薏苡仁提取液抑制大鼠角膜新生血管的实验研究

目的：研究薏苡仁提取液对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用,并比较滴眼和结膜下注射两种给药途径的效果。方法：选取80只Wistar大鼠,随机抽取5只用于空白对照,余下75只取左眼制作碱烧伤模型,随机分为3组,对照组（A组）,薏苡仁提取液滴眼组（B组）和薏苡仁提取液球结膜下注射组（C组）,显微镜下观察各组角膜新生血管（CNV）生长情况并计算CNV面积;免疫组织化学方法检测各组CNV内皮细胞生长因子（VEGF）在不同时间点的表达情况。结果：薏苡仁提取液能明显抑制CNV生长,C组比B组抑制作用更明显（P〈0.05）。结论：薏苡仁提取液能有效抑制大鼠角膜碱烧伤后CNV的形成,其机制与降低CNV的VEGF表达有关。     

强力霉素对碱烧伤后角膜新生血管生长的影响

目的 探讨强力霉素对碱烧伤后角膜新生血管(CNV)形成及角膜血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将35只健康SD大鼠随机选取5只,为A组(正常组).余30只大鼠行右眼角膜碱烧伤,建立角膜新生血管动物模型,将其随机平分为B组(实验对照组)和C组(实验干预组).分别于3d,7d,14d裂隙灯下观察各组CNV的生长情况,计算新生血管面积,并采用免疫组化法检测大鼠角膜组织中VEGF的表达情况.结果 A组没有CNV生成,C组和B组相比CNV的生长明显受到了抑制;免疫组织化学染色结果示:A组VEGF微弱表达,B组和C组的表达明显高于A组,C组VEGF的表达低于B组,且差异具有统计学意义(P<0.05).结论 强力霉素可有效抑制角膜碱烧伤后CNV的生成及角膜组织中VEGF的表达.     

整合素α9β1对大鼠角膜缝线术后新生血管形成及血管内皮生长因子A表达的影响

目的研究整合素α9β1对大鼠角膜缝线术后新生血管（CNV）形成及血管内皮生长因子A（VEGF-A）表达的影响并探讨其
意义。方法39只SD大鼠,随机分为正常组（3只）,对照组、α9β1组、α9β1抑制组各12只。角膜行缝线术后,对照组予以左氧氟
沙星点双眼;α9β1组予以左氧氟沙星+α9β1点双眼;α9β1抑制组予以左氧氟沙星+α9β1单抗Y9A2点双眼。术后每天在裂隙灯
下观察CNV生长情况,并于3、5、7、14d分别随机取3个实验组中各3只大鼠,在裂隙灯显微镜下行角膜照相,计算CNV面积;
RT-PCR、Western blotting法检测不同时间点角膜中VEGF-A的表达。结果3组大鼠缝线后均有CNV形成,在第7天CNV面积
达最大,对照组CNV面积为3.21±0.19;和对照组比较,α9β1组CNV明显增多为4.57±0.31（P<0.05）;而α9β1抑制组CNV明显降
低,面积为2.03±0.26（P<0.05）;第14天时CNV出现部分消退。RT-PCR和Western blotting检测结果示：正常角膜仅有少量
VEGF-A表达,角膜缝线术后,VEGF-A表达明显增加。在术后第7天CNV生长达峰值;与对照组比较,α9β1组VEGF-A表达明
显增高（P<0.05）,而α9β1抑制组VEGF-A表达显著降低（P<0.05）。结论在角膜缝线术后,整合素α9β1可通过上调VEGF-A的
表达促进CNV生成;给予整合素α9β1抑制剂可下调VEGF-A的表达和显著减少CNV生成。
     

二十碳五烯酸对大鼠角膜新生血管血管内皮生长因子及其受体表达的抑制作用

目的 探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1表达的影响及作用机制.方法 78只SD大鼠按随机数字表法分为碱烧伤0.02 mg EPA治疗组(A组, 24只)、碱烧伤0.03 mg EPA治疗组(B组, 24只)、碱烧伤对照组(C组, 24只)、正常组(D组, 6只), 除正常组外,均选用右眼制作碱烧伤模型.A、B、C组碱烧伤后立即分别球结膜下注射0.02 mg/0.04 ml EPA、0.03 mg/0.04 ml EPA、0.04 ml生理盐水.每日裂隙灯显微镜下观察角膜水肿、新生血管情况.碱烧伤后1、4、7、14 d,用免疫组织化学方法检测角膜新生血管内皮细胞CD34表达,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法分别检测角膜VEGF的mRNA表达及Flk-1的蛋白表达.结果 碱烧伤7 d和14 d,角膜新生血管相对面积A组:(15.80±6 43)%、(11.06±2.14)%, B组:(16.10±7.41)%、(11.06±2.51)%,均显著少于C组:(84.74±7.77)%、(89.63±7 50)% (P<0.05).碱烧伤后7 d,C组CD34在CNV内皮细胞强阳性表达,A、B组未见CNV内皮细胞,CD34无表达.C组Flk-1蛋白及VEGF的mRNA表达,碱烧伤后1 d最高,持续高表达至4 d,随后逐渐下降.碱烧伤4 d,A、B组VEGF的mRNA表达及Flk-1的蛋白表达显著低于C组(P<0.05).结论 EPA能通过VEGF途径,抑制VEGF及其受体Flk-1的表达,从而显著抑制角膜新生血管的生长.     

贝伐单抗抑制兔角膜碱烧伤新生血管的实验研究

目的通过点眼和结膜下注射贝伐单抗两种不同的给药途径,抑制兔角膜碱烧伤后的新生血管,探讨该药的这两种给药方式的疗效。方法普通白色家兔50只,取2只为正常对照组,其余48只右眼碱烧伤后随机分为三组,每组16只：A组为碱烧伤对照组,B组为点眼组,用贝伐单抗（5mg/ml）点眼,3次/d,C组为结膜下注射组,用贝伐单抗（2.5mg/0.1ml）结膜下注射。在不同的时间点（第1、4、7、14d）测量角膜新生血管的生长情况及免疫组化检测角膜血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白的表达。结果 B、C组的CNV相对于A组得到明显抑制,CNV的长度和面积及VEGF蛋白的表达差异有统计学意义,而B组和C组之间没有明显差异。结论两种用药方法对于抑制角膜新生血管没有明显差异。     

角膜缝线与碱烧伤诱导兔角膜新生血管的实验观察

目的利用角膜缝线、碱烧伤两种常用方法来诱导兔角膜新生血管（CNV）产生。观察CNV产生早期的过程中,其生长情况及血管内皮生长因子（VEGF）在兔角膜中的表达情况。方法将新西兰白兔75只随机分为3组,A组-正常对照组5只;B组-角膜缝线组35只;C组-碱烧伤组35只。每日裂隙灯显微镜观察角膜炎性反应情况与混浊程度,检测第3天、7天、14天角膜新生血管长度和数量并摄影记录;B、C两组分别于实验后第1、2、3、5、7、10、14天观察、取材。免疫组织化学（IHC）检测VEGF在兔角膜中的表达情况。结果伤后3 d,新生血管开始侵入角膜;7 d,新生血管生长活跃;10 d,新生血管达到生长高峰;14 d后B组与C组新生血管均出现回退迹象。角膜缝线组CNV面积明显小于碱烧伤组（P〈0.01）,10 d后VEGF在碱烧伤组的表达明显高于缝线组（P〈0.01）。结论碱烧伤组相对于缝线组可以诱导产生更多的新生血管（CNV面积）,且CNV退化的时间晚,这些可能与VEGF的表达有关;但角膜缝线更容易控制CNV产生的范围。     

兔眼碱烧伤后VEGF的表达与角膜新生血管的关系探讨

目的:研究兔眼碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达与角膜新生血管(CNV)的关系。方法:56只兔随机分成实验组A、实验组B、实验组C及对照组。实验组用N aOH碱烧伤法诱导CNV模型,按碱烧伤后24h、3d、1周、2周、3周、4周,2月、6月处死兔取出角膜,进行CNV的形态学检查及免疫组化法评价VEGF的表达。结果:实验组兔碱烧伤后1d开始出现CNV,2周达高峰;碱烧伤后1d出现VEGF表达,持续升高至碱烧伤后1周,随后表达水平开始下降。对照组中未出现CNV及VEGF不表达。结论:碱烧伤后兔眼VEGF的表达与CNV的形成有密切相关性,并发挥了作用。     

重组人内皮抑素两种给药途径抑制角膜新生血管的实验研究

目的:研究重组人内皮抑素(recombinant human endostatin,rHES,恩度)两种给药途径对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用. 方法:48只Wistar大鼠随机分为4组:A组(12只眼),对照组,不做处理;B组(12只眼),角膜碱烧伤后球结膜下注射生理盐水0.05ml,隔日1次;C、D组(各12只眼),右眼角膜碱烧伤后分别应用100mg/ml重组人内皮抑素点眼,4次/日和球结膜下注射0.05ml,隔日1次治疗.观察各组角膜新生血管的生长情况,免疫组化检测VEGF蛋白的表达.结果:C组、D组在碱烧伤后各时间点新生血管面积均小于B组,C组、D组与B组新生血管面积的差异有统计学意义(P<0.05);D组较C组对新生血管的抑制作用略强,差异无统计学意义(P>0.05).碱烧伤后第16天免疫组织化学检查显示除C组与D组间,其余各两两比较VEGF蛋白量差异有统计学意义,C组与D组VEGF蛋白量差异无统计学意义(P>0.05).结论:点眼和球结膜下注射重组人内皮抑素(恩度)即均可有效抑制CNV.     

贝伐单抗抑制兔角膜碱烧伤新生血管的实验研究

目的 通过点眼和结膜下注射贝伐单抗两种不同的给药途径,抑制兔角膜碱烧伤后的新生血管,探讨该药的这两种给药方式的疗效.方法 普通白色家兔50只,取2只为正常对照组,其余48只右眼碱烧伤后随机分为三组,每组16只:A组为碱烧伤对照组,B组为点眼组,用贝伐单抗(5mg/ml)点眼,3次/d,C组为结膜下注射组,用贝伐单抗(2.5mg/0.1ml)结膜下注射.在不同的时间点(第1、4、7、14d)测量角膜新生血管的生长情况及免疫组化检测角膜血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)蛋白的表达.结果 B、C组的CNV相对于A组得到明显抑制,CNV的长度和面积及vEGF蛋白的表达差异有统计学意义,而B组和C组之间没有明显差异.结论 两种用药方法对于抑制角膜新生血管没有明显差异.     

PEDF抑制大鼠角膜移植术后新生血管作用的实验研究

目的：探讨局部应用色素上皮细胞衍生因子（pigment epithelium derived factor,PEDF）滴眼液抑制角膜移植术后角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）的作用及其可能机制。方法：建立大鼠同种异体间穿透性角膜移植模型,术后把72只大鼠随机平均分为实验组（10nM的PEDF眼液）和对照组（赋形剂滴眼液）。对术眼角膜用裂隙灯显微镜观察和照相,定量分析角膜新生血管面积,术后1w,2w,3w,1月,2月,3月,每个组随机处死6只动物,取其角膜标本进行免疫组化染色和透射电镜观察。结果：实验组角膜新生血管面积较对照组在术后1w,2w,3w,1月,2月显著减少（P〈0．01或P〈0．05）。结论：局部应用PEDF滴眼液可以抑制角膜移植术后角膜新生血管生长。     

局部应用全反式视黄酸对兔角膜新生血管的影响

目的 :观察全反式视黄酸点眼对兔角膜新生血管的影响。方法 :32只日本大白兔随机分成A、B、C、D 4组 ,每组 8只兔 (8只眼 ) ,制成角膜碱烧伤模型。治疗组 (A、B、C组 )伤后即分别滴用 15 ,30及 6 0mg·L-1的全反式视黄酸滴眼 ,对照组 (D组 )滴赋形剂 ,裂隙灯观察角膜新生血管的生长情况并计算伤后第 6 ,9,12 ,15 ,18,2 1,2 5 ,2 8d的角膜新生血管面积。连续用药 2 8d后处死兔并取下角膜做组织病理学检查。结果 :伤后B组和C组角膜新生血管开始出现的时间明显较A组和D组延长 ,且角膜新生血管生长面积均明显较A组和D组减少 ,组织病理学检查显示CNV面积与角膜后膜和炎性细胞数均有明显相关性。结论 :局部应用全反式视黄酸对由碱烧伤引起的兔角膜新生血管的生长有明显的抑制作用。     

KH902对大鼠缝线法致眼角膜新生血管的治疗效果评价

目的 评价复明肽（Fumintide, KH902）局部应用对缝线法致大鼠角膜新生血管 (corneal neovascularization, CNV)的抑制作用。 方法 将60只成年健康大鼠利用缝线法建立CNV模型后采用随机数字表法分入3组:A组（n=20）为KH902治疗组（KH902 30 mg／mL隔日球结膜下注射1次,0.025 mL/次）;B组（n=20）为地塞米松治疗组（0．1％地塞米松隔日球结膜下注射1次,0.025 mL/次）;C组（n=20）为空白对照组。分别于缝线术后3、7、14 d裂隙灯显微镜下观察记录各组大鼠CNV长出的时间、CNV的长度和数量,并拍照。术后第14 d开始给药,给药1、7、14及21 d后观察CNV变化情况并记录。以免疫组织化学方法观察血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的表达情况。 结果 用药1、7 d后各组大鼠CNV面积两两比较差异无统计学意义;用药14、21 d后,A组与B组CNV面积差异无统计学意义,但均低于C组CNV面积 (P<0.01)。角膜基质中VEGF表达在角膜缝线术后14 d达到高峰,用药后可见VEGF表达逐渐减少,且A组与B组效果相当。 结论 KH902 (30 mg/mL)经球结膜下注射给药可使已形成的缝线法所致大鼠角膜CNV明显退缩,其作用与0.1%地塞米松球结膜下注射相比较差异无统计学意义。     

抑制kB活性对碱烧伤大鼠角膜新生血管内皮生长因子表达的影响

目的观察碱烧伤后大鼠角膜组织核转录因子-kB(NF-kB)和血管内皮生长因子(VEGF)的变化,以及抑制NF-kB活性对碱烧伤大鼠角膜组织新生血管VEGF表达的影响。方法建立大鼠角膜碱烧伤诱发CNV模型,采用裂隙灯、免疫组化等方法,分别检测使用NF-kB活性抑制剂前后VEGF在SD大鼠CNV中的表达情况。结果在正常角膜,VEGF没有表达或在上皮基底膜有微弱表达;在新生血管对照组,角膜全层VEGF表达明显增强;用药组VEGF表达减少。经SPSS软件分析,三组间具有统计学差异。结论抑制NF-kB的表达可降低VEGF的表达。     

角膜碱烧伤大鼠接受多西环素干预后的细胞凋亡情况及角膜和房水中IL-1、TNF-α、HIF-1α的表达

目的:研究多西环素干预对角膜碱烧伤大鼠细胞凋亡情况及角膜和房水中IL-1、TNF-α、HIF-1α表达量的影响。方法:选择雄性SD大鼠作为实验动物,随机分为对照组、碱烧伤组、多西环素组,氢氧化钠滴眼建立角膜碱烧伤模型后给予多西环素滴眼液滴眼干预。造模后14天和28天时,检测角膜中细胞凋亡分子、炎症反应细胞因子、血管新生分子的表达量以及房水中炎症反应细胞因子、血管新生分子的表达量。结果:造模后14天和28天时,碱烧伤组大鼠角膜组织中Bcl-2、PEDF的蛋白表达量显著低于对照组,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、IL-1、TNF-α、HIF-1α、VEGF的蛋白表达量均显著高于对照组;多西环素大鼠角膜组织中Bcl-2、PEDF的蛋白表达量显著高于碱烧伤组,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、IL-1、TNF-α、HIF-1α、VEGF的蛋白表达量均显著低于碱烧伤组。结论:多西环素用于角膜碱烧伤干预能够抑制细胞凋亡、炎症反应及血管新生。     

羊膜细胞培养液对兔角膜重度碱烧伤房水中TNF-α和IL-1的影响

目的探讨羊膜细胞培养液治疗兔眼重度碱烧伤的机制,为临床应用提供理论依据.方法采用中国大白兔72只,随机分成对照组(A组)24只,0.1%地塞米松治疗组(B组)24只,羊膜上皮细胞培养液治疗组(C组)24只.各组动物采用单眼建立角膜碱烧伤模型并分别以0.1%地塞米松液和羊膜细胞提取液对B、C组动物伤眼进行治疗.于伤后1、3、7、14 d活杀动物.每个时段各组分别活杀6只兔,取眼房水检测TNF-α、IL-1的含量与活性.结果各时段B、C治疗组与对照组相比TNF-α、IL-1的活性和含量明显降低(P＜0.01).结论抑制TNF-α和IL-1的生物合成和释放可能是羊膜细胞培养液治疗角膜碱烧伤的机制之一.     

硫酸软骨素在甘油冷冻保存角膜中对内皮细胞活性的影响

目的：探讨硫酸软骨素对甘油长期冷冻保存角膜内皮细胞（CEC）保护作用的机制,并与透明质酸钠进行比较,改进和创新角膜长期保存方法。方法： 60只wistar大鼠角膜片随机分为A、B、C、D四组（A组：对照组;B组：甘油冷冻保存液中加入硫酸软骨素;C组：甘油冷冻保存液中加入透明质酸钠;D组：单纯甘油冷冻保存液）。A组不保存,后三组保存2个月。所有经保存角膜片均行CEC台盼蓝-茜素红活性染色检查,HE染色检查。取40只SD大鼠建立Wistar-SD大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,裂隙灯显微镜观察角膜排斥反应发生情况,测定移植术后不同时间点植片内TNF-α和IFN-γ免疫组化表达水平,检验保存效果。结果：CEC台盼蓝-茜素红活性染色及HE染色检查结果显示,B组与C、D组比较,差异有显著性（P<0.05）;行角膜移植术后,B组和C组较D组出现排斥反应的时间晚、发展慢且反应轻。B组保存效果和角膜移植术后效果均优于C组（P<0.05）,且角膜植片中TNF-α和IFN-γ的免疫组化表达水平低于C组和D组（P<0.05）,接近A组水平（P>0.05）。C、D组间差异有显著性（P<0.05）。结论：甘油冷冻能够保持CEC的活性,硫酸软骨素和透明质酸钠能减少甘油冷冻直接保存时对CEC造成的损害,且硫酸软骨素能进一步增进保存效果。     

肝素抑制碱烧伤后兔角膜新生血管的研究

目的 观察在活体状态下不同浓度肝素对兔角膜新生血管(CNV)的抑制作用,探讨其作用机制是否与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)有关.方法 将20只健康新西兰白兔随机分为4组:对照组与肝素A、B、C组(肝素浓度:A组25 g/L、B组50 g/L、C组100 g/L),每组5只.建立双眼角膜碱烧伤模型后每组每天滴抗生素眼药水,隔天球结膜下注射相应浓度药物,记录角膜新生血管生长情况;28 d后处死并摘除眼球进行碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)免疫组织化学染色.结果 肝素A、B、C组与对照组比较,CNV面积差异均有统计学意义(均P<0.05).肝素A、B、C组间比较,肝素浓度越高,CNV面积越小(P<0.05)、数量越少(P<0.05)、bFGF含量越少)(P<0.05).结论 肝素可以有效抑制碱烧伤后兔CNV的增生,其浓度与其对兔CNV的抑制效果呈正比关系.碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在CNV形成中发挥作用,其含量变化与CNV数量平行.     

VEGF、MVD与角膜新生血管形成关系的实验研究

目的 探讨血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor , VEGF )在大鼠角膜碱烧伤后新生血管形成中的作用.方法 利用氢氧化钠烧灼大鼠角膜表面,建立大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)模型,每日裂隙灯下观察角膜新生血管的发展,并分别于烧伤后1、4、7、14、21d处死大鼠,摘除角膜做病理切片,行微血管密度(Microvessel density,MVD)测定;免疫组化法检测VEGF的表达;图像分析系统测定该因子的蛋白表达.结果 免疫组化显示:VEGF在CNV中的阳性表达逐渐增加,于7 d表达最明显, 21 d后几乎无表达;MVD测定结果以CNV 7～14 d组血管密度最高;图像分析系统结果与免疫组化染色结果一致.结论 碱烧伤后CNV形成中,VEGF的表达增加,CNV中MVD与VEGF的表达呈正相关.     

尼美舒利抑制大鼠角膜新生血管形成的实验研究

目的 观察大鼠角膜新生血管(CNV)形成过程中环氧酶-2(COX-2)和VEGF的表达,探讨结膜下注射环氧酶-2 抑制剂尼美舒利对角膜CNV的抑制作用.方法 HE染色分别观察和计算CNV面积,免疫组织化学方法检测碱烧伤后COX-2,VEGF在角膜中的分布,比较处理组和对照组COX-2,VEGF的表达量,并计算两者的相关性.结果 Ⅰ组和Ⅴ组CNV面积明显高于其它各组(P<0.05).第4和第7天时,Ⅱ组和Ⅳ组CNV面积明显低于其它各组(P<0.05).第4天时,Ⅳ组CNV面积明显低于Ⅱ组(P<0.05).碱烧伤后第7及14天,Ⅱ～Ⅳ组COX-2,VEGF表达量远低于第Ⅴ组.结论 COX-2在角膜CNV形成中表达增加,通过调控VEGF的表达而起重要作用,尼美舒利抑制COX-2的表达,抑制CNV形成.     

多西环素抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管形成

目的探讨多西环素对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用及其机制。方法健康SD大鼠32只,随机分为对照组、多西环素组,每组16只。建立角膜碱烧伤模型后,多西环素组给予0.5%多西环素眼液点眼,对照组给予眼液溶媒点眼。分别于碱烧伤后3、7、14、21 d观察炎症指数、计算角膜新生血管面积;采用酶联免疫吸附试验检测角膜血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果造模后多西环素组各时间点结膜充血、角膜水肿程度较对照组轻微;多西环素组3、7、14 d炎症指数均明显小于对照组(P<0.05);3、7、14、21 d角膜新生血管面积均小于对照组(P<0.05);两组大鼠角膜VEGF表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论多西环素可以减轻碱烧伤大鼠角膜的炎症反应及角膜新生血管形成,其机制可能与抑制炎症反应有关,而与VEGF表达无关联。