基于细胞系的体外热原检测方法研究进展

19世纪40年代以来,随着静脉注射药物的发展,热原检测技术相继被引入到各国药典中,以保证用药安全。目前,广泛采用的热原检测方法包括家兔热原试验和细菌内毒素试验(LAL试验)。但是这两种方法均存在许多不足之处:家兔试验只能进行定性分析且灵敏度低、成本高,对化疗药物、细胞因子药物、免疫抑制药等影响家兔发热的药物适用性不强;细菌内毒素试验只能特异性地检测细菌内毒素,不能检测革兰阳性菌、真菌和病毒来源的热原物质,且     

新的体外热原试验方法研究进展

非肠道给药的药品、生物制品及植入性医疗器械要求无热原,目前各国药典采用兔热原试验或细菌内毒素检查法(BET)这2种基于动物的方法进行试验,但它们还存在一些问题。外热原可刺激人单核细胞释放炎性因子(如 IL-1B,IL-6,TNF-α,IFN-λ等)即内热原,内热原使人体温调定点升高从而引起体温升高,这些内热原的含量可用 ELISA 方法进行测定,新的体外热原试验方法是基于此原理的系统。新方法结合了 BET 高灵敏度和家兔法宽检测谱的优点,与兔法相比,新方法更加灵敏、费用低,能直接反映人对多种热原的反应,与细菌内毒素检查法相比,新方法不仅仅局限于革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素的检测,对各种热原质均能检测。在欧洲,目前有6种最突出的系统被确认,试验表明他们是安全的、不使用动物的、更有效的热原检查方法,可以作为热原检查替代方法向药政管理部门和药典推荐。     

中国、美国、英国3国药典中热原检查法的差异

热原的存在会影响用药的安全性，采和家兔法检查热原是目前药品检验中仍然在使用的热原检查法，中国、美国、英国等国药典中均有收载。动物、仪器、环境、操作等诸多因素都会影响检测结果，因而各国药典均对热原检查法做了详细规定。准确地掌握、规范地应用这一方法才能够较为可靠地反映和判断被检药品是否污染了一定量的热原，从而保     

用鲎试法检测大输液中间体中的热原

配制大输液时,一般只对成品作热原试验。对灌装前的大输液中间体,历来均不作热原试验。实际工作中,我们体会到在灌装前检测大输液中间体的热原,有时具有重大意义。因为如果在此中间体中测得含有热原时,为了避免造成该批输液的经济损失,可以采取一些补救措施。即使无法挽救时,也可以省去灌装、封口、消毒、检查、包装等工序。     

家兔热原检查法的研究动向

美国药典自1912年收载热原试验(Pyro-gen Test)作为检查药品注射液的发热物质后,相继世界各国药典均规定了这一检查方法。     

人血白蛋白热原去除工艺的实验

在热原不合格的白蛋白制品中，加入血浆蛋白Ｃｏｈｎ分部ＩＶ－１、ＩＶ－４组份进行热变性沉淀去除热原。经处理后，热原检测（兔法）表明，４批平均降温０．４７℃回收率为７２．５％，白蛋白５７％５０ｈ的热稳定性试验合格。其它常规检测项目均符合生物制品规程要求。     

尼莫地平注射液用细菌内毒素检查法代替热原试验的探讨

<正> 尼莫地平注射液在进行兔法热原实验时,经常引起试验兔体温异常下降现象,从而导致试验必须一再重试,消耗了大量人力和物力。细菌内毒素检查试验比热原试验灵敏度高,且试验迅速,用样量少,经济可靠,操作简单,工作量少,每天可进行多批样品检测。美国药典24版对大部分的注射剂均由细菌内毒素法代替了热原试验,中国药典2000年版也增订了若干品种的细菌内毒素检查试验,同时删除了相应品种的热原试验,可见用细菌内毒素检查试验代替热原试验已成为必然规律。本文通过一系列的试验发现,尼莫地平注射液经有效稀释后在细菌内毒素检查试验中,无干扰作用,故认为可以用细菌内毒素法代替兔法热原试验。     

鲎法与兔法检测125批注射剂中热原的比较

<正> 目前各国药典规定的热原检查法是用家兔升温试验法(简称兔法)。但家兔饲养工作繁杂,试验操作费时,要求一定的条件设备,基层单位用以控制热原具有一定困难,且某些放射性药品及某些抗肿瘤药物,不适于用兔法检测。因此,十多年来国内外对鲎试验方法(鲎法)进行了广泛研究,并已用于革兰氏阴性细菌感染的快速诊断及生物制品、食品的内霉素污染检测。在检查放射性药品、抗肿瘤药、大输液等注射剂热原方面,也积累了大量资料,但对鲎法与兔法的一致性、鲎法的灵敏度及其适用品种,仍有必要进一步探讨。我们用鲎试验的试管法和兔法,对比检查了28个品     

人血白蛋热原去除工艺的实验

在热原不合格的白蛋白制品中，加入血浆蛋白Ｃｏｈｎ分部ＩＶ－１，ＩＶ－４组份进行热变性沉淀去除热原，经处理后，热原检测（兔法）表明，４批平均降温０．４７℃，回收率为７２．５％白蛋白５７℃，５０ｈ的热稳定性试验合格，其它常规格检测项目均符合生物制品规程要求。     

现行版中、美、英、欧、日五部药典中热原检查法比较

热原检查法是通过将一定剂量的供试品,静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高的情况,以判定供试品中所含热原物质的限度是否符合规定的一种方法。注射剂如果含有热原物质可引起机体热原反应,严重时可危及生命,因此各国药典都在各论中对需制定热原检查的注射剂热原限度做了规定,并且在附录中均对热原检查法的所用动物、环境条件、实验步骤和结果判断等做了详细规定。     

注射剂热原试验的现状报告

注射剂中引起临床发热反应的热原内毒素的检测方法,早在40年代经美国食品药物管理局(FDA)、美国国家卫生研究院(NIH)和14家药厂协作研究,就确定用家兔体温升高法,并于1942年收载于美国药典第12版,作为药典方法,40多年来一直作为唯一的法定热原试验方法为各国药典所采用。此方法虽一般认为适用,但操作繁复,费用高,且有生物差异性。     

细菌内毒素检查法在注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯应用方法的建立

目的建立注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯细菌内毒素检查法。方法按照《中国药典））2010年版二部XIE细菌内毒素检查法进行试验。结果2．5mg／ml盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对内毒素无干扰作用。其Es均在0．5h～2入之间,Et均在0．5Es-2Es之间。结论本品可用细菌内毒素检查法代替家兔法检测热原,其细菌内毒素限值可定为：每1mg盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中含内毒素的量应小于0．25EU。该方法操作简单,影响因素少,不使用动物,更符合减少、优化、替代的原则,是目前各国药典检查热原的重要方法。     

发展中的热原检查法

药品注射剂的热原检查 ,是保证输注药品安全的重要检验项目之一。各国药典附录中的《热原检查法》及其方法学的研究 ,反映了各国建立药品标准和检验方法的水平和某个国家的综合国力。 194 2年美国率先将家兔热原检查法载入第 12版药典 ,相继世界各国均将这一方法载入药典 ,作为检查药品注射剂中污染热原的法定方法。该法是将一定剂量的供试品溶液 ,静脉注射家兔体内 ,在规定的时间内 ,观察家兔体温升高的情况 ,以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。 195 2年世界卫生组织 (ＷＨＯ)生物标准化专家委员会邀请一些国家协作 ,试图建立热原…     

对《中国药典》收载热原试验品种细菌内毒检查限值浅析

作为取代传统兔踢法用于药品热原检查的鲨试验,正被广泛地调查研究,受到世界各国的普遍重视,并日益广泛地收载于标准中,形成取代热原检查的趋势［1］。美国药典2、3版收载细菌内毒素检查法已达470余种。中国药典1995年版附录首次收载了细菌内毒素检查法,目前对8个放射药和4个大输液采用了此法,与国外药典相比,显然是比较少的。因此,热原检查品种进行鲨试验研究成为新的热点,大量的试验都肯定了鲨试验代替热原检查是可行的。但在确定细菌内毒素检查限值（L）时大多采用：代替药典品种热原检查时,按家兔剂量计算;建立新品种的L值…     

鲎试验法与家兔法检测125批注射剂热原的比较研究（摘要）

家兔法(PT)检测药品中的热原各国均采用.此法影响因素较多,如实验环境、条件、动物种系等。而鲎法操作简便、灵敏、快速、重现性好。所以自Levin 提出鲎试验(LT)后,国内外迅速开展研究和利用.我们用鲎试验法检测19个品种,125批次注射剂中热原并与家兔法进行比较,现将初步结果报告如下:     

热原试验的测温精度与数值修约对检查结果的影响

热原试验的测温精度与数值修约对检查结果的影响吴凌溪（青岛市药检所２６６００３）目前，各热原试验室在掌握测温精度和执行数值修约规则问题上，情况很不统一，以致影响到检查结果的正确判断。本文对这个问题进行了探讨。一、测温精度与结果判断的有效数位各国药典对热...     

J.Van Noordwijk谈热原问题

1.药品的热原检验 热原试验是非肠道药物及其组份在质量控制中的一个基本项目。欧洲药典(V2.1.4)的家兔热原试验,几十年来合理地达到了这个目的。然而,由于下列原因需要有一个替代方法。     

香丹注射液内毒素检查法的可行性研究

目的验证香丹注射液兔法热原试验用细菌内毒素检查法代替的可行性。方法按中国药典2015年版四部1143细菌内毒素检查法和1142热原检查法进行试验。结果该注射液稀释一定倍数后检测结果与热原检查法检测结果相同。结论香丹注射液经过60倍稀释,去除对细菌内毒素检查法的干扰后,可采用细菌内毒素检查法(凝胶法)进行细菌内毒素检查代替热原检查法。     

用于试管内检验内毒素的鲎试验法

自从临床采用注射剂以来就要求生产无热原制剂,并对此加以相应的检查。目前各国卫生部门所确认的热原检查法系家兔体内生物学试验法,即取家兔3只,自耳静脉注入规定剂量的供试品溶液,隔一定时间测量其体温。如果体温升高度数超过一定数值就认为供试品溶液含有热原。假如体温升高度数适在某一范围内,则须用更多的动物复试。以上方法操作困难,需有经验的人员和具空调设备的房间,因而试验费用较多。同时试验     

鲎试验对检测注射剂热原专属性的意义

革兰氏阴性菌细胞外膜中的细菌内素毒系脂多糖(LPS)一类的磷脂。细菌内毒素具有广泛的生理效应,包括致热原作用。近来普遍认为,细菌内毒素试验(BET)或鲎变形细胞溶解物(LAL)试验(简称鲎试验),是目前检测细菌内毒素最为灵敏的方法。美国食品药品管理局(FDA)的各个处已确认LAL对检测热原的灵敏性及实用性。生物制品处已为药厂制订出LAL试验标准,最近并批准一些产品符合标准要求的厂商。生物制品处及医药设计局均同意可将LAL试验代替美国药典家兔热原试验法。美国药典第20版(1980年)在“细菌内毒素试验”一章中亦将讨论LAL试验。