N-乙酰半胱氨酸保护心肌细胞对抗化学性低氧诱导的内质网应激反应

目的探讨活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸能否保护H9c2心肌细胞对抗化学性低氧引起的内质网应激。方法应用化学性低氧模拟物氯化钴处理H9c2心肌细胞,建立化学性低氧损伤心肌细胞的实验模型。在氯化钴处理H9c2心肌细胞前60 min把N-乙酰半胱氨酸加入培养基中,作为预处理。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡心肌细胞的形态学改变;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧水平;免疫印迹法检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78的表达。结果在100～2 000μmol/L浓度范围内,氯化钴处理H9c2心肌细胞24 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率。在12～48 h时间范围内,800μmol/L氯化钴处理H9c2心肌细胞呈时间依赖性地抑制细胞存活率。在氯化钴处理H9c2心肌细胞前60 min,应用2 000μmol/L的N-乙酰半胱氨酸不仅能抑制氯化钴对活性氧生成的促进作用,也能明显的抑制氯化钴诱导的细胞凋亡。不同浓度的氯化钴处理H9c2心肌细胞24 h,可使葡萄糖调节蛋白78表达增多,其中800μmol/L的氯化钴处理H9c2心肌细胞24 h时,葡萄糖调节蛋白78表达...     

新型硫化氢供体8L通过上调NF-E2相关因子2的表达拮抗H2O2损伤H9c2心肌细胞

目的探讨新型硫化氢供体8L对氧化应激诱导心肌细胞损伤的保护作用及NF-E2相关因子2(Nrf2)有关的分子机制。方法用活性氧供体过氧化氢(H2O2)处理培养的大鼠H9c2心肌细胞,建立心肌细胞损伤的体外模型以模拟急性缺血再灌注诱导的心肌损伤;在H2O2处理前给予8L预处理观察其对心肌细胞的保护作用。为了明确Nrf2的作用,在H2O2处理或8L预处理前给予其选择性抑制剂鸦胆苦醇预处理。细胞计数试剂盒8比色法检测细胞存活率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放,罗丹明123染色结合荧光照相术检测线粒体膜电位(MMP),Western Blot法检测核内Nrf2的表达。结果 H9c2心肌细胞经0~600μmol/L H2O2处理6 h可浓度依赖性地降低细胞存活率,且半数有效浓度约为400μmol/L。400μmol/L H2O2处理H9c2心肌细胞6 h可使LDH释放增加,MMP降低,并增加细胞核内Nrf2的表达(P均0.01)。在用400μmol/L H2O2处理前,先用50、100和200μmol/L 8L预处理1 h,可将细胞存活率从(52.6±4.3)%分别提高至(72.5±6.3)%、(83.1±5.2)%和(85.7±4.9)%。200μmol/L 8L预处理1 h还可明显抑制H2O2诱导的LDH释放(P0.01)及MMP受损(P0.05),但可易化H2O2诱导的Nrf2表达上调(P0.01)。另外,10μmol/L鸦胆苦醇预处理1 h不但可加重H2O2诱导的心肌细胞损伤(P0.01),还可拮抗8L的心肌细胞保护作用(P0.01)。结论硫化氢供体8L可减轻氧化应激诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与上调Nrf2有关。     

坏死性凋亡与活性氧的相互作用介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

目的探讨坏死性凋亡(Nec)与活性氧(ROS)之间的相互作用能否介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤。方法应用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测心肌细胞RIP3蛋白的表达水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜摄片测定线粒体膜电位(MMP);2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片检测心肌细胞内ROS水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜摄片测定凋亡细胞的数量。结果应用高糖(HG,35 mmol/L葡萄糖)分别处理H9c2细胞0~24 h,其中3、6、9、12和24 h均能明显地上调RIP3蛋白的表达水平,24 h时RIP3蛋白表达上调最为明显。应用100μmol/L Nec的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1)共处理心肌细胞可对抗高糖引起的RIP3蛋白表达的上调作用。此外,100μmol/L Nec-1能显著地抑制高糖引起的细胞毒性、线粒体损伤及氧化应激,使细胞存活率升高,MMP丢失及ROS生成减少。1 000μmol/L ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)预处理心肌细胞60 min,可明显地抑制高糖对心肌细胞RIP3蛋白表达的上调作用;此外,高糖诱导的细胞凋亡和细胞毒性作用,经NAC预处理后均能得到显著的抑制。结论 Nec与ROS之间的相互作用介导高糖对心肌细胞的损伤。     

柚皮苷抗高糖诱导的心肌细胞损伤作用与抑制STAT3通路有关

目的　探讨柚皮苷是否通过抑制信号转导子和转录激活子3（STAT3）通路保护H9c2心肌细胞对抗高糖引起的损伤。方法　应用35　mmol/L的高浓度葡萄糖（高糖,HG）处理H9c2心肌细胞24　h,建立HG损伤心肌细胞模型;细胞计数试剂盒8测定细胞存活率;Hoechst　33258核染色荧光显微镜照相法测定细胞凋亡;双氯荧光素染色/荧光显微镜照相法测定胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123染色法测定线粒体膜电位（MMP）;Western　blot法测定STAT3蛋白表达水平。结果　HG处理H9c2心肌细胞24　h能引起明显的损伤,使细胞存活率降低,凋亡细胞数量和胞内ROS生成增多,MMP丢失;HG能增加STAT3磷酸化水平;柚皮苷预处理能明显抑制HG上调STAT3磷酸化水平这一作用;柚皮苷和STAT3通路抑制剂AG490能阻断HG对心肌细胞的上述损伤作用,包括细胞毒性、凋亡、ROS生成增多及MMP丢失等。结论　柚皮苷可通过抑制STAT3通路保护H9c2心肌细胞对抗高糖引起的损伤。     

硫化氢通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶抑制阿霉素引起的心肌细胞损伤

目的 研究硫化氢(H2S)是否通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(DOX)引起的损伤.方法 应用DOX处理心肌细胞建立心肌细胞损伤模型.为观察H2S的保护作用,在DOX处理心肌细胞前,应用400 μmol/L硫氢化钠(NaHS,为H2S的供体)预处理细胞30 min.Western blot法测定p38MAPK蛋白的表达水平;应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)比色法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧(ROS)水平.结果 在15 ～60min的时间范围内,5μmol/L DOX呈时间依赖性地上调心肌细胞磷酸化p38MAPK的表达水平;在DOX作用心肌细胞前,400 μmol/L NaHS预处理30 min能明显地抑制DOX对p-p38MAPK表达的上调作用,并能显著地阻断DOX引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高、凋亡细胞数量和ROS生成均减少;与NaHS的保护作用相似,p38MAPK的抑制剂SB203580(3 μmol/L)预处理60 min能保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的损伤.结论 p38MAPK通路参与DOX对心肌细胞的损伤作用;H2S可通过抑制p38MAPK通路保护心肌细胞对抗DOX诱导的损伤.     

热休克蛋白90在硫化氢对抗化学性缺氧引起的心肌细胞损伤中的作用

目的 探讨热休克蛋白90在硫化氢保护H9C2心肌细胞对抗氯化钴诱导的损伤中的作用.方法应用不同浓度的氯化钴处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型.硫氢化钠(硫化氢的供体)在氯化钴处理H9C2心肌细胞前30 min加入培养基中,作为预处理.应用细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡心肌细胞的形态学改变;免疫印迹法检测热休克蛋白90的表达.结果 在600～1000 μmol/L浓度范围内,氯化钴处理H9C2心肌细胞24 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率.在应用不同浓度氯化钴处理H9C2心肌细胞前30 min,应用400 μmol/L硫氢化钠可分别显著地抑制600、800、1000μmol/L氯化钴对心肌细胞的损伤作用,使细胞存活率明显升高.400 μmol/L硫氢化钠可促进H9C2心肌细胞的HSP90表达,在硫氢化钠作用6～9 h时,HSP90表达最多,作用18 h时表达恢复到基础水平.2 μmol/L热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素自身对H9C2心肌细胞无损伤作用,但是能加重氯化钴对心肌细胞的损伤作用,并能明显地阻断硫化氢抑制氯化钴对心肌细胞的损伤作用,使H9C2心肌细胞存活率降低,凋亡细胞数量增多.结论 硫化氢能保护心肌细胞对抗氯化钴诱导的损伤作用,并能上调热休克蛋白90表述.热休克蛋白90介导硫化氢的心肌细胞保护作用.     

硫化氢通过抑制ROS-TLR4通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应

目的探讨外源性硫化氢(H2S)能否通过抑制活性氧(ROS)-Toll样受体4(TLR4)通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率,用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞数量,Western blot测定TLR4和Cleaved Caspase 3蛋白的表达水平,双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内ROS水平,罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(MMP)。结果应用35 mmol/L葡萄糖(高糖)作用H9c2心肌细胞24 h能上调TLR4的表达水平。在高糖作用前,应用1000μmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理60 min或400μmol/L硫氢化钠(Na HS)预处理30 min能明显减轻高糖对TLR4蛋白表达的上调作用。高糖作用心肌细胞24 h可引起心肌细胞损伤和炎症反应,使细胞存活率降低,LDH活性、凋亡细胞数量、Cleaved Caspase 3蛋白的表达、ROS生成、MMP丢失及IL-1β和TNF-α的分泌增加;400μmol/L Na HS预处理心肌细胞30 min后再予高糖作用24 h或30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和高糖共处理心肌细胞24 h能显著拮抗高糖引起的上述损伤和炎症反应。结论外源性H2S可通过抑制ROS-TLR4通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应。     

硒对砷诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤的抑制作用和可能机制

目的探讨硒对砷诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法H9c2细胞按处理方法不同分对照组、Na2SeO3（1μmol/L）组、As2O3（5μmol/L）组、As2O3（5μmol/L）＋Na2SeO3（1μmol/L）组以及NF-κB抑制剂PDTC（100 nmol/L）不同处理组。应用MTT法检测细胞存活率;DTNB法检测细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）含量;二氢乙啶（Dihydroethidium,DHE）染色法检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）产生;提取细胞核蛋白,Western blotting法检测核蛋白中NF-κB的p65亚单位表达。结果与对照组相比,5μmol/L As2O3作用下,H9c2细胞生存率、细胞内GSH含量降低,ROS生成和核蛋白中NF-κB p65的表达增加;1μmol/L Na2SeO3可以提高As2O3损伤的H9c2细胞存活率和细胞内GSH含量,减少ROS生成和p65的表达。PDTC干预可减轻砷所致心肌细胞的损伤,表现为细胞ROS产生减少;Na2SeO3和抑制剂PDTC共同作用时,H9c2细胞生成ROS进一步减少。结论NF-κB信号途径参与了As2O3诱导的H9c2心肌细胞氧化应激反应,Na2SeO3可能通过抑制NF-κB减轻氧化应激诱导的H9c2细胞损伤。     

活性氧与ATP敏感性钾通道的相互作用参与高糖对

目的　研究活性氧（ROS）和ATP敏感性钾通道（K_ATP通道）的相互作用在高糖（HG）引起的心肌细胞损伤中的作用。方法　应用Western　blot检测心肌细胞K_ATP通道蛋白、Cleaved　Caspase-3的表达水平;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测胞内ROS水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;Hoechst　33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位。结果　应用高糖（35　mmol/L葡萄糖）处理H9c2心肌细胞24　h能明显下调K_ATP通道蛋白的表达水平,1000　μmol/L　N-乙酰半胱氨酸（ROS清除剂）预处理心肌细胞60　min可阻断HG对心肌细胞K_ATP通道蛋白表达的下调作用。100　μmol/L二氮嗪（线粒体K_ATP通道开放剂）和50　μmol/L吡拉地尔（非选择性K_ATP通道开放剂）预处理均显著抑制HG引起的心肌细胞ROS的堆积。1000　μmol/L　N-乙酰半胱氨酸、100　μmol/L二氮嗪和50　μmol/L吡拉地尔均能抑制HG引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数量、Cleaved　Caspase-3表达及线粒体膜电位丢失减少。结论　在HG状态下,心肌细胞的ROS和K_ATP通道存在相互作用,两者在HG引起的心肌细胞损伤中发挥重要作用。     

丙泊酚对高糖诱导的H9c2细胞衰老的保护作用

目的研究丙泊酚对高糖诱导的H9c2细胞衰老的保护作用及其机制。方法本实验通过使用高糖长期培养H9c2细胞,在体外建立心肌细胞高糖老化模型,给予不同浓度的丙泊酚(5,10,20,40μmol/L)作用后,分别测定细胞存活率,细胞内活性氧(ROS)释放,细胞β-半乳糖苷酶染色,细胞P16、P53、Rb蛋白表达量。结果预处理丙泊酚(5~20μmol/L)能够明显减轻高糖诱导的细胞损伤;抑制细胞内ROS释放;显著降低细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数目;降低P16、P53和Rb蛋白表达量。结论丙泊酚通过抑制ROS释放,降低H9c2细胞衰老相关基因的蛋白表达量,从而产生心脏保护作用。     

血清-葡萄糖剥夺抑制热休克蛋白90致心肌细胞损伤

目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)表达下调是否参与血清-葡萄糖剥夺(SGD)引起的心肌细胞损伤.方法 用血清-葡萄糖剥夺处理H9c2心肌细胞,建立缺血性心肌细胞损伤的体外模型;在血清-葡萄糖剥夺处理前,应用HSP90选择性抑制剂17-AAG预处理心肌细胞60 min;CCK-8比色法检测细胞存活率;Fluo-3AM染色结合荧光显微镜照相术检测细胞内游离钙水平;Western blot检测HSP90和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.结果 血清-葡萄糖剥夺处理24h可明显抑制H9c2心肌细胞内HSP90的表达,诱导细胞内钙超载及上调内质网应激蛋白GRP78的表达.选择性HSP90抑制剂17-AAG预处理不仅可以加重血清-葡萄糖剥夺引起的心肌细胞存活率降低,而且进一步加重血清-葡萄糖剥夺引起的H9c2心肌细胞内钙超载及内质网应激蛋白GRP78的表达上调.结论 抑制HSP90可能是血清-葡萄糖剥夺损伤心肌细胞的重要机制之一.     

叔丁基对苯二酚对亚砷酸钠致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用

目的 探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2)致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用。方法 Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25μmol/L]预处理24h,再用5 μmol/L tBHQ和NaAsO2[0(对照)、30、40、50、60 μmol/L]共同作用24h,采用刃天青钠(Alamar blue)还原法检测细胞活力,结果用实验组Alamar blue还原率与对照组Alamar blue还原率的相对比值表示;Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25 μmol/L]预处理24h,再用5μmol/L tBHQ和NaAso2[0(对照)、40、50 μmol/L]共同作用24h,采用荧光探针2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成,结果用实验组平均荧光强度与对照组平均荧光强度的相对比值表示。结果 30、40、50、60 μmol/L的NaAsO2暴露能够显著降低细胞活力,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可明显恢复细胞活力,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为566.57、55.09、14.50,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的30、40、50、60 μmol/LNaAsO2组细胞活力(0.75±0.02、0.70±0.04、0.59±0.03、0.43±0.03和0.75±0.02、0.73±0.03、0.65±0.02、0.50±0.02)较相应NaAsO2单独作用组(0.70±0.03、0.64±0.03、0.43±0.03、0.33±0.01)显著升高（P均＜0.05）,25 μmol/L tBHQ 预处理的50、60μmol/L NaAsO2组细胞活力高于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜0.05）。40、50 μmol/L的NaAsO2能显著诱导Chang肝细胞内ROS的产生,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可使NaAsO2诱导产生的细胞内ROS水平显著下降,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为181.78、60.55、4.93,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平(1.87±0.09、1.80±0.07和1.36±0.11、1.44±0.12)较相应NaAsO2单独作用组(2.30±0.18、2.18±0.17)显著降低(P 均＜ 0.05),25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平低于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜ 0.05）。结论 tBHQ对NaAsO2诱导的细胞毒性和氧化损伤具有一定的拮抗作用。     

萝卜硫素通过下调微小核糖酸-22改善缺氧诱导的心肌H9c2细胞凋亡

目的:研究萝卜硫素(SFP)对缺氧诱导心肌H9c2细胞损伤的保护作用及其机制。方法:缺氧条件为94%N2、5%CO2和1%O2,将细胞在缺氧培养箱中培养构建缺氧损伤模型。采用SFP处理细胞后,CCK8法、Western blot实验和流式细胞术检测H9c2细胞活力、增殖及凋亡相关指标;观察SFP对缺氧诱导H9c2细胞损伤的保护机制,采用RT-PCR和Western blot方法分析了SFP对H9c2细胞中miR-22/PI3K/AKT信号通路的影响。结果:缺氧诱导H9c2细胞增殖活力的降低,促使细胞凋亡;SFP能明显增强H9c2细胞增殖活力,降低其凋亡;缺氧诱导H9c2细胞中miR-22表达上调,SFP前处理可以明显抑制miR-22表达;miR-22高表达能降低SFP前处理对缺氧诱导H9c2细胞损伤的保护作用,而miR-22低表达诱导SFP对H9c2细胞损伤的保护效应;SFP可通过下调H9c2细胞中miR-22表达增高PI3K和AKT的磷酸化。结论:SFP前处理通过下调miR-22表达改善缺氧诱导的H9c2细胞损伤,其作用机制与PI3K/AKT信号通路活化有关。     

三氧化二砷与白藜芦醇联用对急性早幼粒细胞性白血病NB4细胞存活率的影响

目的 观察三氧化二砷(ATO)与白藜芦醇(Res)联用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞存活率的影响,并探讨其作用机制.方法 采用不同剂量的ATO[0(对照)、0.1875、0.3750、0.7500、1.1250、1.5000、2.2500、3.0000、5.0000 μmol/L]、Res[0(对照)、1.5625、3.1250、6.2500、12.5000、18.7500、25.0000、37.5000、50.0000 μmol/L]孵育NB4细胞.应用四氮唑盐比色法(MTT)检测不同处理组的细胞存活率,计算ATO和Res对NB4细胞的半数抑制浓度(IC50).根据IC50,设置联合用药比例分别为1.5∶18、.5∶25、.5∶35,并根据药物联合指数计算公式,分别计算出联合用药在不同抑制效应(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9)时的联合指数,判断ATO与Res在不同抑制效应时各自所需药物浓度之间的相互作用.应用DCFH-DA荧光探针检测对照组、ATO(1.5000 μmol/L)加药组、Res(25.0000 μmol/L)加药组、联合用药组(0.9000 μmol/L ATO+12.5000 μmol/L Res)NB4细胞活性氧(ROS)水平,每组各检测10份样品.结果 ①ATO(≥0.7500 μmol/L)加药组NB4细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05),呈剂量依赖性的量效关系,IC50为(1.78±0.11)μmol/L.②Res(≥18.7500 μmol/L)加药组NB4细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05),呈剂量依赖性的量效关系,IC50为(18.71±0.18)μmol/L.③ATO和Res联合应用对NB4细胞存活抑制效应呈现拮抗作用.④Res加药组NB4细胞内ROS水平(1670.55±13.97)明显低于对照组(2345.88±14.48,P＜0.05).ATO加药组NB4细胞内ROS水平(3092.42±94.84)明显高于对照组(P＜0.05).联合用药组NB4细胞内ROS水平(1860.27±15.99)明显低于ATO加药组(P＜0.05).结论 ATO、Res均可致NB4细胞存活率下降,而两者联合应用时表现为拮抗效应,ROS可能参与了这种拮抗作用.

Abstract：

Objective To investigated the effects of combined arsenic trioxide(ATO) and resveratrol(Res)on the viability of NB4 human leukemia cells. Methods NB4 human leukemia cell was used in this experiment.Cells were cultured in ATO (0,0.1875,0.3750,0.7500, 1.1250, 1.5000,2.2500,3.0000,5.0000 μmol/L) and Res (0, 1.5625,3.1250,6.2500, 12.5000, 18.7500,25.0000,37.5000,50.0000 μmol/L). Cell viabilities were measured by MTT in different treatment groups. Half inhibitory concentration(IC50) was calculated. The ratio of concentration of ATO and Res 1.5∶ 18,1.5∶ 25,1.5∶ 35 was added to cells, and the combination index(CI) was calculated. The level of ROS in control, ATO( 1.5000 μmol/L), Res(25.0000 μmol/L) and ATO(0.9000 μmol/L) + Res( 12.5000μmol/L) groups was measured by chemiluminescence assay. Results ①ATO( ≥0.7500 μmol/L) reduced the viability of NB4 cells in a concentration-dependent manner(P ＜ 0.05 ), and IC50 was (1.78 ± 0.11 )μmol/L. ②)Res (≥18.7500 μ mol/L) dose-dependently decreased the viability of NB4 cells (P ＜ 0.05 ), and IC50 was ( 18.71 ±0.18)μ mol/L. ③Combination of ATO and Res showed an antagonistic effect on NB4 cells viability. ④The ROS in Res group( 1670.55 ± 13.97) was significantly lower than that in control group(2345.88 ± 14.48,P ＜ 0.05). The ROS in ATO group (3092.42 ± 94.84) was significantly higher than that in control group(P ＜ 0.05). The ROS in ATO + Res group (1860.27 ± 15.99) was significantly lower than that in ATO group(P ＜ 0.05). Conclusions NB4 cell survival rate can be decreased by ATO and Res. The combination of arsenic trioxide and Res presents an antagonistic effect on NB4 cell viability, in part by reducing intracellular ROS formation.     

EMRE对高糖高脂诱导心肌细胞凋亡的影响

目的 研究EMRE分子在高糖/高脂（high glucose and high fat,HGHF）培养的大鼠胚胎心肌细胞H9C2中的表达变化及其在HGHF诱导的心肌细胞凋亡中的作用。方法 H9C2细胞培养分为4组:即正常+siCtrl组（培养基中含5 mmol/L葡萄糖、20 mmol/L甘露醇和siCtrl,培养24 h）、正常+si-EMRE组（培养基中含5 mmol/L葡萄糖、20 mmol/L甘露醇和si-EMRE,培养24 h）、HGHF+siCtrl组（培养基中含25 mmol/L葡萄糖、500 μmol/L软脂酸钠和siCtrl,培养24 h）及HGHF+si-EMRE组（培养基中含25 mmol/L葡萄糖、500 μmol/L软脂酸钠和si-EMRE,培养24 h）。用qRT-PCR及Western blot检测EMRE在各组细胞中的表达;用流式细胞术（FCM）分析各组心肌细胞的凋亡;用Western blot检测caspase3与caspase9表达;用荧光探针DCFH-DA检测各组心肌细胞内ROS水平。结果 HGHF诱导心肌细胞EMRE表达升高（mRNA及蛋白水平）;EMRE促进了HGHF诱导的心肌细胞凋亡及ROS的产生;用si-RNA干涉EMRE表达后,由HGHF诱导的细胞凋亡及ROS产生明显减少。结论 EMRE在HGHF诱导的心肌细胞凋亡中发挥重要的促进作用。     

Effect of Tetrandrine on LPS-induced NF-κB activation in isolated pancreatic acinar cells of rat

AIM: To investigate the effect of Tetrandrine (Tet) on LPS-induced NF-κB activation and cell injury in pancreatic acinar cells and to explore the mechanism of Tetrandrine preventing LPS-induced acinar cell injury.METHODS: Male rat pancreatic acinar cells were isolated by collagenase digestion, then exposed to LPS (10mg/L), Tet (50 μmol/L, 100 μmol/L) or normal media. At different time point (30 min, 1 h, 4 h, 10 h) after treatment with the agents, cell viability was determined by MTT, the product and nuclear translocation of subunit p65 of NF-κB was visualized by immunofluorescence staining and nuclear protein was extracted to perform EMSA which was used to assay the NF-κB binding activity.RESULTS: LPS induced cell damage directly in a time dependent manner and Tet attenuated LPS-induced cell damage (50 μmol/L, P ＜ 0.05; 100 μmol/L, P ＜ 0.01).NF-κB p65 immunofluorescence staining in cytoplasm increased and began showing its nuclear translocation within 30 min and the peak was shown at 1 h of LPS 10 mg/L treatment. NF-κB DNA binding activity showed the same alteration pattern as p65 immunofluorescence staining. In Tet group, the immunofluorescence staining in cytoplasm and nuclear translocation of NF-κB were inhibited significantly.CONCLUSION: NF-κB activation is an important early event that may contribute to inflammatory responses and cell injury in pancreatic acinar cells. Tet possesses the protective effect on LPS-induced acinar cell injury by inhibiting NF-κB activation.     

间充质干细胞分泌的血管内皮生长因子对心肌细胞的保护作用

目的:探索间充质干细胞通过其分泌的血管内皮生长因子对H9C2细胞的保护作用及机制。方法: 收集骨髓源间充质干细胞的条件培养基,分别处理培养,将其置于缺氧小室缺氧处理21 h,复氧处理6 h。阻断实验利用VEGFR阻断剂SU5416与间充质干细胞的条件培养基共处理。随后,利用流式细胞术ANNEXIN/PI双标法分析其凋亡变化。Western blotting分析H9C2细胞pAkt的表达。结果: RT PCR结果显示间充质干细胞表达血管内皮生长因子,Western blotting结果显示间充质干细胞条件培养基增加了H9C2细胞pAkt的水平。AnnexinV/PI分析发现间充质干细胞条件培养基明显降低了H9C2细胞缺氧复氧的凋亡,且这种抗凋亡作用能被VEGFR阻断剂SU5416或PI3 K/Akt途径阻断剂LY294002所阻断。结论: 间充质干细胞通过其分泌的血管内皮生长因子通过激活PI3 K/Akt途径保护H9C2细胞。