丹皮酚通过下调COX-2表达及PGE_2合成抑制大肠癌细胞增殖及诱导细胞凋亡

目的观察丹皮酚对大肠癌细胞增殖活性和细胞凋亡的影响,并探讨丹皮酚对大肠癌的抑制作用是否与其下调COX-2表达及PGE2合成有关。方法以大肠癌LoVo细胞株为研究对象,CCK-8比色法检测不同浓度丹皮酚或PGE2或塞来昔布处理后细胞活力及丹皮酚对PGE2刺激细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting方法检测COX-2和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的表达情况;ELISA法检测大肠癌细胞上清液中PGE2含量。结果丹皮酚处理后LoVo细胞活力显著降低,呈明显的时间和浓度依赖性;流式细胞仪检测结果显示丹皮酚可诱导LoVo细胞凋亡;丹皮酚可降低LoVo细胞COX-2表达及上清液中PGE2含量;经PGE2处理后LoVo细胞活力明显增强,丹皮酚可抑制PGE2诱导的LoVo细胞活力增加;经塞来昔布处理后,LoVo细胞活力显著降低,且细胞凋亡率增加;经丹皮酚处理后,LoVo细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,Pro-Caspase-3、Pro-Caspase-9表达减弱,而Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9表达增强,呈浓度依赖性。结论丹皮酚可抑制LoVo细胞增殖并诱导细胞凋亡,可能的机制是通过下调COX-2表达及PGE2合成进而激活线粒体凋亡途径。     

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌细胞的促凋亡作用

探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达联合5-FU对大肠癌LoVo细胞的促凋亡作用。方法复苏培养PI3K p85α干扰组LoVo细胞（PI3Kp85ɑ/RNAi-LoVo）和LoVo对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,MTT法检测5-FU对两组细胞的半数抑制浓度（IC50）,Annexin-FITC标记法检测细胞凋亡。结果 Western blot结果显示LoVo干扰组细胞PI3K p85α蛋白抑制率为59%,MTT结果显示干扰组细胞5-FU的IC50值（4.57±0.16）μmol/L明显低于对照组细胞5-FU的IC50值（8.07±0.30）μmol/L（P=0.000）,细胞凋亡实验显示,干扰组细胞对5-FU诱导凋亡的敏感性增加（P=0.000）。结论 PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU可促进大肠癌LoVo细胞凋亡,为基因治疗和化学药物联合治疗大肠癌提供新的策略。     

肿瘤相关成纤维细胞对大肠癌LoVo细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

目的观察肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)对大肠癌LoVo细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法取大肠癌患者癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),建立大肠癌LoVo细胞与CAFs或NFs共培养体系,奥沙利铂处理后CCK-8比色法检测LoVo细胞存活率,PI/Annexin V双染法检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blotting)检测共培养体系中大肠癌细胞COX-2、上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin)表达的改变,ELISA法检测共培养体系中细胞上清液中前列腺素E_2(PGE_2)含量。结果 CAFs可提高奥沙利铂处理后LoVo细胞存活率,并降低细胞凋亡率;LoVo细胞与CAFs共培养后,细胞COX-2蛋白表达上调,细胞上清液中PGE_2含量显著增加,且细胞EMT标志物蛋白E-cadherin表达降低,Vimentin、Fibronectin蛋白表达上调。结论 CAFs可降低大肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的敏感性,其机制可能是通过上调大肠癌细胞COX-2表达和PGE_2合成,继而诱导EMT。     

PUMA在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用

目的 研究吉西他滨体外对人胰腺癌AsPC-1细胞生长的作用机制.方法 用脂质体转染法将p53正向凋亡调控因子(PUMA)反义核酸(反义PUMA cNA)的真核表达载体pcDNA3.1-PUMAAS和空载体pcDNA3.1-导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度1、5、10和15 μmol/ml的吉西他滨中作用72 h.RT-PCR和Western blotting检测不同组细胞经吉西他滨作用72 h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)、Hoechst 33258荧光染色法和TUNEL法检测细胞凋亡.结果 吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞出现PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖.结论 吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关.     

西咪替丁对人结肠癌细胞生长及凋亡的影响

目的探讨西咪替丁对体外培养的人结肠癌细胞株LoVo的抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法采用MTT比色法、流式细胞术、形态学观察和TUNEL法检测不同浓度的西咪替丁溶液处理LoVo细胞后的生长状况、形态学、分子生物学改变.结果西咪替丁可抑制LoVo细胞的增殖,且有剂量依赖性的趋势;1×10-2M西咪替丁处理LoVo细胞48h后,在光镜、电镜检测中,可见典型的凋亡细胞;流式细胞术检测凋亡率为32.7%,bcl-2相关蛋白表达率为36.74%;TUNEL法进一步从分子生物学角度证实凋亡的发生.结论西咪替丁对结肠癌细胞LoVo有抑制作用,主要机制为诱导其发生凋亡,凋亡发生的原因与西咪替丁可下调bcl-2蛋白的表达有关.     

上调PTEN蛋白表达对大肠癌细胞周期与细胞凋亡的影响

目的探讨PTEN蛋白过表达对大肠癌细胞周期与细胞凋亡的影响。方法构建PTEN真核表达质粒pc-DNA3.1-PTEN,稳定转染大肠癌LoVo细胞。Western blot鉴定转染效果,采用PI标记法进行细胞周期实验,Annexin V-FITC标记法进行细胞凋亡实验。结果 Western blot结果显示,稳定转染表达质粒可显著增强PTEN蛋白的表达(P<0.05)。与阴性组及转染空白载体的实验组相比,细胞周期实验显示,PTEN表达增加使大肠癌细胞出现明显的G1期阻滞,S期细胞数量减少(P<0.05)。细胞凋亡实验显示,PTEN表达增加可使大肠癌细胞对5-FU诱导凋亡的敏感性增加(P<0.05)。结论上调PTEN蛋白表达可引起大肠癌LoVo细胞周期阻滞,凋亡增加,PTEN可能成为大肠癌基因治疗的新靶点。     

外源野生型p53正向细胞凋亡调控因子基因对人胰腺癌PC-3细胞生长的作用

p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up—regulated modulator of apoptosis，PUMA）是新近发现的Bcl-2家族BH-3亚家族中的成员，是p53的靶基因，可被内外源性p53快速诱导，具有强大的促凋亡作用。研究发现，PUMA基因在许多肿瘤细胞系中低或不表达，转染外源性PUMA基因后，细胞凋亡被促进，动物移植瘤的生长明显受到抑制。在前期的工作中，我们检测了胰腺癌组织中PUMA表达情况发现，PUMA在肿瘤组织中的阳性表达明显低于瘤旁组织，并且肿瘤组织中细胞凋亡指数低于对照组，说明PUMA低表达引起的细胞凋亡抑制在胰腺癌的发生中起重要作用。本试验旨在观察PUMA基因转染抑制体外胰腺癌细胞的生长的效果。     

MiR-451作用于MIF对大肠癌细胞株LoVo的影响

目的:研究MicroRNA-451(MiR-451)作用于巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)对人大肠癌细胞株LoVo的影响.方法:构建包含有MiR-451过表达的慢病毒(hsa-mir-451a),感染LoVo细胞株,采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测MIF mRNA及蛋白在人大肠癌细胞LoVo及人大肠上皮细胞FHC中的表达变化情况,MTT法检测各组细胞的增殖能力.结果:与未感染组及对照组相比,感染组中MIF在mRNA及蛋白水平的表达均显著降低,感染组细胞的增殖活性明显受到抑制.结论:MIF可能是miR-451的直接作用靶点,高表达miR-451可以有效抑制LoVo中MIF的表达,进而抑制了LoVo的增殖.     

大蒜素促进人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的机制

目的探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的相关机制。方法人子宫内膜癌细胞株RL-952经大蒜素或Janus激酶/信号传导及转录液活因子(JAK/STAT3)通路抑制剂AG490共培养后,MTT比色法检测药物对TL-952肿瘤细胞的抑制率;采用Real-time PCR和酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞中JAK/STAT3信号转导通路相关蛋白或mRNA及细胞凋亡蛋白的表达情况。结果大蒜素能够剂量和时间依从性地抑制人子宫内膜癌细胞株RL-952的增殖;且大蒜素和AG490孵育人子宫内膜癌RL-952细胞株后细胞内JAK/STAT3转导通路相关蛋白JAK和STAT3的表达明显减弱,同时促细胞凋亡蛋白Bax、P53的表达明显增高、抑制凋亡蛋白Bcl2表达明显降低,且与对照组细胞差异显著(P0.01)。结论大蒜素能够有效抑制肿瘤细胞增殖的作用,且其可能的机制是通过抑制JAK/STAT3信号转导通路实现。     

大蒜素联合奥沙利铂对HCT-8细胞生长和增殖的影响及机制

目的探讨大蒜素与奥沙利铂联合应用治疗大肠癌的可行性及机制。方法将大蒜素和奥沙利铂单独及联合作用于人大肠癌细胞系HCT-8细胞,MTT法检测HCT-8细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率,免疫细胞化学SP法检测Caspase-3蛋白表达,苏木素复染观察异常分裂细胞。结果联合大蒜素后,奥沙利铂对HCT-8的增殖抑制作用增强（P〈0．01）;细胞阻滞于G2／M期,且凋亡率升高（P〈0．01）;Caspase-3表达上凋（P〈0．01）;异常分裂细胞数增多（P〈0．01）。结论大蒜素能增强HCT-8细胞对奥沙利铂的化疗敏感性,此可能与大蒜素对HCT-8细胞的抑制增殖、细胞周期阻滞及促进凋亡作用有关。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP