LOX-1介导苯扎贝特对ox-LDL所引起PAI-1表达的影响

目的 探讨苯扎贝特对ox-LDL所诱导HUVECs表达PAI-1的影响及是否通过LOX-1介导.方法 体外培养HUVECs,RT-PCR检测PAI-1 mRNA表达,ELISA法观察PAI-1蛋白含量表达.结果 ox-LDL组,PAI-1 mKNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),poly(Ⅰ)组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05);不同浓度苯扎贝特组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05),组间比较差异有统计学意义,呈浓度依赖关系(P<0.05);Poly(Ⅰ)+100μmol/L苯扎贝特组,与未加poly(Ⅰ)组比较,PAI-1mR-NA和蛋白表达均明显减少(P<0.05).结论 LOX-1介导了ox-LDL所诱导HUVECs PAI-1的表达;苯扎贝特可以下调ox-LDL所诱导的HUVECs PAI-1的表达,呈浓度依赖关系,部分机制可能通过LOX-1介导.     

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用

目的研究凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-type oxidized LDL receptor1,LOX-1)在C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用。方法用人重组质粒pTracer CMV2-CRP转染HUVECs细胞,分正常对照组、空质粒GFP组和CRP-GFP组(n=3),RT-PCR、Western blot检测TF、LOX-1 mRNA和蛋白表达。Western blot检测各组P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表达。CRP-GFP组分别加LOX-1阻断剂、ERK1/2阻断剂(U0126)、JNK阻断剂(SP600125),Westernblot检测TF蛋白。结果用表达人CRP的质粒转染HUVECs显著增加LOX-1 mRNA和蛋白表达[(0.70±0.03)vs(0.24±0.01),(0.661 6±0.020 0)vs(0.255 8±0.040 0),P<0.05]、TF的mRNA和蛋白表达[(0.442±0.040)vs(0.146 0±0.030 0),(0.727 4±0.020 0)vs(0.217 4±0.020 0),P<0.05]。CRP启动了ERK1/2 MAPK,未启动JNKMAPK。CRP上调TF表达被ERK1/2阻断剂而非JNK阻断剂阻断.抗LOX-1的中和抗体显著减少CRP诱导的TF mRNA和蛋白表达[(0.264 0±0.030 0)vs(0.442 0±0.040 0),(0.324 4±0.040 0)vs(0.727 4±0.020 0),P<0.05]。结论CRP诱导HUVECs细胞LOX-1表达上调,并通过LOX-1受体这一新途径上调TF表达,且CRP通过ERK1/2 MAPK信号途径非JNK MAPK途径上调了HUVEC细胞TF的表达。     

MiR-590-5p对ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡以及LOX-1表达的影响

目的:研究miR-590-5p对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的调节作用,观察miR-590-5p对HUVECs凋亡的影响。方法:HUVECs经ox-LDL(50μg/mL)作用不同时间(0~48 h)。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-590-5p的表达变化。HUVECs转染miR-590-5p模拟物(miR-590-5pmimics)后ox-LDL继续作用48 h。RT-qPCR和Western印迹分别检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达情况。FCM检测HUVECs凋亡率的变化。结果:随ox-LDL作用时间的延长,HUVECs凋亡率逐渐升高,miR-590-5p表达逐渐下调。miR-590-5p模拟物转染后可以降低LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。结论:miR-590-5p可抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调LOX-1基因表达有关。     

维生素E经LOX-1/NADPH氧化酶/ROS通路抑制oxLDL诱导的HUVEC细胞损伤

【目的】 复制氧化性低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,oxLDL)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤模型,建立慢病毒介导的LOX-1-shRNA转染HUVEC细胞模型,从LOX-1/NADPH氧化酶/ROS信号通路研究维生素E(Vit E)对oxLDL诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用。 【方法】 以200 μg/mL oxLDL与HUVEC细胞共孵育24 h,用于复制细胞损伤模型;实验设计分为:正常对照组、oxLDL模型组、药物组(200 μmol/L Vit E);以MTT检测细胞存活率,DCFH-DA检测细胞内ROS及蛋白质印迹法检测LOX-1、NADPH氧化酶亚基(gp91phox、p47phox、p67phox)蛋白经时改变(3、6、12、24 h);real-time PCR检测24 h后LOX-1、NADPH氧化酶亚基(p22phox、gp91phox、rac1)mRNA的表达,采用慢病毒介导的基因沉默技术抑制LOX-1表达48 h后,用oxLDL诱导24 h,检测LOX-1蛋白、NADPH氧化酶亚基(p47phox、p67phox、gp91phox)蛋白和ROS的含量。采用SPSS 17.0进行统计学分析。 【结果】 与正常组比较,oxLDL处理后细胞生存率仅为50.31%,LOX-1蛋白伴随细胞氧化损伤在3、6、12、24 h表达量显著增加,且在3 h和24 h时呈现两个表达高峰(P<0.05),NADPH氧化酶亚基(p47phox、p67phox、gp91phox)蛋白表达水平在各时间点均显著升高(P均<0.01),24 h达高峰,ROS检测结果表明其动态经时改变在3 h和24 h达峰值( P<0.05)。Real-time PCR结果显示,LOX-1 mRNA及NADPH氧化酶亚基(gp91phox、p22phox、rac1) mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。慢病毒介导LOX-1基因沉默后,最佳转染效率为73.23%。oxLDL诱导24 h后,LOX-1及NADPH氧化酶亚基(p47phox、p67phox、gp91phox)蛋白表达下调,ROS生成量相应降低。VitE组下调LOX-1和NADPH氧化酶的mRNA及蛋白质表达并降低ROS生成。 【结论】 oxLDL经LOX-1/NADPH氧化酶/ROS通路诱导HUVEC细胞损伤。200 μmol/L的VitE可通过抑制LOX-1/NADPH氧化酶/ROS信号通路的活化而发挥对oxLDL诱导的HUVEC细胞损伤的保护作用。     

NF-κB介导ADMA上调大鼠腹腔巨噬细胞LOX-1的表达

目的 探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)上调大鼠腹腔巨噬细胞的氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达是否受核因子-κB(NF-κB)的调控.方法 分离培养大鼠腹腔巨噬细胞.实验分组:正常对照组,以含10%胎牛血清(FBS)DMEM培养液与巨噬细胞共孵育;氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)组,在培养液中加oxLDL(50 mg/L);A+O组,在培养液中加ADMA(15 μmol/L)和oxLDL(50 mg/L);P+A+O组,在培养液中加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,25 μmol/L)、ADMA(15 μmol/L)、oxLDL(50 mg/L).以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot分别检测LOX-1 mRNA和蛋白表达,以电泳迁移率变动分析(EMSA)和增强化学发光法(ECL)检测NF-κB活性.结果 oxLDL组与A+O组LOX-1 mRNA和蛋白表达比对照组明显增强,以A+O组尤为明显(均 P ＜0.05);P+A+O组LOX-1 mRNA和蛋白表达较A+O组降低(P ＜0.05).与对照组相比,oxLDL组与A+O组NF-κB活性明显增强,以A+O组尤为明显(均 P ＜0.05);P+A+O组NF-κB活性较A+O组降低(P ＜0.05).相关分析:NF-κB活性与LOX-1 mRNA和蛋白表达量呈正相关(均为 r =0.82,P ＜0.05).结论 ADMA可能通过NF-κB途径增强LOX-1表达而促进巨噬细胞转化为泡沫细胞,促进动脉粥样硬化的发生发展.     

Ox-LDL诱导血管内皮细胞表达LOX-1

[目的]探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)作为氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的特异性受体在摄取ox-LDL后对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达LOX-1的影响以及LOX-1在ox-LDL诱导其自身表达中所起的作用.[方法]用天然低密度脂蛋白(n-LDL)、LOX-1的受体阻断剂聚肌苷酸[poly(I)]250μg/mL和爱兰苔胶(carrageenan)以及不同质量浓度的ox-LDL(0,10,20,50,100 μg/mL)与HUVECs作用于不同的时间(0,6,12,24,36 h),用Realtime RT-PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平,用Western blot测定LOX-1蛋白表达水平,并比较加入LOX-1阻断剂前后LOX-1表达的变化.[结果]在HUVECs中加入不同质量浓度的ox-LDL(0,10,20,50,100μg/mL),各组剂量的ox-LDL都可以增加LOX-1 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),在10～50 μg/mL的剂量范围内有明显的剂量-效应关系.但n-LDL对LOX-1的表达无影响.随着ox-LDL与HUVECs作用时间的延长,LOX-1 mRNA和蛋白的表达显著升高(P＜0.01),在6～24 h内呈明显的时间-效应关系(P＜0.01).HUVECs预先与250 μg/mL的poly(I)或carrageenan作用2 h,然后再加入50 μg/mL的ox-LDL作用24 h.poly(I)和carrageenan都可以显著抑制ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01).[结论]Ox-LDL可以诱导HUVECs LOX-1的表达,该诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分拮抗.表明LOX-1不仅特异性地结合ox-LDL,而且介导ox-LDL对LOX-1表达的上调作用.     

阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1和eNOS表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1 和eNOS表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为4组,即股动脉结扎组（L组）、高胆固醇血症+股动脉结扎组（HL组）、高胆固醇血症+阿托伐他汀+股动脉结扎组（AL组）、高胆固醇血症+生理盐水+股动脉结扎组（NL组）。HL组、AL组和NL组大鼠均喂食可致动脉粥样硬化饲料8周。AL组股动脉结扎后10 mg/kg 阿托伐他汀腹腔注射2 周。采用免疫荧光法观察后肢侧支血管LOX-1 和eNOS的表达。体外实验中,转染LOX-1-siRNA的内皮细胞经oxLDL和阿托伐他汀单独或共同处理后,RT-PCR和Western blotting检测LOX-1和eNOS的表达,Griess法检测NO的产生。结果LOX-1表达于大鼠正常侧支血管中,在高胆固醇血症大鼠中其表达则明显升高,在阿托伐他汀治疗后明显降低。eNOS在正常生长的侧支血管中呈强阳性表达,在高胆固醇血症血管中表达下调,经阿托伐他汀治疗后其表达上调。体外实验中,oxLDL处理使内皮细胞LOX-1 表达升高,eNOS表达降低,而阿托伐他汀处理后细胞中LOX-1 表达下调,eNOS表达上调。此外,在细胞中使用LOX-1 siRNA 干预可消除oxLDL刺激对eNOS表达的影响。结论高胆固醇血症或oxLDL可能通过LOX-1/eNOS通路诱导内皮功能障碍,阿托伐他汀可以改善这一状态,表明阿托伐他汀可作为缺血性疾病诱导侧支血管损害的潜在治疗药物。     

厄贝沙坦对巨噬细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)基因及蛋白表达的影响

目的研究不同浓度厄贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人单核/巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmoL/L佛波酯诱导分化后,将细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、厄贝沙坦干预组,干预组分别加入不同浓度厄贝沙坦孵育2 h后,再加入AngⅡ1×10-6moL/L孵育24 h,用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测(LOX-1)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,Ang II可明显上调THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度厄贝沙坦均能抑制(LOX-1)蛋白表达(P<0.05),并且随着厄贝沙坦浓度降低,抑制作用减低,即两者呈浓度依赖性。结论厄贝沙坦以浓度依赖方式抑制AngⅡ诱导的THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,减少巨噬细胞通过(LOX-1)途径的氧化低密度脂蛋白(oxLDL)摄入,影响泡沫细胞的发生、发展,发挥其抗动脉粥样硬化(AS)作用。     

LOX-1介导oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性反应

目的 探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮高通透性反应中的作用。方法 采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察oxLDL或和LOX-1阻断抗体对单层血管内皮细胞LDL通透性的影响以及下室THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;用Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜检测oxLDL或和LOX-1阻断抗体对桥粒芯糖蛋白1 （DSG1） 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中表达和分布的改变。结果 oxLDL可以增加单层内皮细胞对LDL的通透性和下室THP-1巨噬细胞脂质的蓄积,同时降低DSG1的表达及其在细胞间分布的连续性,而抑制LOX-1可以减弱内皮细胞的高通透性反应和巨噬细胞脂质蓄积。结论 oxLDL可能是通过降低桥粒蛋白表达使内皮细胞构型改变来诱导内皮高通透性,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积,其机制可能涉及LOX-1的介导。     

LOX-1作为潜在的肺特异性衰老标志物的相关研究

目的 评估小鼠血清及肺组织中LOX-1蛋白随增龄变化的趋势,探索其在衰老调控中的意义。方法 采用6只分别为4月龄和20月龄的C57BL/6小鼠,每组3只。麻醉后处死,解剖取血清、肝脏、脾脏、肾脏、小肠和肺。采用蛋白质芯片检测并分析血清,肺和其他脏器组织中氧化应激相关蛋白的表达量随增龄的变化,采用免疫组化方法检测肺石蜡切片组织中8-氧化鸟嘌呤(8-oxoG)的表达水平和各脏器中组织中LOX-1蛋白的表达水平。结果 蛋白质芯片结果显示,20月龄小鼠血清及肺组织中LOX-1蛋白表达水平显著高于4月龄小鼠(P<0.05)。免疫组化检测同样发现20月龄组小鼠的肺组织内LOX-1蛋白表达水平显著高于4月龄组(P<0.05),但在其他脏器内的表达水平在不同年龄组比较差异无统计学意义。免疫组化染色结果还发现20月龄组小鼠肺组织内8-oxoG的表达水平显著高于4月龄组小鼠(P<0.05)。结论 LOX-1蛋白仅在肺呈现随增龄增加的现象,可能是潜在的肺特异性衰老标志物。     

番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及LOX-1表达的实验研究

目的 研究番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及LOX-1表达的作用。方法 建立THP-1单核-巨噬细胞源性泡沫细胞模型,根据CCK-8法测定的番石榴叶总黄酮对该细胞的安全浓度范围,将配制的番石榴总黄铜溶液在其安全范围内选取低、中、高三个剂量组,以无血清培养液的空白对照组及ox-LDL模型组为对照。采用油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶偶联比色法检测细胞内总胆固醇含量,Western blot法检测LOX-1的蛋白表达水平。结果 三个剂量组细胞内总胆固醇含量均低于模型组（P〈0.05）,并随番石榴叶总黄酮浓度升高而下降;三个剂量组的LOX-1蛋白表达均低于模型组（P〈0.05）,抑制作用随剂量升高而增强。结论 番石榴叶总黄酮通过抑制LOX-1的表达,减少巨噬细胞摄取ox-LDL,抑制泡沫细胞形成,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体与内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶关系的研究

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)活化人脐静脉内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路中的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用不同浓度的ox-LDL孵育,通过W estern印迹检测LOX-1、p38MAPK蛋白水平,逆转录聚合酶链法观察LOX-1 mRNA表达,并以LOX-1特异阻断性抗体(JTX92)预处理内皮细胞,检测p38MAPK蛋白水平。四氮唑蓝法观察ox-LDL对细胞活力的影响。结果ox-LDL引起内皮细胞形态结构的改变,而且抑制内皮细胞的生长(P<0.05);ox-LDL呈浓度依赖性地上调LOX-1蛋白和mRNA表达(均P<0.05),并呈浓度依赖性激活p38MAPK通路,不同浓度ox-LDL(25μg/m l,50μg/m l,100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白质表达水平均明显高于对照组(48±7,79±15,113±14 vs 24±5,P<0.01);JTX92+ox-LDL(100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白水平明显低于ox-LDL(100μg/m l)组,(58±13 vs 113±14,P<0.01)。结论ox-LDL通过LOX-1途径激活p38MAPK信号通路,LOX-1上调是ox-LDL致动脉粥样硬化的重要环节。     

NF-κB对冠心病患者外周血单核细胞LOX-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨核因子-κB（NF-κB）对冠心病患者外周血单核细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）mRNA表达的影响。方法分离收集冠心病患者外周血单核细胞,分为3组:对照组在不含血清的RPMI-1640中孵育24h;ox-LDL组在不含血清的RPMI-1640中加ox-LDL（40μg/ml）孵育24h;PDTC（NF-κB抑制剂）组:先加PDTC(10^-5mol/L)培育1h之后加ox-LDL（40μg/ml）继续孵育24h,之后收集单核细胞及细胞上清液,采用异硫氰酸胍—酚—氯仿抽提法提取总RNA,扩增目的基因LOX-l,并采用ELISA法测定上清液中sLOX-1蛋白浓度。结果与对照组比较,ox-LDL组单核细胞LOX-1 mRNA表达增加（0.304±0.047vs0.813±0.131,P<0.05）,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量（ng/ml）增加（7.277±1.979 vs 16.517±2.064,P<0.05）;PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达及细胞上清液中sLOX-1蛋白含量均增高（分别为0.502±0.140和11.997±1.757,P<0.05）。与ox-LDL组相比,PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达减少,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量显著减少（P<0.05）。结论 ox-LDL可诱导人单核细胞LOX-1表达增加,NF-κB也参与了ox-LDL对LOX-1表达并有促进作用。     

三七总皂苷对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞CD40, VCAM-1表达的影响

目的    探讨三七总皂苷(TPNS)对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）白细胞分化抗原40（CD40）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）表达的影响。方法    原代培养HUVECs。细胞分为空白组、刺激组、小剂量（100mg/L）TPNS组、大剂量（200mg/L）TPNS组及辛伐他汀组并予相应处理。采用MTT法测定HUVECs活性,实时定量RT-PCR检测VCAM 1的基因表达,Western blot 分析CD40蛋白表达量。结果    TPNS及辛伐他汀均可以升高HUVECs的活性（P＜0.05, P＜0.001）,下调HUVECs表达免疫炎症因子CD40 (P＜0.05, P＜0.01)及VCAM-1（P均＜0.001）的水平。且大剂量TPNS作用优于小剂量TPNS（P＜0.05）。结论    TPNS能够减轻oxLDL对内皮细胞的损伤,降低内皮细胞免疫炎症因子的表达,在防治动脉粥样硬化中具有重要作用。     

高迁移率族蛋白B1基因沉默抑制子宫内膜癌侵袭与转移的机制

目的：探讨小干扰RNA抑制高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)表达后对p38MAPK通路的影响，从而了解HMGB1影响子宫内膜癌侵袭与转移的机制。方法：运用RNA干扰技术，设计合成4条HMGB1 shRNA，将HMGB1沉默效果最好的HMGB1 shRNA转染子宫内膜癌HEC-1A细胞，通过RT-PCR和Western 印迹技术检测转染后细胞HMGB1及p38MAPK在基因和蛋白水平的表达情况，MTT实验检测转染后细胞生长活力状态。结果：RT-PCR和Western 印迹结果均证实HMGB1 shRNA载体成功抑制HMGB1和p38MAPK在HEC-1A细胞中mRNA和蛋白的表达(P<0.05)；MTT结果显示HMGB1 shRNA转染后HEC-1A细胞生长明显受抑(P<0.05)。结论：HMGB1表达下调可有效抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖、侵袭和转移，此过程可能通过p38MAPK信号通路进行调节。     

普罗布考对兔动脉粥样硬化模型主动脉凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的研究

目的观察普罗布考对兔动脉粥样硬化模型高胆固醇血症、主动脉内皮功能及LOX-1表达的影响.方法新西兰大白兔随机分为正常对照组(普通饮食,6只),高脂饮食组(高脂饮食,10只)及普罗布考组(高脂饮食+普罗布考200mg/kg·d,10只).实验开始前及第12周分别耳缘静脉采血测定血清总胆固醇.第12周处死动物,取胸主动脉,制备离体胸主动脉环对乙酰胆碱的反应以检查内皮功能,RT-PCR与免疫印迹检测凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)基因与蛋白质表达水平.结果普罗布考可以显著降低兔动脉粥样硬化模型血清总胆固醇浓度;防止高脂血症兔胸主动脉对乙酰胆碱引起的内皮信赖性舒张(E-DR)反应明显降低;以及下调模型动脉主动脉明显增强了LOX-1表达.结论兔动脉粥样硬化模型内皮功能损伤的机制与LOX-1表达增强有关,普罗布考保护内皮功能可能的机制是下调LOX-1表达的作用.     

miR-29c对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响及其机制的初步研究

目的研究miR-29c对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法空白对照组、miR-29c过表达阴性对照组、miR-29c过表达组、miR-29c抑制表达阴性对照组、miR-29c抑制表达组预先转染HUVECs,再用TNF-α(10 ng/mL)诱导HUVECs 48 h,然后分别采用MTT法和Hoechst 33342荧光染色法检测miR-29c对TNF-α诱导HUVECs增殖活力及凋亡的影响;再采用Western blot技术检测miR-29c对Akt、eNOS磷酸化水平及eNOS蛋白表达的影响。结果 miR-29c可显著降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力(P0.05);Heochst 33342荧光染色结果显示,miR-29c可促进TNF-α诱导的HUVECs凋亡(P0.05);miR-29c可显著下调Akt、e NOS的磷酸化(P0.05),但其对e NOS蛋白的表达无影响。结论 miR-29c可降低TNF-α诱导的HUVECs增殖,并促进其凋亡,其机制可能与下调Akt、e NOS的磷酸化相关。     

丝裂原活化蛋白激酶p38在急性胰腺炎患者外周血单个核细胞中的变化和意义

目的探讨急性胰腺炎患者外周血单个核细胞(PBMC)内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)信号水平的变化及其与疾病严重程度的关系。方法收集轻型胰腺炎(MAP组)29例、重症胰腺炎(SAP组)23例和对照组21例,实时荧光聚合酶链反应检测患者PBMC p38 MAPK基因表达水平,Western blot检测PBMC p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK(P-p38 MAPK)蛋白的水平。结果 SAP组p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平高于对照组和MAP组(P<0.05);MAP组p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SAP组P-p38 MAPK总蛋白水平高于对照组和MAP组(P<0.01,P<0.05),MAP组P-p38 MAPK总蛋白水平高于对照组(P<0.05)。结论急性胰腺炎患者PBMC内p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平变化较小;p38 MAPK磷酸化水平显著升高,而且与病情程度密切相关。     

右美托咪定对高迁移率族蛋白1诱导人脐静脉内皮细胞炎性反应的影响

摘要:目的 研究右美托咪定对脂多糖(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌高迁移率族蛋白1(HMGB1) 的影响,及其调控 HMGB1诱导 HUVECs炎性反应的分子机制。方法 100ng/mL的 LPS刺激 HUVECs16h后,用 不同浓度的右美托咪定(0.01、0.1、1、10nmol/L)分别处理细胞 4h,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中 HMGB1的含量。MTT检测不同浓度右美托咪定对 HUVECs细胞活力的影响,细胞免疫荧光检测 HMGB1的表达及 分布。将 HUVECs随机分为对照组、右美托咪定组、HMGB1组、右美托咪定+ HMGB1组,右美托咪定和 HMGB1的 浓度分别是1nmol/L、1μg/mL。ELISA 检测细胞上清液中 TNF-α和IL-1β含量,Westernblotting检测 MAPK 信号通 路的磷酸化水平,再采用 ERK1/2、p38MAPK 通路抑制剂进行阻断实验。结果 不同浓度的右美托咪定对 HUVECs 活力无影响。LPS作用后,HUVECs上清液中 HMGB1的含量增加(P<0.01),而右美托咪定可呈剂量依赖性地抑制 HMGB1的表 达 (P<0.05);LPS 刺 激 HMGB1 蛋 白 从 细 胞 核 转 移 至 胞 质,而 右 美 托 咪 定 可 显 著 抑 制 LPS 引 起 的 HMGB1移位(P<0.05)。相对于对照组,HMGB1组上清液中炎症因子 TNF-α和IL-1β含量增加(均 P<0.01),外源 性 HMGB1促进 ERK1/2、p38MAPK 和JNK 磷酸化(均P<0.05),而右美托咪定+HMGB1组可抑制上述炎症因子的 分泌并部分逆转 ERK1/2、p38MAPK 的磷酸化(均P<0.05)。p38MAPK 抑制剂(SB203580)可下调 HMGB1组IL-1β 的表达,ERK1/2阻滞剂(PD98059)可下调 TNF-α和IL-1β的表达,且与右美托咪定具有协同抑制 TNF-α和IL-1β表达 的作用(均P<0.05)。结论 右美托咪定可抑制LPS引起的 HMGB1分泌,并通过抑制 HMGB1相关的 MAPK 信号通 路发挥抗炎效应。     

螺内酯对醛固酮诱导的人脐静脉内皮细胞LOX-1mRNA表达的影响

目的通过体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并加醛固酮(ALD)诱导,观察氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达的影响。方法体外培养的HUVECs按细胞不同处理方式分为6组:阴性对照组(1640培养基,A组)、不同浓度ALD组(10、100、1 000 nmol/L,分别为B、C、D组)、ALD+LOX-1受体阻滞剂多聚肌苷酸(Poly I)组(E组)、ALD+螺内酯组(F组)加入HUVECs中共孵育24 h,RT-PCR的方法测定HUVECs中LOX-1mRNA的表达。结果用不同浓度的ALD(10、100、1 000 nmol/L)与HUVECs培养24 h后,同A组相比LOX-1mRNA表达呈浓度依赖性增加(P<0.05);而在用螺内酯(1μmol/L)与1 000 nmol/L的ALD共培养24 h或Poly I(250 mg/L)与HUVECs预先作用2 h后再加入1 000 nmol/L的ALD共培养24 h,同D组相比E,F组LOX-1mRNA的表达明显减少(P<0.05)。结论ALD可以促进培养的HUVECs LOX-1基因的表达,而其拮抗剂螺内酯可以抑制LOX-1mRNA的表达,因此ALD的致动脉粥样硬化(AS)作用可能与LOX-1有关,而螺内酯则可能通过此途径发挥抗AS作用。