碱性蛋白酶水解时间对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响

为探究碱性蛋白酶(alcalase)水解对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响,对不同水解时间获得的玉米谷蛋白水解物的表面疏水性、二硫键含量、热性能、分子质量分布、抗氧化活性等进行了评价。结果表明：碱性蛋白酶水解对玉米谷蛋白的性质有显著影响,分子质量和二硫键含量显著降低(P<0.05),与玉米谷蛋白相比其水解物具有较高的溶解性、起泡性、乳化性和热稳定性。此外,玉米谷蛋白水解产物具有良好的抗氧化性能,当水解时间为150 min时玉米谷蛋白水解物的DPPH自由基清除为(54.46±1.43)%,羟自由基(·OH)清除率为(74.06±1.49)%,Fe²⁺螯合力为(86.69±1.35)%。     

酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

本文研究了酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,通过水解度与羟自由基(·OH)清除率来综合评价水解产物的抗氧化能力。以·OH清除率为指标,从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适酶。在单因素实验研究酶浓度、底物浓度与水解时间对酶解产物·OH清除率和水解度影响的基础上,通过L_9(4~3)正交实验对水解工艺进行优化。结果得出,碱性蛋白酶活力高于其他4种蛋白酶,能使蛋白质充分水解,正交实验各因素对水解产物·OH清除率的影响程度依次为底物浓度酶浓度水解时间。其中,碱性蛋白酶的最佳水解工艺条件为:底物浓度3.0%、酶浓度3500 U/g、p H9.0、温度55℃、水解时间3.5 h。在此条件下,水解产物的·OH清除率可达82.7%,水解度为23.1%。碱性蛋白酶水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺可行,为滑菇蛋白高附加值产品的开发提供技术参考。     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

响应面法优化酶解玉米谷蛋白制备抗氧化肽的研究

以玉米蛋白粉为原料制备玉米谷蛋白,以DPPH自由基清除率为指标,采用响应面法优化了玉米谷蛋白抗氧化多肽的酶解工艺。在单因素实验基础上,采用响应面法优化了Alcalase蛋白酶酶解玉米谷蛋白制备抗氧化肽的条件,最佳参数为玉米谷蛋白浓度2%,时间2 h,p H8.0,加酶量0.15 U/g,温度65℃,DPPH自由基清除率可达69.93%;与预测值70.98%相比,实验结果的相对误差约为1.5%。     

双酶水解玉米醇溶蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

为了制备抗氧化活性肽,利用Alcalase碱性蛋白酶和中性蛋白酶分步酶解玉米醇溶蛋白。在单因素的基础上,以1.1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基清除率、羟基自由基清除率和水解度(DH)为响应值,采用响应面(RSM)中心组合实验,选取Alcalase碱性蛋白酶加酶量、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比、底物浓度为自变量,探讨最佳酶解工艺条件。采用Design-Expert软件,通过响应面优化确定修正后各因素的最佳工艺条件为:Alcalase碱性蛋白酶加酶量12880 U/(g底物)、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比为1∶4,底物浓度为3.4%。在此修正条件下,DPPH·自由基清除率为42.98%,水解度为32.18%,与预测值的相对误差为1.04%。浓度为20 mg/m L时,玉米醇溶蛋白的DPPH·自由基清除率和羟基自由基清除率分别为同浓度VC的85.8%和67.0%。     

玉米谷蛋白抗氧化肽的分离纯化与活性研究

采用Alcalase蛋白酶酶解从玉米脱脂蛋白粉中分离得到的玉米谷蛋白,对酶解产物采用超滤、凝胶过滤层析和高效液相色谱法分离纯化玉米谷蛋白抗氧化肽,并研究其抗氧化活性。结果表明,Alcalase蛋白酶酶解玉米谷蛋白获得的抗氧化肽分子量主要集中在低于1 kDa,其DPPH自由基和羟自由基清除率分别为80.46%、81.36%。凝胶过滤层析得到抗氧化活性较高的组分P6、P7和P8,其DPPH自由基清除率分别为32.05%、24.43%、14.19%,多肽含量分别为0.638、0.253、0.158 mg/mL。高效液相色谱对这3个组分进一步分离纯化分别得到主要组分。     

超声预处理双酶分步水解制备滑菇抗氧化肽

研究超声预处理双酶分步水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,为滑菇蛋白高附加值产品的开发提供理论依据。以羟自由基(·OH)清除率为指标,单因素试验研究功率、温度、时间等超声预处理参数对碱性蛋白酶水解效果的影响。从中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶等4种酶中筛选第二步水解的最适酶,通过正交试验优化其水解工艺。结果表明,超声波预处理的最佳工艺参数为:功率300 W、温度40℃、时间20 min,碱性蛋白酶水解产物的·OH清除率最高,为86.15%。风味蛋白酶作为第二步水解的最适酶,各因素对·OH清除率的影响程度依次为:水解时间酶浓度p H温度,其最佳水解工艺条件为:酶浓度3 000 U/g、p H 7.0、温度55℃、水解时间1.5 h。在此条件下,水解产物·OH清除率为93.17%。超声波预处理双酶分步水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺可行。     

芹菜渣水溶性膳食纤维的抗氧化活性研究

研究以微波辅助法提取的芹菜渣水溶性膳食纤维(SDF)为原料,研究其对·OH、O_2~-·和DPPH自由基3种自由基的清除作用、铁还原能力和对芝麻油的抗氧化效果。试验结果表明,芹菜渣SDF对·OH和O_2~-·、DPPH·均有一定的清除能力;SDF对羟自由基的清除效果最明显,对超氧阴离子自由基O_2~-·的清除能力较弱;在其质量浓度为6 mg/mL时对·OH和O_2~-·、DPPH·的清除率分别达到95.6%,15.6%和35.9%;芹菜渣SDF还具有一定的还原能力和对芝麻油较好的抗氧化作用。     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

裙带菜多肽的制备及其抗氧化活性的研究

实验以裙带菜为原料制备裙带菜蛋白,通过单因素和正交试验确定了碱性蛋白酶为裙带菜抗氧化肽制备的最佳酶,最优酶解条件为:料液比4%、酶解温度55℃、酶解时间3.5h、加酶量7500U/g、pH 10.0,该条件下制备的裙带菜多肽的还原能力最强,700nm处的吸光值为0.411。对制备的裙带菜多肽进行超滤分级,从O_2~-·清除率、·OH清除率、DPPH自由基清除率、Fe~(2+)螯合率4个方面,探究了不同分子量裙带菜多肽的抗氧化能力。结果表明:裙带菜多肽对Fe~(2+)的螯合能力和DPPH自由基的清除能力较强,对O_2~-·和·OH的清除能力相对较弱,且总体呈现低分子量肽段的抗氧化活性较强,高分子量肽段的抗氧化活性较弱的趋势。     

不同酶解法水解黑龙江小麦麦胚蛋白的抗氧化功能比较研究

通过采用四种不同蛋白酶对麦胚蛋白分别进行单酶水解、双酶同步水解和分步水解,以水解产物的水解度和抗氧化性为指标,比较研究麦胚蛋白的酶解方法与水解物的抗氧化功能的关系。结果表明：单酶水解时碱性蛋白酶的水解物抗氧化效果最好,DPPH 自由基清除率达到39.74%;双酶分步水解的效果优于双酶同步水解,其中先加碱性蛋白酶后加木瓜蛋白酶效果最好,DPPH 自由基清除率达到45.36%。因此选择先加碱性蛋白酶后加木瓜蛋白酶作为水解麦胚蛋白最佳工艺。     

四种葱属植物醇提物抗氧化活性比较

目的:多指标评价4种葱属植物的抗氧化活性。方法:利用DPPH·,O_2~-·,·OH清除率和总还原能力4种常用体外抗氧化活性模型,测定洋葱、大蒜、韭菜和大葱的抗氧化活性。结果:在实验范围内,4种葱属植物的抗氧化活性与浓度呈量效关系,其活性强弱顺序为:大蒜洋葱大葱韭菜,其中大蒜和洋葱的DPPH·,O_2~-·,·OH清除率均达到90%以上,并显示了较强的总还原能力。结论:大蒜和洋葱醇提物具有明显的抗氧化活性。     

体外消化对玉米谷蛋白酶解物抗氧化活性的影响

以玉米蛋白粉为原料提取玉米谷蛋白,利用蛋白酶对其进行酶解,制备蛋白水解物,再用胃蛋白酶及胰蛋白酶对其进一步消化处理,以抗氧化活性为指标对消化过程中蛋白酶加量进行优化,制备富含谷氨酰胺的具有抗氧化功能的蛋白水解物。结果表明,玉米谷蛋白经复合蛋白酶水解后,蛋白收率(54.41±3.26)%,水解物的羟基自由基清除率、亚铁离子螯合能力及还原力分别达到(29.50±0.31)%、(73.33±0.62)%及0.50±0.01;二步消化后蛋白水解物羟基自由基清除率、亚铁离子螯合能力及还原力分别达到(55.88±0.94)%、(90.44±0.01)%及0.40±0.01。     

乳酸菌抗氧化特性及其katA基因分析

为了分析乳杆菌的抗氧化特性及其与katA基因的关系,以自然发酵肉制品中筛选的6株乳杆菌为研究对象,通过对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)、羟(·OH)、超氧阴离子(O_2~-·)自由基清除率、H_2O_2耐受性以及katA基因的表达进行评价。结果表明:试验菌株清除·OH自由基的活性物质主要是菌体细胞及胞内物质,而清除DPPH和O_2~-·自由基主要是乳酸菌的代谢产物;TR1-1-3对3种自由基的清除能力都比较强,而菌株X31对·OH和O_2~-·的清除率最低,且与TR1-1-3差异显著(P0.05);除菌株X31外,其它试验菌株在H_2O_2浓度0～1.0 mmol/L范围,对H_2O_2均有一定的耐受能力,且在12～48 h培养时间内,随着培养时间的延长,耐受性逐渐增强。对自由基清除率和H_2O_2耐受能力弱的菌株X31的katA基因的特异性PCR检测结果为阴性,而其它菌株均为阳性。本研究发现乳酸菌抗氧化能力具有菌株特异性,通过分析乳酸菌对O_2~-·、·OH、DPPH自由基的清除率以及对H_2O_2耐受性的表观数据,结合katA基因表达情况,可以作为乳酸菌抗氧化能力强弱判定的检测方法。研究结果可为优质菌种资源的开发应用提供技术支持。     

鲢鱼皮抗氧化肽水解用酶的筛选研究

采用鲢鱼鱼皮为原料提取明胶,研究了碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解鲢鱼皮明胶的进程特性,比较了4种蛋白酶水解物对O_2~-·、·OH清除率和脂质氧化抑制率的影响。结果表明碱性蛋白酶是制备鲢鱼鱼皮抗氧化肽的最适水解酶,且其最佳酶解时间为3 h,得到的酶解物对O_2~-·和·OH清除率分别为(68.51±2.94)%、(67.10±1.12)%,脂质氧化抑制率为(47.28±1.07)%,其相对分子质量小于1000的组分所占比例达到51%。为鲢鱼皮的开发利用及其抗氧化肽的制备提供了参考。     

辣椒碱体外抗氧化作用研究

以辣椒碱标准品为原料,Vc为阳性对照,采取体外抗氧化试验模型研究其抗氧化活性。通过分析辣椒碱的还原力和清除DPPH自由基(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O_2~-·)、亚硝基以及羟自由基(·OH)的能力,探讨辣椒碱的体外抗氧化性能。结果表明,辣椒碱的还原能力以及对DPPH·、亚硝基以及·OH的清除率随质量浓度的增加而升高,且清除效果与Vc基本相近,但对O_2~-·的清除率较低;辣椒碱对DPPH·、亚硝基以及·OH的IC_(50)分别为0.02,0.15,0.28mg/mL,说明辣椒碱清除DPPH·的效果较好。     

光裸方格星虫纤溶活性蛋白的提取及抗氧化活性研究

目的:从光裸方格星虫提取纤溶活性蛋白并研究其抗氧化能力。方法:光裸方格星虫全虫匀浆后,用3倍体积PBS缓冲液(0.02 mol/L,p H7.5)在4℃条件下抽提6 h,上清液用硫酸铵盐析法粗提纯纤溶活性蛋白;采用普鲁士蓝法测定该蛋白组分的还原能力,在DPPH体系,Fenton体系和邻苯三酚自氧化体系中分别测定对DPPH自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_2~-·)的清除能力。结果:用30%饱和度硫酸铵沉淀杂质,再用50%饱和度硫酸铵沉淀上清液的纤溶活性蛋白可取得较好的纯化效果,该蛋白组分具有一定还原能力,具有显著的清除DPPH·和·OH作用,且与剂量呈正相关,EC_(50)分别为1.23、6.07 mg/m L,对O_2~-·则有负清除作用。结论:采用两级硫酸铵盐析纯化的光裸方格星虫纤溶活性蛋白具有一定体外抗氧化活性。     

卵白蛋白多肽的酶解制备及抗氧化活性研究

以DPPH自由基清除率和水解度为指标,采用碱性蛋白酶酶解卵白蛋白制备抗氧化活性肽,考察底物质量分数、酶解时间、加酶量、温度等因素对制备的影响。正交实验结果表明,碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物质量分数4%、酶解时间6h、加酶量5500U/g,温度65℃,此条件下DPPH自由基清除率达到96.92%、水解度为57.14%。酶解时间对DPPH自由基清除率的影响最大,而底物质量分数对水解度的影响最大。     

红茶、绿茶和普洱熟茶体外抗氧化作用比较研究

以3种不同类型茶叶——绿茶、红茶和普洱熟茶为材料,按照不同饮茶习惯,采用不同冲泡浓度茶汤进行体外抗氧化作用比较研究,并测定了3种茶样主要滋味品质成分含量及茶多酚(含黄酮类)冲泡溶出量。结果表明,绿茶水浸出物、多酚、游离氨基酸和可溶性总糖均高于红茶和普洱熟茶,3种茶叶体外抗氧化活性均随冲泡浓度增加而略有下降,在试验冲泡浓度范围内,绿茶有较强清除DPPH自由基的能力,红茶有较强的羟自由基清除能力,普洱熟茶清除超氧阴离子自由基能力较强;相关分析显示,O_2~-·清除率与多酚、黄酮溶出量显著负相关(p0.01),而DPPH·和·OH清除率与茶多酚、黄酮溶出量无关(p0.05),不同茶类多酚和黄酮类溶出量与O_2~-·清除率、DPPH·和·OH清除率呈负相关(p0.05)。结果表明不同茶类体外抗氧化作用不同,一般饮茶浓度范围内,3种茶叶均具有较好的体外抗氧化作用,以饮用淡茶为宜,选择和饮用不同种类的茶叶可能带来更好的健康效应。     

蓝圆鲹酶解条件的响应面法优化及其产物抗氧化活性的研究

采用木瓜蛋白酶和风味酶水解蓝圆鲹蛋白,用响应曲面分析法优化水解工艺条件,并以自由基清除率为指标,对水解产物的抗氧化活性进行研究。结果表明:木瓜蛋白酶最佳水解条件为温度55.5℃,加酶量1.85%,pH6.11,时间7h,此时水解度达到26.92%;风味酶最佳水解条件为温度56.0℃,加酶量1.64%,pH6.8,时间7h,此时水解度达到22.32%。不同水解时间的蓝圆鲹酶解液的自由基清除率不同,木瓜酶和风味酶酶解液对羟基自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（（O₂）^-·）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH·）自由基最大清除率分别为63.87%和56.1%,69.81%和72.55%,68.67%和84.44%。