哇巴因与地高辛对大鼠心肌钠泵α亚单位基因表达影响的研究

目的　对比研究哇巴因与地高辛对大鼠心肌钠泵 (Na K ATP酶 )α亚单位基因表达的影响。方法　长期给予大鼠注射小剂量哇巴因 (2 0 μg·kg-1·d-1)与地高辛 (32 μg·kg-1·d-1) ,分别应用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术分析大鼠心肌钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果　长期给予大鼠注射小剂量哇巴因可使大鼠血压升高 ,而地高辛对大鼠血压无影响。无论是在mRNA水平还是在蛋白水平 ,哇巴因组大鼠心肌钠泵α1亚单位表达减弱 ,α3亚单位表达增强 ,而α2亚单位表达无改变 ;地高辛组大鼠心肌钠泵α3亚单位表达增强 ,而α1与α2亚单位表达无改变。结论　哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致不同的钠泵基因表达改变     

血管紧张素Ⅱ对有高血压家族史人脐动脉血管平滑肌细胞离子泵的影响

背景细胞膜离子泵活性和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)异常在高血压发病过程中起重要作用。有高血压家族史(FH+)的青少年红细胞膜钠泵和钙泵活性比无高血压家族史(FH-)的对照组低,而在有高血压家族史的人动脉平滑肌细胞,离子泵活性变化以及AngⅡ干预对其的影响尚不清楚。目的探讨有无高血压家族史人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMCs)钠泵、钙泵活性及其mRNA表达的异同以及AngⅡ干预对上述指标的影响。方法选取有无高血压家族史新生儿脐带各7根,用组织块贴壁法培养其脐动脉平滑肌细胞,设置AngⅡ空白对照组和高、低两个剂量组,采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术分别测量其细胞膜钠泵(Na+,K+-ATP酶)、钙泵(Ca2+-ATP酶)活性和mRNA相对表达量。结果未用AngⅡ时,FH+组HUASMCs质膜钠泵、钙泵活性均高于FH-组(均P<0.05),但其质膜钠泵α1亚单位mRNA表达和质膜Ca2+-ATP酶(PMCA)亚型1(PMCA1)mRNA表达无差异。AngⅡ干预后,在FH-组,AngⅡ(1×10-7mol/L)能提高两种离子泵活性(均P<0.01)和上调钠泵α1亚单位mRNA表达水平(P<0.01),AngⅡ(...     

氨氯地平与依那普利联用对肾性高血压大鼠主动脉重塑的影响

目的观察氨氯地平单用及联用依那普利对肾血管性高血压大鼠(RHR)主动脉重塑及主动脉平滑肌细胞膜钠泵、钙泵活性和钠泵а1亚单位及细胞质膜钙泵亚型1(PMCA1)mRNA表达的影响,探讨氨氯地平单用及联用依那普利改善动脉重塑的可能机制。方法建立"两肾一夹(2K1C)"肾性高血压大鼠模型,设立假手术组、模型组、氨氯地平组[5 mg/(kg.d)]、依那普利组[10 mg/(kg.d)]、氨氯地平+依那普利组[2.5 mg/(kg.d)+5 mg/(kg.d)],每组6只,药物连续干预6周。采用HE染色、免疫组织化学染色、Masson染色法检测主动脉中膜形态及结构变化并测量中膜厚度与腔径比(ML/LD)、中膜面积与管腔面积比(MA/LA),放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,酶学比色法检测细胞膜钠泵及钙泵活性,实时PCR法检测钠泵α1亚单位、PMCA1 mRNA表达水平。结果 RHR血压显著升高,主动脉ML/LD、MA/LA明显增加,中膜组织钠泵、钙泵活性及钠泵α1亚单位、PMCA1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。氨氯地平及依那普利均能减小RHR主动脉ML/LD、MA/LA,改善平滑肌肥大和胶原沉积,且均能降低主动脉中膜AngⅡ水平并升高主动脉中膜钠泵、钙泵活性(均P<0.01)。氨氯地平可显著升高PMCA1 mRNA表达水平,依那普利上调钠泵α1亚单位、PMCA1 mRNA表达水平(均P<0.01)。氨氯地平及依那普利联合应用减小主动脉ML/LD、MA/LA,降低主动脉组织AngⅡ水平和升高钠泵、钙泵活性及PMCA1 mRNA表达水平存在协同作用(均P<0.01)。结论氨氯地平联用依那普利改善主动脉重塑优于两药单用,其机制可能与它们更有效阻断主动脉组织RAS,升高主动脉平滑肌细胞膜钠泵及钙泵活性有关。氨氯地平可能通过上调PMCA1 mRNA表达水平改善钙泵活性。     

赖诺普利对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞离子泵活性及其mRNA表达的影响

目的 探讨赖诺普利对自发性高血压犬鼠动脉血管平滑肌细胞钠泵、钙泵活性及钠泵α1亚单位、钙泵亚型1mRNA表达水平的影响.方法 以自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞为研究对象,分为自发性高血压大鼠对照组、低剂量(1×10-6mol/L)赖诺普利组和高剂量(1×10-5mol/L)赖诺普利组,另以Wistar-Kyoto大鼠(WKY)为对照;分别用生化酶学方法和实时定量PCR检测细胞膜钠泵、钙泵活性和mRNA表达水平,用放射免疫分析法检测细胞培养液血管紧张素Ⅱ的含量.结果 与WKY对照组比较,自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞膜钠泵、钙泵活性及钠泵α1亚单位、钙泵亚型1mRNA表达水平均降低(P<0.01).赖诺普利能提高自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞膜钠泵、钙泵活性,并能上调钠泵α1亚单位和钙泵亚型1mRNA的表达水平(P<0.01).自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞培养液中血管紧张素Ⅱ含量高于WKY对照组(P<0.05),赖诺普利能降低其培养液中血管紧张素Ⅱ含量(P<0.05).结论 高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞两种离子泵活性降低可能缘于它自身基因表达水平的下降,赖诺普利通过阻断血管紧张素Ⅱ而上调两种离子泵活性及基因表达.     

“一肾一夹”高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位的基因表达

目的探讨“一肾一夹(1k1c)”高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据。方法分别应用分子生物学RT-PCR及免疫组化技术,探讨1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位基因表达发生改变无论在mRNA或蛋白水平,α1亚单位表达增强,而α2与α3亚单位表达无改变。结论1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位基因表达发生改变,这种改变可能参与了该模型的血压升高机制。     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景 分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道.目的 探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制.方法 将HUVEC随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α PDTC干预组(PDTC系核因子κB的特异性活性抑制剂),TNF-α NS398干预组(NS398是COX-2的特异性活性抑制剂).TNF-α 阿司匹林0 02 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林0 2 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林1 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林5 mol/L干预组,共8组,每组3例.分别用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平和蛋白表达.结果 1)4 μg/L TNF-α使HUVEC的分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达明显增加(P<0 01).2)阿司匹林浓度依赖性抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(P<0 01);阿司匹林浓度依赖性地抑制HUVEC的NF-κB p65 mRNA水平和蛋白表达(P<0 01).3)PDTC抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(均P<0 01).结论 阿司匹林通过NF-κB p65途径抑制TNF-α诱导的HUVEC 分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达,并可能借此发挥抗动脉粥样硬化作用.     

硫化氢通过SIRT1抗内皮细胞衰老

目的探讨外源性硫化氢在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老中的作用及分子机制。方法用25μmol/L H2O2诱导HUVEC衰老,通过检测β-半乳糖苷酶计算细胞衰老率。检测不同浓度(15、30、60及120μmol/L)的硫氢化钠作用下内皮细胞衰老标志物β-半乳糖苷酶的表达,Western blot分析沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达。结果 HUVEC经25μmol/L H2O2处理1 h后,β-半乳糖苷酶阳性细胞率为12.2%±1.30%;经60μmol/L硫氢化钠干预48 h后,β-半乳糖苷酶阳性细胞率显著降低,为4.6%±1.14%,两组相比差异显著(P<0.05);与对照组比较,60μmol/L硫氢化钠干预48 h后SIRT1蛋白表达显著上调(P<0.05),而用SIRT1抑制剂(NAM)可减弱硫氢化钠此作用(β-半乳糖苷酶阳性细胞率为12.0%±1.58%)。结论硫化氢能通过上调SIRT1表达抵抗H2O2诱导HUVEC衰老。     

“一肾一夹”高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位的基因表达

目的 探讨“一肾一夹（1k1c)”高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据。方法 分别应用分子生物学RT－PCR及免疫组化技术,探讨1k1c高血压大鼠动态平滑机细胞钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果 1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位基因表达发生改变：无论在mRNA或蛋白水平,α1亚单位表达增强,而α2与α3亚单位表达无改变。结论 1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位基因表达发生改变,这种改变可能参与了该模型的血压升高机制。     

人脐静脉内皮细胞衰老时过氧化体增殖物激活型受体α的生物活性变化

目的观察体外培养的脐静脉内皮细胞衰老时过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)的生物活性变化,探索致PPARα生物活性变化的可能因素。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞,应用β-半乳糖苷酶染色法鉴定内皮细胞衰老状态,以此分为人脐静脉内皮细胞青年组及衰老组;流式细胞技术分析细胞周期;半定量反转录-聚合酶链反应法检测内皮细胞PPARα及视黄醇类X受体α(RXRα)、核受体辅阻遏物(NCoR)mRNA表达水平;电泳迁移率变动分析检测PPARα的DNA结合活性;细胞免疫荧光组化方法检测细胞内泛素蛋白表达状况。结果与青年组内皮细胞比较,衰老组内皮细胞PPARαmRNA表达及DNA结合活性均显著降低,RXRαmRNA表达无明显差异,而NCoR mRNA表达显著增强,细胞内泛素蛋白表达显著增强。结论血管内皮细胞衰老时自身功能失调可能与PPARα生物活性降低密切相关。     

激酶非催化的C-叶域蛋白质1对人脐静脉内皮细胞衰老作用的影响及机制

目的:探讨激酶非催化的C-叶域蛋白质1(KNDC1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老作用的分子机制。方法:体外分离培养HUVEC,选择第6代HUVEC转染KNDC1腺病毒为实验组,另设空白对照组与阴性对照组。显微镜下观察细胞形态变化,通过q PCR检测内皮细胞的KNDC1的mRNA的表达,用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况,Westem blot检测衰老相关蛋白,分光光度法检测内皮细胞抗氧化酶活性。结果:第6代的HUVEC呈现出有别于前期传代细胞的衰老特征,细胞变得扁平,体积增大,增殖能力降低;实验组KNDC1的mRNA水平较对照组增高(239%~344%,P<0.05)及蛋白质表达也显著增高(249%~441%,P<0.05),实验组HUVEC的SA-β-gal染色阳性率显著上升(P<0.01),与KNDC1腺病毒转染剂量呈剂量依赖性。实验组磷酸化p53较对照组增加[(244.3±19.5)vs.(113.5±9.0),P<0.05]及抗氧化酶SOD及GPX含量(0.84±0.079);(0.82±0.062)较对照组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:KNDC1过度表达可能通过启动p53信号通路增加ROS表达,进而加速细胞衰老的进程。     

D-半乳糖对大鼠肺组织MMP-2表达水平及HA、LN和COL3含量的影响及相关性分析

目的探讨D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中对大鼠肺纤维化、肺组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平及透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型胶原(COL3)含量的影响,并分析MMP-2与HA、LN和COL3的相关性。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和D-半乳糖组。采用HE染色法观察两组大鼠肺组织形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测两组大鼠肺组织MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的改变;免疫组织化学法分析肺组织MMP2蛋白的表达水平;ELISA法检测大鼠肺组织中HA、LN和COL3的含量,并分析相关性。结果 HE染色结果发现D-半乳糖组大鼠肺组织发生明显的纤维化改变;qRT-PCR结果显示肺组织中MMP-2 mRNA表达水平高于对照组(P0.05);免疫组织化学法和Western blot结果显示肺组织中MMP-2蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05);COL3和LN含量高于对照组,而HA含量低于对照组(P0.05)。相关性分析结果显示,大鼠肺组织中MMP-2表达水平与COL3、LN呈正相关(r=0.2741,P0.05;r=0.2841,P0.05),而与HA呈负相关(r=-0.1782,P0.05)。结论 D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中可以引起肺组织发生纤维化改变,同时增加大鼠肺组织MMP-2表达及COL3和LN含量,降低HA的含量,且MMP-2与COL3、LN和HA之间具有相关性,可能为肺纤维化的早期诊断提供实验依据。     

人参皂甙Rg3对血管平滑肌细胞衰老的影响及机制

目的探讨人参皂甙Rg3对D-半乳糖诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)衰老的影响及机制。方法取SD大鼠胸主动脉中层,分离并原代培养VSMC,选取3~6代VSMC,通过D-半乳糖共孵育的方法诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶染色和透射电镜鉴定衰老VSMC;VSMC随机分成对照组、D-半乳糖组、Rg3高浓度组、Rg3低浓度组,Western blot方法检测p16、p21和p53蛋白的表达水平,流式细胞术检测细胞周期。结果与对照组比较,D-半乳糖组β-半乳糖苷酶阳性细胞明显升高[(58.67±2.52)%vs(4.67±0.58)%,P<0.05]。电镜下表现为细胞核膜内折,细胞线粒体肿胀,脂褐素堆积;p16、p21和p53蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞周期停滞在G0/G1期。与D-半乳糖组比较,Rg3低浓度组和Rg3高浓度组β-半乳糖苷酶阳性细胞明显减少,p16、p21和p53蛋白表达水平明显降低,G0/G1期细胞数明显减少(P<0.05)。结论人参皂甙Rg3可抑制VSMC衰老,其机制可能部分通过抑制细胞生长周期p16INK4a/Rb、p53-p21Cip1/Waf1信号通路来实现。     

巴戟天对D-半乳糖致衰老大鼠心肌细胞肌球蛋白和肌动蛋白基因表达的影响

目的 探讨补肾益气中药巴戟天对衰老心肌细胞肌球蛋白和肌动蛋白基因表达的影响及其可能机制.方法 以新生24h内SD大鼠心脏组织为材料,采用胶原酶消化法分离并培养心肌细胞,用8 mg/ml的D-半乳糖诱导细胞2d并常规培养5 d制得心肌细胞衰老模型,并用巴戟天处理,观察作用.实验分为三组:对照组、模型组、巴戟天组.采用倒置显微镜观察细胞形态,生化方法检测β-半乳糖苷酶活力,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测肌球蛋白重链基因α-MHC和β-MHC mRNA表达,Western印迹方法检测肌动蛋白的蛋白表达.结果 ①与正常组相比,模型组细胞β-半乳糖苷酶活力显著性升高,细胞活力显著性降低,肌球蛋白重链α-MHC mRNA表达下降,肌球蛋白重链β-MHC mRNA表达升高;②巴戟天组与模型组相比较,一定程度上改变了衰老心肌细胞的形态变化,β-半乳糖苷酶的活力降低,细胞活力升高,肌球蛋白重链α-MHC mRNA表达上调,肌球蛋白重链β-MHC mRNA表达下调.α-actin蛋白表达在各用药组并未表现出显著性差异.结论 巴戟天能改善衰老心肌细胞α-MHC mRNA表达下调程度和β-MHC mRNA表达的上调程度.α-actin的表达保持恒定.     

硫化氢对D-半乳糖所致大鼠心肌组织氧化应激和细胞凋亡的影响

目的观察硫化氢对D-半乳糖所致大鼠心肌组织氧化应激及细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠40只,随机分为对照组、D-半乳糖组、硫化氢6.25μmol/kg组(H2S-1),硫化氢12.5μmol/kg(H2S-2)组,每组10只。D-半乳糖组每日腹腔注射D-半乳糖400 mg.kg-1.d-1,连续60 d;对照组每日腹腔注射等体积生理盐水;硫化氢组处理同D-半乳糖组,同时分别按6.25和12.5μmol/kg腹腔注射硫化氢。采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平并测定组织Caspase-3相对活性。结果与对照组相比,D-半乳糖组大鼠心肌组织SOD活性下降、MDA含量升高,Bcl-2蛋白表达下调、Bax蛋白表达上调,Caspase-3相对活性升高;给予硫化氢能显著改善D-半乳糖所致大鼠心肌组织氧化应激水平,减少细胞凋亡。结论硫化氢可通过提高抗氧化能力和减少细胞凋亡缓解D-半乳糖所致心肌组织损伤。     

非小细胞肺癌钠泵亚单位表达及其与预后的关系

目的研究非小细胞肺癌组织钠泵α1、α3、β1、β2四个亚单位表达的改变及其与预后等临床特征的相关性。方法对手术获取的非小细胞肺癌组织标本采用免疫组化法进行染色,半定量分析四个亚单位表达情况及与正常肺组织间的差异。结果①与正常组织相比,人肺鳞癌组织中钠泵α1、β1亚单位表达增强(P分别为0.000和0.003);鳞癌组织中钠泵α3、β2亚单位与正常组织表达比较差异无统计学意义;②与正常组织相比腺癌组织钠泵α1、α3、β1亚单位表达增强,尤以β1亚单位增强最明显,差异有统计学意义。β2亚单位表达与正常组织相比无明显变化;③钠泵α1与β1亚单位的表达强度与肺癌患者的生存月分别呈正相关,P值分别为0.000和0.001。钠泵α3与β2亚单位表达强度与肺癌患者生存月无关(P值分别为0.604和0.126)。结论非小细胞肺癌存在钠泵亚单位表达的改变,此种改变与患者的生存时间呈一定的相关关系,可作为判断预后的辅助指标。     

D-半乳糖诱导的心肌细胞自噬下降与microRNA的表达变化有关

目的探讨microRNA(miRNA)和衰老心肌细胞自噬之间的关系。方法使用0、4、8、16、20 g/L D-半乳糖刺激大鼠心肌细胞H9c2衰老,刺激3、6、9天后,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老水平;电镜观察D-半乳糖刺激衰老大鼠心肌细胞自噬体形成;分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测衰老大鼠心肌细胞与正常H9c2细胞中miRNA-30a、miRNA-126、miRNA-204及自噬蛋白LC3B II/LC3B I表达水平。结果与对照组比较,随着药物浓度的升高及刺激天数的增加,细胞染色逐渐加深,在D-半乳糖浓度为8 g/L刺激9天时,细胞染色最明显;电镜结果显示,D-半乳糖诱导衰老心肌细胞自噬体减少;Western blot结果显示,衰老心肌细胞LC3B II/LC3B I水平降低;实时荧光定量PCR结果显示,诱导衰老组心肌细胞中,miRNA-30a、miRNA-126表达水平明显下降,miRNA-204表达水平明显上升。结论 D-半乳糖诱导的衰老心肌细胞自噬水平降低的过程中,存在miRNA-30a、miRNA-126表达水平的降低以及miRNA-204表达水平的增加,miRNA的差异表达可能是衰老心肌细胞自噬水平变化的重要机制。     

2型糖尿病大鼠胸主动脉上大电导钙激活钾通道α、β_1亚基蛋白及mRNA的变化

目的探讨不同病程T2DM大鼠胸主动脉上大电导钙激活通道(BKCa)蛋白及mRNA表达的变化。方法 60只大鼠被随机分成对照(Con)组10只和模型(M)组50只。Con组予常规饲养,M组采用高脂高糖饮食且腹腔注射小剂量STZ建立T2DM大鼠模型。免疫印记法和RT-PCR测定胸主动脉BKCa通道α,β1亚单位的蛋白和mRNA表达水平。结果 8周、12周M组BKCaα亚单位蛋白在胸主动脉中的表达为(0.942±0.324)和(0.925±0.521);BKCaɑ亚单位mRNA表达为(0.93±0.03)和(0.92±0.07)。(2)8周、12周M组BKCaβ1亚单位蛋白在胸主动脉中的表达为(0.452±0.25)和(0.401±0.34);BKCaβ1亚单位mRNA表达为(0.56±0.19)和(0.43±0.06)。与Con组比较,8周、12周M组β1亚单位蛋白和mRNA表达降低(P0.05)。结论 T2DM大鼠大血管上BKCa通道β1亚单位蛋白及mRNA的表达在8周及12周降低。     

车前子多糖对衰老模型大鼠脑氧化-非酶糖基化影响的实验研究

目的 探讨车前子多糖对D-半乳糖致衰大鼠氧化-非酶糖基化作用的影响,明确车前子抗衰老作用及机制.方法 选用D-半乳糖衰老模型Wistar大鼠作研究对象,观察不同剂量车前子多糖对衰老模型大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(AHR)、脑单胺氧化酶B活性(MAO-B)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSH)比值、羰基化蛋白、醛糖还原酶(AR)和晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)mRNA表达水平的影响,并与衰老模型组和车前子水煎剂组进行比较. T-AOC、AHR、MAO-B活性、GSH/GSSH、羰基化蛋白含量采用分光光度法,AR mRNA 和RAGE mRNA检测采用RT-PCR法.结果 衰老模型组羰基化蛋白含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P＜0.01),而T-AOC、GSH/GSSG比值降低(P＜0.01),AR mRNA表达明显低于青年组(P＜0.01),而RAGE mRNA表达明显高于青年组(P＜0.01).车前子多糖和车前子水煎剂组各组T-AOC、GSH/GSSG、AHR,AR mRNA表达明显高于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01),而羰基化蛋白含量、MAO-B和RAGE mRNA表达显著低于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01).以车前子多糖大剂量组效果最明显.结论 车前子及其多糖可通过提高机体抗氧化能力和清除羰基能力而发挥抗脑老化作用,车前子多糖是其作用的重要成分.     

淫羊藿苷对D-半乳糖致衰老大鼠睾丸组织MMP-2及MMP-9表达的影响

目的观察淫羊藿苷对衰老大鼠睾丸组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 SD大鼠30只,随机均分为正常组、模型组、淫羊藿苷(80 mg/kg)组。大鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(200 mg.kg-1.d-1)造成大鼠亚急性衰老模型,同时灌胃给予药物组,每天1次,连续给药8 w。取出各组动物睾丸组织,测血清睾酮含量;取睾丸组织进行病理组织学观察;RT-PCR方法检测MMP-2及MMP-9 mRNA表达,免疫组化方法检测睾丸组织MMP-2及MMP-9表达。结果与正常组比较,模型组血清睾酮水平下降;病理学检测可见生精上皮层变薄,各级生精细胞减少;MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达降低。淫羊藿苷组明显改善上述指标(P<0.01或P<0.05)。结论淫羊藿苷对D-半乳糖所致的衰老大鼠睾丸损伤有明显的保护作用,其机制可能与上调MMP-2、MMP-9水平有关。     

D-半乳糖、氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积原因探讨

目的 探讨D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)蓄积的原因.方法 取42只小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(90 mg/kg)和三氯化铝制做模拟Aβ代谢异常的阿尔茨海默病小鼠模型(模型组),另取42只小鼠颈背部皮下注射生理盐水,于用药后0、15,30,45、60、75、90d两组分别取6只大鼠行行迷宫试验,观察两组逃避潜伏期;然后处死大鼠取海马组织,采用定量PCR法检测淀粉样前体蛋白(APP)、β分泌酶(BACE1)、胰岛素降解酶(IDE) mRNA表达;Westernblot法检测Aβ、BACE1和IDE蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组逃避潜伏期明显延长;APPmRNA水平无明显变化,Aβ蛋白水平明显升高;BACE1mRNA及蛋白水平均显著升高;IDE mRNA及蛋白水平无明显变化.结论 D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积的可能为BACE1表达增加所致,而非IDE降解减少或APP表达增加所引起.