miR-200c增强肺癌A549细胞对紫杉醇及吉非替尼的敏感度及相关机制

目的 观察上调肺癌A549细胞中miR-200c的表达对紫杉醇、吉非替尼敏感度及两药联合作用的影响及其作用机制。方法 用miR-200c转染肺癌A549细胞,Real-time PCR检测miR-200c表达,MTT法和流式细胞仪检测转染miR-200c后A549细胞对紫杉醇、吉非替尼单药及两药联合的敏感度和细胞凋亡的影响,Western blot检测TUBB3蛋白、EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及总蛋白的表达。结果 上调miR-200c表达可增强A549细胞对紫杉醇及吉非替尼敏感度并促进细胞凋亡,对两药联合无明显作用。Western blot显示转染miR-200c联合紫杉醇可下调A549细胞中TUBB3蛋白表达,联合吉非替尼下调EGFR和Akt磷酸化蛋白表达,与两药联合对EGFR和Akt磷酸化蛋白表达无明显影响。 结论 miR-200c可增强肺癌A549细胞对紫杉醇、吉非替尼的敏感度,可能分别与抑制TUBB3表达、抑制EGFR和Akt磷酸化蛋白表达有关,而对两药联合无协同抗肿瘤作用。     

EGFR-TKI联合COX-2抑制剂抑制肺腺癌A549细胞的增殖及其机制

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)吉非替尼联合环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法:实验设空白对照组、吉非替尼组、塞来昔布组、吉非替尼+塞来昔布组。倒置相差显微镜下观察A549细胞形态变化,MTT法检测A549细胞增殖,流式细胞术检测A549细胞周期及凋亡,Western blotting检测A549细胞中EGFR、p-EGFR、COX-2的表达。结果:吉非替尼和塞来昔布均可抑制A549细胞的增殖,可见细胞活性下降,G1期细胞阻滞及细胞凋亡增加;联合用药较单药组A549细胞活性下降更明显,G1期阻滞细胞增加,且细胞凋亡增加。吉非替尼或塞来昔布作用前后A549细胞EGFR表达无变化,但联合用药组p-EGFR及COX-2的表达较单药组显著下降。结论:吉非替尼联合塞来昔布可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,其机制可能与抑制EGFR的活化及下调COX-2的表达有关。     

康莱特注射液对吉非替尼诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡影响的实验研究

目的 探讨康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响。 方法 应用MTT法计算康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的半数抑制浓度（IC50）,检测康莱特注射液（5、10、20、40、80、100、160 μl／ml）、吉非替尼（0.1、0.5、1.0、5、10、20、40 μmol／L）以及康莱特注射液（80 μl／ml）联合吉非替尼（0.1、0.5、1、5、10、20、40 μmol／L）作用于人肺腺癌A549细胞株24、48、72 h的增殖抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI 双标法检测康莱特注射液、吉非替尼及两药联合作用于A549细胞48 h后的凋亡率;免疫细胞化学法检测各药物处理组作用于A549细胞48 h后FAS、AKT2蛋白表达;RT-PCR技术检测各组FAS mRNA、AKT2 mRNA的表达水平。均设未加药的A549细胞为空白对照组。结果 康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的IC50为80 μl／ml。康莱特注射液联合吉非替尼作用于A549细胞的增殖抑制率高于两单药组和空白对照组,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。两者的联合作用在一定浓度范围内呈现出协同的抗瘤效果。流式细胞术检测显示,两药联合组的细胞凋亡率显著高于两单药组和空白对照组（P＜0.05）。免疫细胞化学和RT-PCR检测显示,与空白对照组比较,康莱特组和两药联合组FAS蛋白和mRNA的表达水平均升高（P＜0.05）,AKT2蛋白和mRNA表达水平均下调（P＜0.05）。结论 康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株有明显的促凋亡作用,康莱特注射液可能增加人肺腺癌A549细胞对于吉非替尼的敏感性。     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145，miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异；不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后，Q-PCR检测miR-145表达变化；miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后，CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞，Western blot检测ADAM19蛋白表达；Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后，SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞，再用5 μmol/L吉非替尼干预，Western blot检测ADAM19蛋白的表达；采用siRNA抑制ADAM19表达，再用5 μmol/L吉非替尼干预，CCK8检测细胞活力；采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法，观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示，与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较，肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低；5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后，miR-145表达显著上调；转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降；双荧光素酶报告系统结果显示，miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区；Western blot结果显示，5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后，两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞，之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗，ADAM19蛋白表达下调；siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达，再给予5 μmol/L吉非替尼治疗，CCK8结果显示，两种细胞的细胞活力显著降低；过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后，显著抑制皮下肿瘤生长，并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性，其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域，从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

阻断表皮生长因子受体和环氧合酶-2信号途径对肺腺癌细胞的抗增殖作用

目的:探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼(gefitinib)联合新型环氧合酶2（cyclooxygenase2, COX2）抑制剂塞来昔布(celecoxib)对肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其可能机制。方法:肺腺癌A549细胞培养于RPMI 1640 培养液中,实验分为正常对照组、吉非替尼5 μmol/L组、塞来昔布25 μmol/L组、吉非替尼5 μmol/L加塞来昔布25 μmol/L组。药物干预细胞48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,锥虫蓝拒染法检测药物对细胞生长的影响,Annexin V/PI法和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测药物作用周期,免疫荧光和Realtime PCR法检测EGFR、COX2蛋白的表达及EGFR mRNA的表达情况。结果:吉非替尼联合塞来昔布组相比单药组,A549 细胞明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆并开始脱落。吉非替尼与塞来昔布单药对A549细胞抑制作用具有时间和剂量依赖性,加药48 h时吉非替尼（5 μmol/L）联合塞来昔布（25 μmol/L）组抑制率为(58.2±4.6)%,明显高于单药组（P<0.01）。联合用药组A549细胞凋亡率明显高于单独用药组（33.9% vs 6.0%,8.8%）,其S期细胞明显减少、G0/G1期明显增加（P<0.01）;EGFR、COX2蛋白的表达明显减弱（P<005）,EGFR mRNA相对表达量（028±0.05）明显高于单独用药组（P<0.05）。结论:吉非替尼和塞来昔布联合对肺腺癌A549 细胞增殖的抑制具有明显协同作用,其可能机制是诱导凋亡、增强G0/G1期阻滞和进步下调活化的EGFR与COX2的表达。     

多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用

目的 探讨多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞A549和PC-9的生长影响及其细胞学机制。方法 qPCR-HRM法检测人肺腺癌细胞EGFR和K Ras基因突变,MTT法检测细胞增殖, Western blotting检测细胞信号蛋白及磷酸化表达,FCM法检测细胞周期变化。结果 人肺腺癌A549细胞为EGFR基因野生型,PC-9细胞为EGFR第19外显子突变型。多西他赛和吉非替尼单药或联合用药均能抑制A549和PC-9细胞生长,呈浓度依赖性。多西他赛对A549和PC-9细胞生长的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为5.24×10^-7和2.13×10^-8mol／L,吉非替尼分别为1.28×10^-5和4.58×10^-8mol／L。在IC₅₀浓度时,多西他赛序贯吉非替尼对A549和PC-9细胞的生长抑制率分别为60.00%和57.45%,均较单药组明显增高（P＜0.05）;而同时用药只对PC-9细胞有增效作用,抑制率为53.46％,较单药组明显增高（P＜0.05）。多西他赛表现为增强A549、PC-9细胞EGFR和ERK磷酸化,吉非替尼表现为抑制,两药均抑制PC-9细胞IGF-1R磷酸化。多西他赛序贯应用吉非替尼显著抑制EGFR和ERK磷酸化,两药同时应用对抑制PC-9细胞的IGF-1R磷酸化具有增强作用。多西他赛将A549及PC-9细胞阻滞在G₂期,吉非替尼将PC-9细胞明显阻滞在G₁期。结论 多西他赛序贯吉非替尼能够抑制EGFR野生型和突变型的A549及PC-9细胞生长,且呈增效作用,可能与影响细胞EGFR和ERK磷酸化有关;两药同时应用仅对PC-9细胞具有增效作用,可能与IGF-1R磷酸化抑制有关;不同时序应用的效果均可能与细胞周期相关。     

吉非替尼联合鸦胆子油乳对肺腺癌细胞的作用及其机制

目的 探讨吉非替尼（Gefitinib, G）联合鸦胆子油乳（Bruceolic oil emulsion, B）对肺腺癌PC-9、A549细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法 取对数生长期的PC-9、A549细胞进行实验,两细胞株在实验中均分为对照组和实验组。采用MTT比色法、TUNEL法及流式细胞技术检测各实验组对肺腺癌细胞的增殖抑制、诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞等作用。结果 吉非替尼、鸦胆子油乳单药均能抑制PC-9、A549细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,呈浓度和时间依赖效应。与鸦胆子油乳联合后,吉非替尼对PC-9和A549细胞的IC50较单用时分别下降了50.72%和66.56%。两药联合后对两细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用进一步增强。结论 吉非替尼联合鸦胆子油乳能显著抑制肺腺癌PC-9、A549细胞增殖、诱导细胞凋亡,可能与药物对细胞周期的阻滞作用有关。两者合用时鸦胆子油乳可对吉非替尼起到增效增敏的作用。     

培美曲塞和吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用和机制

目的 探讨培美曲塞与吉非替尼不同时序应用对肺腺癌细胞A549和PC-9生长及凋亡的影响, 并阐述其可能机制。方法 MTT法检测各组细胞的增殖抑制情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡及细胞周期分布,Western印迹法检测对EGFR下游信号通路及TS酶蛋白水平表达的影响。结果 培美曲塞序贯吉非替尼、培美曲塞同步联合吉非替尼对PC-9和A549细胞增殖抑制率及凋亡率较单药组均提高（P<0.05）,培美曲塞可以提高EGFR、AKT 、ERK磷酸化水平,而吉非替尼表现为抑制作用, 同时吉非替尼降低TS酶表达。培美曲塞序贯吉非替尼,培美曲塞同步联合吉非替尼抑制EGFR、AKT 、ERK磷酸化水平较单药更强。吉非替尼主要将PC-9、A549细胞阻滞在G0/G1期;培美曲塞主要将细胞阻滞在S期。培美曲塞序贯吉非替尼、培美曲塞同步联合吉非替尼较其他组G2/M期细胞比例提高（P<0.05）。结论 培美曲赛序贯吉非替尼、培美曲赛同步联合吉非替尼在PC-9、A549细胞中均起到协同增效作用,且培美曲赛序贯吉非替尼协同作用更为显著,可能主要与培美曲赛诱导EGFR、AKT 、ERK磷酸化及吉非替尼降低TS酶作用有关。     

MircoRNA-214对吉非替尼敏感及耐药细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 研究mircoRNA-214（miR-214）对PC9肺腺癌及吉非替尼耐药细胞（PC9/GR）增殖和凋亡的影响。［方法］ 在PC9细胞中转染miR-214模拟物及PC9/GR中转染miR-214抑制剂,使用定量逆转录PCR（qRT-PCR）检测其表达。MTT检测细胞转染miR-214模拟物或其抑制剂后的存活及增殖。在PC9细胞中顺时转染miR-214模拟物以检测上调miR-214对PC9细胞耐药性的影响,在PC9/GR细胞中顺时转染miR-214抑制物以检测下调miR-214对PC9/GR细胞耐药性的影响,并用流式细胞仪检测细胞的凋亡。Western blotting检测PTEN在PC9和PC9/GR细胞中的表达。构建PTEN 3’-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-214的靶基因;建立异种移植模型检测miR-214抑制物对肺癌移植瘤的影响。［结果］ PC9细胞中miR-214低表达,上调miR-214的表达后PC9细胞对吉非替尼的敏感性降低,并且抵抗吉非替尼诱导的凋亡;而在PC9/GR细胞中低表达miR-214后,下调miR-214增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,并且可以增强吉非替尼诱导的凋亡作用。荧光素酶报告载体实验证实PTEN是miR-214在细胞内的靶基因。动物异种移植模型表明miR-214抑制物可以增强PC9/GR对吉非替尼的敏感性。［结论］ MiR-214可能通过靶基因PTEN调控吉非替尼的获得性耐药。     

上调miR-34b表达可增强HCC827细胞对埃克替尼的敏感性

目的:探讨上调miR-34b的表达对HCC827细胞对埃克替尼敏感性的影响及其机制。方法:应用细胞转染技术获得miR-34b高表达的HCC827细胞，并将HCC827细胞分为空白对照组、转染组、埃克替尼组及埃克替尼与转染联合组，采用MTT法测定各组细胞增殖的情况，运用流式细胞术分析各组细胞凋亡率及生长周期的变化，同时应用Real-time PCR及Western Blot方法检测各组c-MET基因mRNA及蛋白的表达水平。 结果:miR-34b转染后，HCC827细胞的增殖能力下降，凋亡率升高（P<0.05）；miR-34b转染后，埃克替尼对HCC827细胞的抑制率较埃克替尼组明显上升，半数抑制浓度（IC50）明显下降（P<0.05）；转染组及埃克替尼与转染联合组的c-MET水平较对照组有所下降（P<0.05）。结论:上调miR-34b表达可以抑制HCC827细胞增殖，促进其凋亡，并可以增强HCC827细胞对盐酸埃克替尼的敏感性；其机制可能与miR-34b反馈抑制c-MET有关。     

MFG-E8对卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感度的影响及分子机制

目的 探讨沉默MFG-E8基因对SKOV3细胞抗癌药物敏感度的影响及其相关机制。方法 小干扰技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中MFG-E8基因并对干扰效率进行测定。CCK-8检测转染MFG-E8 siRNA后SKOV3细胞对顺铂的敏感度。qRT-PCR检测MFG-E8基因沉默后多重耐药蛋白ABCB1及ABCC1 mRNA的表达,qRT-PCR及Western blot检测沉默MFG-E8对ETM相关蛋白的影响。结果 MFG-E8 siRNA可有效沉默MFG-E8蛋白水平的表达;不同浓度顺铂作用于MFG-E8 siRNA转染组与阴性对照组NC siRNA两组细胞48 h后,随药物浓度增高,两组细胞增殖抑制率均上升,MFG-E8 siRNA转染组细胞增殖抑制率上升较明显（P<0.01）。3 μg/ml顺铂浓度作用于两组细胞48、72 h后,与阴性对照组相比,MFG-E8 siRNA转染组细胞增殖活性明显受到抑制（P<0.05）。qRT-PCR结果显示,MFG-E8 siRNA转染组中ABCB1及ABCC1 mRNA表达均明显降低。qRT-PCR及Western blot结果显示,沉默MFG-E8基因可下调SKOV3细胞中N-Cadherin、Vimentin、Snail mRNA及蛋白的表达,上调E-Cadherin mRNA及蛋白表达。结论 沉默MFG-E8基因可增加SKOV3细胞对顺铂的敏感度,下调多重耐药蛋白ABCB1及ABCC1m R N A 表达,其机制可能与沉默MFG-E8抑制EMT进程有关。     

上调miRNA-506对肺癌耐药细胞株A549/DDP耐药性的逆转及其机制

目的:探讨微小核糖核酸（miRNA）-506对人非小细胞肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的逆转及其可能机制。方法:构建miRNA-506 模拟物,应用脂质体法转染A549/DDP细胞。应用实时逆转录酶链聚合反应（qRT-PCR）法验证各组细胞中miRNA-506的表达情况,CCK8法检测顺铂对细胞的抑制作用。流式细胞术Annexin V／PI双染检测各组细胞的凋亡。Western blot检测MDR1、MRP1、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:qRT-PCR结果显示,miRNA-506转染组miRNA-506的表达量明显高于对照组（P<0.05）。CCK8结果显示,上调miRNA-506 增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。流式细胞术结果显示上调miRNA-506 促进顺铂诱导的A549/DDP细胞凋亡。上调miRNA-506可以使A549/DDP细胞MDR1、MRP1和Bcl-2蛋白的表达下降,使Bax蛋白的表达升高。结论:上调miRNA-506能逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药,这一过程可能通过miRNA-506调控多药耐药蛋白和凋亡相关蛋白实现。     

miRNA-192对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨抑制microRNA-192（miR-192）在非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂（DDP）耐药性方面的影响及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人肺腺癌耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549细胞中miR-192的表达水平,A549／DDP细胞转染miR-192抑制剂（inhibitor）和miR-阴性对照（NC）48h后采用qRT-PCR检测转染效率,分别采用MTT法、克隆形成实验及流式细胞术检测转染48h后A549／DDP细胞对DDP的药物敏感性、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,Western blotting检测转染48h后细胞中Bax和Bcl-2的表达变化。结果 miR-192在A549／DDP细胞中的表达水平高于A549细胞（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor 48h后的A549／DDP细胞miR-192水平低于转染miR-NC者（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor后,A549／DDP细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多、DDP对其半数抑制浓度降低、Bax蛋白水平升高和Bcl-2蛋白水平下降,与转染miR-NC者比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 抑制miR-192能够降低A549／DDP细胞对DDP的耐药性,其作用机制可能是通过增加细胞凋亡以及下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达来实现的。     

LINC00460靶向miR-380-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨LINC00460对皮肤鳞状细胞癌（CSCC）细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及可能机制。方法:实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分析人类永生化表皮细胞（HaCaT）和CSCC细胞（SCC13、A431和HSC-5）中LINC00460和miR-380-3p的表达水平。将LINC00460小干扰RNA（si-LINC00460）、miR-380-3p模拟物（miR-380-3p mimics）、si-LINC00460+miR-380-3p抑制物（anti-miR-380-3p）分别转染A431细胞,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell实验分析细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、上皮细胞钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经钙黏蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的表达。双荧光素酶报告基因实验、RT-qPCR确定LINC00460对miR-380-3p的靶向调控作用。结果:与HaCaT比较,CSCC细胞中LINC00460表达显著增加,miR-380-3p表达显著降低（P＜0.05）。下调LINC00460表达后A431细胞增殖活力、迁移和侵袭细胞数以及CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达显著降低（P＜0.05）,凋亡率、E-Cadherin蛋白表达显著升高（P＜0.05）。上调miR-380-3p表达后A431细胞增殖活力、迁移和侵袭细胞数以及CyclinD1、MMP2和MMP9表达显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著升高（P＜0.05）。与下调LINC00460比较,同时下调LINC00460和miR-380-3p后A431细胞增殖活力、迁移和侵袭细胞数以及CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达显著升高（P＜0.05）,凋亡率、E-Cadherin蛋白表达显著降低（P＜0.05）。LINC00460靶向负调控miR-380-3p表达。结论:CSCC细胞中LINC00460表达增加,下调LINC00460能够降低CSCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制与靶向调控miR-380-3p表达有关。     

microRNA-130a在非小细胞肺癌中的表达和功能

目的:探讨microRNA-130a（miR-130a）在非小细胞肺癌中的表达情况,并对其功能和分子机制进行研究。方法:收集50例非小细胞肺癌肿瘤组织和相对应的正常肺组织,采用RT-PCR方法检测miR-130a的相对表达量,并分析其与临床病理资料的相关性。采用体外转染法将miR-130a抑制剂瞬时转染到A549细胞后,应用real-time PCR检测A549细胞中miR-130a的表达情况。CCK8实验检测细胞转染后的增殖变化。Western blot检测转染后细胞中Smad4的表达变化。结果:肺癌组织中miR-130a的表达水平明显高于正常肺组织（P<0.05）;miR-130a的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期明显相关（P<0.05）。与对照组比较,A549细胞转染miR-130a抑制剂后miR-130a表达水平明显下调,细胞增殖率明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);转染miR-130a抑制剂后,肺癌细胞中Smad4的表达水平明显上调。结论:miR-130a在NSCLC组织中表达上调,可能部分通过下调Smad4的表达来促进肺癌细胞的增殖和转移。     

survivin基因沉默对宫颈癌XB1702细胞增殖和对吉非替尼敏感度的影响

目的研究survivin基因沉默对人宫颈癌XB1702细胞增殖和对化疗药物吉非替尼敏感度的影响。方法 设计合成survivin的siRNA序列,LipofectamineTM2000 转染入XB1702细胞。采用RT-PCR和Western blot检测survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTT法和细胞克隆形成试验法观察survivin基因沉默后XB1702细胞对吉非替尼的敏感度。结果 Survivin基因沉默48 h后,XB1702细胞的survivin基因和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期被阻滞在G₀/G₁期,S期细胞数减少;差异有统计学意义(P<0.05)。survivin基因沉默组细胞对吉非替尼的敏感度显著增强。结论 survivin特异性siRNA能显著沉默XB1702细胞survivin基因,抑制细胞增殖,并增强XB1702细胞对吉非替尼的敏感度。     

桥接整合因子1 通过c-MYC途径抑制非小细胞肺癌A549 细胞中PD-L1的表达

目的：研究人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549 细胞中桥接整合因子-1（bridging intergrator-1,BIN1）对程序性死亡受体-配体1（programmed death-ligand 1,PD-L1）表达的影响及其机制。方法：采用qRT-PCR和Western blotting方法检测A549 细胞和正常人胚肺成纤维细胞2BS中BIN1 与PD-L1 基因和蛋白表达情况,通过基因转染技术、利用阳离子脂质体将含有人全长BIN1 基因序列的真核表达质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-BIN1 转染到A549 细胞中（BIN1+组）,构建过表达BIN1 的细胞株,采用RNA干扰技术将干扰骨髓细胞瘤病毒癌基因（cellular-myelocytomatosis viral oncogene ,c-MYC）的c-MYC-siRNA转染到A549 细胞中（c-MYC-siRNA组）以敲低c-MYC基因表达,通过qRT-PCR和Western blotting 方法验证转染效果及过表达BIN1 基因或敲低c-MYC基因对A549 细胞中c-MYC 和PD-L1 表达的影响。结果：与2BS 细胞相比,A549 细胞中BIN1 基因和蛋白均呈低表达状态,而PD-L1 呈高表达状态（均P<0.05）。将携带BIN1 基因的真核表达质粒转染到A549 细胞后,BIN1 基因和蛋白表达水平较对照组显著升高（P<0.05）,而PD-L1 表达显著降低（P<0.05）。c-MYC-siRNA 转染到A549 细胞后,细胞内c-MYC表达显著降低（P < 0.01）,PD-L1 表达明显下调（P<0.01）。结论：BIN1 过表达可以通过失活c-MYC通路降低PDL1表达,从而抑制A549细胞的免疫逃逸。     

miR-492对非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-492对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法:RT-qPCR检测NSCLC组织及细胞株（Calu-1、A549、H1650和H1299）中miR-492的表达。A549细胞瞬时转染miR-492 mimics或miR-492 inhibitors，并通过划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验证实miR-492调控的靶基因。结果:NSCLC组织及细胞株中miR-492表达明显升高。将miR-492 mimics转染A549细胞后，细胞的迁移和侵袭能力明显增强。将miR-492 inhibitors转染A549细胞后，细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。PTPN9是miR-492的直接靶基因。结论:miR-492可能通过调节靶基因PTPN9，从而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。