尼莫唑的合成

目的 合成尼莫唑。方法 以吗啉与氯乙醇反应,经羟基氯代,再在相转移催化剂存在下与4(5)-硝基咪唑缩合制得目标产物。结果 产物经熔点测定、红外及核磁共振氢谱得到确认。结论 该工艺路线方法简便,原料易得,适合工业化生产。     

尼莫唑的合成

目的合成尼莫唑。方法以吗啉与氯乙醇反应,经羟基氯代,再在相转移催化剂存在下与4（5）-硝基咪唑缩合制得目标产物。结果产物经熔点测定、红外及核磁共振氢谱得到确认。结论该工艺路线方法简便,原料易得,适合工业化生产。     

(+)-氯吡格雷硫酸氢盐的合成研究

目的改进抗血栓药物氯吡格雷硫酸氢盐的合成工艺。方法以邻氯苯乙腈为原料,经溴代、缩合、水解、酯化、拆分,最后与硫酸成盐,经重结晶得目标产物氯吡格雷硫酸氢盐。结果与结论以16%的收率合成了目标产物,较大幅度地降低了生产成本,优化了反应条件,简化了后处理过程,适合于工业化生产。     

(+)-氯吡格雷的合成工艺改进

目的改进抗血栓药物氯吡格雷硫酸氢盐的合成工艺。方法以(±)-邻氯苯甘氨酸为原料,经拆分、酯化,得到( )-邻氯苯甘氨酸甲酯,再与2-(2-噻吩基)乙醇对甲苯磺酸酯经SN2取代,生成α-2-噻吩乙氨基-2-氯苯基乙酸甲酯,后者在甲醛存在下环合制得( )-氯吡格雷游离碱,最后与硫酸成盐,经重结晶得目标产物氯吡格雷硫酸氢盐。结果与结论以26.9%的收率合成了目标产物,较大幅度地降低了生产成本,优化了反应条件,简化了后处理过程,适合于工业化生产。     

吉非罗齐的合成

目的：合成吉非罗齐,并进行工艺改进。方法以２,５－二甲基苯酚为起始原料,与１－氯－３－溴丙烷反应,得３－（２,５－二甲基苯氧基）－１－氯丙烷,再与异丁酸钠锂作用,制得吉非罗齐。结果：通过两步反应制得产物,总收率４３．８％,醚化反应经优化后收率较文献提高３０％以上。合成产物经红外光谱,核磁共振谱及质谱确证。结论：缩短了反应步骤,提高了反应收率。     

吉非罗齐的合成

目的:合成吉非罗齐,并进行工艺改进。方法:以2 ,5-二甲基苯酚为起始原料,与1-氯-3-溴丙烷反应,得3-( 2 ,5-二甲基苯氧基)-1-氯丙烷,再与异丁酸钠锂作用,制得吉非罗齐。结果:通过两步反应制得产物,总收率4 3.8%。醚化反应经优化后收率较文献提高30 %以上。合成产物经红外光谱、核磁共振谱及质谱确证。结论:缩短了反应步骤,提高了反应收率。     

4-氯丁醛缩醛的合成

目的改进4-氯丁醛缩醛的合成方法。方法以γ-丁内酯为起始原料,经开环、卤化、催化加氢及缩醛化4步反应制得4-氯丁醛缩醛。结果目标产物的化学结构经1HNMR分析确证,总收率46.6%。结论改进后的方法,原料易得、操作简便,易于工业化生产。     

3-(2′-氯-6′-氟苯基)-5-甲基-4-异噁唑甲酰氯的合成

目的 研究抗生素氟氯西林钠的关键中间体3-(2'-氯-6'-氟苯基)-5-甲基-4-异噁唑甲酰氯的合成方法,使之适合工业化生产.方法 以2-氯-6-氟苯甲醛为原料,经肟化、氯化、环合、水解、酰氯化等步骤制得目标化合物.结果 合成产物的化学结构经IR,1H-NMR,13C-NMR and MS确证,总收率为60.2%.结论 此方法收率高,成本低,适合工业化生产.     

3-(1-氯-亚庚基)吲哚酮的合成研究

以邻碘苯胺为原料,经Sonogashira交叉偶联反应、羰基化环合反应两步合成了3-(1-氯-亚庚基)吲哚酮,该方法 反应步骤少,产物市体选择性好,反应总收率为84.1%,产物结构经南NMR和MS确证.     

HPLC法测定富马酸氯马斯汀及富马酸氯马斯汀片的有关物质

目的:采用高效液相色谱法测定富马酸氯马斯汀及片剂中的有关物质和降解产物。方法:采用ODS-3 C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);柱温为35℃;流动相为乙腈-辛烷磺酸钠溶液(50∶50);流速为1.0 mL.min-1;检测波长为210 nm;进样量为10μL。结果:各降解产物、辅料均可与富马酸氯马斯汀主峰良好分离,方法的精密度和重复性良好(RSD<0.3%)。结论:经方法学验证,该法灵敏、准确,适用于富马酸氯马斯汀及片剂中有关物质的测定。     

中华猕猴桃多糖的提取及其对自由基的清除作用

中华猕猴桃根经热水提取,乙醇分部沉淀,鞣酸去除蛋白质,再经 Polyerde吸附,60 C热水脱附,乙醇沉淀、冻干,得ACPS。ACPS对O_(2~·)~-和OH~·的抑制功能采用电子顺磁共振法（EPR）测定,ACPS对O_(2~·)~-的清除能力与SOD相同,对OH~·的清除能力略强于V_c。     

天葵子多糖的提取与鉴定

目的提取天葵子多糖,并对其进行定性定量分析。方法采用水提醇沉法提取天葵子多糖,用苯酚-硫酸比色法测定多糖粗提物中的总糖含量,咔唑-硫酸法测定酸性多糖含量,双缩脲法测定蛋白质含量,凝胶过滤法测定相对分子质量(Mr),气相色谱法确定天葵子多糖的单糖组成及摩尔比。并对其进行红外光谱分析。结果总糖含量为80.4%,酸性糖含量为6.8%,蛋白质含量为16.6%,Mr约为6.3×104,天葵子多糖含葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖,摩尔比例为6.23∶2.04∶3.15∶1.03∶1。多糖结构含非O-型呋喃糖苷键。结论天葵子多糖为5种单糖组成的混合物。     

冬凌草甲素上调人前列腺癌PC-3细胞PTEN基因的表达及其诱导凋亡作用

目的：研究冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及与PTEN基因表达的关系。方法：MTT比色法测定冬凌草甲素诱导PC-3细胞的增长抑制;流式细胞术分析DNA倍体测定细胞凋亡;RT-PCR半定量分析冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞后PTENmRNA的表达情况。结果：MTT比色法测得冬凌草甲素对PC-3细胞具有明显的增殖抑制作用,并随冬凌草甲素浓度的升高及作用时间的延长而增强;流式细胞术分析PC-3细胞经冬凌草甲素诱导后,细胞凋亡比率随作用时间延长而增加。RT-PCR测得PTEN基因mRNA的表达随细胞凋亡的增加而逐渐增高。结论：冬凌草甲素能够明显抑制PC-3细胞的增殖,并诱导前列腺癌细胞凋亡,其作用途径可能与上调PTENmRNA表达有关。     

垂盆草总黄酮的酶法提取及其抑菌活性

目的研究垂盆草总黄酮的酶法提取工艺及其抑菌作用。方法用酶解和煎煮相结合的方法,以总黄酮得率为指标,通过正交实验优选出最佳提取工艺,用平板打孔法考察垂盆草总黄酮的抑菌作用。结果垂盆草总黄酮的最佳酶解工艺条件是酶解温度50℃,酶解pH 6.0,酶用量0.6%,酶解时间1.5 h,其中酶解温度是显著影响因素。总黄酮得率可达3.471%。垂盆草总黄酮提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和产气杆菌都有不同程度的抑菌作用,对四联球菌作用不明显。结论该实验得到的垂盆草总黄酮的提取工艺合理可行,提取率高,提取得到的总黄酮具有一定的抑菌作用。     

壳聚糖树脂吸附提取辣椒素及其含量的测定

目的以干辣椒为原料,用壳聚糖树脂吸附提取辣椒碱并测定其含量。方法采用1%NaOH粗提取,提取液脱脂后用壳聚糖树脂柱吸附,乙醇洗脱、重结晶得淡黄色针状辣椒素的晶体。采用香兰素-亚硝酸钠比色法测定辣椒素含量,用HPLC分析晶体中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量。结果辣椒素收率为0.38%,辣椒素晶体纯度为91.20%,其中辣椒碱为63.17%,二氢辣椒碱为26.75%。结论采用壳聚糖树脂吸附提取辣椒碱,方法简便,成本低廉,产率和纯度较高。     

血浆中细菌内毒素定量测定方法的研究

目的:建立定量测定血浆中细菌内毒素的实验方法。方法:以内毒素检查用水制备标准曲线,动态浊度法定量测定分别采用3种抗凝剂的抗凝血中细菌内毒素的含量及回收率;以正常人血浆制备内毒素标准曲线,以抗增液复溶鲎试剂,动态浊度法定量测定人血浆中内毒素的含量及回收率。结果:使用肝素钠抗凝的血浆溶液对内毒素测定无干扰,而其他抗凝剂肝素锂、EDTA-K2等有干扰;人血浆经稀释加热处理,配合使用抗增液后制备的标准曲线与使用内毒素用水制备的标准曲线相比,可以更好地测定人血浆中细菌内毒素的含量,且具有较好的重现性;用所建立的方法测定肠癌患者血浆中内毒素的含量,其结果显著高于正常人血浆中内毒素的含量。结论:以肝素钠作抗凝剂,血浆经稀释加热处理并配合使用抗增液可定量测定血浆中细菌内毒素的含量。     

磷脂酶C对ADP诱导的兔血小板IP_3水平的影响

目的测定磷酯酶C(PLC)对ADP诱导的兔血小板三磷酸肌醇(IP3)的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法取家兔血除去红细胞制备血小板,血小板计数后分为8个组。第1组用生理盐水处理,第2组用ADP处理,第3组用ASP处理以ADP诱导激活,第4~8组分别用不同剂量的PLC处理并以ADP诱导激活。采用三氯醋酸法制备血小板IP3,再用放射免疫分析法分别测定IP3含量。结果家兔血小板经生理盐水处理后的IP3含量为0.29 pmol/108血小板,而经ADP处理后IP3含量为0.39pmol/108血小板。经ASP 668μmol.L-1、5、10、15、20和25 U PLC.ml-1各组处理,并以ADP激活的血小板,测得的IP3含量分别为0.19、0.08、0.15、0.25、0.04和0.18(pmol/108血小板)。ADP组比生理盐水组IP3有明显的提高,而ASP组、不同的PLC组比ADP组IP3有明显的降低(P<0.05)。结论PLC使得ADP激活后的兔血小板IP3水平下降,且无剂量依赖性,表明PLC具有降低血小板中IP3水平的作用,这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。     

胰岛素与脂质体的相互作用

目的研究胰岛素与脂质体的相互作用。方法用荧光扫描、荧光淬灭、HPLC测定及微量量热方法,对胰岛素脂质体相互作用样品和超速离心、凝胶柱分离样品进行研究。结果胰岛素与脂质体相互作用后,胰岛素的荧光发射峰未发生蓝移,仅强度有所增加,荧光淬灭实验结果与胰岛素溶液基本相同,K_sv之比分别为0.9及0.81,微量量热实验表明为非共价键结合。分离后的样品经HPLC测定,胰岛素与脂质体的结合率只有0.2%,说明胰岛素与脂质体作用属弱吸附方式,未发生插膜(镶嵌);结合量小且强度低。结论胰岛素与脂质体相互作用的数量及程度均较弱,属于弱吸附的范畴。     

Enzyme inhibition XI: glutamate decarboxylase activity relationship with the reaction products as determined by the colorimetric and radioisotopic methods

The relationship of glutamate acid decarboxylase (GAD) activity with the reaction products was developed. It was based on incubating sodium glutamate substrate (S) with GAD enzyme (E) when the enzyme-substrate-complex (ES) product was obtained along with gamma aminobutyric acid (GABA) and unreacted sodium glutamate. The reaction products were separated by paper chromatography. The ES, GABA and S products were sprayed with ninhydrin reagent when ninhydrin-colored-complex (NCC) was formed on the paper chromatogram. The products were extracted with 75% ethanol containing 0.5% cupric sulfate. The NCC absorption readings of ES and S products were measured by a spectrophotometer. A standard curve was prepared by plotting absorption readings against different concentrations of sodium glutamate. This curve was the basis of determining GAD activity of E. coli and C. welchii. It was observed that NCC absorption of ES and S products was directly related with the enzyme activity. The qualities of ES and S products in the reaction mixture increased as the enzyme activity increased with the incubation time. On the other hand, some products in the reaction mixture decreased in the presence of an inhibitor of GAD activity. The relationship of reaction products with GAD activity was also established by the radioisotopic method. The results obtained by the chromatographic separation of products followed by the spectrophotometric method of determining GAD activity is a simple, safe and less expensive compared to the other methods.     

人心肌肌钙蛋白IcDNA的克隆及分泌表达

克隆人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因全序列，并进行分泌表达。从人心肌组织提取总RNA，经逆转录得到cDNA第一链，以此为模板，PCR扩增目的条带，重新设计上游引物，用相同PCR程序完成点突变；突变后PCR产物克隆入Pfd5载体，并用PCR、SpeI XhoI双酶切、载体测序等方法鉴定；用ITPG诱导cTnI的表达。PCR扩增出630bp左右条带，Pfd5—cTnI融合表达载体用PCR、SpeI Xho1双酶切均可见630bp左右条带，测序结果与预期序列一致；诱导后培养基及细胞周质均检测到cTnI蛋白免疫原活性。人心肌肌钙蛋白I得到成功表达。