河南省烟草赤星病病原鉴定

为明确河南省烟草赤星病病原菌的种类,从河南省不同烟区采集烟草赤星病典型病斑,分离病原菌并且做致病性测定,对确定为病原菌的菌种按国际标准方法进一步做形态和分子鉴定。结果显示分离到的85株菌株中60株被证明是烟草赤星病病原菌,从形态学上鉴定为三个种,分别是链格孢Alternaria alternata、长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens。其中鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens引起烟草赤星病属首次报道。三个种的代表菌株的5.8S rDNA ITS基因序列间及已报道的链格孢Alternaria alternata,长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens的5.8S rDNA ITS区均没有较大差异,证明该基因在链格孢小孢子种间较保守,不适合区分这些链格孢种。     

湖北烟区烤烟赤星病病原鉴定

为研究湖北各烟区烟草赤星病病原菌的种类和地理分布,对湖北烟区的72株烟草赤星病病原菌进行形态学观察,共鉴定出4个种,在此基础上对其中8个典型菌株的r DNA-ITS和Plasma membrane ATPase(ATPase)基因进行测序分析,从分子水平上进一步证实湖北烟区烟草赤星病为链格孢(Alternaria alternata)、长柄链格孢(A.longipes)、细极链格孢(A.tenuissima)和鸭梨链格孢(A.yaliinficiens)侵染所致。其中A.longipes广泛分布于湖北各烟区,是优势种群,占69%;A.tenuissima和A.alternata分布在宜昌、十堰、恩施3个烟区;A.yaliinficiens仅在恩施区域零星分布,约占3%。该试验也证实了ATPase基因可以用来作为烟草赤星病病原的辅助鉴定。     

烟草赤星病菌的Biolog代谢表型分析

为了解我国烟草赤星病的2种主要致病菌链格孢菌Alternaria alternata和长柄链格孢菌Alternaria longipes的碳氮源代谢表型。采用Biolog表型芯片技术分析了2株链格孢菌（中等致病力的CQ1和GZ11）及2株长柄链格孢菌（强致病力的HuN2和弱致病力的YN4）对PM1、PM2微孔板中190种碳源物质和PM3微孔板中95种氮源物质的代谢情况。结果发现,4株赤星病菌均能代谢PM1-PM3微孔板中24.21%的碳源和86.31%的氮源。不同致病力菌株间的碳氮源代谢能力表现出一定差异,长柄链格孢菌的强致病力菌株HuN2比弱致病力菌株YN4对D-甘露糖、D-木糖、D-甘露醇、b-环糊精、L-缬氨酸、D-天门冬酰胺、腺苷和i-赤藓糖醇等物质的代谢更显著;链格孢菌的中等致病力菌株CQ1比GZ11对L-鼠李糖、海带多糖和二羟基丙酮的代谢更好;弱致病力菌株YN4比强致病力菌株HuN2和中等致病力菌株CQ1、GZ11对水杨苷的代谢更明显。表明烟草赤星病菌的不同种群菌株对碳氮源的代谢情况总体趋势一致,但不同致病力菌株间存在一定差异。     

四川烤烟赤星病的生物学特性及药剂筛选

为明确四川烤烟赤星病发生规律和生物学特性并筛选高效防治药剂,连续3年在四川省泸州市、凉山州、攀枝花市、广元市、宜宾市等5个主要植烟区对烟草赤星病发生情况进行调查,并在烟叶成熟期采集典型患病烟叶进行病原菌分离培养,通过宏观形态学、显微形态学及分子生物学鉴定其种类并测定菌落生长速率和萌发率,同时在烟田开展烟草赤星病高效防治药剂筛选。结果表明,5个烟区采集的赤星病样均属于链格孢属（Alternaria spp.）真菌,各烟区所采集分离的赤星病菌在SDAY培养基上菌落直径、产孢量和萌发率差异均不显著。5个烟区均发生烟草赤星病,整体发病规律为：每年6月底至9月初,烟田病情指数随着时间的推移逐渐增加,每年8月份,5个植烟区烟草赤星病病情指数显著高于7月份并趋于峰值。10%苯醚甲环唑水分散粒剂和40%菌核净可湿性粉剂对烟草赤星病均有较好的防治效果（防效均大于60%）。     

烟草赤星病拮抗菌Q96的筛选鉴定及其防病效果研究

为分离筛选对烟草赤星病有良好防效的拮抗菌,以烟草赤星病链格孢菌为靶菌,从蚯蚓粪中经初筛和复筛获得拮抗菌,通过形态、生理生化特征和16S rDNA分析鉴定拮抗菌种类,并对烟草赤星病的防治效果进行了研究。结果表明,筛选出一株拮抗菌Q96,初筛和复筛的抑菌率均超过60%,经鉴定为副地衣芽孢杆菌（Bacillus paralicheniformis）,其活菌液（稀释10倍）对孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别为73.33%和79.68%,粗发酵液离体防效可达60.04%。Q96菌株可作为抗烟草赤星病生防菌剂的菌种资源。     

一株枯草芽胞杆菌L249的分离鉴定及对烟草赤星病的盆栽防效

为筛选出对烟草赤星病具有生防潜力的拮抗细菌，以链格孢菌（Alteraria alternata）为靶标菌，采用5点取样法在赤星病发生严重地块采集健康烟株根际土壤，通过梯度稀释分离法和平板对峙法筛选得到一株具有生防作用的拮抗菌L249，对链格孢菌抑菌率达72.27%，经菌落形态、生理生化和分子生物学鉴定为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。该菌能产生蛋白酶、纤维素酶和硝酸还原酶等生防相关酶类。利用比浊法测定菌株L249的生长速率，结果表明该菌培养4 h后进入对数生长期，14 h后进入稳定生长期。盆栽试验结果表明，菌株L249发酵液能有效抑制烟草赤星病的发生，相对防效达60.66%，与10%苯醚甲环唑水分散粒剂的相对防效差异不显著。枯草芽胞杆菌L249可有效防治烟草赤星病，具有较好的生防潜力。     

印度梨形孢诱导烟草的抗病性分析

内生真菌印度梨形孢(Piriformospora indica)能够增强植物体抗生物和非生物胁迫能力.为了明确印度梨形孢对诱导烟草抗病性的作用,分别进行了接种病原菌长柄链格孢、胶孢炭疽菌、终极腐霉和茄丝核菌后印度梨形孢定殖的烟草对赤星病、炭疽病、猝倒病和立枯病害的抗性试验,同时分析了接种长柄链格孢后烟叶中丙二醛(MDA)和脯氨酸(Pro)含量、抗氧化酶活性以及病程相关蛋白基因表达水平.结果表明:印度梨形孢定殖的烟草,接种长柄链格孢后,烟叶病斑显著减小,烟叶中MDA含量显著降低,Pro含量显著升高,病程相关蛋白基因PR-1a,PR2,PR3和PR5的表达量明显提高;接种胶孢炭疽菌后,烟叶病斑减小;终极腐霉和茄丝核菌对烟草的危害症状显著减轻.印度梨形孢能诱导烟草产生抗病性,是通过维持生物膜系统的完整性、稳定细胞内渗透压以及膜脂过氧化在较低水平、并调控病程相关蛋白基因的表达来实现的.     

烟草赤星病病原长柄链格孢菌快速检测胶体金试纸条的研制

为实现大田期烟叶烟草赤星病的快速测定,以胶体金标记特异性识别长柄链格孢菌的单克隆抗体,利用侧流免疫层析技术构建了长柄链格孢菌快速检测试纸条.结果表明,该试纸条对目标真菌的检出限为20 ng/mL,且与烟草相关病原体无交叉反应,灵敏度高、特异性好.利用该试纸条对加标鲜烟叶进行检测,10 min内可完成检测,操作简便快速,...     

河南烟草镰刀菌的分子鉴定及致病性分析

为明确河南省不同烟叶产区危害烟草的镰刀菌种类,以河南省烟叶产区典型镰刀菌根腐病烟株及烟田土壤为供试样品,采用组织分离法和土壤分离法获得纯化菌株,根据菌株形态和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,并采用无创接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,获得的98个菌株在PDA培养基上均产生白色菌丝,大型分生孢子呈镰刀形或马特形,无色、多孢;小型分生孢子呈肾形、椭圆形或卵形,无色、多无分隔。序列比对结果显示,所分离的98株菌分属尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、茄病镰刀菌（Fusarium solani）、层出镰刀菌（Fusarium proliferatum）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）和Fusarium nematophilum。致病性分析结果表明,尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌对烟苗具有致病性;48株致病菌中豫南烟区烟草镰刀菌根腐病致病性病原菌为尖孢镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌,以尖孢镰刀菌为主;豫中为尖孢镰刀菌;豫东、豫西为茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌。因此,尖孢镰刀菌为全省烟区重点防控对象,豫南烟区还需加强层出镰刀菌和木贼镰刀菌的防控,豫东、豫西需防范茄病镰刀菌的发生。      

华莱士瓜采后丝状真菌的分离及rDNA ITS区序列分析

从采后贮藏期间自然发病的华莱士瓜上分离到12 株丝状真菌,将分离菌经纯化后回接到健康无损的华莱士瓜上,发病特征与分离发病果实一致,确定其为华莱士瓜的病原菌。结合形态学观察和rDNA内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分析,结果表明：分离到1 株黑附球菌（Epicoccum nigrum）、1?株草酸青霉菌（Penicillium oxalicum）、2 株链格孢属（Alternaria Nees ex Wallr.）真菌、3 株曲霉属（Aspergillus Micheli ex Fr.）真菌和5 株镰刀属（Fusarium LK. ex Fr.）真菌。其中,黑附球菌（E. nigrum）为甜瓜中首次发现的病原菌,而草酸青霉菌（P. oxalicum）、细极链格孢菌（Alternaria tenuissima）、泡盛曲霉菌（Aspergillus awamori）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）、轮状镰刀菌（F. verticillioides）和燕麦镰刀菌（F. avenaceum）分别为甜瓜上分离到的青霉属、链格孢属、曲霉属和镰刀属的新菌株。     

三株芽孢杆菌的生防特性研究

为明确贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）GY1、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）GY10和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）GY12的生防特性,采用平板试验法、对扣法、盆栽试验等,对三株生防菌的抑菌谱、次生代谢产物、挥发性物质、根际定殖能力和促生能力等进行了研究。结果表明,GY1、GY10、GY12培养液可以显著促进烟草种子的萌发和烟株的生长;三株生防菌抑菌谱广,对烟草赤星病菌、黑胫病菌及花生镰刀菌等9种病原具有显著的抑制作用,并且都具有分泌嗜铁素和蛋白酶的能力;三株生防菌发酵上清液和挥发性物质对链格孢菌（Alternaria alternata）和烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica var.nicotianae）具有显著抑制作用;菌株的分泌蛋白热稳定性好,对烟草赤星病菌具有显著的体外抑菌活性,并对酸性环境具有较高的耐受性;根际定殖结果表明,GY1-GY10-GY12复配与单菌株相比能增加各生防菌在烟草根际的定殖。以上结果对于菌株GY1、GY10、GY12生防特性的深入挖掘和产业化开发具有一定的指导作用。     

湖北省烟草靶斑病病原鉴定及其菌丝融合群遗传分化研究

2020—2021年湖北烟区爆发新型烟草叶部病害,本研究对病原菌进行分离培养、形态观察、镜检菌丝和科赫法则验证,并提取30个菌株的DNA使用通用引物ITS1/ITS4进行rDNA-ITS序列的PCR扩增,及MEGA-X软件进行基因序列比对及系统发育树构建,同时以Rs1F2/Rs2R1为引物,进行30个菌株的rDNA-ITS基因的PCR专化性鉴定。结果表明,该病害病原菌为立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kühn）,30个菌株序列都隶属于R. solani AG-3融合群且均具有AG-3融合群所特有的504 bp片段。因此,确定该病害为烟草靶斑病。这是首次从湖北省烟草产区分离鉴定到该病菌。     

烤烟霉变病原菌鉴定及其生防菌筛选

为明确云南省大理州烟叶烘烤变黄期叶柄和部分叶片霉变的病原菌,依据柯赫氏法则,采用组织分离法分离病原菌,经室内和烤房内验证致病性,结合形态学和多基因序列分析鉴定病原物种类,运用平板拮抗法和活体生测法筛选生防菌。结果表明,分离物的形态学与根霉属（Rhizopus sp.）真菌相似,其ITS序列与少根根霉菌（Rhizopus arrhizus.,异名Rhizopus oryzae）模式菌株CBS 112.07^T序列一致性大于99%;基于内转录间隔区（ITS）、肌动蛋白（ACT）和翻译延伸因子1-α（TEF）的多基因序列系统发育分析也表明,病原菌与少根根霉菌亲缘关系最近。综合形态学和多基因序列分析结果,确定烤烟霉变病病原菌为少根根霉菌。通过平板对峙法筛选获得5株抑菌能力较强的拮抗菌,其中芽孢杆菌（Bacillus spp.）Z002和05-1205在烤房内的防治效果均在70%以上。     

Effects of food preservatives on Alternaria alternata growth and tenuazonic acid production

The effects of different organic acids on Alternaria alternata growth and tenuazonic acid production (TeA) were evaluated. Both TeA pure toxin solution and TeA production in solid medium were considered. Sodium benzoate, potassium sorbate and sodium propionate, all preservatives commonly used by food industry in Argentina, were tested. TeA was stable as pure toxin solution when was treated with the salts of organic acids used. A differential effect was observed when the preservatives were evaluated in relation to A. alternata growth and TeA production in solid medium. L evels above 10mg/kg of sodium benzoate and potassium sorbate produced a total inhibition of fungal development and toxin biosynthesis. Sodium propionate produced a 59% decrease in A. alternata growth and total inhibition of TeA production only at the highest concentration of preservatives used.     

烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测

为了解吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗性水平,采用菌丝生长速率法,测定了318株烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的药剂敏感性,建立敏感基线。运用最低抑制浓度法确定抗性菌株及频率,并比较不同采样地点的抗性水平。结果表明,供试敏感菌株对菌核净的敏感性频率分布呈连续的单峰曲线,接近正态分布,其EC₅₀均值2.916 μg/mL可作为两省烟草赤星病菌对菌核净的敏感基线,抗性频率为21.38%;烟草赤星病菌对苯醚甲环唑的敏感基线为1.198 μg/mL,抗性频率为18.24%。吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑产生了不同程度的抗性,不同地点抗性水平存在差异。本研究为烟草赤星病菌的抗药风险评估奠定了基础,为制定吉林和黑龙江两省烟草赤星病科学防治策略和科学用药提供了依据。     

烟草赤星病流行动态预测

2001~2002年对黑龙江省宾县和肇州县两个烟草赤星病田间观测点进行了系统调查,种植烤烟品种为NC89,共计获得了13组田间病害流行数据资料,利用多种增长模型对所得数据进行拟合检验,通过比较决定系数和剩余均方,认为Logistic模型能较好地拟合赤星病田间动态变化过程。分析赤星病发病因素,证明初始病情、日平均温度、日平均相对湿度、日降雨量及降雨日数是影响赤星病发生流行的重要因素,利用逐步回归分析建立了烟草赤星病田间增长速率的预测模型,并对田间病害流行动态进行了预测。     

重庆烟区烟草叶斑病的诊断与鉴定

在重庆市烟草病害调查中,从彭水县润溪镇烟田发现一种未知的烟草叶斑病。为明确其病原物的分类地位,通过田间采集症状典型病害样品,经组织分离、菌株纯化并采用科赫氏法则测定其致病性,结合rDNA-ITS分子鉴定方法,对该叶斑病进行了诊断和鉴定。结果表明：该叶斑病的病斑在叶片上呈不规则形,周围有淡黄色晕圈,病部中央灰白色,且密生有黑色小点;分离物菌株psrx-1能引起健康烟株叶片发病,具有致病性;病原菌株的形态学特征表现为分生孢子座垫状、黑褐色,呈球形或半球形,分生孢子梗紧密排列、梗短小、直立,分生孢子暗褐色、球形或近球形,无隔膜,表面有颗粒状凸起或褶皱。经rDNA-ITS基因序列比对分析,将该病害鉴定为附球菌（Epicoccum sp.）引起的烟草叶斑病害,为重庆烟区首次发现的一种烟草新病害。