热休克预处理结合保护剂对嗜酸乳杆菌的冻干保护作用

研究热休克预处理结合添加保护剂对嗜酸乳杆菌冻干存活率的影响。结果表明:结合冷冻干燥之前的热休克处理,能显著提高单独使用冻干保护剂的嗜酸乳杆菌的存活率。比较热休克处理结合12种冻干保护剂,有10种能增加冻干菌体的存活率,其中以结合脱脂乳的冻干存活率最高,达71.98%;以葡萄糖为保护剂结合热休克处理的正向叠加效果最显著,菌株的存活率从34.42%提高到76.28%(P0.01)。对结合热休克处理保护效果较好的4种保护剂交互作用条件进行优化,得到嗜酸乳杆菌冻干存活率最高的试验条件为:菌培养18 h后,经45℃热休克处理30 min,加入10%脱脂乳,10%葡萄糖,1.5%甘油以及2.5%山梨糖醇为冻干保护剂,在此条件下嗜酸乳杆菌ATCC 4356的冻干存活率高达92.8%。     

嗜酸乳杆菌NX2-6冻干发酵剂的研究

为制备嗜酸乳杆菌NX2-6高活性发酵剂,研究了其高密度发酵后真空冷冻干燥时不同冷冻保护剂对其存活率的影响。通过离心条件的选择,获得了最大浓度的嗜酸乳杆菌NX2-6。进而采用单因素实验和正交实验设计,以冻干后的菌体存活率为指标,考察了10种冻干保护剂对嗜酸乳杆菌NX2-6冷冻干燥的保护效果,以获得对嗜酸乳杆菌NX2-6真空冷冻干燥的最佳保护剂配方。实验结果表明,嗜酸乳杆菌NX2-6在8000r/min的条件下离心10min(4℃),所得的活菌数最多。实验确定嗜酸乳杆菌NX2-6的最佳保护剂配方为以15%麦芽浸粉,3%谷氨酸钠和7%菊糖作为复合保护剂,在此条件下嗜酸乳杆菌NX2-6的冻干存活率高达82.43%。     

嗜酸乳杆菌冷冻干燥过程中保护剂的筛选及液氮预冻

冻干乳酸菌发酵剂在乳品生产中的优势日益明显,对其研究尤为重要。通过正交试验设计,优化适合嗜酸乳杆菌的最佳冻干保护剂配方为：脱脂乳粉15%、海藻糖4%、VC 1%、谷氨酸钠1.5%。在冷冻干燥中,通过实验发现,用液氮预冻比在普通的冷冻干燥条件下预冻嗜酸乳杆菌的存活率要高。此外,用液氮预冻时,不同的液滴大小对嗜酸乳杆菌的存活率也有影响,液滴越小,存活率越高。     

嗜酸乳杆菌泠冻干燥过程中保护剂的选择

采用不同保护剂组合，对嗜酸乳杆菌在冷冻干燥中存活率进行了测定。结果表明，保护剂对提高冻干过程中嗜酸乳杆菌的存活率具有明显效果，且组合不同保护剂协同累加效果不同，其中10％脱脂乳 10％乳糖La-1和La-2的存活率均为100％。     

直投式泡菜乳酸菌发酵剂冷冻保护的研究

以蔗糖、甘露醇、山梨醇、麦芽糖、谷氨酸钠为保护剂对筛自泡菜的嗜酸乳杆菌S1的冻干保护效果进行研究表明,乳糖为最佳保护剂,菌体存活率可达到了70%以上,其次是麦芽糖、山梨醇、蔗糖、甘露醇。对冻干前后及未加保护剂的菌体作电镜观察表明,所选保护剂对菌体有很好的保护作用。     

罗伊氏乳杆菌冻干保护剂的优选及高密度冻干工艺优化

为提高罗伊氏乳杆菌的冻干存活率及产业化制备效率,系统解析不同种类保护剂对该菌的保护效果并优化高密度冻干工艺降低冻干体积。首先将不同分子量、不同种类的单糖(醇)、二糖(醇)、低聚糖、多糖和蛋白质分别与罗伊氏乳杆菌的菌泥混合冻干测定存活率,然后研究不同分子质量的保护剂复配,及优势保护剂复配其他类物质对菌体的冻干保护效果,最后优化冻干前菌体与保护剂的比例和菌悬液总干物质含量。结果表明,低聚糖对罗伊氏乳杆菌具有最好的冻干保护效果,分子质量大小不同的物质以不同比例复配均不会提高保护效果,谷胱甘肽、甜菜碱、氨基酸、核苷酸、无机盐、维生素等物质均未显著提高低聚糖对该菌的冻干保护效果。菌泥与低聚糖类保护剂以干重比为1∶1. 2混合时,具有最高的冻干存活率,冻干前菌悬液总干物质质量分数最高为29%时菌体存活率达90%以上。该研究结果为乳杆菌的高效冻干提供了指导。     

嗜酸乳杆菌冻干保护剂及其直投式复合发酵剂的开发

为提高嗜酸乳杆菌冻干存活率和研发以嗜酸乳杆菌冻干菌粉为基础的直投式复合发酵剂,本研究以嗜酸乳杆菌为试验菌株,在单因素实验、析因实验和最陡爬坡实验的基础上采用响应面分析优化了嗜酸乳杆菌真空冷冻干燥的保护剂配方。优化后将嗜酸乳杆菌冻干菌粉与肉糖葡萄球菌冻干菌粉以一定质量比复合并应用于萨拉米香肠的制备中。结果表明,嗜酸乳杆菌最佳冻干保护剂(以11%脱脂乳为基础)配方为:海藻糖3.03 g/100 mL、甘油9.50 g/100 mL、谷氨酸钠3.50 g/100 mL,此条件下,嗜酸乳杆菌冻干存活率高达81.24%;嗜酸乳杆菌与肉糖葡萄球菌的冻干菌粉最佳比例为1:2,直投式复合发酵剂最佳接种量为10~8 cfu/g。与对照组相比,该直投式复合发酵剂生产的萨拉米香肠酸味柔和,色泽、硬度、弹性良好,总体接受度最高。     

酸胁迫下嗜酸乳杆菌菌体形态的扫描电镜观察

对嗜酸乳杆菌在pH为1.5、3.5和6.2三种培养条件下的菌体形态进行了扫描电镜观察(SEM)。电镜扫描结果显示,嗜酸乳杆菌菌体呈典型杆状菌,无鞭毛和荚膜,以单个或成双排列,无分支;且在不同pH条件下菌体形态存在差异。在pH为1.5的条件下,嗜酸乳杆菌菌体呈短杆状,且菌体粗壮、两端钝圆;在pH为6.2的条件下,嗜酸乳杆菌菌体纤细,杆状较长。通过对比发现,随着pH的下降,嗜酸乳杆菌的菌体形态由长杆状变成短杆状,由菌体纤细变成菌体粗壮。     

常用抗生素对益生菌存活率影响的研究

研究了9种抗生素对产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌存活率的影响。结果表明,对3种益生菌存活率影响都较小的抗生素有3种,占所研究抗生素总量的1/3。对产朊假丝酵母有影响的抗生素有1种,占所研究抗生素总量的1/9;对枯草芽孢杆菌有影响的抗生素有6种,占所研究抗生素总量的2/3;对嗜酸乳杆菌有影响的抗生素有6种,占所研究抗生素总量的2/3。以上可以看出,枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌受到抗生素影响的几率较大,产朊假丝酵母受抗生素影响的几率较小。     

冷应激及包埋对乳酸菌冻干发酵剂的影响

将嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌按3∶2∶1比例制备乳酸菌冻干发酵剂.比较不同温度冷应激处理对乳酸菌冻干存活率的影响,结果表明,20℃,处理4h时,冻干存活率为96.3％.选择发酵的固定化细胞制作条件:海藻酸钠2.25g/L、CaCl2 4.0g/L.包埋后乳酸菌冻干存活率为95.6％.     

嗜酸乳杆菌冻干菌粉保护剂选择的研究

为了开发以嗜酸乳杆菌为基础的各类制品,本文以嗜酸乳杆菌存活率为指标,对保护剂进行了单一和复合的筛选及配方的研究,并进行了验证实验。结果表明,单一及复合保护剂均对菌体存活率具有一定的保护作用,但复合保护剂的效果明显高于单一保护剂。最终确定出配方:脱脂乳(16.0%)、麦芽糊精(10.0%)、海藻糖(10.0%)、L-谷氨酸(1.0%)、维生素C(2.0%)、甘油(2.0%)、MnSO4(0.8%)对嗜酸乳杆菌的保护效果最佳;保护剂与细胞悬浮液最佳比例是2∶1,利用此保护剂,经真空冷冻技术可制得活菌水平在1010cfu/g的嗜酸乳杆菌冻干菌粉。     

嗜酸乳杆菌冻干影响因子的研究

传统的乳酸菌发酵剂因活化过程复杂,极易引起污染而影响发酵乳的质量。目前,多采用冷冻干燥技术制备直投式粉末状乳酸发酵剂。然而,菌种冻干时机的把握和冻干保护剂的选择,将直接影响乳酸菌在冷冻干燥前后的存活率以及存活期。本文研究了嗜酸乳杆菌的生长曲线,选用蔗糖、乳糖、甘油、VC、谷氨酸钠、麦芽糊精、脱脂乳粉等为嗜酸乳杆菌冻干保护剂进行了冻干研究。结果表明:①嗜酸乳杆菌发酵液培养至酸度为100°T、pH值4.8时,OD410nm=0.511为最大,是最佳发酵终止时间;②嗜酸乳杆菌冻干保护剂配方以5%麦芽糊精、2%VC、5%甘油为最佳冻干保护剂组合,此时嗜酸乳杆菌冻干菌粉活菌数为2.34×109cfu/g。     

表层蛋白对嗜酸乳杆菌NCFM生长代谢的影响

为评估表层蛋白对嗜酸乳杆菌自聚集、生长及代谢的影响,通过测定菌体自聚集率、菌体生长、GC-MS分析表层蛋白去除前后嗜酸乳杆菌胞内小分子代谢物的变化。结果表明,表层蛋白去除前后,嗜酸乳杆菌的胞内氨基酸类如组氨酸、酪氨酸、鸟氨酸,有机酸类如乳酸、苹果酸等代谢物具有显著差异,这些代谢物直接影响了表层蛋白相关的主要生化反应和关键代谢通路。经过代谢通路富集分析,主要影响了精氨酸和脯氨酸代谢、赖氨酸生物合成、精氨酸生物合成、氨基糖和核苷酸糖代谢、丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢这5条代谢通路。总之,表层蛋白的剥离影响了氨基酸合成的代谢通路,氨基酸合成会竞争生长所需的能量,进而影响嗜酸乳杆菌的生长,该研究为进一步认识表层蛋白对嗜酸乳杆菌胞内小分子化合物代谢的影响提供了依据。     

蒺藜对L.acidophilus和L.bulgaricus生长的影响

研究了不同浓度的蒺藜药液及药液离心与否对嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌生长的影响。结果表明，蒺藜药液培养嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌的最佳浓度均为0．111g／mL；药液离心对嗜酸乳杆菌的生长和药液的pH几乎没有影响；药液离心对保加利亚乳杆菌的生长和药液的pH均有较大影响，与对照相比，其菌体减少，pH升高。     

嗜酸乳杆菌生长促进物质研究

为提高嗜酸乳杆菌活菌数,工业化生产嗜酸乳杆菌冻干菌粉,通过测定嗜酸乳杆菌发酵液的吸光度和活菌数,采用优选法研究了不同生长促进物质对嗜酸乳杆菌活菌数的影响。结果表明:在11%(m/m)的脱脂乳中加入麦芽汁、番茄汁、酵母膏、真菌浸汁、胡萝卜汁能显著促进嗜酸乳杆菌的生长,蛋白胨、葡萄糖次之,麦芽糖几乎无促进效果。因此,以脱脂乳为基础培养基,嗜酸乳杆菌的最佳生长促进物质的组合为0.5%(m/m)酵母膏、5%(V/V)番茄汁、5%(V/V)真菌浸汁、12%(V/V)胡萝卜汁和5%(V/V)麦芽汁,在此条件下其活菌数可达5.46×109cfu/mL。     

影响嗜酸乳杆菌表面疏水性因素的研究

对嗜酸乳杆菌的表面疏水性进行分析,利用微生物黏着碳氢化合物法测定嗜酸乳杆菌的表面疏水率,采用不同条件分别处理菌体细胞表面,初步确定嗜酸乳杆菌表面疏水性的影响因素。经研究得出,影响嗜酸乳杆菌表面疏水性的因素有时间、温度、pH、浓度、Ca2+和蛋白酶,并结合国内外报道得出,嗜酸乳杆菌表面疏水性与黏附能力之间存在着相关性;此外,推测能够介导嗜酸乳杆菌表面疏水性的物质可能是一类蛋白质。     

热休克法提高嗜酸乳杆菌的抗冻干胁迫作用

将乳酸菌在冷冻干燥前做热休克处理,可以提高其抗冻干胁迫能力。以菌体收集时期、热休克温度和热休克时间为热休克处理条件,通过单因素试验初步获得热休克对嗜酸乳杆菌抗冻干胁迫作用的影响,并以嗜酸乳杆菌冷冻干燥存活率为响应值,利用响应面分析获得热休克的最佳条件,即:嗜酸乳杆菌培养10.5 h,46℃热休克处理30 min。经此条件的热休克处理后,嗜酸乳杆菌冷冻干燥的存活率为56.77%,比未热休克处理的对照组存活率(37.68%)提高了50.66%。     

嗜酸乳杆菌H0606冻干保护剂配方优化

研究单一保护剂和组合保护剂对嗜酸乳杆菌冻干的影响。结果表明,海藻糖、脱脂乳、蔗糖、抗坏血酸钠、乳糖、葡萄糖和谷氨酸钠对嗜酸乳杆菌的保护效果较好;优选嗜酸乳杆菌的冻干保护剂的配方组合为:脱脂奶粉、蔗糖、海藻糖、葡萄糖和抗坏血酸钠。     

冷诱导胡萝卜粗提物对嗜酸乳杆菌的保护作用

为了检测冷诱导的胡萝卜蛋白质粗提物对嗜酸乳杆菌的冻干保护作用,从冷诱导的胡萝卜中制备蛋白质粗提物,设计6组冻干保护剂配方,以细菌存活率作为指标检测该粗提物的冻干保护效果;并在扫描电镜下观察冻干菌粉的形态特征。试验结果显示:冷诱导胡萝卜在12.5 ku和36 ku分子量处出现疑似抗冻蛋白条带;不同保护剂对嗜酸乳杆菌的冻干保护效应差异显著(P<0.05),添加冷诱导胡萝卜粗提物的复合保护剂冻干保护效果最优,其细菌存活率达到76.02%;最佳保护剂组配方为:10%脱脂乳,10%麦芽糊精,10%海藻糖,1.0%L-Cys,2.0%VC,2.0%甘油,0.8%硫酸锰和15%冷诱导胡萝卜粗提物。     

嗜酸乳杆菌生理特性的研究

本文以实验室保藏的一株嗜酸乳杆菌为研究对象，研究了该菌的生理特性，包括生长曲线的测定，渗透压对菌体生长的影响，耐胆盐性，同化胆固醇及抑菌能力。结果表明，嗜酸乳杆菌为革兰氏阳性菌，培养16h是最佳收获期，最高可耐受浓度为6％的NaCl，菌体在0．5％的胆盐溶液中放置0．5h后存活率为80％，胆固醇同化率为57．06％，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有明显的拮抗作用。