不同沉淀方法对牛乳中蛋白质质量分数测定的影响

通过单因素试验和正交试验优化硫酸铜、饱和食盐水、乙醇、乙酸铅、三氯乙酸沉淀牛乳中蛋白氮的最佳沉淀条件,并对分别添加了尿素、硝酸铵、亚硝酸钠、三聚氰胺、三种水解蛋白的牛乳样品进行前处理,采用凯氏定氮法测定各样品蛋白质质量分数,研究不同沉淀剂对含非蛋白氮牛乳中蛋白质质量分数测定的影响。结果表明,三氯乙酸为沉淀牛乳中蛋白质的最佳沉淀剂,沉淀效果优劣顺序为三氯乙酸乙醇饱和食盐水硫酸铜乙酸铅,本研究旨在为进一步提高凯氏定氮法测定牛乳中蛋白质质量分数的准确性提供理论依据。     

关于GB/T 21704-2008方法改进和适用范围的研究

目的 对GB/T 21704-2008《乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定》中前处理部分提出方法改进,明确方法的适用范围。方法 用不同剂量的三氯乙酸溶液沉淀样品中蛋白质,过滤后测定滤液中非蛋白氮含量；加水完全溶解三组不同质量的三聚氰胺,加入不同体积的三氯乙酸溶液,观察三聚氰胺在不同浓度三氯乙酸溶液中的析出情况；加标不同量的三聚氰胺,测定计算回收率确定仪器的检测限。结果 样品中蛋白质含量低于20 g/ 100 g 时,20 mL 15%三氯乙酸溶液可完全沉淀样品中蛋白质；三氯乙酸浓度越高,三聚氰胺溶解度越小,越容易析出；本实验用的全自动凯氏定氮仪最低可准确稳定检测2 mg三聚氰胺/10g样品。结论 国标方法改进后可以节约试剂,在消化环节缩短加热时间,提高实验效率；三聚氰胺在三氯乙酸溶液中的溶解度情况和仪器检测限的限制框定方法的适用范围是2 mg -20 mg三聚氰胺/10g样品。     

雪糕中合成色素的测定

分别采用碱性硫酸铜和乙酸锌-亚铁氰化钾作为沉淀剂对雪糕样品进行预处理,并按照GB/T5009.35-2003第一法中的聚酰胺吸附法对样液中的色素进行提取,用高效液相色谱法进行合成色素含量的测定.结果表明,采用沉淀剂对样品进行预处理,可降低雪糕浆料的粘稠度,有利于色素的提取.对于四种常用合成色素柠檬黄、胭脂红、日落黄、亮蓝,以碱性硫酸铜作为沉淀剂,加标回收率为72.04%～82.64%,相对标准偏差为1.48%～3.50%;以乙酸锌-亚铁氰化钾作为沉淀剂,加标回收率为81.62%～95.73%,相对标准偏差为1.46%～3.19%.采用乙酸锌-亚铁氰化钾进行样品预处理的方法准确度和精密度良好,可作为高效液相色谱法测定雪糕中合成色素的样品预处理方法.     

燕窝蛋白质制备及双向电泳分离条件的研究

样品制备是双向电泳成败的关键,为此以市场上购买的燕盏为材料,对燕窝蛋白质样品制备中的蛋白质沉淀及沉淀洗涤等条件进行了比较,发现常用的蛋白质沉淀方法包括丙酮沉淀法、三氯乙酸沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法及酚抽提法中,以丙酮沉淀法制备样品SDS凝胶电泳后获得的蛋白质谱带最为丰富,80%丙酮去除蛋白质沉淀中杂质的效果优于丙酮。双向电泳分析发现燕窝蛋白质主要是酸性蛋白质,采用窄范围pH3～5.6的非线性胶条,对其进行了较好的分离。双向电泳分离体系的建立,为燕窝蛋白质图谱库的构建及相关研究提供了条件。     

三氯乙酸沉淀法与硫酸铜沉淀法在液态奶蛋白质检测中适用性研究

分别利用三氯乙酸沉淀蛋白法和硫酸铜沉淀蛋白法与凯氏定氮法相结合,时液态奶蛋白质进行测定.比较研究了亚硝酸钠、硝酸铵、尿素、甘氨酸、水解蛋白等几种非蛋白氮对这两种蛋白沉淀法的影响,并对这两种方法进行比较.结果表明,对于液态奶蛋白氮的测定,三氯乙酸沉淀法与硫酸铜沉淀法在数值上存在着显著性差异,三氟乙酸沉淀法能更有效地排除非蛋白氮对液态奶蛋白氮测定的影响.     

黑龙江市售乳制品蛋白质质量评价

为评价黑龙江省市售乳制品中蛋白质的质量,采用凯氏定氮法和三氯乙酸沉淀法测定黑龙江市售不同厂家生产的全脂加糖乳粉、纯酸牛乳、配制型乳饮料和灭菌纯牛乳中的蛋白质和非蛋白氮含量,计算各乳制品的蛋白氮指数和非蛋白氮指数。结果表明, 利用蛋白氮指数和非蛋白氮指数评价乳制品中蛋白质质量是可行的,并建立了4种乳制品的蛋白氮指数和非蛋白氮指数模型。黑龙江市售合格的全脂加糖乳粉、纯酸牛乳、配制型乳饮料和灭菌纯牛乳的蛋白氮指数范围分别为0.990～0.995、0.870～0.956、0.402～0.633和0.929～0.943,其非蛋白氮指数范围分别为0.005～0.010、0.084～0.130、0.367～0.598和0.069～0.071。总体来说,黑龙江市售乳制品蛋白质含量大多数符合国家标准规定,但部分乳制品的蛋白质质量有待提高。     

半微量定氮法中三氯乙酸提取挥发性盐基氮的改进

目的 提高三氯乙酸提取挥发性盐基氮效率。方法 研究了提取剂三氯乙酸和水的提取效果、结果稳定性,并考察了三氯乙酸做提取剂时氧化镁的添加量和判别指示剂,同时添加氯化铵做回收率实验。结果 按照标准方法用三氯乙酸浸泡的样品检测结果明显偏低,通过研究发现其样品溶液碱度未能达到方法要求,经优化后的方法加标回收率为94.0%～95.9%,相对标准偏差（RSD）为 0.57%;用水做提取剂的样品结果偏高,浸泡30min过程中,pH值中性环境样品持续腐败。结论 经优化后三氯乙酸提取法样品可以直接蒸馏无需过滤,从而简化检验流程;三氯乙酸给样品提供足够的酸性环境,抑制样品进一步腐败;通过方法学考察,优化后的检验方法满足实验要求。     

冰淇淋中合成色素的测定

采用乙酸锌-亚铁氰化钾作为沉淀剂对冰淇淋进行处理,并按照GB/T5009.35-2003第一法中的聚酰胺吸附法对样液中的色素进行提取,用高效液相色谱法进行合成色素含量的测定。结果表明,采用沉淀剂对样品进行预处理,可降低冰淇淋浆料的粘稠度有利于色素的提取。对于五种常用合成色素柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝,以乙酸锌-亚铁氰化钾作为沉淀剂处理冰淇淋,加标回收率为81.89%~95.80%,而用国标第一法处理冰淇淋,加标回收率为57.40%~71.91%。采用乙酸锌-亚铁氰化钾进行样品预处理的方法准确度良好,可作为高效液相色谱法测定冰淇淋中合成色素的样品预处理方法。     

冰淇淋中合成色素的测定

采用乙酸锌-亚铁氰化钾作为沉淀剂对冰淇淋进行处理,并按照GB/T5009.35-2003第一法中的聚酰胺吸附法对样液中的色素进行提取,用高效液相色谱法进行合成色素含量的测定。结果表明,采用沉淀剂对样品进行预处理,可降低冰淇淋浆料的粘稠度有利于色素的提取。对于五种常用合成色素柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝,以乙酸锌-亚铁氰化钾作为沉淀剂处理冰淇淋,加标回收率为81.89%~95.80%,而用国标第一法处理冰淇淋,加标回收率为57.40%~71.91%。采用乙酸锌-亚铁氰化钾进行样品预处理的方法准确度良好,可作为高效液相色谱法测定冰淇淋中合成色素的样品预处理方法。     

高选择性的菜籽蛋白含量测定方法

为解决菜籽蛋白原料及制品中真蛋白含量难以测定的问题,建立了一种基于分级和定量2步完成的高选择性菜籽蛋白含量测定方法。通过酸化丙酮溶液和沸水萃取实施分级处理,可将样品中的非蛋白氮分离;结合应用可溶性蛋白的染色法测定和不溶性蛋白的凯氏定氮法测定,可获得样品的真蛋白含量。该方法变异系数不大于2.83%,回收率95%~96%,并可排除本源性非蛋白氮(包括芥子碱和硫甙)及外源性非蛋白氮(包括硝酸盐、铵盐、三聚氰胺和尿素)的干扰。该方法具备良好的抗干扰能力且不受蛋白质溶解性的影响,可推广到更多的植物蛋白制品及原料的真蛋白含量测定中,并可为相关行业的掺杂辨识或品质评价提供可靠手段。     

高效液相色谱法分析原料乳和奶粉中三聚氰胺

建立了二极管阵列检测器-高效液相色谱测定原料乳及奶粉中三聚氰胺的方法。奶粉样品经三氯乙酸超声提取,乙酸铅沉淀蛋白,三氯甲烷除去脂肪和非极性杂质,PROELUTPXCSPE阳离子交换固相萃取小柱进一步除去样品基质干扰,氨化甲醇洗脱。实验对色谱分离条件进行了优化,三聚氰胺的质量浓度在1.0～100.0μg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,回归方程为y=89.763x-113.72,相关系数为R2=0.9988。加标回收率为90.5%～105.0%,相对标准偏差(RSD)小于4.0%。该方法简单、快速,结果准确可靠。     

高效液相色谱法测定水产品中三聚氰胺的含量

以罗非鱼、南美白对虾和鳗鲡为实验对象,建立了水产品中三聚氰胺的离子对反相液相色谱测定法。用三氯乙酸和乙酸锌溶液超声提取待测物,离心后上清液过MCX阳离子柱净化,氨化甲醇溶液洗脱,水浴氮气吹干,用甲醇水溶液定容过滤后供高效液相色谱(HPLC)分析,外标法定量。结果表明,三聚氰胺在0.5～100.0mg/L浓度范围内呈线性相关,相关系数R2=0.9999。加标水平在0.2～10.0mg/kg时,回收率为87.6%～94.3%,相对标准偏差为3.9%～7.1%,检出限为0.2mg/kg。     

Non-protein nitrogen determination: A screening tool for nitrogenous compound adulteration of milk powder

Kjeldahl and Dumas crude protein measurement methodologies do not distinguish between nitrogen native to milk and nitrogen in low molecular mass, nitrogen-rich adulterants. Measuring the non-protein nitrogen (NPN) content is one possible means of closing this loophole. Four methods were considered, with three selected for further research and validation: protein precipitation using trichloroacetic acid, protein precipitation using tannic acid, and molecular mass cut-off filtration. Kjeldahl assay was used on the supernatant or filtrate for all three methods. An NPN reference concentration range was established using 15 milk powder samples. This was followed by spiking experiments using seven low-molecular-weight, nitrogen-rich adulterants. Tannic acid precipitation and molecular mass cut-off filtration, both simple techniques available for routine use in food analysis laboratories, proved to be suitable for detecting the adulteration of milk powders with a variety of nitrogenous contaminants. NPN concentrations of ≥0.34% in milk powders are suspected to result from adulteration.     

3种不同方法提取芒果致敏原组分分析

评价3种芒果致敏原提取方法,分析与血清特异性IgE结合的芒果蛋白成分,为临床检测sIgE提供最佳抗原制备方法。方法 分别用三氯乙酸沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法、裂解液提取法粗提芒果蛋白,并通过SDS-PAGE和二维电泳技术分析不同提取方法提取的芒果蛋白组分,用免疫印迹和二维免疫印迹的方法鉴定粗提液中与患者特异性IgE结合的蛋白成分。结果 3种方法提取的蛋白组分不同,单例病人血清与3种不同方法提取的蛋白结合的强度和所识别的蛋白组分存在一定差异,三氯乙酸沉淀法和三氯乙酸/丙酮法提取的蛋白反应条带主要是30、40、44、47和90 kD,而裂解液提取的蛋白反应条带主要是23、32、40、46、73、90 kD。结论 3种提取方法各有特点,三氯乙酸沉淀法提取的芒果蛋白粗提液致敏原组分较完整,重复性好,操作简便,能够满足检测芒果sIgE所需已知抗原的要求。     

固相萃取- 高效液相色谱检测法测定食用菌中三聚氰胺残留量

建立食用菌中三聚氰胺的固相萃取- 高效液相色谱检测法。样品经三氯乙酸、乙腈提取,离心,混合型固相萃取小柱净化后,过0.45μm 滤膜,用配有二极管阵列检测器(PAD)的液相色谱仪检测,外标法定量。同时,以三聚氰胺标准品进行添加回收率测定,结果显示,本方法对三聚氰胺的测定低限为2.0mg/kg,回收率为81.3%～91.7%,测定的相对标准偏差均不大于5.6%。本方法能满足食用菌中三聚氰胺残留量常规检测的需要。     

冷冻调制食品中复合磷酸盐的测定

本文建立了测定冷冻调制食品中复合磷酸盐各组分含量的离子色谱检测方法.该方法采用水超声萃取,以醋酸锌和亚铁氰化钾作为沉淀剂去除蛋白质和脂肪处理样品,离子色谱氢氧化钠淋洗液梯度洗脱,电导检测器检测冷冻调制食品中复合磷酸盐各组分的含量及总量.实验表明该方法可以达到以下指标:线性相关系数＞0.9990,精密度＜2％,加标回收率84.7～96.3％,满足要求.     

牛羊肉中三聚氰胺的HPLC快速检测

建立高效液相色谱(HPLC)检测牛、羊肉中三聚氰胺的检测方法。样品经1% 三氯乙酸- 乙腈(3:1,V/V)提取,利用阳离子交换固相萃取柱净化后,洗脱液于50℃条件下用氮气吹干,残渣用离子对试剂缓冲液- 乙腈(90:10,V/V)溶解,用高效液相色谱法由紫外检测器检测、外标法定量。结果表明,三聚氰胺在0.2～80μg/mL 质量浓度范围内具有良好的线性关系,线性相关系数(R2)为0.9999,其检出限为0.05mg/kg。在牛肉样品中,三聚氰胺的平均回收率为81.73%～83.35%,相对标准偏差为0.97%～1.95%;在羊肉样品中,三聚氰胺的平均回收率为80.95%～82.95%,相对标准偏差为0.70%～2.32%。本方法具有操作快捷、灵敏度高、重现性好等优点。