环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人肝癌HepG2裸小鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用

背景与目的:有研究证实,环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)与肿瘤,特别是与消化系统肿瘤形成的关系较为密切,而其抑制剂则具有抗肿瘤作用。本研究探讨特异性抑制剂塞来昔布对人肝癌HepG2裸小鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用。方法:将肝癌细胞HepG2种植至裸鼠背侧皮下,4天后开始用塞来昔布治疗,58天后处死。观测裸鼠移植瘤的体积和质量。并采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测裸鼠移植瘤组织中COX-2、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、碱性成纤维生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和血管生成素-2(angiopoientin-2,Ang-2)的表达,用免疫组化法检测微血管密度(microvesseldensity,MVD)。结果:治疗组切除的移植瘤平均体积和质量分别是(709.11±108.53)mm3和(2.63±0.34)g,对照组分别为(1417.55±69.50)mm3和(5.32±0.98)g,两组比较差异有显著性(P<0.01)。治疗组肿瘤增殖率为55.21%。②对照组COX-2、VEGF、bFGF、Ang-2的表达和MVD值分别是4.50±0.25、5.43±0.58、4.03±0.47、5.53±0.54和128.24±9.82,而在塞来昔布组分别是2.42±0.29、2.80±0.30、2.23±0.41、2.88±0.25和29.23±1.52。两组相比较,COX-2、VEGF、bFGF、Ang-2的表达和MVD值差异有显著性(P<0.01)。COX-2与VEGF、bFGF、Ang-2和MVD有明显的相关性(r分别为0.862、0.882、0.857,P分别<0.01)。结论:塞来昔布有效抑制了人肝癌细胞HepG2裸小鼠移植瘤的生长和血管生成,其作用途径是抑制了COX-2的表达。     

PPARγ基因沉默抑制裸鼠肝癌血管生成的初步研究

目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)基因沉默对肝癌裸鼠模型瘤内血管生成的影响.方法:构建PPARγ短发夹状RNA表达质粒并转染HCCLM3细胞(pshPPARγ组),以空质粒转染为对照组.观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积,肺转移灶数量及分级.免疫组织化学法检测抗-CD34、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板反应蛋白(TSP1)表达;RT-PCR检测MMP-2和TIMP2表达.结果: pshPPARγ组种植瘤体积为(1.86±0.65) cm3,微血管密度(MVD)为20.84±6. 38,肺转移灶数量为(37.2±0.7)个/肺,分级为1～2级,对照组体积为(4.86±1.15) cm3,MVD为39.48±9.01,肺转移灶数量为(107.8±6.1)个/肺,分级多为3～4级,两组种植瘤体积、MVD和转移灶数量、分级的差异有统计学意义,t值分别为5.082、8.441和21.83, P值均＜0.05.pshPPARγ组TSP1蛋白阳性表达,而VEGF蛋白为弱阳性或阴性表达,MMP-2 mRNA表达下调,而TIMP2 mRNA表达下调,与对照组比较差异有统计学意义,t值分别为11.34、 8.44, P值均＜0.01.结论: PPARγ基因沉默可降低肝癌种植瘤血管生成,与调节MMP-2/TIMP2表达,影响VEGF/TSP1平衡有关.     

高转移潜能肝癌HCCLM3细胞中侧群细胞的分离及其干细胞特性鉴定

目的:检测高转移潜能肝癌HCCLM3细胞株中侧群(side population,SP)细胞比例,分选SP细胞并探讨其生物学特性。方法:4种肝癌细胞株的转移潜能大小依次为HCCLM3>MHCC97H>MHCC97L>Huh7,分别予以荧光染料Hoechst33342染色,以加入维拉帕米的拮抗组为对照,流式细胞术检测SP细胞比例;从HCCLM3细胞中分选SP细胞和主群(main population,MP)细胞,采用悬浮球培养、Transwell侵袭实验及裸鼠成瘤实验判断HCCLM3 SP细胞是否具备肿瘤干细胞生物学特性;RT-PCR检测SP及MP细胞中干细胞相关基因的表达。结果:HCCLM3细胞中SP细胞比例为(16.9±1.8)%,显著多于MHCC97H、MHCC97L、Huh7中SP细胞比例[(8.4±0.7)%、(4.6±0.5)%、(1.0±0.2)%,均P<0.05]。HCCLM3细胞中,SP细胞悬浮球形成明显高于MP细胞[(25.3±5.1)%vs(11.2±2.6)%,P<0.05],SP细胞的侵袭能力显著高于MP细胞(P<0.05),SP细胞的裸鼠皮下成瘤能力也明显高于MP细胞。HCCLM3细胞的SP细胞中干细胞相关基因ABCG2、CD13、CD44、Nanog、Sox2及Klf4 mRNA平均表达水平分别是MP细胞的5.64、2.26、2.10、3.78、2.37、2.92倍(均P<0.05)。结论:肝癌HCCLM3细胞的SP细胞中富集了肝癌干细胞,这可能与其较高的转移潜能有关。     

蜂毒素对人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤生长及肿瘤血管生成的影响

背景与目的:蜂毒素体外抗骨肉瘤、白血病及宫颈癌的研究已有报道.我们先前的实验发现蜂毒素能够抑制人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖,并诱导其凋亡.本研究拟探讨蜂毒素在裸小鼠体内的抗肝癌作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法:建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:生理盐水对照组(10 ml/kg)、阳性对照组(沙利度胺,200 mg/kg)、蜂毒素低剂量组(40 μg/kg)、蜂毒素中剂量组(60 μg/kg)和蜂毒素高剂量组(80 μg/kg).测量各组裸鼠肿瘤体积,观察蜂毒素的体内抗肿瘤作用.光镜下观察肿瘤组织及瘤内血管形态.采用免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和核转录因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)蛋白表达.应用实时荧光定量PCR法检测BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结果:蜂毒素低、中、高剂量组裸鼠肿瘤相对体积(V/V0)分别为4.42±0.58、3.47±0.97和3.06±1.23,与生理盐水对照组(V/V0为9.06±1.45)相比,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小(P＜0.01).与生理盐水对照组MVD(16.50±2.35)比较,蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织MVD(11.33±1.86、9.17±1.17和6.67±1.21)明显降低(P＜0.01).显微镜下可见蜂毒素各剂量组肿瘤组织呈片状坏死,肿瘤间质内可见肿瘤血管,并有血管破坏现象.蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织VEGF(2.59±0.27、2.61±0.17和1.55±0.22)、bFGF(2.45±0.78、2.27±0.36和2.10±0.27)及NF-κB(2.79±0.29、2.71±0.66和2.26±0.56)阳性表达指数均低于生理盐水对照组(3.80±0.60、4.43±0.34和4.98±0.63)(P＜0.01).实时荧光定量PCR检测显示,蜂毒素能够抑制BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结论:蜂毒素能够明显抑制人肝癌BEL-7402细胞裸鼠移植瘤的生长,影响NF-κB表达、下调VEGF和bFGF的表达、抑制肝癌血管生成可能是其抗肿瘤作用的重要机理之一.     

IL-12转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制

背景与目的:卵巢恶性肿瘤发病率、复发率、转移率均较高,有研究表明IL-12具有明显的抗肿瘤作用.本研究探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用机制及其对裸鼠皮下种植瘤成瘤能力的影响.方法:应用脂质体转染技术将含有小鼠IL-12全长基因的质粒转染到SKOV3细胞(SKOV3/IL-12组),同时以空白质粒载体转染SKOV3细胞(SKOV3/neo组)和未转染SKOV3细胞作为对照.ELISA法检测3组细胞上清中IL-12表达.MTT法检测3组SKOV3细胞的抑制率和细胞倍增时间.建立裸鼠皮下卵巢癌种植模型,分别接种SKOV3/IL-12、SKOV3/neo、SKOV3细胞,观察肿瘤生长情况.ELISA法检测裸鼠血清中IL-12及γ-干扰素(gamma interferon,IFN-γ)的表达,免疫组化法检测裸鼠种植瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)及干扰素诱生蛋白-10(IFN-gamma-inducible protein 10,IP-10)的表达.结果:转染48、60 h后细胞上清中IL-12蛋白表达量,SKOV3/IL-12组[(473.0±38.0)pg/ml、(522.0±32.0)pg/ml]高于SKOV3/neo组[(16.0±1.3)pg/ml、(18.0±1.6)pg/ml]及SKOV3组[(16.0±1.2)pg/ml、(17.0±1.4)pg/ml](P＜0.01).SKOV3/IL-12组细胞增殖抑制率为63.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),SKVO3/IL-12组细胞倍增时间(45.8±2.7)h明显长于SKOV3/neo细胞组(27.6±2.2)h和SKOV3组(28.2±2.1)h(P＜0.01).裸鼠皮下卵巢癌种植模型中,SKOV3/IL-12组裸鼠成瘤率(5/8)低于对照组(8/8)(P＜0.01);平均成瘤时间[(15.0±5.0)天]长于SKOV3/neo组[(7.9±3.2)天]和SKOV3组[(7.8±2.4)天](P＜0.01);SKOV3/IL-12组种植瘤体积、重量和裸鼠体重低于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01),种植瘤生长速度缓慢,抑瘤率达61.3%.SKOV3/IL-12组裸鼠血清中IL-12、IFN-γ表达量高于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01).SKOV3/IL-12组裸鼠种植瘤中IP-10阳性率(100%)高于对照组(P＜0.01),VEGF阳性率(62.5%)及MVD低于对照组(P＜0.01).结论:转染IL-12能有效地抑制SKOV3细胞生长;转染IL-12的SKOV3/IL-12细胞在裸鼠皮下的成瘤能力降低;IL-12可通过诱导IFN-γ诱生IP-10抑制肿瘤血管形成而实现其抗卵巢癌的作用.     

bFGF及其抗体对裸鼠皮下移植膀胱癌生长影响的研究

 目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及其抗体对裸鼠人膀胱癌移植瘤生长的影响和作用机制。方法　建立膀胱癌EJ细胞裸鼠皮下移植瘤动物模型 ,观察bFGF和bFGF抗体对裸鼠皮下瘤生长状况的影响 ;应用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原 (PCNA)和Ⅷ因子相关抗原的表达。结果　 (1)bFGF治疗组皮下瘤体积和重量分别比对照组显著增多 ,瘤组织中PCNA指数和微血管密度 (MVD)也显著提高 ;(2 )bFGF抗体治疗组皮下瘤体积和重量比对照组均显著减少 ,瘤组织中PC NA指数和MVD也显著降低。结论　bFGF能够促进膀胱癌生长而bFGF抗体具有抑制肿瘤的作用 ,其作用机制与调控肿瘤细胞增殖和血管形成有关     

bFGF表达对裸鼠白血病移植瘤血管新生影响的研究

  目的   研究丙戊酸钠（VPA）对裸鼠白血病细胞移植瘤血管新生的影响,并探讨其作用机制。  方法  使用白血病细胞株Kasumi-1细胞接种于裸鼠皮下,建立裸鼠白血病细胞移植瘤模型,分为对照组和VPA治疗组进行研究,免疫组织化学标记肿瘤组织血管内皮细胞的CD34,计算微血管密度。RT-PCR、蛋白印迹和免疫组织化学检测碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA表达水平及蛋白含量水平。  结果  对裸鼠白血病移植瘤研究发现,VPA治疗14 d后,裸鼠瘤组织CD34+血管内皮细胞明显减少,微血管密度（MVD）为32.59±5.76较对照组12.23±4.11明显减少（P < 0.01）;VPA治疗组bFGF mRNA的表达0.321±0.046较对照组0.151±0.036明显降低（P < 0.01）,bFGF蛋白表达为0.493±0.026较对照组0.298±0.011明显下降。  结论  VPA可以抑制裸鼠白血病细胞移植瘤的血管新生,其发生的机制与抑制血管新生相关因子bFGF的表达有关。      

重组人干扰素a2b联合顺铂对骨肉瘤的作用及其对VEGF表达的影响

目的探讨重组人干扰素a2b联合顺铂对骨肉瘤的作用效果及其对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将32只荷瘤裸鼠随机均分为4组:对照组、干扰素a2b组、顺铂组和联合治疗组。分别在接种后第0、5、10、15、20、25、30天记录肿瘤体积变化和抑瘤率;接种后30 d后处死裸鼠,取裸鼠移植瘤测定重量,采用免疫组化法进行CD34标记,用Weidner方法计数微血管密度(MVD);显微镜下检测细胞凋亡情况;ELISA法检测VEGF水平。结果 4组裸鼠成瘤率均为100%。其中,联合治疗组在接种后第10、15、20、25、30天的肿瘤体积显著低于顺铂组和对照组。联合治疗组的瘤体重量显著低于顺铂组和对照组[(0.733±0.054)g vs.(2.326±0.151)g、(2.419±0.166)g],差异均有统计学意义(均P0.05)。联合治疗组MVD值显著低于顺铂组和对照组[(22.86±2.86)vs.(27.45±1.64)、(31.8±3.12)],联合治疗组移植瘤凋亡指数高于顺铂组和对照组[(45.62±4.24)%vs.(9.66±1.15)%、(10.00±1.28)%],差异均有统计学意义(均P0.05)。干扰素a2b组和联合治疗组的VEGF蛋白表达阳性率分别为20.62%、15.45%,低于顺铂组和对照组(59.24%、68.37%),差异有统计学意义(P0.05)。结论重组人干扰素a2b联合顺铂注射能特异性抑制骨肉瘤裸鼠VEGF的表达、血管生成和肿瘤生长,并能促进肿瘤细胞凋亡。     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇(TNP-470)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法:人肝癌转移模型(HCC)-LCI-D20原位移植瘤裸鼠32只,随机分4组(每组8只)给药:As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水(NS)对照组,给药21天后,对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度(MVD)、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果:As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组(P<0.05);计算两药相互作用系数(CDI)值:瘤重CDI(0.95)<1,体积CDI(0.89)<1,两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达;TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达,对移植瘤VEGF的表达无影响;联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达,抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义;各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组(P<0.05)。结论:As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生,能有效抑制移植瘤生长。     

裸鼠肺癌移植瘤中NRP-1的表达及其意义

目的:探讨非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)中神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的表达与肿瘤发展及血管新生的关系。方法:用RT-PCR方法体外检测人肺腺癌细胞株A549中血管内皮生长因子(vascularendo-thelialgrowthfactor-165,VEGF165)mRNA的表达。此细胞株皮下接种裸鼠,建立两组荷瘤时间不同的肺癌移植瘤模型,两组移植瘤块均经常规HE染色鉴定。用免疫组化S-P法检测两组移植瘤块中NRP-1的表达,并用全自动图像分析系统分析其平均吸光度,同时对两组移植瘤内微血管密度(microvesseldensity,MVD)值进行测定。结果:A549细胞株表达VEGF165mRNA,经常规HE染色鉴定裸鼠肺癌皮下移植瘤模型建立成功。NRP-1在瘤内血管内皮细胞及部分A549细胞的胞浆中有表达。两组移植瘤中NRP-1的平均吸光度分别为0·11±0·02,0·18±0·02(P<0·05),MVD值分别为13±1·58,24±2·92(vessels/mm2)(P<0·05),且NRP-l的平均吸光度与MVD值呈线性正相关(Pearson相关系数r=0·92,P=0·0002)。结论:两组荷瘤时间不同的裸鼠肺癌皮下移植瘤中NRP-1的表达及MVD值随时间进展增加,肿瘤中NRP-1的表达与血管新生有关。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。