杞菊地黄汤改善实验性大鼠视网膜变性的作用观察

目的:观察杞菊地黄汤对实验性视网膜变性大鼠的治疗作用。方法:将生后45 d的SD大鼠分为正常组、模型组和杞菊地黄汤组。中药组大鼠ig杞菊地黄汤8.3 g.kg-1(15 mL.kg-1),模型组ig等体积生理盐水。两组动物均于生后47 d开始ig,每天1次,直至动物处死。生后50 d以N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)ip造成视网膜变性模型,预定时间行闪光视网膜电图(flash electroretinograms,FERG)检测,造模后2,5 d时分批处死动物,取右眼行病理切片,分别以TUNEL法检测视网膜外核层细胞的凋亡、HE染色检测视网膜外核层的厚度。结果:ig杞菊地黄汤8.3 g.kg-1组大鼠FERG消失时间较模型对照组明显延迟;造模后2 d,其外核层细胞凋亡指数(50.8±7.3)%低于同期模型组大鼠(81.1±9.7)%(P<0.01);造模后5 d,其视网膜外核层厚度(71±27)μm大于同期模型组大鼠(22±10)μm(P<0.01)。结论:杞菊地黄汤对MNU诱导的光感受器细胞凋亡有保护作用。     

针刺对N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜变性的影响

目的:观察针刺对N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜变性视网膜的保护作用。方法:N-甲基-N-亚硝脲以50 mg/kg剂量腹腔注射于7周龄的SD大鼠诱导视网膜变性,然后随机分为针刺治疗组、模型对照组,观察针刺治疗7 d后两组大鼠视网膜的形态学变化,并与同一时间点的正常组进行比较。结果:N-甲基-N-亚硝脲引起的大鼠视网膜变性明显,针刺组大鼠全视网膜外核层的损伤程度轻于模型组,外核层光感受器细胞的核固缩、深染以及光感受器的内、外节的损伤均轻于模型组。结论:针刺能够抑制N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜光感受器细胞的病理损伤。     

四种补益药方对光感受器细胞凋亡大鼠的治疗观察

目的观察临床常用的4种补益方剂对N-甲基-N-亚硝脲（MNU）诱导的光感受器细胞凋亡的影响。方法SD大鼠分为正常组、模型对照组、四物汤组、杞菊地黄汤组、四君子汤组和肾气丸组。TUNEL法检测光感受器细胞的凋亡，常规HE染色测量视网膜外核层的厚度。结果与模型对照组相比，四君子汤和肾气丸组大鼠在细胞凋亡和外核层厚度方面无差异，而四物汤和杞菊地黄汤组大鼠光感受器细胞凋亡百分率有不同程度下降，同时外核层厚度显著增厚。结论四物汤和杞菊地黄汤能抑制MNU诱导的光感受器细胞凋亡，且杞菊地黄汤疗效优于四物汤。     

杞菊地黄汤对视网膜变性大鼠半胱氨酸 天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的:观察杞菊地黄汤对实验性视网膜变性大鼠的治疗机制.方法:将生后45 d的SD大鼠分为正常组、模型对照组和杞菊地黄汤组,正常组不做处理,生后47 d中药组大鼠灌服杞菊地黄汤8.3 g·kg-1(15 mL·kg-1),模型对照组同时灌服等体积生理盐水,生后50 d ip N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)40 mg,kg-1造成视网膜变性模型,正常组第55天处死,后2组大鼠分别按造模后12 h,1,2,3,5d处死,应用免疫组织化学法检测视网膜中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3( Caspase-3)的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测视网膜中Caspase-3的含量.结果:免疫组织化学和实时荧光定量RT-PCR法均显示模型对照组大鼠视网膜Caspase-3阳性表达在MNU处理后渐升高,第2天达顶峰,第5天有所下降;杞菊地黄汤组大鼠视网膜Caspase-3阳性表达第3天才达顶峰,且高峰值低于模型组.结论:杞菊地黄汤能延缓MNU ip所导致的大鼠视功能损害,其治疗机制与降低视网膜中Caspase-3的表达,从而抑制光感受器细胞的凋亡有关.     

黄芪抗MNU致大鼠视网膜损伤的作用

目的观察黄芪注射液对N甲基N亚硝脲(MNU)诱导SD大鼠视网膜光感受器细胞凋亡的保护作用。方法将出生后47d的♀SD大鼠随机分为正常对照组、模型组及黄芪3个剂量组,腹腔注射给予生理盐水或黄芪,每日1次,并于给药第4日腹腔注射MNU60mg·kg-1,然后分别于不同时间摘取动物眼球。形态学分析测量视网膜的总厚度;TUNEL法和转录因子分析检测光感受器细胞凋亡和胞核内NFkBp65活性。结果黄芪注射液可显著增加周边视网膜总厚度、降低MNU引起的光感受器细胞凋亡指数,并增加视网膜组织细胞胞核内NFkBp65的活性。结论黄芪注射液对MNU引起的视网膜损伤有一定的保护作用。     

白蒺藜抗光损伤小鼠光感受器细胞凋亡及保护视网膜功能的研究

目的探讨白蒺藜对光损伤小鼠光感受器细胞凋亡及受损视网膜功能的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、光损伤模型组、白蒺藜给药组。暗适应24 h后,白蒺藜给药组腹腔注射白蒺藜水煎液100μl(每20 g体质量100 mg生药),给药后30 min进行光照造模。造模采用白色荧光灯,光强度为10 000 lux,持续照射30 min。正常对照组和光损伤模型组同时腹腔注射等量0.9%NaCl溶液。(1)光照1 d、3 d后,摘取眼球制备冰冻切片,采用TUNEL法标记凋亡的光感受器细胞。(2)光照6 d后采用视网膜电流图(ERG)检测小鼠视网膜功能。结果 (1)TUNEL结果显示,正常对照组的外核层光感受器细胞核TUNEL染色为阴性。与正常对照组比较,光损伤后模型组小鼠的视网膜外核层TUNEL阳性光感受器在1 d开始显著增加,3 d达到高峰(P0.001);与光损伤模型组比较,白蒺藜给药组外核层仅见少量散在的TUNEL阳性光感受器细胞(P0.05)。(2)ERG结果显示,与正常对照组比较,光损伤模型组小鼠视网膜a波、b波振幅显著降低(P0.05),白蒺藜给药组a波、b波振幅显著高于模型组(P0.05)。结论白蒺藜能显著地减轻光损伤引起的光感受器细胞凋亡,对光损伤小鼠视网膜功能具有保护作用。     

葛根素和灯盏花素对大鼠视网膜变性的保护作用

目的　观察葛根素和灯盏花素对N -甲基 -N -亚硝脲 (N -methyl -N -ni trosourea ,MNU)诱导SD大鼠视网膜变性的保护作用及机制。方法　雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、葛根素和灯盏花素组。通过视网膜形态学分析测量周边视网膜的总视网膜厚度 ,TUNEL试剂盒检测光感受器细胞凋亡。结果　MNU处理后 7天模型组周边视网膜的总厚度是 3 6μm ,而葛根素组和灯盏花素组的周边视网膜总厚度分别是 46μm、 3 5 μm、 5 8μm、 43 μm和3 9μm。MNU处理 2 4小时后 ,模型组周边视网膜的光感受器细胞凋亡指数是 3 8 0± 3 6( % ) ,葛根素组和灯盏花素组的凋亡指数分别是 2 5 4± 3 0 ( % )、 3 9 0± 2 5 ( % )、 19 4± 1 9( % )、2 8 0± 3 0 ( % )和 3 6 9± 2 1( % )。结论　葛根素和灯盏花素对MNU引起的周边视网膜损伤有一定的保护作用 ,呈剂量依赖性 ,其作用机制是通过抑制光感受器细胞发生凋亡。但二者对中心视网膜均无保护作用     

杞菊地黄丸联合美托洛尔光感受器细胞保护及视网膜重塑相关研究＊

目的 本实验采用光损伤小鼠模型，探讨杞菊地黄丸联合美托洛尔的光感受器细胞保护效应及视网膜重塑相关机制。方法 采用BALB/c小鼠，随机分为正常对照组、光损伤模型组、美托洛尔治疗组、杞菊地黄丸治疗组及杞菊地黄丸联合美托洛尔治疗组，给药一周后进行24 h暗适应，末次给药后15 min以10 000 lux白光光照30 min对小鼠进行造模，3天后采用视网膜电图（electroretinogram,ERG）进行视网膜功能分析，7 d后采用光学相干断层扫描（optical coherence tomography,OCT）对视网膜结构进行分析并测量视网膜外核层（outer nuclear layer,ONL）厚度，最后进行眼球取材、切片、病理学及免疫组织化学分析进一步明确各组视网膜光感受器细胞、双极细胞、水平细胞及Müller细胞病理改变情况。结果 （1）OCT、ONL厚度及HE染色分析结果表明，与正常对照组完整的视网膜形态及ONL厚度相比较，光损伤模型组小鼠视网膜ONL结构受损严重，ONL厚度显著降低（P < P < 0.05）；与光损伤模型组相比较，美托洛尔及杞菊地黄丸治疗组均存在不同程度的视网膜ONL结构破坏，其中美托洛尔给药组视网膜ONL形态与光损伤模型组结果相似，杞菊地黄丸治疗组视网膜尚可见视网膜ONL结构层次，ONL厚度测量结果表明美托洛尔与杞菊地黄丸给药组ONL厚度较模型组显著增加（P < P < 0.05）；与光损伤模型组和美托洛尔治疗组及杞菊地黄丸治疗组相比，杞菊地黄丸联合美托洛尔给药组小鼠视网膜结构清晰，ONL厚度显著增加（P < 0.05）。（2）ERG分析结果表明，正常对照组小鼠视网膜电图a波及b波振幅随着刺激增强而上升；与正常对照组相比较，光损伤模型组小鼠a波及b波振幅显著降低（P < 0.05）；与光损伤模型组相比，美托洛尔治疗组小鼠视功能未见改善，杞菊地黄丸组小鼠视网膜电流图振幅增加（P < 0.05）；与光损伤模型组和美托洛尔治疗组及杞菊地黄丸治疗组相比较，杞菊地黄丸联合美托洛尔治疗组a波及b波振幅显著增加（P < 0.05）。（3）免疫组织化学分析结果表明，正常对照组小鼠视网膜光感受器细胞外节视紫红质（rhodopsin,RHO）和中波敏感视蛋白（mid-wavelength sensitive cone opsin,M-opsin），双极细胞标志蛋白激酶Cα（protein kinase Cα,PKCα），水平细胞标志蛋白钙结合蛋白D（Calbindin D）以及Müller细胞标志蛋白胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫阳性正常；与正常对照组相比较，光损伤模型组小鼠视网膜上述神经元标志蛋白免疫阳性染色显著减弱甚至消失，GFAP表达模式异常，提示胶质异常增生；与光损伤模型组相比较，美托洛尔治疗组上述视网膜神经元免疫阳性并无差异，杞菊地黄丸治疗组视网膜双极细胞和水平细胞免疫阳性显著增强，但光感受器细胞标志蛋白和Müller细胞免疫阳性并无差异；与模型组及美托洛尔治疗组和杞菊地黄丸治疗组相比较，杞菊地黄丸联合美托洛尔治疗组视网膜光感受器细胞、双极细胞、水平细胞标志蛋白免疫阳性显著增强，GFAP免疫阳性减弱。结论 杞菊地黄丸联合美托洛尔干预对光感受器细胞结构及功能具有显著的保护效应，可能与其促进视网膜修复性重塑相关。     

针刺对N-甲基-N-亚硝脲诱导的视网膜变性大鼠感光细胞凋亡的抑制作用

目的 观察针刺对N－甲基－N－亚硝脲（MNU）诱导的视网膜变性大鼠感光细胞凋亡发生的影响。 方法 选取50天龄的SD雌性大鼠,将N－甲基－N－亚硝脲以50 mg/kg剂量一次性腹腔注射诱导其视网膜变性,随机分为针刺组、模型组。观察大鼠视网膜的凋亡变化。     

针刺调控感光细胞凋亡大鼠视网膜JAK2及STAT3表达作用机制

目的:观察感光细胞凋亡模型大鼠视网膜JAK2和STAT3蛋白表达,探讨针刺对感光细胞凋亡引起的视网膜退行性病变的保护机制。方法:75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、维生素A组、假针刺组和针刺组,每组15只。采用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)方法建立感光细胞凋亡大鼠模型。各组干预1次/d,6次/周,共4周后,HE染色和Tunel法分别观察视网膜组织形态和感光细胞凋亡结果;免疫荧光法定位和检测小胶质代表细胞-离子钙接头分子(Iba-1)活性与迁移;免疫荧光和Western Blot法检测观察蛋白酪氨酸激酶2蛋白(JAK2)和信号传导及转录激活因子3(STAT3)表达。结果:HE染色示,模型组细胞排列松散不规则,针刺组较模型组有所改善;Tunel法示,感光细胞凋亡可见针刺组凋亡率少于模型组(P<0.01);免疫荧光和Western Blot法检测结果示,针刺组Iba1、JAK2、STAT3表达显著低于模型组(P<0.01)。结论:针刺对感光细胞凋亡具有保护作用,其机制可能通过调控JAK2、STAT3蛋白抑制视网膜小胶质细胞活化与迁移有关。     

小檗皮水浸膏对db/db糖尿病小鼠视网膜病变的影响(Ⅰ)

目的:观察小檗皮浸膏对基因突变自然发病型db/db糖尿病小鼠视网膜病变的影响。方法:选用18周龄db/db糖尿病小鼠,db/m型同性同窝瘦型小鼠为对照。采用随机方法将db/db小鼠分为:db/db组,小檗皮高、中、低剂量(1.50,0.75,0.38 g·kg~(-1))组,羟苯磺酸钙(0.23 g·kg~(-1))组,盐酸小檗碱(0.135 g·kg~(-1))组。相关药物连续ig 2个月,观察一般体征状态,每2周称体重1次,测空腹血糖水平1次,并于ig 2个月末处死小鼠。苏木素和伊红(HE)染色观察视网膜常规病理改变,消化铺片观察微血管变化,计算视网膜血管内皮细胞/周细胞比值(E/P)。结果:与db/m组比较,db/db组体重显著增加(P0.01),血糖水平显著升高(P0.01),视网膜血管E/P明显升高(P0.05),视网膜毛细血管充血扩张,视网膜损伤明显。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组、小檗碱组、小檗皮各剂量组体重无显著变化;小檗碱组、小檗皮低剂量组血糖水平显著降低(P0.01),小檗皮高、中剂量组血糖水平明显降低(P0.05),羟苯磺酸钙组血糖水平无显著变化;小檗皮高剂量组视网膜血管E/P显著降低(P0.05),其他给药组E/P无显著变化;小檗皮各剂量组视网膜损伤减轻。结论:小檗皮对db/db糖尿病小鼠视网膜病变具有明显的防治作用,具有降低自发性糖尿病小鼠高血糖水平作用,改善视网膜微血管损害并阻止新生血管生成。     

细辛水提物与尼莫地平合用的镇痛作用及其机制研究

目的 研究细辛水提物和钙通道拮抗剂尼莫地平合用的镇痛作用及其机制。方法 40只健康Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组、细辛组、尼莫地平组和联合用药组,除对照组外其他各组大鼠均进行结扎坐骨神经制备神经病理性疼痛模型。各组大鼠手术后ig给药2周,细辛组大鼠给予细辛水提物（200 mg/kg,相当于细辛药材2 g/kg）,尼莫地平组大鼠给予尼莫地平（40 mg/kg）,联合给药组大鼠给予尼莫地平（40 mg/kg）30 min后给予细辛水提物（200 mg/kg）,对照组和模型组给予生理盐水。各组大鼠分别于手术前1 d及手术后第1、3、5、9、14 天给药30 min后分别测量热缩足潜伏期以及机械刺激缩足反射阈值。结果 各组大鼠手术前的热缩足潜伏期以及机械刺激缩足反射阈值的差异无统计学意义(P＞0.05),手术后各时间点模型组大鼠的热缩足潜伏期和机械刺激缩足反射阈值均较对照组显著降低（P＜0.05、0.01）,细辛组和尼莫地平组大鼠的热缩足潜伏期和机械刺激缩足反射阈值均从术后第5天起较模型组大鼠显著升高（P＜0.05、0.01）,联合用药组大鼠热缩足潜伏期和机械刺激缩足反射阈值从手术后第3天起均较模型组大鼠显著升高（P＜0.05、0.01）,从手术后第5天起均较细辛组和尼莫地平组高（P＜0.05、0.01）。联合用药组的镇痛作用强于细辛水提物和尼莫地平。结论 细辛水提物和尼莫地平合用具有镇痛作用。     

玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道3种细菌的影响

目的:观察不同剂量玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌的影响,为玉屏风散加味方治疗COPD提供一定的实验依据。方法:Wistar大鼠通过气管滴注脂多糖(LPS)加烟熏的方法建立COPD大鼠模型,模型成功的大鼠随机分为模型组、玉屏风散加味方高、中、低剂量组(4.644,9.288,27.864 g·kg-1·d-1),另设正常组,每组10只。利用高通量测序分析每组3种细菌的含量,苏木素-伊红(HE)观察右肺组织病理学变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量明显升高(P0.05),右肺组织病理学观察显示模型组大鼠右肺组织慢性炎症细胞增多和少量中性粒细胞浸润;与模型组比较,玉屏风散加味方低、中剂量组的流感嗜血杆菌含量均明显降低(P0.05),玉屏风散加味方高、中、低剂量组的肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量明显降低(P0.05,P0.01),大鼠右肺组织病变明显减轻。结论:玉屏风散加味方对COPD大鼠气道流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌含量有明显的降低作用,低剂量组对铜绿假单胞菌的作用更为明显,这可能是其治疗COPD的重要机制之一。     

云南松松塔提取物含药血清对乙醇损伤大鼠肝细胞的抗氧化作用

目的:研究云南松松塔提取物含药血清对乙醇损伤大鼠肝细胞的抗氧化作用进行研究。方法:取SD大鼠10只,随机分为正常组和云南松松塔提取物组(1 g·kg-1),每组5只,每天ig 2次,连续3 d,于末次ig 8 h后制备含药血清。取新生大鼠处死,无菌条件下,取肝脏分离正常肝细胞进行培养,将预培养的肝细胞分为正常组、模型组、空白组、3个不同质量分数云南松松塔提取物含药血清组(25%,50%,100%),用不同质量分数的云南松松塔提取物含药血清对体外培养的大鼠正常肝细胞进行预处理,1 h后,除正常组,空白组外,其余组加入100 mmol·L-1乙醇诱导损伤,继续培养8 h后,MTT法检测大鼠肝细胞存活率,酶标法检测培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT),超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA),还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果:与正常组比较,受损大鼠肝细胞经5%和10%含药血清处理后,存活率明显增大,细胞培养液中ALT活性和MDA含量明显降低,SOD活性和GSH含量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:云南松松塔提取物含药血清对乙醇损伤大鼠肝细胞有一定的抗氧化作用。     

Effects of Puerarin on Experimental Model of Retinal Vein Occlusion in Rats

Objective To establish a model of retinal vein occlusion(RVO)in rats and to study the effect of puerarin on ischemic retinal disease and the corresponding mechanism.Methods RVO was induced in 10 adult male Sprague-Dawley(SD)rats by laser photothrombosis.Retinal blood flow was examined before and after 1 h of the operation,and model rats with the retinal vein blood flow decreasing by 50%compared to the basic value were chosen and then puerarins(20,40,and 80 mg/kg)were given.The levels of vascular endothelial growth factor(VEGF),interleukin-1β(IL-1β),and nitric oxide(NO)were analyzed.In addition,the histopathology of RVO-eyes was performed.Results RVO-eyes displayed the signs of retinal damage and ischemia on Doppler Flowmeter and histopathology.Puerarin(20,40,and 80 mg/kg)increased blood flow by 9.3%(P0.05),33.1%(P0.001),and 41.5%(P0.001),respectively.On the other hand,the histological changes were less severe at different degrees,relieving the symptoms such as edematous and thick neuroretinal layers,lax,edematous,and disorganized optic fibers layers,swollen and confused inner and outer nuclear layer.Besides,dose-dependent decrease of VEGF and IL-1βand increase of NO in vitreous fluid were observed,with respect to the model group.Conclusion A rat model of laser photochemical-induced RVO is established and a decrease in the retinal blood flow and histological damage is detected.The puerarin has therapeutic benefit in the rat model of RVO,through the pathway of neovascularization,anti-inflammation,and increase of NO.