犬贾第虫巢式PCR检测方法的建立

目的建立犬贾第虫巢式PCR检测方法并进行验证。方法根据犬贾第虫Rnase P基因序列设计两对特异性引物,通过优化Mg2+浓度和退火温度建立巢式PCR检测方法,并进行灵敏度和特异性验证。用优化的巢式PCR方法检测60份犬临床粪样。结果建立的巢式PCR方法的最佳Mg2+浓度为3.0 mmol/L;最佳退火温度为53℃;对犬贾第虫的最低检测量可达1个虫体DNA/ml;对柔嫩艾美尔球虫、伊氏锥虫、弓形虫、阴道毛滴虫、犬心丝虫等寄生虫基因组DNA的扩增结果均为阴性;60份犬临床粪样贾第虫的检出率为61.7%。结论建立的巢式PCR检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于犬贾第虫感染的临床检测。     

犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条的制备

目的制备犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用于标记抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体2D12制作金标垫,兔抗细粒棘球绦虫Ediag A864多克隆抗体标记检测线(T线),羊抗鼠Ig标记质控线(C线),制备胶体金试纸条,并进行特异性、敏感性、重复性及稳定性试验。用优化的胶体金检测试纸条对96份犬粪样品(36份参照阳性样,60份临床样品)进行检测。结果制备的犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条与犬蛔虫阳性粪及犬贾第虫阳性粪样品均无交叉反应;粪便稀释度为1∶4时仍可检出正确结果;3次检测参照阳性样本均为阳性;于不同温度(室温、4及37℃)下保存不同时间(1、2、3、4个月)的试纸条均可检出正确结果。96份犬粪便样品中,36份参照阳性样品检出率为97.2%(35/36),60份临床样品均为阴性。结论制备的试纸条具有良好的特异性及稳定性,可应用于临床样品检测及大规模流行病学调查。     

云南大理某农村猪星状病毒分子流行病学调查

目的了解云南大理某农村猪群中星状病毒(astrovirus,AstV)感染情况,为AstV的防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术,对云南大理某农村采集的42份猪粪便样品进行PAstV799 bp基因部分片段扩增、克隆,并测序;利用NCBI BLAST进行数据库比对,Mega 4.1软件进行序列同源性比较和系统进化树构建。结果 Trizol试剂提取42份猪粪便样品上清总RNA,经RT-nested PCR扩增,5份样品可见799 bp的目的基因片段,阳性率为11.90%;PAstV 799 bp片段同源性分析显示,5个毒株与PAstV-1、2、3、4和5的同源性为46.3%~87.9%,与PAstV-4的同源性最高,为75.5%~87.9%;PAstV 799 bp片段的系统进化分析显示,分离的毒株属于PAstV-4,同源性为80.0%~99.5%。结论云南省PAstV-4流行病学调查将有利于中国AstV的预防及治疗。     

犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

目的建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度、最佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105。建立的双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1%BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1∶800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8。用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法。     

贾第虫核糖核酸酶PRNA转录本3′端序列及其存在形式

目的确定贾第虫滋养体内核糖核酸酶P(RNase P)RNA 3′端序列及其存在形式。方法提取贾第虫滋养体总RNA,大肠埃希菌(E.coli)Poly(A)聚合酶加polyA尾后,进行反转录,扩增出加polyA尾后的cDNA,经PCR及测序进行鉴定,确定其3′端序列。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测RNase P-GLsR15共转录体与RNase PRNA成熟体的总表达量,两者之差即为RNase P RNA成熟体的表达量,确定贾第虫RNase P RNA的存在形式。结果 RNase P RNA 3′cDNA大小约300 nt,3′端序列与GLsR15 3′端序列一致;RNase P-GLsR15共转录体和RNaseP RNA成熟体的总表达量与RNase P-GLsR15共转录体表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论已成功克隆了RNase P RNA 3′端序列,证实RNase P RNA和GlsR15的共转录体即为RNase P RNA成熟体的存在形式。     

长春地区丙型肝炎病毒的基因分型及其与肝脏疾病的相关性

目的分析长春地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型的分布及其与HCV RNA含量、感染途径、肝病程度的相关性。方法采用荧光定量PCR和型特异性引物PCR对82份抗-HCV阳性病人的血清标本进行HCV RNA检测及HCV的基因分型,并分析基因型与感染途径、HCV RNA含量和肝病程度的相关性。结果78份HCV RNA阳性血清标本中1a型占5.1%、1b型占48.7%、2a型占33.3%、2b型占11.6%、3a型占1.3%,未发现混合型。血源性与非血源性感染患者间HCV基因型构成比差异无统计学意义。基因1b型的HCV RNA含量高于2a型,且差异有统计学意义。HCV感染的不同程度肝病患者的基因型分布差异有统计学意义,基因1b型比率显著高于其他基因型。结论长春地区丙型肝炎病毒基因型流行株为1b和2a型;HCV基因型与感染途径无明显相关性;基因lb型的病毒含量明显高于2a型;HCV基因型与慢性丙型肝炎的严重程度及肝硬化、肝癌的产生有一定的相关性。     

戊型肝炎病毒在长春地区动物群中的流行病学研究

目的分析戊型肝炎病毒(HEV)在长春地区动物群中的感染情况及戊型肝炎病毒系统进化关系。方法用抗-HEV抗体试剂盒检测长春地区猪、牛、羊、鹿、鸡和马血清中的抗体;对部分血清用RT-PCR检测HEVRNA,并对PCR阳性产物进行克隆测序及序列分析。结果493份猪血清中有427份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为86.61%;有5份为HEVRNA阳性,5株克隆的核苷酸序列的同源性为91.2%～99.1%,该5株克隆的序列在ORF2区348bp与1～4型间核苷酸同源性分别为77.8%～82.3%、77.2%～78.1%、77.2%～99.1%和85.2%～95.2%;266份牛血清中有122份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为45.86%;93份羊血清中有7份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为7.53%;798份鹿血清中有348份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为43.61%;369份鸡血清中有18份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为4.88%;197份马血清中有31份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为15.74%。结论HEV在多种动物群中均有流行,但在猪群中的流行率明显高于其他动物群。猪感染的HEV的基因序列与人群中散发性戊型肝炎病毒的基因4型同源性最高。进化关系表明,在长春地区猪与人HEV应划为一个分支。     

腮腺炎病毒临床口漱液样本的一步法实时荧光定量PCR检测

目的建立腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)临床口漱液样本一步法荧光定量PCR检测方法,为腮腺炎的临床诊断及免疫防控提供依据。方法对101份采集自中国南部3个省、自治区(云南、四川、广西)的临床疑似腮腺炎患者口漱液样本,分别采用细胞培养-MuV特异的巢式PCR法及TaqMan探针Real-time PCR法进行检测,比较两种方法检测MuV的灵敏性。结果细胞培养-MuV特异的巢式PCR法共检出31份MuV阳性样本,系统进化分析表明,该31株MuV均属于F基因亚型;TaqMan探针Real-time PCR法共检出41份MuV阳性样本,其中包含了细胞培养-MuV特异的巢式PCR法检出的31份阳性样本,TaqMan探针Real-time RT-PCR法对MuV的检出率(40.59%)高于传统细胞培养-巢式PCR法的检出率(30.69%)。结论 TaqMan探针Real-time PCR法的灵敏性、特异性和简便性均优于传统的细胞培养-MuV特异的巢式PCR法,可应用于腮腺炎的临床诊断及免疫防控。     

2019-2020年辽宁省沿海城市甲型肝炎病毒基因特征分析

目的 对2019-2020年辽宁省沿海城市甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的基因特征进行分析.方法 选取2019-2020年辽宁省丹东、大连、盘锦市急性期甲型肝炎患者的血清或粪便标本(共162份),采用巢式PCR法进行HAV VP1/2A序列扩增,阳性样本进行基因测序,选取28个代表序列,同时...     

猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

目的建立猪细小病毒(PPV)PCR检测方法。方法设计一对针对PPV的特异引物,经方阵滴定法确定PCR检测的最佳条件,以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行斑点杂交鉴定。提取已知滴度的病毒培养物DNA为模板,稀释后进行PCR扩增,测定PCR方法的敏感性。采用此方法检测了180份猪各种组织样品的DNA及PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型。结果仅PPV野毒株和北京分离株AV7909能够扩增出一条531bp的片段,测序结果证明为PPV的特异片段。该方法所能检测的最小病毒滴度值为0.398TCID50,可以检测出PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型中0.500 TCID50的感染量。180份组织样品均未检出PPV。结论该方法具有良好的特异性和敏感性。     

DUO-ICP-AES测定精对苯二甲酸中的钴、铬、铁、锰、钼、镍、钛

采用DUO-ICP-AES同时测定精对苯二甲酸中钴、铬、铁、锰、钼、镍、钛,并对仪器的分析线选择、背景校正、入射功率、雾化器压力、辅助气流量、冷却气流量、蠕动泵转速的影响及共存元素的干扰、硝酸铯灰化助剂等因素进行了详细的研究。方法的检测限:钴0.0097 mg/L;铬0.0021 mg/L;铁0.0078 mg/L;锰0.0012 mg/L;钼0.0027 mg/L;镍0.016 mg/L;钛0.0027 mg/L,回收率和精密度分别为93.0%～99.5%和0.37%～3.2%。该方法快速简便,具有良好的精密度和准确度,适用于进出口精对苯二甲酸的日常检验。     

ICP—AES测定石英砂中的铁、铝、钙、钛、硼、磷

本文阐述了用ICP—AES法同时测定石英砂中的Fe、Al、Ca、Ti、B、P,试样用HF和H2SO4加热分解,HCl溶解盐类。试样的处理只需一次便可做多元素的分析。测定结果准确、快速,相对偏差小,在操作上更易掌握。     

染发剂中铁、铜、铬、镉、铅、镍和钴等重金属含量测定

建立了微波消解前处理,电感耦合等离子发射光谱(ICP-AES)测定染发剂中铁、铜、铬、镉、铅、镍和钴等重金属含量的方法。该方法各元素检出限均为0.05 mg/kg,线性范围0～500 ng/mL,加标回收率86.8%～108.0%,相对标准偏差为0.98%～5.54%。该方法简便、灵敏,结果稳定准确,可以用于染发剂中重金属含量的测定。     

对羧基苯甲醛、对甲基苯甲酸、苯甲酸、对苯二甲酸和间苯二甲酸在N,N-二甲基甲酰胺中的溶解度

采用激光监视技术由合成法实验测定了对羧基苯甲醛、对甲基苯甲酸、苯甲酸、对苯二甲酸和间苯二甲酸在N,N－二甲基甲酰胺中的溶解度。实验数据用多项式方程进行关联,计算的溶解度与实验值符合良好。     

ICP-AES分析低合金钢中的Mn、Mo、V、Ni、Al、Cu、Cr元素

用等离子发射光谱法测定低合金钢中的Mn、Mo、V、Ni、Al、Cu、Cr元素,试样用HNO3和HCl在加热条件下分解,经过系列试验,选择仪器的工作条件,进行测定,建立了一套分析方法,经对照分析,分析结果令人满意。本方法快速准确,精密度良好,完全可以满足生产需要。     

ICP-OES测定大量元素水溶肥料中锌、镁、铜、铁、锰、钼、硼含量

采用ICP-OES对大量元素水溶肥料中微量元素锌、镁、铜、铁、锰、钼、硼进行分析,研究确定了最佳分析条件。加标回收率为96.94%～106.2%,RSD为0.50%～1.40%,检出限为0.001 8～0.218 0 mg/L,方法简便、快速、准确。     

Dispirations,disclinations, dislocations,and chain twist in polyethylene crystals

It is proposed that the twist in polyethylene chains that can result from crystallization and subsequent deformation aggregates at boundaries and becomes a template for further reorganization that results in the long period observed in polyethylene fibres. The observed lower density at the boundaries requires the transport of free volume to the twist boundaries. Dispirations, disclinations and dislocations are crystallographic defects that are involved in the necessary transport mechanism. Twist and bend, derived from the Eulerian angles which are computed from the sets of chain internal coordinates, relate the orientation of different segments of a chain. Twist and bend are useful for the characterization of both crystallographic defects and arbitrary conformations of polymer chains. Defects, along with folds, chain ends, and ordinary edge and screw dislocations provide a basis for interpretation of structure-property relationships in solid polyethylene.     

Lactones in butter,butteroil, and margarine

The γ- and Δ-lactones of butter, butteroil, and margarine samples were determined by a recently developed extraction and chromatographic method. A chromatographic column is made of three layers consisting of 6 g aluminum oxide upon which is placed 35 g sodium sulfate and then a fat-Celite mixture obtained by grinding 10 g sample with 35 g Celite 545. The column was eluted with acetonitrile, and the extract was concentrated and lactones determined by gas chromatography. γ-Dodecalactone, Δ-decalactone, Δ-dodecalactone, and Δ-tetradecalactone were recovered quantitatively. Freshly made butter had only 7 ppm of these lactones, whereas commercial samples ranged from 12–30 ppm. Two of eight commercial margarine samples had as much as 10 ppm of Δ-decalactone and Δ-dodecalactone. Comparison of unheated butteroil with butteroil heated at various temperatures showed a correlation of lactone content with time and temperature of heating. Butteroil heated at 65 or 100 C showed increasing levels of lactones up to 8 hr, whereas butteroil heated at 145 or 125 C showed a maximum production at ca. 2 and 4 hr, respectively.     

Soy grits,flour, concentrates,and isolates in meat products

Because of changing attitudes of consumers, processors, and regulatory agencies, soy protein products are being used at an increasing rate in various processed meat systems. The use of basic soy protein products in several meat systems is examined and guidelines are presented to optimize their use. Soy products as a supplemental ingredient in various meat systems can contribute nutrition, flavor, and valuable functional properties. As the price of meats continues to rise, and consumer interest in nutrition continues to increase, their demands will prompt governmental agencies to reconsider present meat regulations.