结果所建立的方法能明确分辨外周血含与不含微核的网织红细胞和成熟红细胞,COL处理小鼠的外周血含微核网织红细胞率呈明显的剂量依赖性升高,流式细胞术与显微镜检测的外周血含微核网织红细胞率有良好相关性(r=098)。结论微核流式细胞术检测方法能准确地检测小鼠外周血含微核网织红细胞。     

镉染毒小鼠网织红细胞微核流式细胞术研究

目的通过流式细胞术(FCM)检测外周血微核方法，研究氯化镉(CdCl2)染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率，评价流式细胞术在微核检测中的应用价值及探讨氯化镉的致突变作用。方法采用转铁蛋白受体CD71荧光抗体和碘化丙啶(PI)染色，并以疟原虫感染小鼠外周血红细胞为微核模式生物调校流式细肛仪．检测10～60mg／kg环磷酰胺染毒和50～400μg／kg氯化镉染毒对小鼠的外周血含微核网织红细胞率的变化。结果不同剂量环磷酰胺染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率和骨髓含微核网织红细胞率均明显高于对照组小鼠，且二者之间相关性良好(r=0．955)；不同剂量氯化镉染毒小鼠外周血含微核网织红细胞率未见明显升高。结论FCM测定外周血含微核网织红细胞率可替代传统显微镜检查骨髓含微核网织红细胞率用于遗传毒性评价；在本研究条件下未观察到氯化镉有明显的诱导小鼠外周血含微核网织红细胞形成的作用。     

非整倍体毒剂和染色体断裂剂的FCM微核检测区分方法研究

目的研究流式细胞术（flow cytometry，FCM）微核检测筛选非整倍体毒剂和染色体断裂剂的方法。方法采用CD71荧光抗体和碘丙啶（PI）双染色，通过FCM检测环磷酰胺（CP）和秋水仙素（COL）诱导的NIH小鼠外周血含微核网织红细胞的PI荧光强度，比较它们与二倍体细胞PI荧光强度中位数的比值，以探索通过FCM微核检测筛选非整倍体毒剂和染色体断裂剂的方法。结果染色体断裂剂CP诱导的含微核网织红细胞与二倍体细胞PI荧光强度中位数的比值较低，非整倍体毒剂COL诱导的含微核网织红细胞与二倍体细胞PI荧光强度中位数的比值较高，两者间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论通过FCM检测微核PI染色强度，可初步判断诱导微核形成的因素是否具有染色体断裂剂和非整倍体毒剂毒性。     

PCR法筛选检测转基因食品

目的通过PCR检测花椰菜花叶病毒(camv)35S启动子和胭脂碱合酶(nos)终止子建立筛选食品中有无转基因成分的方法.方法用改良溴化十六烷三甲基铵(CTAB)法制备转基因抗除草剂[大豆RoundUp ReadyTMSoybean(RRS)]和转基因抗虫玉米系列标准品Bt176 Maximaizer的DNA,PCR检测其内参照基因及camv 35 S启动子和nos终止子.结果改良CTAB法制备的DNA用作PCR模板均可扩增出内参照基因,PCR扩增camv 35S启动子可检测出含量为0.5%的RRS和Bt176 Maximaizer,而PCR扩增nos终止子可检测出含1%RRS的食品样品.结论改良CTAB法制备的DNA可用作PCR模板,建立的PCR检测camv 35S启动子和nos终止子方法可用于筛选食品中有无转基因成分.     

小鼠胃插管模型制备方法探讨

胃插管动物模型能较准确地经胃给予动物药物或营养成分，在毒理学、药理学和营养学等动物实验研究中有重要地位。为方便胃插管手术，一般用狗、兔和大鼠等较大型的动物制备，但由于小鼠是最常用的实验动物，并且小鼠的抗体也远比其他实验动物丰富，新近发展起来的转基因和基因敲除动物也多为小鼠，所以为方便开展进一步深入细致的研究工作，     

幽门螺杆菌cagA基因全长克隆及序列分析

目的探索扩增cagA基因全长的PCR方法,克隆中国2株胃癌幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)分离株和1株十二指肠溃疡分离株及国际标准株SS1的cagA基因,初步探讨cagA序列和磷酸化位点变异及其临床意义.方法针对已知cagA基因两侧及cag致病岛右侧反转重复序列设计PCR引物,扩增cagA基因并克隆测序,分析已知cagA序列同源性及其酪氨酸磷酸化位点.结果3株中国Hp分离株cagA氨基酸序列的同源性约为94%(93.9%、94%、94.5%),并都有pY117/118/122和EPIYA-A、B、D 4个酪氨酸磷酸化位点.SS1株cagA与西方菌株同源性大于85%,而与中国菌株的同源性小于80%,具有pY117/118/122和EPIYA-A、B、C 4个酪氨酸磷酸化位点.结论建立的PCR方法可扩增cagA基因全长.CagA序列变异和磷酸化位点具有地区聚类特征,但与Hp感染临床结局无特殊关联.