虫草素对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠的保护作用及TLR4/NF-κB通路的影响

目的：探讨虫草素对脂多糖诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠的保护作用及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路的影响。方法：通过脂多糖诱导建立ALI大鼠模型,造模48只大鼠随机分成：模型组、虫草素低（5 mg/kg）、中（10 mg/kg）、高（20 mg/kg）剂量组,12只/组;另设12只健康大鼠作为对照组。虫草素各剂量组大鼠腹腔注射相应剂量的虫草素,模型组和对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水,连续给药1周（1次/d）。检测大鼠动脉血氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）、肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、TLR4、NF-κB信使核糖核酸（mRNA）和蛋白水平,观察肺组织形态学并进行肺损伤评分。结果：对照组大鼠肺泡组织结构正常;模型组肺泡组织受损,毛细血管扩张,红细胞渗漏和肺组织液分泌,可见炎症细胞浸润;虫草素干预后,肺泡组织趋于正常,肺泡壁变薄,红细胞、分泌液减少,炎症细胞浸润减少。与对照组比较,模型组大鼠PaO2水平降低,PaCO2、肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白水平升高（P<0.05）;与模型组比较,虫草素低、中、高剂量组大鼠PaO2水平依次升高,PaCO2、肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白水平依次降低（P<0.05）。结论：虫草素可改善ALI大鼠肺功能和肺损伤,降低肺部炎症反应,其机制可能与虫草素抑制ALI大鼠肺组织TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达进而抑制TLR4/NF-κB通路的激活有关。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路异甘草素对大鼠颅脑外伤后炎症反应及Th1/Th2失衡的影响

【摘要】 目的 探讨异甘草素（ISL)通过介导Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB (NF-κB)通路对大鼠颅脑外伤 （TBI)炎症反应及Th1/Th2细胞失衡的影响。方法将SPF级大鼠随机分为模型组、ISL低剂量组（20 mg·kg-1）、ISL高剂量组（40 mg·kg-1）、阳性药物组（甘油果糖氯化钠,40 mg·kg-1）,每组10只,另设对照组。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;比较血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,脑组织TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA及TLR4、My D88、NF-κB p65、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清IL-1β、IL-4、TNF-α水平,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平升高,血清IFN-γ水平降低（均P＜0.05）;与模型组比较,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL低剂量组比较,ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL高剂量组比较,阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）。HE结果显示,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组脑组织病变较模型组出现不同程度改善,ISL高剂量组和阳性药物组改善尤为明显。结论ISL能有效改善大鼠TBI炎性反应、调节Th1/Th2细胞平衡,可能基于调控TLR4/MyD88/NF-κB通路相关mRNA和蛋白表达发挥作用。     

穗花杉双黄酮调控miR-140-5p介导脂多糖致急性肺损伤的机制研究

目的 探究穗花杉双黄酮对脂多糖（lipopolysaccharides ,LPS）致大鼠急性肺损伤（acute lung injury ,ALI）的保护作用及机制研究。方法 将60只大鼠随机分为4组：对照组、模型组、阳性对照组、实验组。模型组、阳性对照组和实验组大鼠均通过气道滴注3.00 mg/kg LPS 100μl,空白对照组气道滴注等体积的生理盐水,6 h后阳性对照组大鼠腹腔注射地塞米松（2.5 mg/kg）,实验组大鼠腹腔注射穗花杉双黄酮（2.5 mg/kg）,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48 h后称重测定大鼠肺组织湿/干比;苏木精-伊红染色( hematoxylin-Eosin staining,HE )观察各组大鼠肺组织病理结构;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）水平;RT-PCR检测miR-140-5p在肺组织中的表达情况;蛋白印迹法（western Blot,WB）检测肺组织中Toll样受体4（Toll Like Receptor 4,TLR4）、核因子活化B细胞κ轻链增强子（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB）蛋白表达水平。RT-PCR检测肺组织中miR-140-5p的表达情况。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RT-PCR检测TLR4、NF-κB的表达。结果 实验组肺组织湿/干比明显低于模型组（P＜0.05）;HE染色结果显示实验组大鼠肺组织结构相比于ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显减轻;ELISA结果显示实验组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组（P＜0.05）;WB结果发现实验组大鼠肺组织中TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示实验组大鼠肺组织和细胞中miR-140-5P表达均明显高于模型组（P＜0.05）,而miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB的表达（P＜0.05）。结论 穗花杉双黄酮能明显缓解LPS诱导的大鼠ALI,降低肺损伤病理进程中血清TNF-α、IL-6和IL-1β的含量,对ALI起保护作用,其作用机制可能是通过促进了miR-140-5P的表达,从而减低ALI炎症过程中关键炎症信号TLR4、NF-κB的表达。     

基于β2AR2/βarrestin2/NFκB通路的地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制

目的 探讨地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠β2肾上腺素受体(β2AR)/β抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及心肌凋亡的影响。方法 60只大鼠随机分为假手术组（Sham组）,心肌缺血再灌注模型组（MIRI组）,地佐辛高、中、低剂量组（20、10、5 mg/kg）,每组12只。地佐辛各剂量组在造模前30 min经股静脉注射相应剂量的地佐辛,Sham组和MIRI组给予等量生理盐水,采用手术结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法复制大鼠MIRI模型。再灌注2 h后,检测各组大鼠心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末（LVEDP）,评价心脏功能;并检测血清中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;HE染色观察左心室组织学变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数;免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达;Western blot检测心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα、NF-κB p65蛋白表达。结果 心肌组织病理学可见,Sham组心肌纤维完整、排列整齐,MIRI组心肌严重受损,局部肌纤维横纹消失,大量炎性细胞浸润;与Sham组相比,各治疗组明显好转。与Sham组相比,MIRI组大鼠HR、LVSP、Bcl-2/Bax比值、心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα蛋白表达显著降低,各治疗组较MIRI组明显升高（均P＜0.05）;与Sham组相比,MIRI组LVEDP、血清CK、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达、心肌细胞凋亡率显著升高,各治疗组较MIRI组明显降低（均P＜0.05）。结论 地佐辛可抑制炎症反应,减少心肌细胞凋亡,对MIRI大鼠具有保护作用;其作用机制可能与上调β2AR、β-arrestin2、IκBα的表达,降低NF-κB p65表达有关。     

右美托咪啶抑制NF-κB活化减轻肢体缺血再灌注损伤的研究

目的探讨右美托咪啶预处理对抑制NF-κB活化及减轻肢体缺血再灌注损伤的影响及机制。方法将21只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血再灌注+右美托咪啶预处理组（DEX组）,每组各7只。DEX组在麻醉后腹腔注射右美托咪啶25滋g/kg,其余两组给予相应体积的0.9%氯化钠溶液,30min后单侧股部切口,无创动脉夹夹闭股动脉,用橡皮筋以恒定张力结扎该侧肢体,Sham组仅行股部手术、分离股动脉不夹闭,其余两组缺血3h后去除动脉夹及橡皮筋。采用ELISA法检测血清IL-1、IL-6、TNF-α,Westernblot检测胞核NF-κB,光镜观察腓肠肌形态,并测定湿/干重比值。结果显微镜下可见Sham组大鼠腓肠肌肌纤维排列整齐、间质少有炎性细胞浸润,I/R组大鼠腓肠肌肌纤维排列紊乱并出现明显水肿、间质中出现大量炎症细胞,DEX组大鼠腓肠肌肌纤维排列欠规则、间质中有少量炎性细胞,但较I/R组有所好转。与Sham组相比,I/R组湿/干重比值、IL-1、IL-6、TNF-α、NF-κB水平均明显升高（均P＜0.05）;与I/R组相比,DEX组湿/干重比值、IL-1、IL-6、TNF-α、NF-κB水平均明显降低（均P＜0.05）。结论右美托咪啶可抑制NF-κB信号通路活化,减轻肢体缺血再灌注损伤。     

楮实子对肝星状细胞增殖、凋亡及TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路的影响

目的探究楮实子对肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路的影响。 方法体外培养大鼠肝星状细胞系(HSC-T6),正常培养细胞作为空白组;使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞24 h后,分别添加不同质量浓度(0、1、5、10 g/L)的楮实子培养细胞,依次作为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法检测楮实子对HSC-T6细胞增殖、凋亡的影响;ELISA法检测HSC-T6细胞上清液中TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)含量;Western blotting法检测HSC-T6细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达。 结果楮实子可抑制活化的HSC-T6细胞增殖,促进其凋亡,且呈质量浓度依赖性(P＜0.05);楮实子可降低活化的HSC-T6细胞上清液中TNF-α、IL-6水平,下调细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白水平,并均呈质量浓度依赖性(P＜0.05)。 结论楮实子可抑制HSC-T6细胞增殖,促进HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路激活有关。     

微RNA-144抑制剂通过Toll样受体4/核因子κB信号通路减轻大鼠反流性食管炎食管黏膜损伤

目的 探讨微RNA（miRNA）-144抑制剂能否减轻大鼠反流性食管炎（RE）食管黏膜的损伤及可能机制。方法 取18只SD雄性大鼠，随机分为假手术组、RE组、miRNA-144抑制剂组，每组6只。RE组、miRNA-144抑制剂组采用前胃结扎联合幽门限制法建立慢性RE大鼠模型，造模后miRNA-144抑制剂组大鼠通过尾静脉注射miRNA-144 antagomir拮抗体内miRNA-144的表达。应用qPCR法检测miRNA-144抑制剂的有效性及各组大鼠食管组织中Toll样受体4（TLR4）、核因子κB（NF-κB）、核因子κB抑制蛋白α（IκBα） mRNA的表达变化。采用Elisa法检测大鼠食管组织中白细胞介素（IL）-6、IL-8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量，蛋白质印迹法检测CLDN3蛋白的表达，免疫组织化学染色检测cleaved caspase 3、Ki-67蛋白的表达，TUNEL法检测食管组织的细胞凋亡情况。结果 与假手术组相比，RE组大鼠食管组织中TLR4、NF-κB、IκBα mRNA表达水平明显升高（P均＜0.05），炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α 的含量（P均＜0.05）及凋亡相关蛋白cleaved caspase 3表达显著增加（P＜0.01），促进了食管黏膜细胞凋亡（P＜0.01），并减少食管黏膜屏障指标CLDN3蛋白的表达（P＜0.01）。与RE组相比，抑制miRNA-144表达可降低大鼠食管组织中TLR4、NF-κB、IκBα mRNA的表达（P均＜0.05），减少炎症相关因子IL-6、IL-8、TNF-α 的含量（P均＜0.05），进而抑制RE大鼠食管中黏膜细胞凋亡（P＜0.05），并增加CLDN3蛋白的表达（P＜0.01）。但抑制miRNA-144不影响食管黏膜细胞的增殖，miRNA-144抑制剂组Ki-67阳性细胞数与RE组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 miRNA-144抑制剂可减轻RE大鼠食管黏膜的损伤，这种作用可能主要通过TLR4/NF-κB信号通路来实现。     

白藜芦醇抑制TLR4/NF-κB通路对毛细支气管炎小鼠的保护作用

目的 研究白藜芦醇通过抑制T样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)通路对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎小鼠的保护作用。方法 选取30只小鼠随机分为对照组、RSV组、给药组,建立RSV毛细支气管炎小鼠模型,检测小鼠肺组织中TLR4、NF-κB的变化;利用肺组织HE染色、ELISA法检测白藜芦醇给药前后气道炎症病变、IL-6、TNF-α因子水平,Western Blot法及实时定量PCR法检测TLR4、 NF-κB蛋白及基因表达等相关变化。结果 与对照组相比,RSV组小鼠组肺组织中TLR4、NF-κB水平升高,肺组织切片HE染色显示气道炎症细胞浸润加剧,ELISA检测炎性因子IL-6、TNF-α升高;而给药组处理后,肺组织TLR4、NF-κB的表达下调,病理改变减轻,炎性因子IL-6、TNF-α下降。结论 白藜芦醇可通过抑制TLR4/NF-κB通路抑制炎性因子的释放,从而减轻毛细支气管炎小鼠的气道炎症反应。     

还原性谷胱甘肽对急性坏死性胰腺炎肺损伤的影响

目的:观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)mRNA,细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-18),髓过氧化物酶(MPO)的变化,探讨还原性谷胱甘肽(GSH)治疗肺损伤的机制. 方法:72只Wistar大鼠随机分成3组: ANP组, GSH组,SO组(假手术组). 于术后6,12,18 h取肺组织供实验用. 免疫组化测定肺中IL-1β,IL-18,TNF-α的表达,比色法测定MPO的活性,RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达,胰、肺行组织学观察. 结果:ANP组肺组织NF-κB mRNA,IL-18, IL-1β,TNF-α,MPO的水平升高,NF-κB,IL-1β,TNF-α在12 h达高峰,与SO组相比各时间点均有统计学差异(P＜0.05). GSH治疗后IL-1β,IL-18,TNF-α在各时间点均降低,NF-κB mRNA,MPO在12 h降低(P＜0.05). 结论:ANP时NF-κB,IL-18,IL-1β,TNF-α及MPO均参与了肺损伤,GSH能够抑制肺NF-κB活化,促炎因子的表达及中性粒细胞的聚集,对肺损伤有保护作用.     

熊果酸对脓毒症模型大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察熊果酸对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响。方法:Wistar大鼠75只随机分为假手术组,模型对照组,熊果酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1)),每组15只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型,术后立即及8 h后尾静脉注射给药。造模后24 h处死大鼠,苏木精-伊红染色法评估肺组织病理学变化;ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著增加,SOD活性下降,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,熊果酸各剂量组大鼠肺组织病理明显改善,MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著降低,SOD活性升高,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著下降(P<0.01或P<0.01)。结论:熊果酸可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应,从而发挥对脓毒症肺损伤的保护作用。     

熊果酸对脓毒症模型大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察熊果酸对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响。方法:Wistar大鼠75只随机分为假手术组,模型对照组,熊果酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1)),每组15只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型,术后立即及8 h后尾静脉注射给药。造模后24 h处死大鼠,苏木精-伊红染色法评估肺组织病理学变化;ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著增加,SOD活性下降,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P0.01);与模型组比较,熊果酸各剂量组大鼠肺组织病理明显改善,MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著降低,SOD活性升高,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著下降(P0.01或P0.01)。结论:熊果酸可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应,从而发挥对脓毒症肺损伤的保护作用。     

外源性一氧化碳释放分子2对急性肺损伤时肺部炎症反应的抑制作用

目的:探讨外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对急性肺损伤 (ALI )时肺部炎症反应的抑制作用.方法:建立小鼠LPS吸入肺损伤模型.实验动物分成4组:对照组(n＝8),LPS吸入致ALI组(n＝15),ALI+无活性CORM-2组(n＝15)以及ALI+CORM-2组(n＝15).在自制的16 cm×8 cm雾化发生罐中雾化LPS(终浓度500 μg/ml),实验组小鼠在雾化罐中放置30 min,对照组小鼠置于单纯的生理盐水雾化罐30 min,ALI+CORM-2组小鼠尾静脉注射CORM-2(8 mg/kg).检测动物肺组织髓过氧化物酶(MPO)、核因子κB(NF-κB) 活性、细胞间粘附分子-1 (ICAM-1)的表达,肺泡灌洗液中TNF-α和IL-1β水平.结果:ALI组肺组织中MPO及NF-κB活性迅速增强,同时肺组织ICAM-1蛋白水平亦显著升高.CORM-2干预后肺组织MPO及NF-κB活性被明显抑制(P<0.05), ICAM-1蛋白表达量也被显著抑制(P<0.05).肺泡灌洗液中TNF-α和IL-1β水平在CORM-2干预后较ALI组明显下降(P<0.05).结论:外源性一氧化碳释放分子能明显抑制肺组织NF-κB活性,减轻ALI肺组织粘附分子的表达,从而减轻组织中白细胞扣留,有效减轻肺部炎症反应.     

参麦对大鼠肾缺血再灌注损伤中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 观察参麦注射液(SM)对大鼠肾缺血再灌注损伤TLR4/NF-κB信号通路的影响,探讨参麦对肾脏保护作用的机制.方法 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、参麦预处理组(IR+SM组).HE法观察肾组织病理学形态,自动生化分析仪测定BUN、Cr水平,实时荧光定量PCR法检测肾组织中TLR4和NF-κB p65 mRNA含量,ELISA法检测血浆中ICAM-1和TNF-α表达.结果 IR组较Sham组肾组织病理学明显改变,BUN、Cr水平、TLR4、NF-κB p65 mRNA含量及ICAM-1、TNF-α表达均升高(P＜0.05).与IR组相比,IR+SM组肾组织病理学改变减轻,BUN、Cr水平、TLR4、NF-κB p65 mRNA含量及ICAM-1和TNF-α表达降低(P＜0.05).结论 SM通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,下调其下游ICAM-1和TNF-α表达,发挥肾脏保护作用.     

乌司他丁减轻老年大鼠髋部骨折后肺损伤程度的实验研究

目的 探讨乌司他丁减轻髋部骨折后肺损伤的作用及相关机制。方法 将24只10月龄SD大鼠随机分为对照组、实验组及干预组,每组8只,后2组制成左侧髋部骨折,其中干预组在造模前给予尾静脉注射乌司他丁50 000 U/kg。造模24 h后处死各组大鼠,检测各组实验动物血清中线粒体DNA（mtDNA）水平,肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平,肺组织中toll样受体-9（TLR9）、转录因子NF-κB表达水平,肺组织干湿质量比（W/D）、病理评分情况。结果 实验组大鼠血清中mtDNA水平,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,肺组织中TLR9、NF-κB表达水平,肺组织W/D、病理评分情况均高于对照组（ P<0.05）;干预组大鼠血清中mtDNA水平,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,肺组织中TLR9、NF-κB表达水平,肺组织W/D、病理评分情况均较实验组下降（ P<0.05）,但均未恢复至对照组水平（ P<0.05)。结论 乌司他丁可能通过减少髋部骨折释放的mtDNA,进而降低肺组织中TLR9、NF-κB表达及下游的炎症因子水平,最终达到保护肺功能的作用。     

血必净对兔急性肺损伤的早期保护作用及其机制研究

目的探讨血必净对爆炸致兔急性肺损伤（ALI）的早期保护作用及其机制。方法将40只家兔随机分为血必净低剂量（L）组、高剂量（H）组、地塞米松（D）组、氯化钠溶液对照（N）组及ALI模型（A）组,每组8只。除了N组外其他组均建立ALI模型。L、H组分别给予血必净10、20ml/kg;D组给予0.5ml/kg地塞米松;N、A组给予10ml/kg氯化钠注射液;各组于给药后24h采集血液及肺组织标本。采用ELISA法测定血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的含量,采用Westernblot法和RT-PCR法测定肺组织核转录因子-κB（NF-κB）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的蛋白及mRNA表达水平,测定肺湿干重比（W/D）,并在光镜下观察肺组织病理变化。结果A组MMP-9、NF-κB的表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量以及W/D均比N组高（均P＜0.05）;经血必净治疗后,L、H组MMP-9、NF-κB的表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6含量以及W/D均比A组低（均P＜0.05）,IL-10表达量比A组高（P＜0.05）,其中均以H组改变最显著（均P＜0.05）;肺病理切片显示血必净治疗后肺组织损伤明显减轻。结论血必净可抑制爆炸致ALI早期炎性介质的生成和释放,减轻组织病理损害,从而起到保护作用。     

乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎症介质及其信号通路miR-146a调控TLR4/NF-κB的影响研究

目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎症介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法将60只SD大鼠经股动脉放血制作休克模型,采用随机数字表法分为A、B、C三组,每组20只,其中A组不予复苏,B组休克后60 min给予醋酸钠林格液复苏,C组采用醋酸钠林格液联合乌司他丁复苏。采集大鼠复苏后肺组织,对肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6以及IL-10的mRNA水平予以检测,采用Western blotting对肺组织中TLR4、NF-κB蛋白相对表达量予以检测,对三组大鼠肺组织病理学变化予以观察。结果与A组、B组相比,C组大鼠miR-146a、IL-4、IL-10 mRNA水平提高,TNF-α、IL-1、IL-6水平下降,差异有统计学意义(P0.05);三组大鼠肺组织TLR4、NF-κB蛋白表达水平相比,C组低于A组、B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论乌司他丁能够通过增强miR-146a表达复苏创伤失血性休克大鼠,对TLR4/NF-κB信号通路起到负反馈调控作用,维持促炎因子与抑炎因子平衡,对肺组织具有保护作用。     

苯甲酰芍药苷上调miR-520c-3p缓解脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤研究

目的 探究芍药单体成分苯甲酰芍药苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的作用及分子机制。方法 将75只SPF级小鼠按照随机数表法分成5组：空白对照组（生理盐水）、ALI组（2.00 mg/kg LPS 100μl）、阳性对照组（2.00 mg/kg LPS 100μl+血必净注射液100μl）、苯甲酰芍药苷低剂量组（2.5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）、苯甲酰芍药苷高剂量组（5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）,通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;ELISA法检测ALI小鼠肺组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平;蛋白免疫印迹（WB ）检测肺组织IκB激酶（IKKβ）/核因子κB（NF-κB）表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC（RT-PCR）检测ALI小鼠肺组织中miR-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测miR-520c-3p靶基因;A549转染miR-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果 苯甲酰芍药苷低、高剂量均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比（P＜0.05）,ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示苯甲酰芍药苷低、高剂量能明显降低ALI小鼠肺组织中TNF-α、IL-6的水平（P＜0.05）;WB结果显示,与空白对照组相比,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RT-PCR结果发现苯甲酰芍药苷有效促进miR-520c-3p在ALI中的表达（P＜0.05）;Targetscan预测结果显示miR-506-3p直接靶向NF-kB p65亚基RELA基因3’UTR序列;补救实验显示miR-520c-3p inhibitor有效逆转了苯甲酰芍药苷对ALI过程中TNF-α、IL-6的抑制作用（P＜0.05）。结论 苯甲酰芍药能有效缓解LPS引起的ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调miR-520c-3p的表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB 信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。     

基于TLR4/NF-κB炎性轴探讨针灸联合感觉运动训练对膝骨关节炎模型大鼠运动能力的改善作用

目的:基于Toll样受体4(toll like receptor4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)炎性轴探讨针灸联合感觉运动训练对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠运动能力的改善作用.方法:50只SD大鼠随机取10只作为空白对照组,另40只大鼠采用向关节腔注射经典乙酸钠复制KOA模型,然后将造模成功的36只大鼠按随机体质量排序法分为模型组、感觉运动训练组、针灸组、针灸联合感觉运动训练组,每组各9只.检测各组大鼠步态评分、爪压评分、软骨组织病理学、Mankin's评分;ELISA法检测大鼠膝骨关节软骨白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;Wstern Blot法检测大鼠膝骨关节软骨TLR4、NF-κB蛋白表达;RT-PCR法检测关节软骨TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量.结果:与模型组比较,感觉运动训练组、针灸组、针灸联合感觉运动训练组步态评分、爪压评分、Mankin's评分显著降低(P＜0.05),同时可显著降低膝关节软骨IL-6、TNF-α水平和咒R4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量及TLR4、NF-κB蛋白相对表达量(P＜0.05),且针灸联合感觉运动训练组＜针灸组＜感觉运动训练组.结论:针灸联合感觉运动训练可改善KOA大鼠运动能力,减轻炎症反应、软骨损伤,机制可能与调控TLR4/NF-κB炎性轴有关.     

谷氨酰胺对克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症的抑制作用

目的 探讨谷氨酰胺对克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症的抑制作用及机制.方法 将36只SD大鼠随机分为3组,正常组、模型组、谷氨酰胺组,通过气管滴入克雷伯杆菌建立大鼠肺炎模型,谷氨酰胺组在造模前1d即腹腔注射10 mL/kg谷氨酰胺,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续给药7d,大鼠脱颈处死,取肺组织及血清进行检测.称量记录右肺湿重及干重(W/D),HE染色检测肺组织病理形态,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肺组织匀浆及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量,RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)p65和NF-κ:B抑制蛋白(IκBα) mRNA表达,Western blot检测NF-κB p6和IκBα蛋白表达.结果 与模型组比较,谷氨酰胺组能降低W/D比值5.98±0.29 vs.4.32±0.33(P＜0.05)],减轻肺组织充血水肿、炎性细胞浸润,改善肺组织形态,抑制血清和肺组织匀浆中TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌(P＜0.05),并抑制NF-κB p65和kBα磷酸化水平(P＜0.05).结论 谷氨酰胺能抑制克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症,与抑制NF-κB信号通路有关.     

葛根素对急性痛风性关节炎大鼠TLR4/NF-κB通路的影响*

目的 观察葛根素治疗急性痛风性关节炎（AGA）大鼠的效果,并基于TLR4/NF-κB信号通路讨论葛根素治疗AGA的作用机制。方法 选取60只雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组及葛根素组,每组15只。复制模型并进行药物干预2周后,记录AGA大鼠治疗前后关节肿胀程度,光学显微镜下观察膝关节滑膜组织病理切片,应用ELISA法和免疫组织化学法分别检测关节腔冲洗液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量和关节滑膜组织Toll样受体4（TLR4）、核转录因子-κB（NF-κB）表达量。结果 AGA大鼠药物干预后,观察各项指标均得到不同程度的改善。3组AGA大鼠关节肿胀度、关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量和关节滑膜组织TLR4、NF-κB表达量比较,差异均有统计学意义（P?<0.05）;与模型组、秋水仙碱组比较,葛根素组大鼠关节肿胀程度减轻,关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量均下降,关节滑膜组织TLR4、NF-kB表达量均下调（P?<0.05）。结论 葛根素治疗AGA大鼠的作用机制可能与葛根素抑制TLR4/NF-kB信号通路,抑制下游炎症因子IL-1β、TNF-α的产生有关,从而减轻AGA炎症反应程度,起到治疗作用。