β-连环蛋白高表达对人胚肺成纤维细胞前胶原合成的影响

目前公认成纤维细胞是肺纤维化的主要效应细胞,在特发性肺纤维化患者成纤维细胞内存在β-连环蛋白高表达[1].本研究旨在观察β-连环蛋白高表达能否造成成纤维细胞前胶原合成增加及其对肺纤维化的影响.     

Wnt/β-连环蛋白信号转导途径与呼吸系统疾病

Wnt/β-连环蛋白信号转导途径是一条Wnt胞外信号和β-连环蛋白核内信号双重依赖的信号转导通路,在胚胎发育、肿瘤发生和器官纤维化等重要生理及病理过程中发挥重要作用。在呼吸系统,Wnt/β-连环蛋白信号转导途径除参与肺组织的发育外,其各组分的异常也与肿瘤、间质性肺疾病和囊性纤维化等疾病的发生发展有关。从细胞和分子水平理解Wnt/β-连环蛋白信号转导途径,将有助于阐明相关肺部疾病的发病机制,发展诊断和治疗策略。     

Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞迁移的影响

目的探讨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞迁移能力的影响。方法抑制组用浓度为20μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理脑胶质瘤U251细胞,对照组细胞中不加入抑制剂。培养48 h后,噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的存活率,细胞划痕实验检测各组细胞的迁徙率,Transwell小室检测各组细胞迁移的数目,用Western印迹法检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2蛋白的表达水平。结果抑制组细胞存活率、细胞迁移数目、迁徙率和MMP-9、MMP-2蛋白水平与对照组相比明显降低(P<0.01)。抑制组细胞中β-catenin、C-myc水平明显低于对照组(P<0.01)。结论 Wnt/β-catenin信号通路抑制剂能够抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁徙及迁移能力。     

MAPK信号通路在转化生长因子β1诱导心肌成纤维细胞趋化运动中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞趋化运动中可能的作用机制。方法 培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,将细胞随机分为空白对照组、TGF-β1组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制因子(SP600125,10 μmol/L)组、P38MAPK抑制因子(SB203580,10 μmol/L)组、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制因子(U0126,10 μmol/L)组,除空白对照组外,其余组均给与10 μg/L TGF-β1及对应抑制因子处理。MTT比色法测定心肌成纤维细胞增殖活性,Transwell小室检测心肌成纤维细胞运动能力,羟脯氨酸试剂盒检测胶原含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌成纤维细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)水平,Western blot检测成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。结果 TGF-β1可明显促进心肌成纤维细胞增殖活性、趋化运动能力及胶原含量,MAPK信号途径抑制因子干预后能够抑制这种增殖及趋化运动,并降低胶原含量(P＜0.05);ELISA结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的MCP-1、PAI-1水平升高(P＜0.05);Western blot结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的α-SMA、Col-1、MMP-9蛋白表达升高(P＜0.05)。结论 TGF-β可能通过激活MAPK信号通路促进心肌成纤维细胞的趋化运动,通过使用MAPK抑制剂能够一定程度的抑制心肌纤维化。     

Wnt/β-连环蛋白信号通路在心肌肥大中的作用

心肌细胞肥大是许多心血管疾病常见的细胞形态学改变,其表型特征由其核内基因表达模式决定。β-连环蛋白（β-catenin）是细胞连接处钙粘蛋白-连环蛋白（Cadherin/Catenin）复合体的胞内组成部分之一,对维持细胞连接和细胞的正常结构起重要作用。β-连环蛋白也是Wnt信号通路中重要的信号分子,参与细胞的生长、分化、死亡和肿瘤发生等。本文主要阐述了Wnt/β-连环蛋白信号通路在心肌肥大信号转导中的作用及最新研究进展。     

小干扰RNA干扰Wnt/β-连环蛋白信号转导通路抑制肝癌细胞生长

以β-连环蛋白(β-catenin)为中心的Wnt信号转导通路是肿瘤发生、发展过程中关键的信号传导通路之一.本实验应用RNA干扰技术沉默β-连环蛋白基因的表达,研究Wnt/β-连环蛋白信号传导通路对肝癌细胞生长的影响,以进一步揭示肝癌的发病机制,并观察小干扰(si)RNA能否用于肝癌的治疗.     

趋化素在特发性肺纤维化中的表达及其保护作用研究

目的探讨趋化素在特发性肺纤维化(IPF)中的表达及其作用。方法分别使用定量PCR与蛋白质免疫印迹法测定对照与IPF患者肺部组织中趋化素的mRNA及蛋白表达水平, 通过酶联免疫吸附实验检测临床血清样本中趋化素的含量。构建肺纤维化体外模型, 将分离得到的原代成纤维细胞分成对照组、TGF-β组、TGF-β+趋化素组和趋化素组, 使用免疫荧光法检测各组成纤维细胞α-平滑肌蛋白(α-SMA)表达水平。构建肺纤维化体内模型, 采用随机分组法将C57BL/6小鼠分成对照组、博来霉素组、博来霉素+趋化素组和趋化素组, 通过肺组织病理学染色观察各组小鼠肺纤维化严重程度。通过定量PCR与免疫组化染色法分别检测肺纤维化体外与体内模型中上皮间充质转化(EMT)标记基因的表达情况。结果与对照组相比, IPF患者肺组织与血清中趋化素表达量均下调。免疫荧光结果显示, TGF-β组α-SMA表达水平较对照组明显增强, TGF-β+趋化素组中α-SMA表达水平则与对照组相仿。病理学染色结果显示, 博来霉素组小鼠较对照组肺组织纤维化病变明显, 趋化素表达量显著下调;博来霉素+趋化素组小鼠肺组织受损程度则有所缓解。定量PC...     

β-连环蛋白在高糖诱导的内皮细胞损伤中的作用

内皮细胞功能紊乱被认为是高糖诱导血管并发症的始动因素和加重的基础。Wnt/β-连环蛋白信号途径在内皮细胞增生和凋亡的调控上起着重要作用,这条信号通路关键调节靶点是胞浆中β-连环蛋白的水平,它决定了Wnt靶基因的活化水平。当内皮细胞处于高糖环境中,β-连环蛋白减少,Wnt信号减弱,内皮细胞抗凋亡能力下降,增殖受到抑制,从而导致血管并发症。除此以外,在高糖作用下,β-连环蛋白介导的内皮细胞间黏附连接的破坏将导致内皮通透性增高,使蛋白质等大分子物质漏出血管外,同样造成血管功能紊乱。     

特发性肺纤维化中Smurf2对TGF-β1/Smad通路调控机制

特发性肺纤维化是肺间质纤维化的主要原因,为最常见的间质性肺疾病.其主要病理特点为大量成纤维细胞、肌成纤维细胞集聚、增殖.近年来研究表明转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肺纤维化的形成与发展中起关键性作用.Smad蛋白是参与TGF-β1信号细胞内传导的一类信号蛋白,是TGF-β1信号传导重要通路.近年来发现Smad泛素调节因子2(Smad ubiquitination regulatory factor 2,Smurf2)可选择性作用于Smad蛋白,进而调控TGF-β信号传导.本文就特发性肺纤维化中Smurf2对TGF-β1/Smad通路的调控机制作一综述.     

Wnt/β-catenin信号通路与肺纤维化关系的研究进展

肺纤维化是一类慢性进行性呼吸系统疾病,病死率较高,目前尚无根治方法。Wnt/β-catenin信号通路是在进化上高度保守的信号转导通路之一,参与哺乳动物发育,细胞分化、增殖及凋亡等。研究表明,Wnt/β-catenin信号通路在肺纤维化发生发展过程中发挥着重要的调控作用。本文主要综述了Wnt/β-catenin信号通路与肺纤维化的关系。     

与Wnt/β-连环蛋白信号通路相关的长链非编码RNAs的研究进展

Wnt/β-连环蛋白信号通路调节体内多种生理、病理程序,其表观遗传和转录水平的调控异常会导致心血管系统疾病以及肿瘤等的发生。长链非编码RNA能从表观遗传、转录及转录后等多个水平调节与心脏发育、心血管系统疾病及多种肿瘤相关的基因及信号通路。同时研究证实一些长链非编码RNA能与Wnt/β-连环蛋白信号通路形成调节网络参与调控心血管系统疾病的发生及肿瘤的侵袭、迁移。本综述主要总结了近年来与Wnt/β-连环蛋白信号通路相关的长链非编码RNA的研究进展以及这些长链非编码RNA在心血管系统疾病中的作用。     

Wnt/β-catenin信号通路与肝癌发生发展的研究进展

已有研究表明肝癌的发生发展与多种信号通路有关.其中, Wnt配体/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路参与肝脏疾病进展的所有阶段,从最初的肝损伤到炎症、纤维化、肝硬化以及肿瘤的发生及进展均有所参与.异常的Wnt/β-catenin信号会促进包括癌症在内的不同肝脏疾病的发生和进展.在这篇综述中,我们将在介绍Wnt/β-catenin信号通路的激活、生物学功能及调控机制的基础上,讨论Wnt/β-catenin信号通路在肝癌的发生和进展的中的作用,并将对目前小分子抑制剂、中药提取物及微小RNAs(microRNAs,miRNAs)等能够抑制Wnt/β-catenin信号通路的相关因子进行阐述,为肝癌的基础与临床研究提供参考.     

β-连环蛋白在高糖诱导的内皮细胞损伤中的作用

内皮细胞功能紊乱被认为是高糖诱导血管并发症的始动因素和加重的基础。Wnt／β-连环蛋白信号途径在内皮细胞增生和凋亡的调控上起着重要作用，这条信号通路关键调节靶点是胞浆中β-连环蛋白的水平，它决定了Wnt靶基因的活化水平。当内皮细胞处于高糖环境中，β-连环蛋白减少，Wnt信号减弱，内皮细胞抗凋亡能力下降，增殖受到抑制，从而导致血管并发症。除此以外，在高糖作用下，β-连环蛋白介导的内皮细胞间黏附连接的破坏将导致内皮通透性增高，使蛋白质等大分子物质漏出血管外，同样造成血管功能紊乱。     

Wnt／β-catenin信号通路在气道炎症性疾病中的研究进展

Wnt／β-catenin信号通路是一条依赖Wnt细胞外信号和β-连环蛋白（β—catenin）核内信号发挥作用的信号传导通路,在进化上相对保守,在胚胎发育和多种器官的生理、病理过程中发挥着重要作用。     

特发性肺纤维化中肌成纤维细胞来源的研究进展

在特发性肺纤维化发病过程中.肌成纤维细胞是主要效应细胞,具有促进细胞外基质沉积、肺顺应性下降,肺组织结构破坏以及分泌多种炎性细胞因子的功能.因此,研究肌成纤维细胞的来源对于阐明特发性肺纤维化的发病机制以及寻求有效的分子治疗靶点具有非常重要的意义.迄今为止,肌成纤维细胞的来源集中在3个方面:肺内的成纤维细胞、肺组织上皮细胞和骨髓源性细胞或纤维细胞.本文对近年来的相关文献进行整理,加以阐述.     

用RNA干扰慢病毒研究Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响

目的 构建β-连环蛋白特异的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,与辅助包装质粒一起在293 T淋巴细胞中包装并扩增病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度;RNAi慢病毒感染小鼠胰岛β细胞,实时PCR以及Western blot法检测其对β-连环蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi慢病毒抑制β-连环蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测小鼠胰岛β细胞增殖活性.组间比较采用方差分析(ANOVA).结果 成功构建了β-连环蛋白特异的RNAi慢病毒表达载体,获得的慢病毒滴度在5.0×10~8TU/ml左右;RNAi慢病毒在3 d后就能有效感染小鼠胰岛β细胞,5 d后使细胞内β-连环蛋白基因mRNA和相应蛋白的表达受到明显抑制;慢病毒感染小鼠胰岛β细胞后,细胞增殖率明显减少.结论 构建的目的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制β-连环蛋白基因的表达;Wnt/β-连环蛋白信号通路在小鼠胰岛β细胞增殖中有重要影响.     

基于Wnt/PCP通路HSG过表达对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重建的作用机制研究

目的分析细胞增殖抑制基因(HSG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重建的作用及对Wnt/平面细胞极性(PCP)通路的影响。方法取40只SD大鼠气道内注射脂多糖联合烟熏法,建立COPD模型,随机分为模型组、过表达组、空载组、Wnt/PCP抑制组,每组10只。另取10只健康大鼠为对照组。对比各组肺功能指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中PDGF、TGF-β1、MMP-9水平;HE染色观察肺组织病理变化;组织块贴壁法培养大鼠气道成纤维细胞;实时荧光定量PCR及Western blot检测各组成纤维细胞HSG、Wnt、RhoA、JNK mRNA及蛋白表达情况。结果 HSG过表达后,与模型组和空载组比较,过表达组气道阻力减小,肺顺应性、PEF升高,PDGF、TGF-β1、MMP-9水平降低(P0.05),与Wnt/PCP抑制组比较差异无统计学意义(P0.05)。HE染色显示,过表达组病理改变较模型组与空载组轻,与Wnt/PCP抑制组相当。与模型组、空载组和Wnt/PCP抑制组比较,过表达组成纤维细胞中HSG mRNA及蛋白相对表达量升高(P0.05);与模型组、空载组比较,过表达组Wnt7a、RhoA mRNA和蛋白相对表达量及p-JNK/JNK降低(P0.05),与Wnt/PCP抑制组比较升高(P0.05)。结论 HSG过表达可改善COPD大鼠肺功能,延缓病理变化,抑制气道重建,其机制可能与抑制Wnt/PCP通路的激活有关。     

上皮-间质转化及其在肺间质纤维化作用的研究进展

上皮-间质转化是指上皮细胞失去其特性获得间质表型的过程.肺泡上皮细胞向间质细胞转化是成纤维细胞的重要来源.肺纤维化以成纤维细胞增生和细胞外基质沉积为特征,是多种间质性肺疾病共同的结果.转化生长因子β是最强的致纤维化因子,介导多条信号转导途径参与纤维化的发生发展.因此,研究上皮-间质转化及其在肺间质纤维化的作用和信号通路具有重要的意义.     

诱导型一氧化氮合酶参与白细胞介素-1β对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2作用的实验研究

目的 观察白细胞介素-1β(IL-1β)对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的作用及相关机制.方法 将3～6代人心脏成纤维细胞接种于6孔培养板内接受各种干预措施.待实验细胞接受刺激12 h后,用RT-PCR法观察MMP-2的mRNA表达量.细胞接受各种刺激24 h后,收集细胞总蛋白和培养上清,通过凝胶酶谱法进行上清MMP-2的活性检测,采用Western blot法测定细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达,采用Griess法衡量细胞上清中一氧化氮(NO)水平.结果 IL-1B作用人心脏成纤维细胞24 h后,促进了细胞MMP-2的活性增加,其中4 ng/ml的IL-1β刺激作用达到高峰,与对照组相比活性增加了(170.24±13.12)%(P＜0.01),并且该浓度IL-1β能时间依赖性地促进心脏成纤维细胞MMP-2的活性增加.IL-1β作用心脏成纤维细胞12 h后,与正常对照组相比4 ng/ml和10 ng/ml IL-β组MMP-2 mRNA表达明显增加(P＜0.01).IL-1β(4 ng/ml)可以明显促进细胞NO水平升高(P＜0.01),而NOS抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(10-3 mol/L)显著抑制了IL-1β诱导的MMP-2 mRNA表达(P＜0.01)、MMP-2活性(P＜0.01)以及NO水平的升高(P＜0.01).通过Western blot发现在生理水平的心脏成纤维细胞上未能检测到iNOS蛋白的表达,而不同浓度的IL-1β明显促进了细胞iNOS的蛋白水平的升高.结论 IL-1β能促进人心脏成纤维细胞MMP-2的mRNA表达和活性,并提示其作用与细胞iNOS-NO水平有关.     

β连环蛋白在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制研究

目的探讨肝硬化大鼠心肌中的β连环蛋白(β-catenin)表达,以阐明β-catenin在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制。方法建立肝硬化大鼠模型,通过模型组和对照组比较,免疫组化法检测各组心肌组织中β-catenin表达水平; Western blot检测大鼠心肌中的β-catenin和Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP-1)表达差异。结果模型组体重增长较慢,且小于对照组。免疫组化及Western blot结果显示对照组β-catenin蛋白的表达水平低,肝硬化模型组β-catenin蛋白的表达水平高,二者比较差异有统计学意义(P 0. 01)。结论 Wnt/β-catenin(Wnt/β-连环蛋白)信号通路参与肝硬化所致心肌肥厚的病理过程。