微小隐孢子虫CP15/60基因在Hela细胞中的表达

目的 构建隐孢子虫CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,观察其在Hela细胞中的表达。方法用Xho I和EcoR　I从pMD18-T-15/60中酶切得到CP 15/60基因,将其插入真核表达载体pCR3.1（+）的 XhoI和EcoRI位点,构建CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,用脂质体介导法将其转染Hela细胞,并用G418加压筛选,用RT-PCR方法检测外源CP15/60基因的转录,ELISA法和间接免疫荧光法检测其活性。结果 酶切鉴定表明已成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-15/60,外源CP15/60基因能在转染细胞中有效转录,经检测表达产物具有良好的生物活性。结论 已成功地构建了pcDNA3.1-15/60真核表达载体,并在Hela细胞中具有良好的表达。     

检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用

目的建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用。方法以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证。用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较。结果确定该方法 HRP-H11抗体的最佳稀释度为1∶100,包被抗体最适工作浓度为0.3μg/片,待测血清稀释度为1∶8。自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1∶64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好。该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2%,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致。结论建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法。     

CaF2对C3S和C4A3S矿物形成及共存的影响

以纯化学试剂配料，研究了CaF2和C3S和C4A3S矿物形成及共存的影响。结果表明，掺加适量的CaF2可改善配合料的易烧性，促进C3S及C4A3S矿物的形成，有利于其在熟料中的共存。     

旋毛虫感染诱导的小鼠乳腺癌MCF-7细胞基因表达的变化

目的构建旋毛虫感染诱导的小鼠乳腺癌MCF-7细胞基因表达变化的cDNA消减文库,探讨旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞基因表达的变化。方法复制MCF-7细胞小鼠模型,设对照组和旋毛虫感染组(实验组),采用抑制性消减杂交技术构建旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,并利用反向Northernblot技术对所获得基因的特异性表达进行验证。结果成功构建了旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,克隆的目的基因片段大小分布在200～500bp之间,20个阳性克隆的测序结果经BLAST比对,获得差异表达的已知功能基因8个和未知功能基因4个,这些基因在小鼠乳腺癌细胞中均有表达,而在肌肉组织中无表达。结论旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞差异表达基因上调,其中RB基因可能与乳腺癌细胞的生长抑制密切相关,为在基因水平研究旋毛虫抗肿瘤机理奠定了基础。     

旋毛虫对BALB/c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞的作用

目的观察旋毛虫感染对BALB/c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞生长的作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种HCT-8细胞,荷瘤20 d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量,计算抑瘤率,并检测T淋巴细胞亚群。结果各实验组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、未长瘤小鼠比例、小鼠死亡率和抑瘤率均显著高于对照组;先接虫后荷瘤组抑瘤效果优于先荷瘤后接虫组。结论旋毛虫对BALB/c小鼠体内的人结肠癌HCT-8细胞的生长有一定的抑制作用。     

贾第虫核糖核酸酶PRNA转录本3′端序列及其存在形式

目的确定贾第虫滋养体内核糖核酸酶P(RNase P)RNA 3′端序列及其存在形式。方法提取贾第虫滋养体总RNA,大肠埃希菌(E.coli)Poly(A)聚合酶加polyA尾后,进行反转录,扩增出加polyA尾后的cDNA,经PCR及测序进行鉴定,确定其3′端序列。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测RNase P-GLsR15共转录体与RNase PRNA成熟体的总表达量,两者之差即为RNase P RNA成熟体的表达量,确定贾第虫RNase P RNA的存在形式。结果 RNase P RNA 3′cDNA大小约300 nt,3′端序列与GLsR15 3′端序列一致;RNase P-GLsR15共转录体和RNaseP RNA成熟体的总表达量与RNase P-GLsR15共转录体表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论已成功克隆了RNase P RNA 3′端序列,证实RNase P RNA和GlsR15的共转录体即为RNase P RNA成熟体的存在形式。     

旋毛虫iRNA对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤细胞的抑制作用

目的观察旋毛虫免疫核糖核酸(iRNA)对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤细胞的抑制作用。方法以不同剂量旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫ICR小鼠、家兔和山羊,ELISA检测抗体效价达1:1024的最低免疫剂量确定为最佳免疫剂量,同时取各实验动物肝、脾和淋巴结,制备旋毛虫iRNA,并进行鉴定。以不同剂量iRNA接种BALB/c小鼠,并在不同时间接种SP2/0肿瘤细胞(试验分为先荷瘤和后荷瘤进行)。在荷瘤20d时,处死小鼠,测量肿瘤体积和重量,并检测脾脏T淋巴细胞亚群的变化。结果旋毛虫肌幼虫可溶性抗原的最佳免疫剂量分别为:ICR小鼠:300μg/只;家兔:2mg/只;山羊:20mg/只。制备的旋毛虫iRNA各项指标均合格。各试验组小鼠肿瘤体积和重量均小于相应的对照组,且差异均有统计学意义;各试验组小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+比值较相应的对照组均有不同程度的增高。在后荷瘤试验组中,1mg组抑瘤效果最好;在先荷瘤试验组中,4mg组抑瘤效果最好。结论旋毛虫iRNA对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤细胞的生长具有较强的抑制作用。     

计算机病毒的防治

一、研究背景1986年,可令个人计算机的操作受到影响的电脑病毒首次被发现。此后,电脑病毒的数目不断上升,病毒的侵入必将对系统资源构成威胁,即使是良性病毒,至少也要占用少量的系统空间,影响系统的正常运行。一些通过网络传播的计算机病毒,能在很短的时间内使整个计算机网络处于瘫痪状态,给人们的生产生活带来巨大的麻烦。因此,计算机病毒的防治工作变得越来越重要。计算机病毒的防治要从防毒、查毒、解毒三方面来进行,系统对于计算机病毒的实际防治能力和效果也要从防毒能力、查毒能力和解毒能力三方面来评判。现代信息社会,计算机已经走…     

抗疲劳复方添加剂方剂设计及其功效

本实验以螺旋藻、维生素E、L-肉碱、二十八醇、牛磺酸为原料，采用正交试验方法进行了抗疲劳复方添加剂方剂设计，得到四个较优配方；通过游泳耐力和生化指标的测定研究了四个较优配方的抗疲劳效果。结果表明，四个较优配方均能显著延长小鼠游泳时间，降低血尿素氮和血乳酸含量，具有明显的抗疲劳效果。     

RNA干扰PTEN基因对HCT-8细胞增殖能力的影响

目的:观察小干扰RNA(siRNA)对结肠癌相关基因PTEN表达的抑制作用及其对结肠癌细胞增殖能力的影响.方法:构建携带有针对PTEN基因序列的siRNA真核绿色荧光表达载体重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4,脂质体法转染入结肠癌HCT-8细胞(分别为p1、p2、p3和p4组),同时设转染阴性对照质粒组(p5组)和亲本细胞组(p6组),实时 PCR方法检测PTEN mRNA表达,MTT法分析细胞增殖活性变化.结果:通过荧光显微镜观察计数,细胞转染率为58%.实时 PCR方法检测结果显示,siRNA 重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4的抑制率分别为48.3%、76.5%、29.4%和61.2%,与p6组比较差异均有统计学意义(P<0.05).MTT结果表明,细胞增殖抑制能力明显增强.结论:PTEN基因在肿瘤的发生发展中可能起到一定的作用.