一株产纤维素酶的耐热烟曲霉筛选及产酶条件研究

从土壤中分离和筛选到l株产纤维素酶能力较强的耐热真菌E4.通过菌株的形态特征和18S rDNA序列同源性比较,该菌株被鉴定为一种烟曲霉(Aspergillus fumigatus).实验结果表明,该菌株能在20℃以下生长,其最适和最高生长温度分别为40℃和55℃.该菌株的最佳产纤维素酶的基质为稻草,其最适产酶pH值为5.0,最适产酶温度为42℃.50℃摇瓶培养72h时可达到产酶最高峰,其羧甲基纤维素酶(CMCase)活和滤纸酶(FPA)活分别达到3.5U/mL和3.2U/mL.该菌株对稻草的降解效果较好,45℃液体摇床培养条件下在7d内对天然稻草的降解率达63.5％.     

木聚糖酶产生菌——类芽孢杆菌的筛选及其酶学性质研究

从富舍半纤维素的土壤中分离、纯化木聚糖酶的高产细菌.并对其酶学性质进行研究.采用平板法及DNS法分离筛选菌株,利用16S rDNA鉴定菌种;研究不同pH、温度、金属离子等因素对木聚糖酶酶学性质的影响.最终筛选出1株木聚糖酶高产细菌,经鉴定其为类芽孢杆菌.对其酶学性质的研究表明.其最适温度50 ℃,最适pH 5.0;在pH 4.0-10.0、温度20～50℃之间有较好的稳定性,其野生型菌株的木聚糖酶活力可达到122.77 IU.     

高产木聚糖酶菌株的诱变筛选及其产酶性质

以青霉M1-1为出发菌株，经过紫外诱变和透明圈筛选得到两株遗传性状稳定的高产木聚糖酶菌株M128和M195，同时对其产酶特性进行了研究。结果表明,M128和M195所产木聚糖酶的最适pH值分别为6．0和5．0，最适反应温度分别为55℃和45℃，M128所产木聚糖酶的温度和pH稳定性以及对底物的亲和性均比M195好。     

木聚糖酶产生菌的筛选、发酵及酶学性质

该研究对木论自然保护区土壤中高产木聚糖酶的菌株进行了分离,经菌落形态观察、ITS基因序列分析对菌株进行了鉴定,并通过单因素固态发酵实验确定最佳产酶条件。结果表明,筛选到1株高产木聚糖酶菌株,并鉴定为黑曲霉（Aspergillus niger）。其最佳产酶培养基配方：玉米芯与麸皮质量比为1∶7、氮源为硫酸铵（添加量1.4 g/L）、初始pH值为5.0、料水比为1∶3.5（g∶mL）,接种量为7.5%。在此优化条件下,木聚糖酶酶活最高可达10 801.3 IU/g。酶学性质研究表明,木聚糖酶的最适作用pH值为5.5、最适作用温度为37 ℃。     

常压室温等离子体诱变选育木聚糖酶高产菌及其酶学性质研究

利用常压室温等离子体（ARTP）技术对黑曲霉（Aspergillus niger）FXY进行诱变处理,并对菌株的遗传稳定性及所产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明,筛得一株高产木聚糖酶且能稳定遗传的菌株ARTP-82,其所产木聚糖酶酶活为175.33 U/mL,较出发菌株提高了120.8%。酶活的提高与酶比活力增加有关、与菌株生物量增加无关;该木聚糖酶的最适温度为45.0 ℃、最适pH值为7.0,在该温度和pH值条件下酶的稳定性良好。     

耐热纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

从温泉热源地区采集的大量泥土和水样中，筛选出一株在60℃生长的纤维素酶产生菌SH2。结合菌株的生理生化特性分析与Biolog微生物自动鉴定仪的鉴定结果，命名为热葡糖苷酶地芽孢杆菌（Geobacillus thermoglucosidasius）SH2，该菌株兼性好氧，在45～60℃能较好地生长。对菌体生长与产酶培养条件优化表明：初始pH值为5．5，碳、氮源分别为蔗糖和玉米浆时有利于产酶，经48h发酵后纤维素酶酶活达0．36IU／mL。纤维素酶反应条件研究表明，该纤维素酶的最适pH值为6．0，在pH4．0～10．0范围具有较强的耐受性；在45～65℃间酶活差异仅在5％之内，显示了很好的温度耐受性。     

真菌融合子R201纤维素酶的纯化及性质研究

采用两株真菌康宁木霉3.2774和白腐真菌5.776融合产生的融合菌株R201对秸秆进行液态发酵,发酵粗酶液经硫酸铵盐析,SephadexG-100柱层析2次后酶活可提纯8.89倍。经SDS-PAGE测得3种纤维素酶的分子量约为66.3、52.7ku和37.0ku。酶作用的最适温度为50℃,最适pH值为5.0,在40℃以下,pH值4～6之间酶活较稳定。浓度为5mmol/L的Fe2 对酶反应有明显促进作用。     

一株中性内切纤维素酶产生菌的分离及鉴定

利用刚果红染色法从偏碱性土壤中分离产内切纤维素酶的菌株,通过内切纤维素酶(CMC酶)的发酵液酶活和酶促反应最适pH,复筛得到1株中性内切纤维素酶产生菌A8。经形态学观察、生理生化特征分析及分子生物学鉴定,A8菌株属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。其在50℃、pH7.0发酵96h条件下发酵液的中性内切纤维素酶酶活为141.70U/mL,是一株在食品加工中具有开发潜力的产中性内切纤维素酶菌株。     

产耐热纤维素酶菌株的分子鉴定及产酶条件优化

从温泉热源地区采集的水样中筛选出1株60℃生长的纤维素酶产生菌NR615。通过ITS序列及系统发育进化树的分析表明该菌株为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。该菌株在28～60℃生长较好。对菌体及产酶条件进行优化得出:初始pH6.5,碳、氮源分别为结晶纤维素、牛肉膏时有利于产酶。其产生的纤维素酶的最适反应温度65℃,最适pH5.0,且在50～70℃有一定稳定的活性。经过响应面分析优化培养基,发酵5 d时活力达到2.411 3 IU/mL。这些特征表明,该菌株是1株性能良好的耐热纤维素酶生产菌株。     

纤维素酶高产菌筛选鉴定及酶学性质初步研究

该研究从土壤中筛选出一株纤维素酶高产菌株SP08,并通过菌落形态特征和ITS测序技术对菌株进行鉴定,最后通过酶促反应初步测定了该菌所产纤维素酶的性质。结果表明,筛选得到菌株SP08,经鉴定为康氏木霉（Trichoderma koningii）,该菌株具有较高的纤维素酶产酶能力,培养60 h时纤维素酶活性即达（18.54±0.75）,72 h时酶活达到最高（19.18±0.68）U/mL。酶学研究表明,菌株SP08所产纤维素酶最适温度和pH分别为50 ℃和5.5,在20～50 ℃及pH4.0～6.0时稳定性较高;Mg2+、Mn2+和Ca2+能够提高该酶活性,而Fe2+和Cu2+却对该酶具有抑制作用。     

毛柄金钱菌gpd启动子驱动福寿螺纤维素酶基因在灰盖鬼伞菌中的表达

为研究毛柄金钱菌gpd启动子驱动福寿螺纤维素酶基因(mfc)在大型丝状真菌中的表达效果,本实验通过构建毛柄金钱菌gpd启动子驱动的mfc基因的真核表达载体,采用PEG(polyethylene glycol)介导法将目的基因重组进色氨酸营养缺陷型灰盖鬼伞菌染色体,对转化子进行PCR、Southern blotting、RT-PCR等分子鉴定,通过测定滤纸酶、CMC酶和木聚糖酶的活力考察mfc的表达效果。结果表明：多功能纤维素酶基因整合入灰盖鬼伞基因组中,毛柄金钱菌gpd启动子能够高效驱动mfc基因的表达,其中酶活力最高的工程菌株为Cfvlm9,其滤纸酶活力、CMC酶活力和木聚糖酶活力分别为21.5、44、235U/mL,分别是对照的1.79倍、1.6倍和2.97倍。     

浏阳豆豉发酵中高产酶活菌株的分离鉴定及酶活性分析

从浏阳豆豉发酵过程中分离产高酶活菌株,通过形态观察结合分子生物学技术进行鉴定,并对其产蛋白酶、脂肪酶及纤维素酶的活性进行分析。结果表明,分离得到3株菌（编号为000、5132、621）均被鉴定为溜曲霉菌（Aspergillus tamarri）。3株菌的蛋白酶、脂肪酶及纤维素酶的活性测定结果表明,菌株621蛋白酶活性最强,为（207.98±3.20）U/mL;菌株5132的纤维素酶活性最强,为（3.40±1.40）U/mL;菌株000的脂肪酶活性最高,为（90.7±0.64）U/mL。     

New isolate of Trichoderma viride strain for enhanced cellulolytic enzyme complex production

A new Trichoderma viride stain was isolated from Singapore soil samples. Its mutants were developed by using ethyl methyl sulfonate (EMS) treatment and UV-irradiation followed by a semi-quantitative plate clearing assay on phosphoric-acid-swollen cellulose plates. Mutant EU2-77 proved to be the most promising extracellular cellulase producer among 20 mutants in a screening program performed in shake flask fermentation after plate screening. Soluble protein content, filter paper cellulase (FPase) activity, β-glucosidase activity and endoglucanase (CMCase) activity of the fermentation broths of the mutant strain were increased to 1.67, 2.49, 2.16, and 2.61 folds, respectively, compared with the wild strain. This enzyme complex produced by mutant EU2-77 contained FPase (2.19 IU/ml), CMCase (16.46 IU/ml), β-glucosidase (4.04 IU/ml), xylanase (42.37 IU/ml), and β-xylosidase (0.12 IU/ml). The soluble protein concentration in the enzyme complex was 1.69 mg/ml. The hydrolytic capacities of fermentation supernatants of T. reesei Rut-C30, the wild strain T. viride NP13a and mutant T. viride EU2-77 were compared with the commercial enzymes on the hydrolysis of waste newspaper. The crude enzymes prepared by T. viride EU2-77 showed much higher hydrolysis performance than that from the commercial strain Rut-C30 and demonstrated much comparable hydrolytic performances with the commercial enzyme mixtures. T. viride mutant EU2-77 produced high levels of extracellular cellulases as well as β-glucosidase, rendering the supplementation of β-glucosidase unnecessary in waste newspaper hydrolysis.     

Thermostable and alkaline-tolerant cellulase-free xylanase produced by thermotolerant Streptomyces sp. Ab106

Cellulase-free xylanase was produced by Streptomyces sp. Ab106 using cane bagasse as the substrate at 55 degrees C. Its maximum activity was 13 IU without cellulase and mannanase activities. Its profiles were investigated. Its optimum temperature and pH were 60 degrees C and 6.0, respectively. More than 70% of its activity was remained at 60 degrees C at pH 9. This enzyme was quite stable and exhibited an active of more than 70% for 144 h at 60 degrees C, and of more than 80% for 144 h at 40 degrees C, pH 9. This thermo-tolerant and alkaline-tolerant xylanase can be used in the pulp bleaching process.     

豆粕异黄酮酶法提取的研究

大豆异黄酮是一类具有重要生理作用的植物雌激素，从豆粕中提取异黄酮具有重要的经济意义。在常规的醇提工艺前用纤维素酶或木聚糖酶预处理，能明显提高大豆异黄酮的提取得率。纤维素酶的最适用量为15FPIU／g豆粕，处理24h后，总异黄酮含量和未经酶处理的相比，可增加1．9倍。采用木聚糖酶对豆粕进行预处理，当酶用量为200IU／g豆粕时，作用36h后，总异黄酮含量可增加2．2倍。纤维素酶和木聚糖酶协同作用有利于提高豆粕异黄酮的得率，在每g豆粕的酶用量为5FPIU纤维素酶和100IU的木聚糖酶的条件下，作用36h后，异黄酮得率为59mg／10g豆粕，是酶未处理的2．2倍。     

速生杨枝桠材P-RC APMP浆的酶促磨浆

研究了纤维素酶和木聚糖酶对速生杨枝桠材P-RC APMP浆酶促磨浆性能的影响.实验结果表明酶预处理可以改善P-RC APMP浆的磨浆性能和成浆质量.纤维素酶和木聚糖酶预处理纸浆打浆度提高3～11°SR,磨浆能耗明显降低.最佳酶用量为25 IU/g.与未经过酶预处理速生杨枝桠材P-RC APMP浆相比,纤维素酶预处理纸浆裂断长提高11%,撕裂指数提高13%,耐破指数提高14%,耐折度提高50%,白度提高1.2个百分点;木聚糖酶预处理纸浆裂断长略有提高,撕裂指数提高15%,耐破指数提高11%,耐折度提高75%,白度提高1.9个百分点.酶预处理可抑制纸浆返黄.纤维素酶的酶促磨浆效果好于木聚糖酶.     

速生杨枝桠材P—RC APMP浆的酶促磨浆

研究了纤维素酶和木聚糖酶对速生杨枝桠材P—RCAPMP酶促磨浆性能的影响。实验结果表明酶预处理可以改善P—RCAPMP浆的磨浆性能和成浆质量。纤维素酶和木聚糖酶预处理纸浆打浆度提高3-11°SR,磨浆能耗明显降低。最佳酶用量为25IU／g。与未经过酶预处理速生杨枝桠材P—RCAPMP浆相比,纤维素酶预处理纸浆裂断长提高12％,撕裂指数提高13％,耐破指数提高14％,耐折度提高50％,白度提高1．2％ISO。木聚糖酶预处理纸浆裂断长略有提高,撕裂指数提高15％,耐破指数提高12％,耐折度提高75％,白度提高1．9％ISO。酶预处理可抑制纸浆返黄。纤维素酶的酶促磨浆效果好于木聚糖酶。     

车前子壳诱导木聚糖酶与阿拉伯糖苷酶协同制备

该研究以车前子壳为诱导底物,采用单因素试验和响应面试验对里氏木霉（Trichoderma reesei）诱导木聚糖酶和阿拉伯糖苷酶的协同制备条件进行优化。单因素试验结果表明,在诱导碳源为车前子壳,初始pH为5.0、底物质量浓度为20 g/L、培养时间为4.0 d、碳氮比为1.6∶1.0时,木聚糖酶和阿拉伯糖苷酶活力最高,分别为（10.59±0.33）IU/mL和（8.99±0.05）IU/mL。响应面试验结果表明,最佳产酶条件为培养时间4.0 d、底物质量浓度20 g/L、碳氮比1.6∶1.0。在此最佳条件下,木聚糖酶和阿拉伯糖苷酶活力分别为（11.42±0.15）IU/mL和（10.83±0.08）IU/mL,分别是未优化前的2.55倍和7.37倍。     

制麦白地霉的筛选及其初步应用

对40株白地霉产β-葡聚糖酶、木聚糖酶、中性蛋白酶和纤维素酶的酶活情况进行研究,以加权评分对这些酶活进行分析评价,从中选出4株白地霉菌株(3号、12号、18号和39号)作为制麦用微生物。通过大麦制麦试验证明:这4株白地霉均对麦芽的溶解具有促进作用,其中12号白地霉的效果最好。与空白对照相比,制得的白地霉麦芽中,β-葡聚糖质量分数降低了17.8%,60min的滤液体积提高了35.4%,糖化力增加了10.3%,α-氨基氮质量分数增加了7.3%,其他理化指标也均符合QB1686-2008。将12号白地霉麦芽与对照麦芽分别进行了啤酒酿造实验,结果表明:白地霉麦芽的酿造性能优于空白对照麦芽,两种麦芽所酿啤酒的理化指标均符合GB 4927-2008。