水牛乳风味蛋白酶解肽的分离与抗氧化活性研究

通过蛋白纯化系统,采用Superdex peptide凝胶过滤层析柱,对水牛乳风味蛋白酶解肽进行分离,按洗脱体积收集不同组分,以肽含量、还原能力及3种自由基清除能力为评价指标,跟踪高抗氧化肽组分。结果表明, 15号样品的还原能力、DPPH自由基清除率及羟自由基清除率最强,分别为0.154, 50.56%及15.22%,样品肽含量为2.45 mg/mL;16号样品的超氧阴离子清除率最强,为54.88%,样品肽含量为1.93 mg/mL; 15号及16号样品同属于蛋白纯化系统分离的F2组分,分子量范围在89.09～1 245.32 Da。     

河蚬肉抗氧化肽的分离及活性研究

目的:为制备具有抗氧化活性的河蚬肉抗氧化肽。方法:河蚬肉酶解液经膜分离后,采用Sephacryl S-100 HR凝胶层析柱进行分离,得到抗氧化性最强的组分经CM Sepharose FF离子交换层析柱进一步分离,并对各组分的体外抗氧化活性进行测定。结果:经Sephacryl S-100 HR凝胶层析柱分离得到5个活性组分A、B、C、D和E,其中组分C的抗氧化活性较强,其总抗氧化能力A_(700 nm)、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率分别为1.79、83.33%和26.35%。组分C经CM Sepharose FF离子交换层析柱进一步分离得到2个活性组分C1和C2,其中C2的抗氧化活性最强,总抗氧化能力A_(700 nm)、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率分别为2.03、92.34%和35.94%。结论:河蚬酶解液抗氧化肽的羟自由基清除能力突出,该研究为河蚬肉抗氧化肽的开发提供理论技术依据。     

优选南极磷虾蛋白肽抗氧化活性组分

目的制备南极磷虾抗氧化肽,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽成分。方法采用脱脂、酶解、超滤等手段制备南极磷虾抗氧化肽;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化能力指数3个抗氧化指标和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活力2个酶活力指标为评价指标,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分;基于G-25凝胶层析技术对抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分进行分离纯化,进一步基于电子顺磁共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法测定洗脱后各峰的DPPH自由基清除率,得到抗氧化活性最好的南极磷虾抗氧化肽组分。结果通过抗氧化指标测定,截留分子量3～10 KDa的肽的DPPH自由基清除率最高,为(30.10±1.10)%,截留分子量3 KDa的南极磷虾肽的ABTS清除能力和抗氧化指数较好,则IC50值为(0.74±0.08) mg/mL、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)值为6.39±0.21;通过酶活力指标测定,截留分子量3 KDa的肽的SOD活力和CAT活力最好,分别为(45.7±0.13)U/mg和(17.1±0.19)U/mg蛋白质。对截留分子量3KDa和3～10KDa的南极磷虾肽进行G-25分离纯化后,测定各组分的DPPH自由基清除率,可知截留分子量3～10KDa的F2-2峰清除率最好,为(51.55±1.54)%。结论基于EPR方法优选出分子量为3～10 KDa的南极磷虾肽的F2-2组分的DPPH自由基清除率最高。     

金枪鱼皮胶原蛋白肽分离纯化工艺的研究

采用超滤法、凝胶层析柱法、离子交换法、高效液相分析法等研究金枪鱼皮胶原蛋白肽(TSCP)的分离纯化工艺。结果表明:通过超滤分离分子量越低TSCP组分DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率越高,且分子量小于3kDa的TSCP-IV组分的清除率最高,IC50值分别为0.17,0.20,1.64mg/mL。对TSCP-IV进行Sephadex G-25凝胶柱过滤层析后得到4个峰,峰GP-I的得率较高,且峰GP-I对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子的清除率较高,IC50值分别为50.01,86.56,623.75μg/mL。将凝胶过滤组分GP-I经离子交换柱用不同pH值溶液梯度洗脱后得到4个峰,pH 5.61时的洗脱峰IP-II的得率较高,且IP-II对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率较高,IC50值分别为21.59,20.28,121.23μg/mL。用高效液相色谱分析表明,IP-II为纯度较高的金枪鱼皮胶原抗氧化肽段。     

诺邓火腿抗氧化肽的分离纯化与鉴定

提取诺邓火腿抗氧化肽,经过Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化,对各组分进行体外抗氧化试验(清除·OH、清除DPPH自由基、螯合Fe~(2+))研究抗氧化活性;将抗氧化活性最强的组分经葡聚糖凝胶G-15(Sephadex G-15)凝胶色谱再次分离纯化,最后对抗氧化活性最强的组分通过基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)对抗氧化肽进行测序鉴定。试验结果:诺邓火腿抗氧化肽经Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化后得到4个组分(A、B、C和D),其中组分C的抗氧化活性最强,质量浓度为1 mg/mL时,·OH清除率、DPPH自由基清除率和Fe~(2+)螯合率分别达到50.01%、48.32%和34.37%,与其他组分(A、B和D)相比,差异极显著(p0.01);组分C经Sephadex G-15凝胶色谱分离纯化的5个组分(C_1、C_2、C_3、C_4和C_5),其中C_3组分抗氧化活性最强,质量浓度为1 mg/m L时,·OH清除率、DPPH自由基清除率和螯合Fe~(2+)分别达到73.01%、51.21%和65.23%,与其他组分(C_1、C_2、C_4和C_5)相比,差异极显著(p0.01);通过MALDI-TOF-MS对C_3组分抗氧化肽进行测序鉴定,得到抗氧化肽序列。     

猪皮胶原蛋白抗氧化肽的分离纯化及体外抗氧化活性研究

采用碱性蛋白酶对猪皮胶原蛋白进行酶解,制备抗氧化肽。为了得到抗氧化活性高且纯度高的抗氧化肽,本实验采用多种体外抗氧化评价体系研究超滤获得的各分子质量段猪皮胶原蛋白抗氧化肽的体外抗氧化活性;依次采用离子交换色谱、凝胶色谱对猪皮胶原蛋白酶解液进行分离纯化。结果显示:超滤分离获得5~10ku的抗氧化肽较其他分子量范围的抗氧化肽具有较好的抗氧化活性;采用离子交换色谱、凝胶色谱两种分离方法分步分离能达到较好的分离纯化效果,离子交换色谱分离得到7个组分,其中组分P1对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.85mg/mL时,清除率为46.30%,IC50值为1.24mg/mL;该组分经过凝胶色谱分离后得到2个组分,其中组分P1-B对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.9mg/mL时,清除率为49.43%,IC50值为0.98mg/mL。     

几种竹叶醇提物体外抗氧化活性的对比

采用乙醇提取慈竹、苦竹、四季竹中的有效成分并检测其总黄酮和总蛋白含量,通过测定提取物的DPPH自由基清除能力、还原能力、抑制β-胡萝卜素漂白能力和抑制脂质过氧化能力,比较不同竹叶的抗氧化活性。结果表明:醇提物总蛋白含量大小依次为:苦竹慈竹四季竹,总黄酮含量大小依次为:慈竹苦竹四季竹。苦竹的DPPH清除能力(IC_(50)=1.53 mg/mL)最强,慈竹的还原能力(IC_(50)=0.55 mg/mL)和抑制脂质过氧化能力(IC_(50)=0.04 mg/mL)最强。三种竹叶DPPH自由基清除率IC_(50)值范围为1.53～2.71mg/mL,还原能力IC_(50)值范围为0.55～0.97 mg/mL,β-胡萝卜素漂白抑制作用IC_(50)值范围为0.78～0.98 mg/mL,脂质过氧化抑制作用IC_(50)值范围为0.04～0.12 mg/mL。三种竹叶乙醇提取物均具有较好的抗氧化活性,可作为抗氧化剂、防腐保鲜剂或功能性食品添加剂应用于食品工业中。     

中华真地鳖抗氧化肽的分离及其抗氧化活性的研究

以中华真地鳖酶解物为原料,分离抗氧化肽,并对其抗氧化活性进行研究。采用DEAE-SephadexA50离子交换层析分离中华真地鳖抗氧化肽,得到FⅠ、FⅡ、FⅢ3个组分。其中FⅡ组分对O2-·自由基、OH.自由基、DPPH.自由基的清除能力最强,清除率分别为86.83%(10mg/mL)、92.28%(0.7mg/mL)、68.06%(1.8mg/mL),其半抑制质量浓度(IC50)分别为5.98、0.27、1.09mg/mL。利用高效液相分离FⅡ组分,以0%～30%乙腈为流动相,在进样量1mg时分离效果较好。     

茴香精油微胶囊在辣椒丝中的应用

利用总抗氧化能力、DPPH·清除率和羟自由基(·OH)清除率评价茴香种子精油的体外抗氧化活性,采用复凝聚法制备茴香精油微胶囊,并将之用于辣椒丝的防腐保鲜。采用模糊数学综合评价法确定茴香精油微胶囊在辣椒丝中的添加量。结果表明:茴香种子精油清除DPPH·自由基的IC_(50)为13.5612 mg/mL(TBHQ为7.5235 mg/mL),清除·OH自由基的IC_(50)为11.6433 mg/m L(TBHQ为6.1404 mg/mL),总抗氧化能力清除率为58.9%。茴香精油微胶囊在辣椒丝中最适添加量为3%。     

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

牛乳酪蛋白抗氧化乳基料的制备及其分离纯化

为制备具有低过敏性和抗氧化作用的牛乳酪蛋白活性肽乳基料,以水解度和·OH清除率为指标,先后采用大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化酪蛋白酶解物。结果表明：胰蛋白酶和中性蛋白酶组合酶解牛乳蛋白6h,其产物具有较高的水解度(36.80%)和较好的抗氧化活性,·OH清除率的半抑制浓度(IC50)值为3.12mg/mL;酶解物通过LS106大孔吸附树脂分离、纯化后,体积分数为75%的乙醇洗脱液具有较高的抗氧化活性,其·OH清除率的IC50值为0.14mg/mL;体积分数75%的乙醇洗脱组分经凝胶过滤色谱分离、纯化后,得到4个不同相对分子质量肽段,其中抗氧化活性较强肽段的相对分子质量为355.38～854.89,其·OH清除率的IC50值为0.09219mg/mL,与酶解物相比其抗氧化活性扩大33.84倍;相对分子质量小于3238.05的多肽占纯化后多肽总量的60.32%,30.09%多肽是由2～8个氨基酸组成的寡肽。牛乳酪蛋白经复合酶酶解后其抗氧化活性明显提高,过敏性明显降低,喷雾干燥后可以直接制备乳基料。     

芸豆肽的抗氧化活性研究

采用Sephadex-G50 凝胶柱层析分离具有强抗氧化活性的小分子芸豆肽,以VC 为对照,研究3 种肽分离组分的还原能力及对羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH 自由基的清除能力。结果表明：随着相对分子质量的减小和肽质量浓度的增加,其还原能力及对羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH 自由基的清除能力逐渐增大;小分子芸豆肽(C 组分)的还原能力低于VC;对羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH 自由基的半清除质量浓度分别为2.301、2.553、1.386mg/mL。该小分子肽组分的相对分子质量主要集中在100～1000,该组分疏水性氨基酸含量为36.78%,其疏水值达到364.73 kcal/mol。说明小分子肽组分的抗氧化活性与其氨基酸种类和组成、相对分子质量分布密切相关。     

绿豆中ACE抑制肽的分离纯化及抗氧化研究

在绿豆中提取蛋白,以成熟的提取工艺提取ACE抑制肽,用SephadexG-25凝胶柱色谱对酶解产物分离纯化,纯化后得到3个组分,并确定其分离条件。结果表明,以SephadexG-25为分离介质的色谱条件是:上样体积,2 mL;样品浓度,9 mg/mL;洗脱剂,超纯水;流速,0.7 mL/min。通过试验证明绿豆中的ACE抑制肽可以清除DPPH自由基和ABTS自由基,且清除率效果较好。     

黑姜抗氧化活性研究

研究了黑姜的体外抗氧化活性。黑姜是以新鲜的姜为原料,在一定条件下发酵而成。测定了黑姜与新鲜姜醇提物和水提物的抗氧化活性,其中包括清除DPPH自由基能力、清除ABTS自由基能力、清除OH自由基能力、二价铁离子还原能力。结果显示:与新鲜姜相比,黑姜的抗氧化活性增强,醇提物的活性要高于其水提物的活性。黑姜醇提物DPPH自由基清除率,其IC_(50)是0.12mg/mL,ABTS自由基清除率,其IC_(50)是0.04mg/mL,当样品浓度为0.5mg/mL时,OH自由基清除率为36.49%。二价铁离子还原力是鲜姜醇提的1.5倍。通过比较醇提物和水提物的抗氧化活性,得出样品的乙醇提取物的抗氧化活性要优于其水提取物的。     

软枣猕猴桃多糖的体外抗氧化活性

利用水提醇沉法提取软枣猕猴桃粗多糖,经脱蛋白、脱脂,软枣猕猴桃粗多糖的提取率为1.41%。利用DEAE-52纤维素离子交换层析对软枣猕猴桃多糖进行初步分离,得到4种软枣猕猴桃多糖组分。利用SephadexG-200凝胶柱层析对组分Ⅱ和Ⅲ实现了完全分离。通过测定清除自由基能力,评价软枣猕猴桃多糖组分Ⅱ的抗氧化活性。结果表明:软枣猕猴桃多糖对DPPH自由基及烷基自由基(R)有较强的清除能力,IC50值分别为0.497、0.547mg/mL。在受试范围内,随软枣猕猴桃多糖质量浓度的增加,清除能力增强,当软枣猕猴桃多糖质量浓度达到1mg/mL时,其对DPPH自由基及R的清除率分别达到86.4%、87.1%,与VC的清除率相近。软枣猕猴桃多糖对羟自由基(OH)有一定的清除能力,IC50值为0.668mg/mL。其清除能力随多糖质量浓度的增加而有所增加,但其对OH的清除率较VC有一定的差距。软枣猕猴桃多糖对O-2.的清除率较低,清除能力较弱。由此可见,软枣猕猴桃多糖具有较强的抗氧化活性。     

响应面优化鲍鱼内脏抗氧化肽制备工艺及其活性

利用鲍鱼内脏结缔组织为原料,通过酶解法制备内脏多肽,研究鲍鱼内脏蛋白的抗氧化性。考察底物质量分数(1%～5%),酶添加量(3 000～15 000 U/g),酶解温度(40～60℃),酶解时间(1～5 h), pH (5.5～7.5)对鲍鱼内脏抗氧化性的影响;在单因素的基础上结合响应面法,以DPPH自由基清除率为指标,优化出抗氧化肽的最佳制备工艺,进一步研究其体外抗氧化活性。结果表明,风味蛋白酶为最适水解酶,在底物质量分数4.29%、酶添加量10 533.76 U/g、酶解时间3.87 h、酶解温度50℃、pH 6.5,抗氧化肽的酶解效果最佳;在该条件下DPPH自由基清除率达89.18%,其清除DPPH自由基、羟自由基、ABTS自由基的IC_(50)分别为4.61 mg/mL, 16.24 mg/mL和17.41 mg/mL。说明鲍鱼内脏结缔组织能够制备得到良好抗氧化性的蛋白肽。     

牦牛血抗氧化肽制备方法对比及分离纯化研究

为研究牦牛血抗氧化肽最佳制备方法,以牦牛血为原料,分别采用枯草芽孢杆菌发酵法、碱性蛋白酶解法、菌酶联合法制备3种牦牛血抗氧化肽,依次简写为BF、AP、BA。应用羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_2-)清除能力,脂质过氧化抑制能力、还原力4种体外抗氧化实验,对比3种牦牛血抗氧化肽的抗氧化活性。以超滤、凝胶层析法对制备的较高活性产物进行分离。结果表明:3种抗氧化肽活性大小为BABFAP,BA有最大的·O_2-清除能力、脂质过氧化抑制能力及还原力,表明制备牦牛血抗氧化肽的最佳制备方法为菌酶联合法;超滤分离菌酶联合制备产物获得分子量5 kD的抗氧化肽活性高于分子量10 kDa、介于5~10 kDa的抗氧化肽,对·OH的IC50值为1.62 mg/mL;该组分经凝胶层析分离后得到4个组分,其最高活性组分Ⅰ对·OH的IC50值达到0.72 mg/mL。     

3种大米蛋白肽的制备及其抗氧化活性比较

为研究不同品种大米蛋白肽的品质特性,在采用碱式酸沉法提取大米蛋白的基础上,合理酶解制备大米蛋白肽,并以超氧自由基(O_2~—)、羟基自由基(OH~—)、DPPH自由基(DPPH·)清除率为指标,比较不同大米蛋白肽的水解度和抗氧化活性。结果表明,3种大米蛋白肽的水解度差异显著(P0.05),由高到低依次为籼米粳米糯米。3种大米蛋白肽的半数自由基清除率(IC_(50))具有明显差异(P0.05),其中籼米蛋白肽清除半数DPPH·自由基、O_2~—自由基、OH~—自由基的IC_(50)值最低,抗氧化活性最高,而糯米蛋白肽清除半数自由基的IC_(50)值远大于籼米、粳米蛋白肽,抗氧化活性最低。综合分析,籼米和粳米更适宜进行大米抗氧化肽的开发和利用。     

紫苏粕蛋白抗氧化活性肽的制备、分离纯化及序列鉴定

以紫苏粕粉为原料，使用碱性蛋白酶进行水解反应，制备抗氧化活性肽。采用超滤离心、凝胶过滤色谱和反相色谱等分离纯化手段对其富集。结果表明，相较其它3种蛋白酶，碱性蛋白酶Alcalase对紫苏粕蛋白的水解程度最高，约为(25.94±0.21)%；碱性蛋白酶作用紫苏蛋白后的酶解产物的抗氧化活性最好，对DPPH自由基清除率约为(91.01±0.73)%。酶解上清液经超滤离心分离后最小分子质量组分F1(小于3 ku)抗氧化活性最强，F1组分经Sephadex G-25凝胶过滤色谱分离后按照分子质量大小依次得到P1、P2、P3 3个组分，其中分子质量最小的P3组分抗氧化活性最高。P3组分经反相色谱分离所得4个组分中，最后被洗脱出来的P3-4组分疏水性最强且DPPH·自由基清除率最高，质量浓度为3 μg/mL的 P3-4溶液的DPPH·清除率为(58.8±0.78)%。通过LC-MS-MS 鉴定，抗氧化活性肽P3-4组分为十二肽，其氨基酸序列为Lys-Leu-Lys-Asp-Ser-Phe-Glu-Arg-Gln-Gly-Met-Val，分子质量为 1 437.8 u。本研究结果为深入开发紫苏蛋白资源，研发紫苏抗氧化活性肽提供理论参考。     

河蚬抗氧化肽-锌螯合物抗氧化活性的研究

研究了河蚬抗氧化肽-锌螯合物体外抗氧化能力,以Vc为阳性对照,选用·OH清除率、DPPH·清除率、ABTS~+·清除率、O_2~-·清除率、还原力及对油脂的抗氧化性6种方法,并将其与河蚬抗氧化肽进行比较。结果表明:河蚬抗氧化肽-锌螯合物对4种自由基有一定的清除能力,对·OH、DPPH·、O_2~-·和ABTS~+·的IC_(50)分别为1.44、1.93、3.20 mg/mL和2.26 mg/mL,具有一定的还原力,对猪油及芝麻油的氧化均有抑制效果,且河蚬抗氧化肽-锌螯合物的体外抗氧化活性高于河蚬抗氧化肽,为其在抗氧化活性方面的应用提供理论依据。