柱前衍生化高效液相色谱法拆分人体血浆和尿液中阿替洛尔对映 …

高效液相色谱法分离和测定人体血浆和尿液中Ｓ（－）－和Ｒ（＋）－阿替洛尔对映体。选用盐酸甲氧胺为内标，Ｒ（＋）－苯乙基异氰酸酯为衍生化试剂，ＯＤＳ为固定相，流动相为水－甲醇－异丙醇－二氯甲烷（５３．２：４１．６：４．８：０．４），荧光检测波长２３５／３００ｎｍ（Ｅｘ／Ｅｍ）。     

甘油三酯对血管内皮细胞GRK2表达时序性的研究

[目的]探讨甘油三酯对血管内皮细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)时序性表达的影响.[方法]体外培养人血管内皮细胞(EAhy926),在培养基中加入终浓度为150mg/L的甘油三酯进行时间效应实验,于0、3、6、12、24、36h收集细胞后立即进行蛋白抽提,用Westernblot检测甘油三酯作用后血管内皮细胞GRK2的改变.[结果]0、3、6、12、24和36h组GRK2/Actin灰度比值分别为0.31±0.02、0.41±0.02、0.49±0.03、0.54±0.04、0.61±0.11、0.59±0.05.随着甘油三酯作用时间延长,GRK2含量呈时间依赖性增加,24h达到高峰.[结论]甘油三酯可能通过上调血管内皮细胞的GRK2,导致内皮细胞功能障碍,从而参与了动脉粥样硬化的发生发展进程.     

细菌—酵母穿梭表达质粒pGBKT7—MIF的构建及转化

目的：构建并转化能在酵母菌AH109中表达巨噬细胞游走抑制因子（MIF）的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF。方法：用RT-PCR方法从人T淋巴细胞中扩增MIF基因全外显子片段，并定向克隆人细菌-酵穿梭表达质粒pGBKT7中；用PEG/LiAC法将pGBKT7-MIF转化感受态酵母菌AH109。提取转化酵母菌的质粒DNA，转化大肠杆菌并行质粒的酶切鉴定。结果：扩增出人MIFcDNA片段，限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确有重组质粒pGBKT7-MIF；获得可在色氮酸缺陷培养基（SD/-trp）上生长含pGBKT7-MIF的酵母菌克隆。酶切鉴定表明pGBKT7-MIF已转化入酵母菌AH109。结论：成功构建穿梭质粒pGBKT7-MIF，并转化入酵母菌AH109。     

体外培养诱导外周血淋巴细胞促进大鼠面神经再生的实验研究

目的:通过在神经缺损处局部回输体外分离培养纯化的淋巴细胞,了解此种方法促进面神经损伤修复的效果。方法:将20只Wistar大鼠的面神经颊支剪断并立即缝合(其余3支反折缝合)制成面神经损伤模型大鼠,将其分成淋巴细胞组和对照组,每组10只,每组再分成2周组和8周组。淋巴细胞组局部回输体外分离培养的外周血淋巴细胞,对照组作对照。于2周和8周测定面神经颊支-触须肌复合动作电位传导速度,辣根过氧化物酶(HRP)神经逆行示踪测定面神经核团的神经元阳性数目。结果:淋巴细胞组面神经颊支-触须肌复合动作电位传导速度8周时为0.64±0.07,与对照组(0.56±0.07)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。HRP神经逆行示踪测定面神经核团神经元阳性数目,淋巴细胞组2周及8周与对照组同时间段相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:体外分离培养纯化的淋巴细胞在局部应用于神经损伤处对面神经再生修复可起一定的促进作用。     

运动训练联合基因治疗对肾性高血压大鼠肾功能的影响

目的观察运动训练联合β1肾上腺素能受体基因治疗对肾性高血压大鼠血压、肾功能、肾脏前肾素原mRNA、肾脏β1受体mRNA和蛋白的影响，探讨其改善肾功能的机制。方法两肾一夹法制作肾性高血压模型，基因治疗采用经鼠尾静脉注射阳离子脂质体与β1反义寡核苷酸方法。检测大鼠血压、肾功能变化。半定量RT—PCR测定肾脏β1受体mRNA、前肾素原mRNA水平。Western印迹法测检肾脏β1受体的蛋白水平。结果与模型组比较，运动联合基因治疗可使血压下降并维持4周，血压下降最高达41mmHg；尿蛋白量[（45．82±6．56）比（29．12±5．22）mg／L，P〈0．01】、BUN[（13．10±2．62）比（9．05±1．84）mmol／L，P〈0．05]显著降低（P〈0．01，P〈0．05）；内生肌酐清除率显著升高（P〈0．01）；前肾素原mRNA、β1受体mRNA、蛋白表达水平显著降低（P〈0．05）。结论运动训练联合β1受体反义基因治疗可以明显地降低血压，改善肾功能；且运动训练可以增强基因治疗对β1受体mRNA和蛋白的抑制作用，在转录和翻译水平抑制过度激活的β1受体的表达。     

血管紧张素转换酶2基因转染对人内皮细胞MIF表达的影响

目的：探讨重组血管紧张素转换酶2（ACE2）基因转染对体外培养的人血管内皮细胞中由血管紧张素（Ang）II诱导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达的影响。方法:克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒（pACE2），并将之转染入人血管内皮细胞中。分别采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的MIF mRNA与蛋白表达情况。结果: Ang Ⅱ（100 nmol/L）和Ang IV（100 nmol/L）刺激后均可诱导人血管内皮细胞中MIF mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）。pACE2基因转染可明显抑制内皮细胞中由Ang II和Ang IV诱导的MIF mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论: ACE2基因过表达可明显抑制人内皮细胞中炎症介质MIF的表达，提示ACE2基因具有一定的抗炎症效应。通过调节ACE2基因的活性和表达，很可能为炎症相关疾病如动脉粥样硬化治疗提供新的策略。     

MIF在斑块形成与不稳定性中的作用及其信号转导通路研究

近年来的研究逐渐凸现动脉粥样硬化的现代概念 :(1)动脉粥样硬化病变不是仅呈斑片状 ,而是呈现弥散性 ,只不过某些部位斑块较重而已 ;(2 )这些斑块的特点是含有大量巨噬细胞。吞噬脂质后细胞内外胆固醇聚积在一起 ,上面覆盖着一层薄薄的内皮 -纤维组织的“帽” ,即使它们并不造成高度的狭窄 ,但它可以破裂、出血、形成血栓、血管痉挛而造成猝死 ;(3)动脉粥样硬化的脂质沉积过程由炎症反应介导 ,此炎症反应的特征是 ,病变部位出现单核巨噬细胞、活化T细胞和纤维化。多项研究表明巨噬细胞复制见于动脉粥样硬化进展的各个阶段 ,巨噬细胞复制可…     

表达载体介导的反义RNA抑制人巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的：研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。 方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平。将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)，建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-antiMIF)细胞。将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA的表达水平。 结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF。MIF 反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%（P<0.05）。建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株。HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制，表达水平降低40%（P<0.05）。 结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达，建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs。     

告诉你一个真实的卵磷脂

卵磷脂风靡欧美,在美国其销量仅次于复合维生素和维生素E。在许多国家,卵磷脂已成为一种像维生素一样的营养补充剂,甚至作为佐餐食品,因此它被誉为“最伟大的营养师”、“天然的血液洁净剂”。那么,卵磷脂究竟是什么东西,它来自哪里,它是否真有“血管清道夫”、“保肝”、“健脑”、“养颜美容”等功效呢?为让更多的读者认识卵磷脂,我们特邀了几位专家,请他们——     

MIF在动脉粥样硬化与斑块不稳定性中的作用

急性冠脉综合征(acute coronary syndromes，ACS)包括不稳定心绞痛、急性心肌梗死及急性缺血性心源性猝死，是当今社会危害人体健康的主要原因之一，目前认为，冠脉病变的严重程度主要是由斑块的稳定性而非大小决定，不稳定斑块的破裂、继发血栓形成是ACS发病的病理基础，巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)在30多年前首次被发现时作为活化T淋巴细胞的产物，