肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-208b-3p在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和高糖/葡萄糖氧化酶（G/Go）处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞（NMVCs）和心肌成纤维细胞（mCFs）中的表达;利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白（包括COL1A1、COL3A1和α-SMA）表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响;双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc1 3′端非翻译区（3′-UTR）的结合作用;利用RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-208b-3p转染的mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达;通过小干扰RNA(siRNA)抑制Mtf2和Pgrmc1表达,并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用。【结果】miRNA表达谱和RTqPCR结...     

CircRNA_005647通过结合miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

目的 研究环形RNA circRNA_005647对小鼠心肌成纤维细胞（CFs）纤维化表型的影响及分子机制。方法 利用血管紧张素Ⅱ 缓释泵[1.46 mg/ （kg·d）,2周]诱导建立小鼠高血压心肌纤维化模型,采用Masson染色观察心肌纤维化程度。实时荧光定量PCR检测发生纤维化的小鼠心肌及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠CFs中circRNA_005647的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA_005647的稳定性。利用重组circRNA_005647 腺病毒（rAd-circRNA_005647）感染小鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1、Acta2 的mRNA和蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及RNA Pulldown实验验证circRNA_005647与微小RNA miR-27b-3p的结合作用。结果 RT-qPCR结果显示,circRNA_005647在高血压诱导纤维化的小鼠心肌和Ang-II处理的小鼠CFs中表达增强（P<0.01）。放线菌素D和RNase R实验证实circRNA_005647比其宿主基因 Myo9a mRNA具有更好的稳定性（P<0.01）和抵抗 RNase R的降解作用。过表达 circRNA_005647可显著抑制小鼠CFs中纤维化相关基因 Col1a1、Col3a1和 Acta2表达（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及 RNA Pull down实验一致性地证实了circRNA_005647与miR-27b-3p之间存在特异结合作用,miR-27b-3p具有促进小鼠CFs的纤维化表型作用（P<0.05）,并可减弱circRNA_005647对小鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论 CircRNA_005647在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-27b-3p发挥抑制心肌纤维化作用。     

基于Jurkat细胞分析circ＿0006689对系统性红斑狼疮中IL2的作用及机制研究

目的：在Jurkat细胞基础上初步探讨circ＿0006689在系统性红斑狼疮（SLE）中调控白介素2(IL2)的作用机制。方法：使用慢病毒转染Jurkat细胞构建circ＿0006689低表达株。用PMA、PHA活化低表达组（si-circ＿0006689组）、病毒空载组（si-NC组）及未转染组（control组）细胞后通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组IL2、miR-95-5p的相对表达量；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞IL2浓度；生物信息学分析预测circ＿0006689的目标miRNA及IL2的目标miRNA；双荧光素酶报告实验检测circ＿0006689与miR-95-5p、miR-95-5p与IL2的靶向关系。结果：Jurkat细胞活化后IL2分泌显著增加（P<0.05）；下调circ＿0006689后细胞IL2表达及分泌减少（P<0.05）,miR-95-5p表达水平显著升高（P<0.05）。双荧光素酶报告实验提示circ＿0006689与miR-95-5p、miR-95-5p与IL2存在结合作用。结论：在Jurkat细胞中...     

miR-199a-3p靶向Smad1促进小鼠心肌纤维化相关基因的表达

目的探讨微小RNA-199a-3p（miR-199a-3p）对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法原代分离并体外培养成体 C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;脂质体转染法将miR-199a-3p模拟物和Smad1 siRNA瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞;双荧光 素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Smad1 3’端非翻译区（3’-UTR）的结合作用;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和 Western blot 法分别检测小鼠心肌成纤维细胞转染miR-199a-3p 后,Smad1 及纤维化相关基因表达。Western blot 检测转染 miR-199a-3p,Smad1 siRNA 后,小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因、Smad1 和Smad3 的激活水平。结果RT-qPCR 和 Western blot结果证实在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-3p可以增强纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验显示 miR-199a-3p 与Smad1 3’-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot 结果证实miR-199a-3p 可在转录水平抑制Smad1 表达。 过表达miR-199a-3p和沉默Smad1均能一致性的通过激活Smad3通路而促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论 miR-199a-3p通过靶向Smad1,从而激活Smad3通路来促进纤维化相关基因表达。     

环状RNA hsa＿circ＿0001479在胃癌中的表达及功能研究

目的：探讨hsa＿circ＿0001479在胃癌（gastric cancer,GC）组织中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测hsa＿circ＿0001479表达量的方法并进行方法学性能评价;通过RT-qPCR检测76对胃癌组织和配对癌旁组织中hsa＿circ＿0001479的表达水平并分析其表达量与临床病理参数的关系;构建针对hsa＿circ＿0001479的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和过表达载体,转染至胃癌细胞株,通过CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布,划痕实验检测细胞横向迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果：RT-qPCR检测hsa＿circ＿0001479表达量的方法具有良好的精密度、正确度和线性;hsa＿circ＿0001479在胃癌组织中表达增高且表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和CA19-9水平有关;细胞功能实验显示,在胃癌细胞株中干扰hsa＿circ＿0001479的表达可抑制胃癌细胞的增...     

hsa＿circ＿0001859靶向miR-16抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的机制研究

目的 探讨hsa＿circ＿0001859靶向miR-16抑制类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞（RASFs）增殖和转移的机制研究。方法 选取2019年6月-2020年7月于成都八一骨科医院进行治疗的RA患者40例为RA组,同时选取本院体检中心健康志愿者40例为对照组。培养RASFs细胞,将si-NC、si-hsa＿circ＿0001859、pcDNA-NC、pcDNAhsa＿circ＿0001859、miR-NC、miR-16 mimics、si-hsa＿circ＿0001859+anti-miR-NC、si-hsa＿circ＿0001859+anti-miR-16分别转染至RASFs,记为si-NC组、si-hsa＿circ＿0001859组、pcDNA-NC组、pcDNA-hsa＿circ＿0001859组、miR-NC组、miR-16组、si-hsa＿circ＿0001859+anti-miR-NC组、si-hsa＿circ＿0001859+anti-miR-16组。RT-qPCR检测hsa＿circ＿0001859、miR-16表达水平;四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测细胞活性;...     

miR-126通过ADAM9调控自发性高血压大鼠的心肌纤维化

目的：探讨微小RNA(miR)-126/整合素和金属蛋白酶9(ADAM9)在自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化中的作用。方法：实验分为正常组、SHR组、SHR+AAV9组和SHR+miR-126-AAV9组。超声心动图检查心功能，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）表达情况，Masson和HE染色观察心肌组织形态并统计胶原沉积评分（CVF）,qRT-PCR检测miR-126、ADAM9 mRNA表达，Werstern Blot检测α-平滑肌肌动蛋白（SMA）、ADAM9、转化生长因子（TGF）-β1蛋白表达，双萤光素酶实验验证miR-126与ADAM9的靶向关系。结果：miR-126在SHR组大鼠心肌中低表达，ADAM9高表达。与SHR+AAV9组比较，SHR+miR-126-AAV9组心肌炎症和纤维化损伤减轻，左心室缩短分数（LVFS）、左心室射血分数（LVEF）显著增高，左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、CVF、ADAM9、TGF-β、α-SAM蛋白水平显著降低。miR-126可靶向调节ADAM9表达。结论：miR-126可能通过调节成纤维细胞活...     

山慈菇提取物调控circ＿0003998/miR-330-5p表达对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 研究山慈菇提取物对口腔鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生物学行为的影响,分析其作用机制是否与调控circ＿0003998和miR-330-5p表达有关。方法 采用集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法分析不同剂量山慈菇提取物对口腔鳞癌细胞CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响。实时定量PCR分析CAL-27细胞中circ＿0003998和miR-330-5p表达情况。双荧光素酶报告基因实验用于确定circ＿0003998和miR-330-5p之间靶向关系。分别转染circ＿0003998小干扰RNA、miR-330-5p模拟物至CAL-27细胞,分析干扰circ＿0003998或过表达miR-330-5p对CAL-27细胞生物学行为的影响。结果 山慈菇提取物作用后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量和circ＿0003998表达量显著降低(P<0.05),而miR-330-5p表达量显著升高(P<0.05)。circ＿0003998与miR-330-5p直接结合,干扰circ＿0003998可上调miR-330-5p表达(P<0.05)。干扰circ＿0003998或过表达miR-330-5p后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量显著降低(P<0.05)。过表达circ＿0003998或抑制miR-330-5p均可减弱山慈菇提取物对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 山慈菇提取物能够降低口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与下调circ＿0003998/miR-330-5p分子轴有关。     

circRNA＿0031269调控miR-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨circRNA＿0031269调控mi R-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移。方法 选取深圳市南山区前海蛇口自贸区医院2020年3月—2021年4月妇科肿瘤专科收治的40例宫颈癌患者,经手术治疗切除的癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitativereal-time PCR,q RT-PCR）检测不同组织中circ RNA＿0031269和mi R-127-3p的相对表达;双荧光素酶报告基因检测观察circRNA＿0031269和miR-127-3p的靶向关系。采用MTT、Transwell细胞实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移能力。结果 癌组织中circ RNA＿0031269表达高于癌旁组织,mi R-127-3p表达低于癌旁组织（P<0.05）;miR-127-3p过表达可降低WT-circ RNA0031269的荧光酶活性,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;anti-miR-127-3p过表达可抑制He La细胞增殖、迁移,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑...     

环状RNA hsa_circ_0002185对乳腺癌细胞瘤细胞活力和侵袭能力的影响及其作用机制

目的 ：探讨环状RNA hsa＿circ＿0002185对乳腺癌细胞瘤细胞活力和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 ：收集2018年1月至2020年1月在宁夏医科大学总医院接受根治性手术治疗的20对乳腺癌组织及癌旁,通过qRT-PCR检测hsa＿circ＿0002185和hsa-miR-1248在人乳腺上皮细胞MCF10A和人乳腺癌细胞（MCF-7、T47D、BT-474和SK-BR-3）中m RNA的表达水平。构建T47D-siCirc(hsa＿circ＿0002185沉默)和T47D-NC（空载体对照）细胞株系,并以T47D作为空白对照,qRT-PCR检测hsa＿circ＿0002185 m RNA的表达水平;分别采用CCK-8细胞活性实验、划痕实验和Transwell实验检测hsa＿circ＿0002185对T47D细胞的增殖、迁移和侵袭能力;免疫荧光实验检测E-cadherin和Vimentin表达;使用生物信息学网站Circular RNA Interactome预测hsa＿circ＿0002185可互补结合的miRNA,再根据Targetscan网站预测相应miRNA可靶向结...     

环状RNA circ＿0020123靶向调控微小RNA-145影响胰腺癌细胞SW-1990增殖、侵袭与转移实验研究

目的:探讨环状RNA circ＿0020123靶向调控微小RNA(miR)-145对胰腺癌细胞SW-1990增殖、侵袭与转移的影响。方法:选择胰腺癌细胞株SW-1990,分为si-NC组、si-circ＿0020123组、si-circ＿0020123+anti-miR-145组，进行细胞转染。采用MTT法检测细胞增殖能力。采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭与迁移能力。采用反转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ＿0020123和miR-145相对表达量。采用Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)。采用双荧光素酶报告实验分析circ＿0020123与miR-145的靶向作用。结果:与si-NC组比较，si-circ＿0020123组和si-circ＿0020123+anti-miR-145组细胞增殖、侵袭及迁移能力明显降低(均P<0.05)。与si-circ＿0020123组比较，si-circ＿0020123+anti-miR-145组细胞增殖、侵袭及迁移能力明显...     

环状RNA hsa＿circ＿0008591对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA(circRNA)hsa＿circ＿0008591在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法 运用高通量芯片数据分析筛选在乳腺癌组织中差异表达的circRNAs,确定hsa＿circ＿0008591为研究对象,并通过Sanger测序、核糖核酸酶R(RNaseR)处理等对其进行表征。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa＿circ＿0008591在乳腺癌组织和细胞中的表达;进一步将质粒或小干扰RNA(siRNA)转染至乳腺癌细胞,采用实时无标记细胞分析技术(RTCA)、CCK-8增殖实验、EdU增殖实验和平板克隆形成实验检测hsa＿circ＿0008591对细胞增殖能力的影响。运用TargetScan等数据库预测互相作用的微小RNA(miRNA)和蛋白,同时进行功能富集分析;并运用Cytoscape软件绘制竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络。结果 与癌旁组织比较,hsa＿circ＿0008591在乳腺癌组织中呈低表达(P=0.007 6);与人正常乳腺上皮细胞比较,hsa＿circ＿0008591在6种乳腺癌细胞株中的表达水平明显下调(P&...     

miR-1、miR-16和miR-208前体在乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达

目的检测心肌特异的miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中的表达。方法利用出生1～3d的Sprague-Dawley(SD)大鼠和C57BL/6小鼠,采用2.5%胰酶消化和差速贴壁法分离心肌细胞和心肌成纤维细胞。提取原代的乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及P1代的心肌成纤维细胞总RNA,以β-actin为内参照,逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测miR-1、miR-16和miR-208的前体表达水平。用FluorChem8900软件分析琼脂糖凝胶电泳后PCR产物条带的灰度值,计算出表达的目的miRNA前体与β-actin的比值。结果有效分离并培养了乳C57BL/6小鼠、乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞。RT-PCR结果显示,在乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中miR-1和miR-16均有相近水平的表达;心肌细胞中miR-208的表达显著低于miR-208b(P0.01),miR-208b在心肌细胞中的表达显著高于其在心肌成纤维细胞中的表达(P0.05)。乳C57BL/6小鼠心肌细胞中miR-1a-1的表达显著低于miR-1a-2(P0.01),而miR-1a-2在心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达水平一致;miR-16-1在心肌细胞和心肌成纤维细胞中表达水平相近,而miR-16-2在两种细胞中均不表达;心肌细胞中miR-208a和miR-208b表达水平差别不明显,心肌成纤维细胞中只有miR-208a表达,并且在水平上低于其在心肌细胞中的表达(P0.05)。结论 miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中呈细胞特异性的表达。     

人环状RNA＿0114428对脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用及其机制

目的：探讨人环状RNA＿0114428 (circ＿0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ＿0114428通过调节微小RNA-139-5p (miR-139-5p)/转化生长因子β受体2 (TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法：体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ＿0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L^-1 LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ＿0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、 LPS+circ＿0114428沉默(LPS+si-circ＿0114428)组、LPS+circ＿0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ＿0114428+in-NC)组和LPS+circ＿0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ＿0114428+in-miR-139-5p)...     

circPUM1靶向调控miR-144-3p对宫颈癌细胞放射抵抗的影响

目的：探讨环状RNA?pumilio?RNA结合家族成员（circPUM）1对宫颈癌细胞放射抵抗的影响及其可能的作用机制。方法：收集2019年8月至2020年2月郑州大学第二附属医院收治的47例宫颈癌患者的癌组织及其相应癌旁组织（距离癌组织5?cm处正常组织）标本。定量反转录聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中circPUM1、miR-144-3p的表达量;Pearson法分析宫颈癌组织中circPUM1与miR-144-3p表达量的相关性。将circPUM1慢病毒短发夹RNA（sh-circPUM1）及其阴性对照（sh-NC）、miR-144-3p寡核苷酸模拟物（miR-144-3p?mimic）及其阴性对照（miR-NC）、sh-circPUM1与miR-144-3p抑制物（anti-miR）、sh-circPUM1与anti-miR阴性对照（anti-miR-NC）分别转染至人宫颈癌细胞SiHa,并通过0、4?Gy照射剂量照射,采用细胞计数试剂盒（CCK-8法）、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成、凋亡、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测活化的胱天蛋白酶3（cleaved-caspase3）蛋白表达量;Starbase平台分析及细胞实验检测circPUM1与miR-144-3p的靶向关系。结果：与癌旁组织比较,宫颈癌组织中circPUM1的表达量增加（P<0.05）,miR-144-3p的表达量减少（P<0.05）;circPUM1与miR-144-3p呈负相关（r=–0.9282,P<0.01）;转染sh-circPUM1或miR-144-3p?mimic后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平升高（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数减少（均P<0.05）;circPUM1可靶向结合miR-144-3p;共转染sh-circPUM1与anti-miR后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平降低（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数增多（均P<0.05）。结论：沉默circPUM1可通过靶向调控miR-144-3p表达而抑制宫颈癌细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭能力及诱导细胞凋亡,从而减弱细胞放射抵抗性。     

儿童急性白血病耐药相关microRNA的筛选

【目的】 寻找?鉴定与儿童急性白血病耐药相关的microRNA,为治疗耐药白血病探索新的途径?【方法】 在不同的阿霉素(DOX)浓度下培养原代细胞K562/WT,建立三种不同浓度的耐药白血病细胞株K562/DOX?提取K562/WT及其耐药细胞株的RNA进行基因芯片检测?qRT-PCR等方法,初步筛选可能与白血病细胞耐药相关的microRNA?收集治疗前?治疗后骨髓完全缓解及早期复发的儿童急性白血病的骨髓样本,提取RNA检测筛查的白血病细胞耐药相关的microRNA的表达,进一步验证体外实验的结果?【结果】 ①在K562/DOX耐药细胞株,miR-20a?miR-188-3p?miR-214等microRNA表达上调,而miR-331-5p?miR-338-5p?miR-27a?miR-15a和miR-455-3等的表达明显下调?qRT-PCR进一步证实了上述结果,并且发现miR-331–5p 和 miR-27a的表达与P-gp的表达呈反向关系?②在复发的骨髓样本组(13例),miR-331–5p 和miR-27a表达明显低于治疗前骨髓组(24例)和治疗后完全缓解组(11例),证明复发的儿童急性白血病耐药细胞存在miR-331-5p 和miR-27a低表达? 【结论】 耐药白血病细胞存在microRNA差异性表达,其中miR-331–5p 和miR-27a在耐药白血病细胞及复发的急性白血病细胞中低表达?推测miR-331-5p 和miR-27a可能在儿童急性白血病耐药中起到重要作用?     

miR-144-3p在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达及其靶向调控作用

目的探讨在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中,miR-144-3p表达的生理功能和作用机制,并预测其靶基因,为成骨细胞 分化的深入研究提供实验依据。方法采用大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,并在体外诱导间充质干细的成骨分化,通过 qRT-PCR 检测成骨分化标志基因（Runx2, OCN）以及miR-144-3p 的表达;通过向BMSCs 株转染miR-144-3p mimic 以及 miR-144-3p inhibitor,检测miR-144-3p 表达对BMSCs分化的影响,并通过Western blot 以及qRT-PCR检测miR-144-3p 靶蛋 白在RNA水平以及蛋白水平的表达变化。结果在体外诱导BMSCs成骨分化过程中,成骨分化标志基因（Runx2, OCN）的 表达量逐渐升髙,而miR-144-3p 的表达量则逐渐降低,到诱导成骨第21 天表达水平最低;检测各组ALP活性发现,相比于 对照组miR-144-3p mimics 转染组ALP活性显著降低（P<0.05）,miR-144-3p inhibitor 转染组ALP活性显著升高（P<0.05）;运 用多种靶基因预测数据库TargetScan、microRNA.org和miRanda对miR-144-3p进行靶基因的预测分析发现,smad4最可能是 miR-144-3p的靶基因;qRT-PCR结果表明,smad4在各组中的表达水平差异无统计学意义（P>0.05）;Western blot结果显示,smad4 在miR-144-3p mimics转染组表达显著下降,在miR-144-3p inhibitor转染组则显著升高,相比于对照组差异均有统计学意义（P< 0.05）。结论miR-144-3p参与调控大鼠BMSCs成骨分化,其抑制成骨分化的功能是通过降低smad4转录后的表达水平来实现。     

FAK短发夹RNA干扰重组体的构建与鉴定

目的本研究利用RNA干扰技术,以粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)为靶基因,设计构建重组体,并对重组体进行鉴定,为下一步探索心肌纤维化的新途径奠定基础。方法设计小发夹结构四条DNA序列,经退火成互补两对双链,再克隆到载体PAVU6 27中构建重组体,转化入JM109菌株,提取质粒进行酶切鉴定、测序分析。结果酶切鉴定和测序分析均提示FAK靶向RNA干扰重组体的构建成功。结论FAK靶向RNA干扰重组体的成功构建,为下一步利用该重组体沉默心脏成纤维细胞中FAK基因的表达,探索心肌纤维化机制打下基础。     

基于miR-34a-5p/Notch1信号通路探讨蒙药四味土木香散对压力超负荷心肌肥厚大鼠的保护机制

【摘要】目的 探讨四味土木香散（STP）对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法 第一部分：Wistar大鼠随机分为假手术（sham）组、模型（Mod）组、Mod+STP高、中、低剂量（STP-H、STP-M、STP-L）组、Mod+阳性药卡托普利（CAP）组,检测血压、超声心动图、HE及Masson染色。第二部分：Wistar大鼠随机分为sham组、Mod组、Mod+STP-H组、Mod+STP-H+miR-34a-5p激动剂（agomir）组、Mod+STP-H+Notch1抑制剂（DAPT）组,观察HE及Masson染色,RT-qPCR检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、核因子κB（NF-κB）、miR-34a-5p表达量,Western Blot检测Notch1、NICD1、hes1蛋白表达量。结果 第一部分：STP各剂量组均对压力超负荷心肌肥厚具有改善作用,其中高剂量治疗效果最佳。与Mod组比,STP-H组在8、10周时血压降低,心功能提高,细胞短轴直径及心肌纤维化降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。第二部分：与Mod组比,STP-H组 TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平降低,Notch1、NICDI、hes1表达量升高,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。与STP-H组相比,agomir组、DAPT组细胞短轴直径及心肌纤维化增加,TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平升高,Notch1、NICDI、hes1表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。结论 STP可通过抑制miR-34a-5p的表达,同时靶向激活Notch1通路而改善压力超负荷性心肌肥厚,发挥心肌保护作用。     

miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症中的表达

目的：探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症（ITP）中的表达变化。方法：采用RT-qPCR检测25例ITP患儿和15例正常对照PBMCs中3种miRNAs相对表达量,Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪检测血小板计数及未成熟血小板分数（IPF%）;分析miRNAs与血小板计数的相关性,ROC曲线分析检验效能。结果：ITP患儿组PBMCs中的miR-144-5p和miR-668-3p较对照组表达均上调,miR-134-5p表达下调（均P＜0.05）。miR-144-5p和miR-668-3p在急性ITP患儿组中表达量要高于慢性ITP患儿组（均P＜0.05）,且miR-144-5P（r=-0.802,P＜0.001）和miR-668-3p（r=-0.753,P＜0.001）的相对表达量与外周血小板计数呈负相关。相较于单个指标,miR-144-5p联合IPF%诊断急性ITP的AUC为0.960,灵敏度和特异度分别为93.3%和100%;而miR-134-5p联合IPF%诊断慢性ITP的AUC为0.967,灵敏度和特异度分别为90.0%和93.3%。结论：miR-144-5p和miR-668-3p在ITP患儿PBMCs中表达显著上调,miR-134-5p表达下调,这些改变可能在疾病的发生与发展中发挥了重要作用。