miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2增殖

目的检测miR-129对鼻咽癌细胞系CNE2细胞生物学功能的影响。方法人工合成miR-129模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),转染至鼻咽癌CNE2细胞中,RT-qPCR检测细胞miR-129表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果与对照组相比,转染miR-129 mimics组的miR-129表达水平明显升高(P0.05);转染miR-129 inhibitor组的miR-129表达水平均明显降低(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 mimics组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著下降(P0.05),凋亡显著增多(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 inhibitor组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著升高(P0.05),凋亡显著下降(P0.05)。结论 miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。     

STC2 基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞生物学特性的影响研究

目的:探讨斯钙素鄄2(STC2)基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法: RT鄄PCR 及Western blot 分别检测乳腺癌组织中STC2 基因的mRNA 及蛋白表达,并分析其与病理特征的关系;将STC2-siRNA 转染人乳腺癌MCF-7 细胞,另设空白对照组(Control)和阴性对照组(NC-siRNA),转染48 h 后,Western blot 检测各组细胞中 STC2、ki67、细胞周期素(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Notch1、Hes1 蛋白表达; CCK8 检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:STC2 基因在乳腺癌中的mRNA 及蛋白表达均显著高于癌旁组 织(P<0.05);STC2 基因表达与乳腺癌患者年龄、组织学分级及是否发生转移无关(P>0郾05),与病理分期、肿瘤大小相关(P< 0.05);NC-siRNA 组STC2 的蛋白表达与Control 组差异无统计学意义(P>0.05),STC2鄄siRNA 组STC2 的蛋白表达显著低于 Control 组(P<0.05);STC2鄄siRNA 组细胞存活率、S 期和G2/ M 细胞及ki67、cyclin D1、Notch1、Hes1 蛋白表达显著低于Control 组,细胞凋亡率、G0/ G1 期细胞及Cleaved caspase3 蛋白表达显著高于Control 组(P<0.05)。结论:STC2 基因在乳腺癌中高表 达,其表达与病理分期和肿瘤大小相关,抑制其表达可降低癌细胞的增殖,阻滞细胞于G1 期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调 ki67、cyclin D1 和上调Cleaved caspase3 表达及下调Notch1 信号通路有关。     

miR-342-3p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及可能机制

目的探讨Aβ1-42对小鼠巨噬细胞RAW264.7向炎症性细胞转变的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2、HNE-1、5-8F、HONE-1中miR-342-3p的表达水平。采用脂质体介导法向CNE-2细胞转染miR-342-3p模拟物记为miR-342-3p mimic组,转染模拟物对照的CNE-2细胞记为NC组,不行转染的CNE-2细胞记为Control组。以qRT-PCR检测转染效果,四甲基偶氮唑盐(MTT)法和克隆形成实验检测转染对细胞增殖的影响,Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染色法检测转染对细胞凋亡的影响,Western blot检测细胞中caspase-3、Ki-67及NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果与鼻咽上皮细胞NP69相比,miR-342-3p在鼻咽癌细胞中的表达水平显著降低。与Control组和NC组相比,miR-342-3p mimic组细胞miR-342-3p的表达水平显著升高,细胞OD值明显降低,克隆形成率显著下降,凋亡显著升高(P0.05),细胞中caspase-3激活水平升高,Ki-67、p-IKKα、p-IKKβ蛋白水平降低(P0.05)。结论 miR-342-3p在鼻咽癌细胞中呈低表达,上调鼻咽癌CNE-2细胞中miR-342-3p的表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用与抑制NF-κB信号通路的激活相关。     

UNC5A基因过表达对膀胱癌T24细胞增殖、转移的影响及其机制探讨

【摘要】　目的　探究UNC5A 基因过表达对膀胱癌T24 细胞增殖、转移及Wnt/ β-catenin 信号通路的影响。方法　选取T24 细胞, 转染UNC5A-pcDNA 和pcDNA-NC, 将细胞随机分为Control 组、pcDNA-NC 组和UNC5A-pcDNA 组。RT-PCR 检测UNC5A mRNA 表达水平; 克隆形成实验检测细胞克隆形成率; 流式细胞术检测细胞凋亡率; Transwell 检测细胞侵袭细胞数; Western 印迹检测UNC5A、Wnt1、β-catenin 蛋白表达水平; 加入Wnt/ β-catenin 信号通路激活剂LiCl 检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭情况。结果　与Control 组比较, UNC5A-pcDNA 组UNC5A mRNA 和蛋白表达水平升高(P< 0. 05), 克隆形成率降低(P< 0. 05), 细胞凋亡率升高(P<0. 05), 侵袭细胞数降低(P<0. 05), Wnt1、β-catenin 蛋白表达水平降低(P< 0. 05)。加入Wnt/ β-catenin 信号通路激活剂LiCl 则能逆转过表达UNC5A 对T24 细胞增殖、侵袭的抑制作用, 凋亡促进作用。结论UNC5A 基因过表达可能通过抑制Wnt/ β-catenin 信号通路的活化抑制T24 细胞增殖、侵袭, 并诱导细胞凋亡。     

端粒酶RNA反义核酸降低鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平

目的:研究端粒酶活性抑制后鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平的变化。方法:脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化法检测端粒酶逆转录酶(hTRT)和p53蛋白表达水平。结果:端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量依赖性,流式细胞仪检测出现凋亡峰,反义寡核苷酸组hTRT和p53蛋白表达水平显著低于其它处理组及空白对照组(P＜0.01)。结论:端粒酶RNA反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性后可降低p53蛋白表达水平。     

PKM2对鼻咽癌细胞增殖凋亡糖酵解及ROS水平影响

目的探讨PKM2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、糖酵解及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法检测鼻咽上皮细胞(NP69)和鼻咽癌细胞(CNE-1、5-8F、HONE-1)中PKM2的表达水平。HONE-1细胞转染PKM2 siRNA1、PKM2siRNA2,采用RT-qPCR和Western blot检测干扰效果。细胞增殖、凋亡及细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,同时检测细胞ROS水平、HK活性、ATP含量和培养液上清中乳酸含量。结果鼻咽癌细胞中PKM2表达水平高于NP69细胞,且HONE-1细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平最高,选用HONE-1细胞继续研究。转染PKM2 siRNA1、PKM2 siRNA2后均能够下调HONE-1细胞中PKM2水平,且PKM2 siRNA2下调效果较好。转染PKM2 siRNA2后的细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3水平、Cleaved Caspase-9水平、ROS水平明显升高,而细胞增殖活性、HK活性、ATP含量和上清液中乳酸含量明显降低(P 0. 05)。结论下调鼻咽癌细胞中PKM2表达可以抑制鼻咽癌细胞糖酵解和增殖,诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

过表达泛素偶联酶E2C对293T细胞增殖的影响

目的:构建稳定过表达人类泛素偶联酶E2C(UBE2C)的293T人胚肾细胞株,初步探讨其对293T细胞增殖的影响。方法:采用脂质体法将已成功构建的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒转入293T人胚肾细胞株中,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株;用Western blot技术检测并鉴定UBE2C基因在293T细胞中的表达情况;用MTT法检测UBE2C对293T细胞增殖的影响。结果:Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的UBE2C蛋白表达水平明显高于转pcDNA3.1(-)组(P<0.01)。MTT法检测结果显示转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的增殖速度明显快于转pcDNA3.1(-)组(P<0.01)。结论:成功建立稳定过表达UBE2C的293T细胞株,过表达UBE2C可促进293T细胞的增殖。     

miR-346 在鼻咽癌中的表达及生物学功能

目的:探讨miR-346 在鼻咽癌中的表达及在鼻咽癌中的生物学功能。方法:收集63 例鼻咽癌组织以及34 例 鼻咽部非癌组织标本,Real-time PCR 检测组织和6 株人鼻咽癌细胞系及1 株人正常鼻咽部永生化上皮细胞株NP69 中miR- 346 表达量,选取人鼻咽癌细胞系中表达量居中的两种细胞系,并转染miR-346 inhibitor,设置对照组(NC 组)并转染阴性对照 质粒,Real-time PCR 检测两种细胞系转染miR鄄346 inhibitor 和对照组miR鄄346 表达量,细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA 和 流式细胞术检测,Transwell 小室实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与鼻咽非癌组织比较,鼻咽癌组织中miR-346 表达量显著升 高(P =0.000);以正常人鼻咽部上皮细胞NP69 比较,各鼻咽癌细胞株中miR-346 相对表达量均显著升高,差异有统计学意义 (P<0.05)。选择6 种鼻咽癌细胞株中miR-346 表达量居中的两种,分别为CNE-1 和CNE-2,转染miR-346 inhibitor 后,两种鼻 咽癌细胞株miR-346 相对表达量均显著降低,与NC 组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两种鼻咽癌细胞转染miR-346 inhibitor 下调miR-346 表达后鼻咽癌细胞的增殖受到抑制,均在转染第3 天差异具有统计学意义(P<0.05)。下调miR-346 表 达后鼻咽癌细胞CNE-1 和CNE-2 的凋亡显著增加,迁移细胞数和侵袭细胞数显著降低,与NC 组比较差异均有统计学意义 (P<0.05)。结论:miR-346 在鼻咽癌中高表达,下调miR-346 表达会抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,miR-346 可 能作为一种癌基因在鼻咽癌的发生和发展中发挥重要的作用。     

HMG-CoA2裂解酶在鼻咽癌组织中表达及其对鼻咽癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的探讨HMG-CoA2裂解酶(HMGCL)在鼻咽癌(NPC)组织中表达及其过表达对鼻咽癌细胞行为学的影响。方法 Western blot检测64例鼻咽癌组织和42例正常鼻咽上皮组织(NNE)及5个NPC细胞系(HK-1、CNE1、CNE2、HONE1和HNE-1)和正常鼻咽上皮细胞NP69中HMGCL表达水平;以HK-1细胞为研究对象,构建过表达HMGCL的细胞株;MTT法、集落形成实验、Transwell实验分别检测过表达HMGCL后HK-1细胞增殖、集落形成和迁移侵袭能力。结果 HMGCL在NPC和NPC细胞系中普遍低表达(P0.05),在NNE和NP69细胞中普遍高表达(P0.05);成功构建了过表达HMGCL的HK-1细胞株,过表达HMGCL后HK-1细胞增殖、集落形成和迁移侵袭能力均显著降低(P0.05)。结论 HMGCL在鼻咽癌组织中低表达可能与鼻咽癌细胞恶性表型有关,为将来寻找抑制鼻咽癌发生进展提供了新的靶标。     

靶向PCNA基因的小干扰RNA对鼻咽癌CNE2细胞周期的影响

目的： 研究小干扰RNA抑制PCNA基因表达后对鼻咽癌CNE2细胞株增殖及细胞周期的影响。方法: 利用体外合成法合成针对PCNA基因的小干扰RNA(siRNA)序列,应用脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞,实时定量PCR(real-time PCR) 和免疫组织化学法观察siRNA干扰后细胞中PCNA mRNA水平和PCNA蛋白表达,倒置相差显微镜观察转染前后CNE2细胞的生长变化,流式细胞仪检测siRNA干扰后的细胞周期。结果: 在siRNA转染CNE2细胞后,细胞增殖受到抑制,蛋白表达不同程度降低,对PCNA mRNA水平的抑制达98.5%,细胞周期在G0/G1停滞。结论: siRNA可在鼻咽癌中有效发挥RNA干扰效应,抑制PCNA mRNA及蛋白表达,降低PCNA活性,抑制鼻咽癌细胞增殖,为鼻咽癌基因治疗提供了新的方法。     

重组Ad-Cp-CDglyTK双自杀基因腺病毒载体构建及体外抑制鼻咽癌细胞的实验研究

目的：构建含EB病毒Cp启动子的CDglyTK双自杀基因靶向腺病毒载体 Ad-Cp-CDglyTK，探讨Cp启动子能否特异性调控自杀基因在转染鼻咽癌细胞中表达及靶向性治疗鼻咽癌的可行性。方法：采用pDC316穿梭质粒系统，高保真PCR扩增tk、 cd、 Cp等基因序列，采用定向克隆方法构建含Cp启动子的双自杀基因pDC316-CP-CDglyTK重组质粒，经DNA测序、酶切法鉴定所构建质粒，在293细胞中进行重组腺病毒Ad-Cp-CDglyTK包装、扩增、纯化与病毒滴度测定，体外转染鼻咽癌细胞株CNE1与正常鼻咽NP69细胞株，RT-PCR法检测转染细胞中CDglyTK基因的表达，MTT法观察Ad-Cp-CDglyTK/GCV+5-FC系统对CNE1细胞株的体外杀伤作用。结果： 经DNA测序、限制性酶切法分析显示pDC316-Cp-CDglyTK含完整正确的tk、cd、Cp基因序列，在293细胞中包装扩增后病毒滴度为5.6×1012 TCID50/L，体外转染鼻咽癌CNE1细胞株与正常鼻咽NP69细胞株后，采用RT-PCR法从CNE1细胞株总RNA中扩出Cp片段，而NP69细胞株未检测到相应基因mRNA表达，MTT结果显示经前体药物处理转染后CNE1细胞株与NP69细胞株，5-FC+GCV联合用药较单一前体药物对CNE1细胞具有更强的抑制作用（P＜0.05），联合用药对NP69细胞株未见明显杀伤作用。结论： Cp启动子可以特异性调控CDglyTK融合自杀基因在鼻咽癌细胞株(CNE1)中表达，融合自杀基因/前药系统较单一基因对鼻咽癌细胞具有更强的杀伤作用。     

汉防己甲素对人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞株的放疗增敏作用

目的:探讨最大非毒性剂量汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放疗增敏机制。方法:分别采用最大非毒性剂量Tet(对CNE1细胞为1.5μmol/L;对CNE2细胞为1.8μmol/L)、4 Gy放疗和最大非毒性剂量Tet联合放疗处理CNE1和CNE2细胞;流式细胞术检测各组细胞周期分布,Western blot检测各组细胞γ-H2AX、cleaved caspase-3、p-CDC25C、CDK1、p-CDK1、cyclin B1、ERK和p-ERK的蛋白水平。结果:最大非毒性剂量Tet联合放疗后可上调CNE1和CNE2细胞中γ-H2AX的表达。放疗组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例分别为(18.09±0.42)%和(18.48±1.32)%,联合处理组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例降为(15.88±1.04)%和(13.80±0.82)%,与放疗组比较差异有统计学意义(P0.05)。联合处理可增加放疗所致的cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05)。不同浓度Tet处理CNE1和CNE2细胞后,p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平随Tet浓度增加而升高(P0.05),CDK1的表达无明显改变;最大非毒性剂量Tet不影响p-CDC25C、p-CDK1和CDK1的蛋白水平。在CNE1和CNE2细胞中,联合处理可明显降低放疗引起的p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平(P0.05),上调放疗后cyclin B1的表达,而对总CDK1的表达无明显调节作用;联合处理可显著抑制放疗所致的pERK蛋白水平(P0.05)。结论:最大非毒性剂量Tet可以增加放疗引起的CNE1和CNE2细胞的DNA断裂及细胞凋亡,其放疗增敏的机制可能与Tet调控ERK/CDC25C/CDK1/cyclin B1通路、去除放疗导致的G2/M期阻滞有关。     

TPX2对人肺癌细胞增殖、凋亡及cleavedcaspase-3表达的影响

目的 探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对人肺癌细胞增殖、凋亡及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达影响。方法 培养人肺癌细胞A549,分为Control组(不进行细胞转染)、siRNA-NC组(细胞转染TPX2 siRNA control)、TPX2 siRNA组(细胞转染TPX2 siRNA),采用实时荧光定量PCR (qPCR)和Western blot检测TPX2 siRNA的转染效果。取转染后各组细胞,采用噻唑蓝检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 TPX2 siRNA组中,TPX2 mRNA、蛋白水平和细胞光密度(OD)值均明显低于Control组和siRNA-NC组,细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显高于Control组和siRNA-NC组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而siRNA-NC组中,TPX2 mRNA、蛋白水平及细胞OD值、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3与Control组比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。结论TPX2 siRNA能够干扰人肺癌细胞A549中TPX2的表达。下调TPX2的表达能够抑制人肺癌细胞A549增殖,促进caspase-3活化,促进人肺癌细胞A549的凋亡。     

PHB 对高糖环境下的心肌细胞中活性氧及细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨抗增殖蛋白(PHB)对高糖诱导的H9C2 心肌细胞凋亡的影响以及机制研究。方法:选取pCDNA3-PHB、pCDNA3-NC 重组质粒转染和高糖干预心肌细胞,实验分为4 组:正常对照组(Control 组)、高糖刺激组(HG 组)、高糖+空载体组(HG+pCDNA3-NC 组)、高糖加pCDNA3-PHB 重组质粒组(HG+pCDNA3-PHB);Western blot 检测细胞转染后各组细胞中PHB 蛋白、B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2 相关X 蛋白(Bax) / B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bcl-2)、剪切的半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(c-caspase3)、蛋白激酶B(AKt)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKt)蛋白的表达量,二氢乙啶(DHE)染色法检测高糖环境下心肌细胞内的活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中TNF-αmRNA 和IL-6 mRNA 含量的测定,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:pCDNA3-PHB 重组质粒可使PHB 表达量增加;与Control 组相比,HG 组、HG+pCDNA3-NC 组、HG+pCDNA3-PHB 组细胞凋亡率显著增高(P<0.05);与HG 组相比,HG+pCDNA3-NC 组细胞凋亡率变化不显著(P>0.05); HG+pCDNA3-PHB 组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与Control 组相比,HG 组HG+pCDNA3-NC 组、HG+pCDNA3-PHB 组细胞内ROS 的水平、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、Bax/ Bcl-2 的相对表达量、c-caspase3(P<0.05)蛋白相对表达量显著增高;与HG组相比,HG+pCDNA3-NC 组细胞内ROS 的水平( P>0.05)、TNF-αmRNA(P<0.05)、IL-6 mRNA(P<0.05)、Bax/ Bcl-2 的相对表达量(P>0.05)、c-caspase3 蛋白相对表达量(P>0.05)无明显差异;但pCDNA3-PHB 组细胞中ROS 的水平(P<0.05)、TNF-琢mRNA(P<0.05)、IL-6 mRNA(P<0.05)、Bax/ Bcl-2 的相对表达量(P<0.05)、c-caspase3(P<0.05)蛋白相对表达量明显降低。经统计分析显示,各组细胞中AKt 蛋白的相对表达量无显著差异(P>0.05)。经比较后,HG 组、HG+pCDNA3-NC 组、HG+pCDNA3-PHB 组心肌细胞中p-AKt 蛋白的相对表达量显著低于Control 组(P<0.05);HG+pCDNA3-NC 组心肌细胞中p-AKt 蛋白的相对表达量与HG 组间无显著差异(P>0.05);但HG+pCDNA3-PHB 组心肌细胞中p-AKt 蛋白的相对表达量明显高于HG组(P<0.05)。结论:PHB 过表达可抑制高糖环境下H9C2 心肌细胞的凋亡和炎症反应,主要是通过调控PI3K/ Akt 信号通路、ROS、Bax/ Bcl-2、c-caspase3 蛋白的水平,为糖尿病心肌病的治疗提供新的思路与方法。     

苹果多糖抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨苹果多糖(AP)对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法采用水提-醇沉-酸降解的方法获得AP。培养CNE2细胞,采用(0.0、 0.25、 0.5、 1.0)mg/mL AP处理。CCK-8法观察AP对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测CNE2细胞KI-67抗原(ki67)的表达,Western blot法检测CNE2细胞凋亡相关蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 c-caspase-8、 c-caspase-9、 BAX和Bcl2的蛋白水平。结果提取得到的AP相对分子质量(M_r)为5000～15 000; AP可显著抑制CEN2细胞的增殖、诱导其凋亡; AP处理后,CEN2细胞的c-caspase-3、 c-caspase-9和BAX蛋白水平增加、 Bcl2蛋白水平降低,具有一定的剂量依赖性。结论 AP可明显抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖、诱导其凋亡,可能通过线粒体和死亡受体途径发挥作用。     

RNA干扰环指蛋白2基因抑制胰腺癌细胞系PANC-1增殖和迁移

目的研究沉默环指蛋白2(RNF2)基因对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖、迁移、周期和凋亡的影响及可能机制。方法用siRNA-RNF2转染PANC-1细胞沉默RNF2表达,同时设立转染无义序列(siRNA-NC)的空转染组及不进行任何处理的空白对照组(mock)。荧光定量PCR检测RNF2 mRNA表达;Western blot检测RNF2和p53表达;MTS实验和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力;流式细胞计量术检测细胞转染率、凋亡率和细胞周期。结果相比正常胰腺导管上皮细胞,RNF2在胰腺癌细胞系中高表达(P<0.05)。转染siRNA-RNF2的PANC-1细胞与阴性对照组比较,RNF2 mRNA及蛋白表达下调;细胞增殖被抑制(P<0.05);细胞迁移能力下降(P<0.05);细胞凋亡率增高(P<0.05);G_0/G_1期细胞比例上升,S期和G2/M期细胞比例则降低(P<0.05)。此外,转染siRNA-RNF2显著下调PANC-1细胞中p53蛋白的表达。结论 siRNA-RNF2特异性下调胰腺癌细胞RNF2表达,显著抑制细胞增殖和迁移,结果提示RNF2可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。     

miRNA-7介导Bax和Bcl-2表达对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响

 目的:研究过表达微小RNA-7(microRNA-7,miRNA-7)诱导人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)CNE-1细胞凋亡及其与Bax和Bcl-2表达之间的关联情况。方法:体外利用脂质体Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染到人鼻咽癌CNE-1细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各实验组细胞中miRNA-7的相对表达情况;CCK-8法检测各组细胞活力的改变;在荧光显微镜下利用Hoechst 33258荧光染色法观察转染后细胞的凋亡;real-time PCR法检测Bax和Bcl-2的mRNA表达水平;Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果:Real-time PCR结果表明,转染miRNA-7模拟物的CNE-1细胞中其miRNA-7的相对表达水平明显高于无关序列组和空白对照组(P<0.01);转染miRNA-7模拟物后,CNE-1细胞的活力明显下降(P<0.01);Hoechst 33258染色检测可发现典型的凋亡细胞核形态学变化;real-time PCR及Western blot结果显示,转染miRNA-7模拟物的CNE-1细胞中Bax的mRNA及蛋白显著上调(P<0.01),而Bcl-2的mRNA及蛋白则显著下调(P<0.01)。结论:过表达miRNA-7可以通过调节Bax/Bcl-2之间的比例关系来抑制鼻咽癌CNE-1细胞的恶性生长,并促进细胞凋亡。     

TRIM31 过表达改善脂多糖诱导下神经细胞的炎症损伤

目的:探讨E3泛素连接酶31(TRIM31)对LPS诱导PC12细胞炎症性损伤的保护作用和机制。方法:用不同浓度LPS处理PC12细胞24 h,MTT法检测细胞增殖活性,Western blot检测LPS最佳浓度处理后PC12细胞TRIM蛋白表达水平。将TRIM31过表达质粒(pcDNA3.1-TRIM31)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC)转染至PC12细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平。PC12细胞分为对照组(Control)、LPS组、LPS+NC组和LPS+TRIM31组,分组干预后,ELISA检测细胞上清IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光检测NLRP3蛋白表达,qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1 mRNA表达,Western blot检测NLRP3、caspase-1、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:LPS剂量增加,PC12细胞增殖活性逐渐降低(P0.05),LPS处理可降低PC12细胞TRIM31蛋白表达水平(P0.01),TRIM31过表达,PC12细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05)。与Control组相比,LPS组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著提高(P0.05),Bcl-2和TRIM31蛋白水平显著降低(P0.05),NLRP3蛋白荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05);与LPS组相比,LPS+TRIM31组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著提高(P0.05),NLRP3荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:过表达TRIM31能通过抑制NLRP3炎症小体活化,改善LPS诱导的PC12细胞炎症损伤。     

EFNB2对膀胱癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制

目的 研究EFNB2对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学功能的影响，探讨其作为免疫治疗的可能性。方法 以膀胱癌细胞系T24、5637、J82和UM-UC-3细胞为研究对象，选用人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1细胞作为阴性对照。通过慢病毒载体转染shRNA-EFNB2进行敲低实验，然后分别采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中EFNB2的mRNA和蛋白表达水平；CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖活力；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率；Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力；Western blot检测Bcl2、Bax、Vimentin和E-cadherin的蛋白表达水平。结果 与人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1细胞相比，膀胱癌细胞系中EFNB2的表达水平显著增高,其中以T24细胞表达最高(P<0.01)。敲低T24细胞系EFNB2基因表达后，T24细胞增殖活力显著下降(P<0.05)；细胞周期虽然尚未有显著变化，但细胞凋亡率显著增高(P<0.05)，并且抗凋亡蛋白Bcl2表达显著下降（P<0.05）,促凋亡蛋白B...     

瞬时受体电位通道M8调控NCR1/NKP46通路抑制胶质瘤细胞免疫逃逸的作用研究北大核心CSCD

目的:探讨瞬时受体电位通道M8(TRPM8)对胶质瘤细胞免疫逃逸的影响,并初步探究可能的作用机制。方法:通过实时荧光定量PCR法检测人正常胶质细胞株(SVGp12)与3种胶质瘤细胞株(U251、U373、T98G)中TRPM8基因表达;将U251细胞随机分为空白对照组、TRPM8-siRNA组、NC-siRNA组、pcDNA3.1-TRPM8组和pcDNA3.1-NC组,利用脂质体分别将TRPM8-siRNA、NC-siRNA、pcDNA3.1-TRPM8和pcDNA3.1-NC转染至U251细胞中,采用实时荧光定量PCR法和Western blot检测细胞中TRPM8基因和蛋白表达,CCK-8法、集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖、克隆形成及凋亡情况,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK92细胞对U251细胞的杀伤作用,ELISA法检测TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ水平,流式细胞术、Western blot检测细胞调节区域因子1(NCR1)与自然杀伤因子蛋白46(NKP46)的表达。结果:3种胶质瘤细胞株U251、U373、T98G中TRPM8 mRNA表达水平均显著高于正常胶质细胞株SVGp12,其中U251细胞最高;与空白对照组相比,TRPM8-siRNA组TRPM8 mRNA和蛋白的相对表达量均下调(P<0.01),细胞活性下降(P<0.05),细胞克隆形成数目减少(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01),NK92细胞对U251细胞的杀伤率提高(P<0.01),细胞上清液中TNF-α、IL-2、IL-6及IFN-γ水平均下降(P<0.01),同时,NCR1、NKP46表达也明显增加(P<0.01);与空白对照组相比,pcDNA3.1-TRPM8组TRPM8 mRNA和蛋白的相对表达量均上调(P<0.01),细胞活性升高(P<0.05),细胞克隆形成数目增加而凋亡率下降(P<0.01),NK92细胞对U251细胞的杀伤率下降(P<0.01),细胞上清液中TNF-α、IL-2、IL-6及IFN-γ水平均升高(P<0.01),NCR1、NKP46表达减少(P<0.01)。结论:抑制TRPM8表达能够调控胶质瘤微环境中免疫抑制状态,增强NK92细胞杀伤U251细胞的能力,削弱肿瘤细胞的免疫逃逸能力,这可能与调控NCR1/NKP46通路相关。