三氧化二砷对人肝癌细胞周期相关基因表达的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞周期的阻滞作用及相关基因的表达.探讨As2O3抗肝癌作用的机理.方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化;通过免疫细胞化学检测cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达.结果 As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1期.与对照组比较,经As2O3作用的人肝癌细胞cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达减少.结论 As2O3 通过干扰细胞周期的进程,下调cyclinD1、PCNA基因编码蛋白的表达,抑制肿瘤的增殖和转移,从而具有抗肿瘤的作用.     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞凋亡及相关分子机制研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞凋亡时,细胞周期及细胞周期调节蛋白的变化,探讨As2O3抗肝癌作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;透射电镜观察细胞形态变化及细胞凋亡情况;免疫细胞化学检测cyclinD1、cyclinA、p21蛋白的表达.结果:As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1、S期,与对照组比较,Aa2O3在诱导SMMC-7721细胞发生凋亡的同时,p21蛋白的表达水平显著增高(对照组1.128;As2O3组:3.794),cyclinD1、cyclinA蛋白的表达水平明显下降(对照组:3.647,2.833;As2O3组:1.133,1.179).结论:As2O3能干扰细胞周期的进程,诱导SMMC-7721细胞凋亡.其作用机制与上调p21蛋白及下调cyclinD1、cyclinA蛋白的表达有关.     

FOXO3a在三氧化二砷诱导肝癌HepG2细胞周期阻滞中的作用

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对肝癌HepG2细胞增殖的影响及其与细胞周期素依赖性激酶抑制剂（CDKI）p27kip1和p27kip1相关蛋白FOXO3a的关系。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2经2μmol/L As2O3处理72 h,用流式细胞仪检测细胞周期变化,并采用核浆分离、Western blot技术及细胞免疫荧光技术检测该过程中p27kip1和FOXO3a在HepG2细胞中的表达变化和亚细胞定位情况。结果与对照组比较,As2O3使HepG2细胞周期阻滞在G2/M期,并诱导凋亡。As2O3作用后,HepG2细胞的p27kip1蛋白和FOXO3a蛋白总量也增加,并且p27kip1的表达变化与FOXO3a的表达水平高低及核-胞浆易位相关。结论 As2O3可能通过上调FOXO3a的表达影响p27kip1基因的转录,从而调控肝癌细胞的增殖。     

血清饥饿释放过程中Raji细胞内Skp2与p27kip1的表达变化及意义

目的:探讨血清饥饿释放过程中淋巴瘤细胞株Raji细胞内Skp2与p27kip1的表达变化及意义。方法:采用免疫沉淀方法检测Raji细胞中p27kip1与Skp2的结合情况;采用血清饥饿合并释放同步化处理Raji细胞,经WesternBlot技术检测该过程中p27kip1、Skp2在Raji细胞中的表达变化。结果:免疫沉淀结果显示在Raji细胞中p27kip1与Skp2能够相互结合。在Raji细胞血清饥饿释放过程中,Skp2蛋白总量增加,p27kip1蛋白总量减少。结论:在Raji细胞血清饥饿释放过程中Skp2合成增加,可能通过加快p27kip1的泛素化降解而使细胞中p27kip1显著减少,从而推动了细胞周期的进程。     

低相对分子质量肝素对人肝癌细胞生长的影响及机制

目的探讨低相对分子质量肝素（LMWH）对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721增殖、细胞周期分布及周期调控相关基因Skp2和c-Mye表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,经不同浓度LMWH作用不同时间后,MTT比色法检测细胞存活和生长情况。将对照组和LMWH处理组（400、800IU／mL）细胞培养36h后,流式细胞术检测细胞周期分布情况;RT-PCR检测细胞Skp2、c-MyemRNA表达的变化;Western blotting检测skp2、c-Myc蛋白表达的变化。结果与对照组相比,经LMWH作用后SMMC-7721细胞的生长受到抑制,且在一定范围内呈药物浓度和时间依赖关系;细胞周期分布发生变化,随LMWH剂量增加,S期细胞比例显著下降（P〈0．05）,G0／G1期细胞比例显著上升（P〈0．05）;同时,Skp2、c-Mye的mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性降低（P〈0．05）。结论LMWH可抑制SMMC-7721细胞的生长,其机制可能与降低Skp2、c-Myc的表达,阻滞细胞于G0／G1期,从而降低细胞增殖指数有关。     

三氧化二砷抗肝癌血管新生作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)注射液抗肝癌血管新生的作用及其相关机制。方法:采用MTT法、透射电镜观察、免疫组化、鸡胚尿囊膜(CAM)血管形成实验等方法,观察As2O3注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长、超微结构、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达以及对CAM血管形成的影响。结果:As2O3能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡超微结构改变;As2O3对SMMC-7721细胞和ECV304细胞VEGF、EGFR的表达均有抑制作用;As2O3能抑制CAM血管形成。结论:As2O3注射液具有显著抗肝癌血管新生作用,其机制与抑制血管内皮细胞生长、诱导血管内皮细胞凋亡、调控肿瘤血管新生相关因子VEGF和EGFR的表达密切相关。     

整合蛋白β1亚基过表达上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖

目的:研究整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及机制。方法:采用MTT及细胞流式测定观察整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的影响。蛋白质印迹及RT-PCR检测细胞中p27的蛋白及mRNA的表达,并构建p27的RNA干扰质粒,转染整合蛋白β1亚基过表达细胞,再观察p27的表达变化对细胞增殖的影响。结果:整合蛋白β1亚基过表达可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并将细胞阻滞在细胞周期的G1期。整合蛋白β1亚基过表达可以在蛋白水平上调p27的表达,但并不影响p27的mRNA水平。p27的RNA干扰质粒可明显抑制p27的表达,而且p27表达的下调可以阻止整合蛋白β1亚基过表达所引起的细胞增殖抑制。结论:整合蛋白β1亚基过表达通过上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。     

三氧化二砷联合氟尿嘧啶对人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷联合氟尿嘧啶（5-FU）对肝癌细胞凋亡相关因子Bcl—2和Bax表达的影响。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞株,将细胞分为四组,即AS2O3组、5-FU组、As2O3＋5-Fu组及对照组,采用免疫细胞化学法检测各组SMMC-7721细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果As2O3组、5-Fu组、As2O3＋5-FU组细胞Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0．01）;联合用药组细胞Bcl-2蛋白表达较单用药组明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0．01）。结论As2O3联合5-FU可下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,从而诱导肝癌细胞凋亡。     

氧化砷诱导人肝癌细胞凋亡相关基因的实验研究

目的：探讨氧化砷（As2O3)对人肝癌细胞诱导凋亡作用的分子机制。方法：以As2O3作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2，通过免疫组化技术对bcl-2,bax,p53,Fas及c-myc五种基因编码蛋白的表达进行检测。结果：经As2O3作用的人肝癌细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，bax,Fas基因编码蛋白表达增加，p53,c-myc基因编码蛋白表达改变不明显，结论：As2O3诱导肝癌细胞凋亡分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强box,Fax基因编码蛋白表达。     

熊果酸对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响

目的探讨熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响。方法用不同浓度的UA处理SMMC-7721细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞周期相关基因p21、p53及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果 UA对SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;UA可以诱导SMMC-7721细胞阻滞在S期,RT-PCR结果显示其能够上调p21和p53基因,下调PCNA基因。结论 UA能明显抑制SMMC-7721细胞的生长,引起细胞周期阻滞;细胞周期阻滞的发生与p21、p53、PCNA基因变化相关。     

p27~(kip1)表达在食管癌放射抗拒中的意义

目的 探讨p27~(kip1)表达与食管癌放射敏感性变化的关系.方法 通过γ射线反复照射人食管鳞癌细胞EC9706(累计放射剂量6 000 cGy),逐步筛选得到具有放射抗拒性的细胞EC9706R.采用克隆形成实验检测两种细胞的放射敏感性,流式细胞仪分析细胞周期特征,免疫细胞化学检测p27~(kip1)的表达.结果 筛选得到的人食管鳞癌细胞EC9706R较亲本细胞显示出明显的放射抗性,EC9706R细胞SF_2=65.71%,D_0=2.20 Gy,D_q=1.61 Gy,N=2.07;EC9706细胞SF_2=46.72%,D_0=1.61 Gy,D_q=0.99 Gy,N=1.85,EC9706R细胞SF_2、D_0、D_q及N值均高于亲本细胞;细胞周期检测显示EC9706R细胞G_1期比例较亲本细胞明显下降,而S期比例明显增加;免疫细胞化学结果 显示具有放射抗性的EC9706R细胞p27~(kip1)表达明显低于亲本细胞.结论 p27~(kip1)表达下调导致细胞周期变化,可能是食管癌细胞产生放射抗拒的机制之一.     

人KiSS-1和p27^Kip1基因在骨肉瘤MG63细胞株中的共表达

目的克隆肿瘤转移抑制基因KiSS-1和细胞周期依赖性激酶抑制剂基因p27^Kip1的表达序列,应用内部核糖体插入位点（IRES）序列构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27^Kip1,测序鉴定,并获得稳定表达目的蛋白的细胞株。方法利用RT-PCR从人正常胎盘组织中获得KiSS-1和p27^Kip1基因开放阅读框的cDNA序列,将两目的基因的eDNA序列重组至pIRES载体,构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27^Kip1,应用脂质体转染骨肉瘤MG63细胞,并通过RT-PCR和Westernblot检测目的蛋白的表达情况。结果经PCR、酶切鉴定和基因序列测定,证实重组人pIRES载体上的两个片段均为目的基因开放阅读框的核苷酸序列,KiSS-1和p27^Kip1蛋白在转染后的细胞中有表达。结论成功构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27^Kip1,获得稳定表达KiSS-1和p27^Kip1蛋白的细胞株,为进一步观察目的基因对骨肉瘤细胞体内外效应奠定基础。     

Ki-67及p27^kip1基因在非小细胞肺癌中的表达及与预后的关系

目的探讨Ki-67及p27^kip1蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其对预后的影响。方法采用免疫组化二步法检测30例NSCLC、15例正常肺组织中Ki-67及p27^kip1基因的表达。结果①NSCLC中Ki-67阳性表达率明显高于正常肺组织（P〈0.01）。②p27^kip1在NSCLC中阳性表达明显低于正常肺组织,差异有统计学意义。③在NSCLC中Ki-67的表达与病理分型密切相关。④NSCLC组织中Ki-67、p27^kip1蛋白表达与患者预后有关。结论检测NSCLC中Ki-67及p27^kip1的表达对评估其预后有一定意义。     

应用组织芯片技术研究Skp2、p27 kip1在肾细胞癌中的表达及意义

目的 检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和抑癌基凶p27kip1在肾细胞癌(RCC)中的表达,探讨其与肾细胞癌生物学特征的关系及意义.方法 采用组织芯片技术及免疫组化SP法检测Skp2和p27kip1在80例肾细胞癌组织和40例癌旁正常肾组织中的表达,并做统计学分析.结果 (1)Skp2在肾细胞癌中的表达率高于正常肾组织(P=0.025);随肿瘤恶性程度增加,Skp2阳性表达率升高(P=0.002),其表达率与肾癌患者的年龄、性别、临床分期、淋巴结转移及肿瘤大小无关(P>0.05).(2)p27kpi1在肾细胞癌中的表达率低于正常肾组织(P=0.007);p27kip1阳性表达率与肿瘤分级及临床分期呈负相关((P<0.05),与肾癌患者的年龄、性别、淋巴结转移及肿瘤大小无关(P>0.05).(3)Skp2与p27kip1表达呈显著负相关(r=-0.273,P=0.014).结论 肾细胞癌中Skp2蛋白的过度表达与p27kip1蛋白降解增强有关,提示Skp2可能在肾细胞癌发生中扮演着重要角色.     

P27kip1 在肾癌中的表达及临床意义

目的 检测细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白p27kip1在肾癌中的表达及临床意义.方法 采用基于组织芯片的免疫组化方法、Western blotting及RT-PCR检测80例肾癌组织、40例配对的癌旁肾组织及786-0细胞系中p27kip1蛋白及mRNA的表达情况,观察其表达与肿瘤临床参数之间的关系,并对3种检测方式(免疫组织化学、Western blotting及RT-PCR)在p27kip1基因及蛋白水平上的检测结果进行分析和评价.结果 免疫组化及Western blotting检测显示,p27kp1蛋白主要在细胞核中表达,肾癌组表达率明显低于正常组(P＜0.05),且在肿瘤不同的临床分期及病理分级间的表达有显著差异(P＜0.05);p27kip1 mRNA的表达在正常组织和肾癌组织中无明显差异.Western blotting与免疫组化法检测蛋白表达有较一致的效果.结论 正常肾组织与肾癌组织之间p27kip1的基因水平并无差异,而肾癌中p27kip1蛋白阳性表达率低于正常肾组织,其表达的调控可能是基于翻译阶段的蛋白降解.p27kip1低表达可能促进肿瘤的演进与发展.检测p27kip1蛋白可能成为评价肾癌预后的参考指标,为肾癌诊治的研究提供了新的思路.     

p27kip1在星形细胞瘤中表达的意义

目的检测p27kipl在星形细胞瘤中的表达并探讨其在星形细胞瘤发生、发展中的作用。方法采用免疫组化S-P法检测了59例星形细胞瘤的表达。结果p27kipl在星形细胞瘤良性组(I级、Ⅱ级)表达阳性率76.9％(30/39)高于恶性组(Ⅲ级、Ⅳ级)50.0％(10/20)(P<0.05)。p27kipl表达水平与星形细胞瘤分级呈负相关(r=-0.487,P<0.0001)。结论细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kipl在星形细胞瘤发生、发展中起重要作用；p27kip1可作为良恶性星形细胞瘤辅助鉴别诊断标记物。     

p27~(KIP1)与神经母细胞瘤分化的研究

目的 探讨p27~(KIPl)在神经母细胞瘤诱导分化及预后的作用。方法用BrdU诱导神经母细胞瘤细胞系TGW的分化,免疫组化法分析神经母细胞瘤分化过程中p27~(KIPl)的表达特点,Western blot法分析p27~(KIPl)的总体表达水平。结果 BrdU引起p27~(KIPl)的表达明显增加,主要位于细胞浆,p27~(KIPl)的表达使神经母细胞瘤细胞株的生长停滞,p27~(KIPl)在诱导分化作用下蛋白质表达的总体水平增加。结论 p27钓(KIPl)的表达与神经母细胞瘤的分化呈正相关,p27~(KIPl)可以抑制神经母细胞瘤的生长并可以成为以促进肿瘤细胞分化的基因治疗方案的基础。     

Skp2与P27~(kip1)在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的:F-box蛋白家族中的一员Skp2参与细胞周期抑制蛋白P27kip1泛素化降解,研究发现Skp2在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中表达增加。本研究旨在探讨Skp2与P27kip1在鼻咽癌组织中的表达及与鼻咽癌多项临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。方法:鼻咽癌组39例,慢性鼻咽炎组24例。标本均经石蜡包埋,HE染色确诊。Skp2和P27kip1蛋白的检测采用免疫组化染色(PV-9000二步法)。结果:(1)Skp2在鼻咽癌组织中的阳性表达率为71.79%,明显高于其在慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率(41.67%),差异有统计学意义(P<0.05);P27kip1在鼻咽癌组织中的阳性表达率为35.90%,明显低于其在慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率(79.17%),差异有统计学意义(P<0.01);(2)Skp2、P27kip1的蛋白表达与鼻咽癌的临床分期、颅神经侵犯有关(P<0.05),与年龄、性别、分化程度、颈淋巴结转移无关(P>0.05);(3)Skp2、P27kip1在鼻咽癌组织中的表达呈负相关(rs=-0.373,P=0.019)。结论:鼻咽癌中Skp2蛋白表达与靶蛋白P27kip1蛋白降解有关,Skp2、P27kip1可能与鼻咽癌的发生发展有关,联合检测Skp2、P27kip1蛋白表达可作为判断鼻咽癌生物学行为的指标之一。     

p27kip1对前列腺癌的预后意义

目的 了解ｐ２７＾ｋｉｐ１免疫组化分析对前列腺癌病人预后判断的价值。方法 对４３例接受了根治性前列腺切除术的Ｔ１／Ｔ２期前列腺癌患者的前列腺标本用ＡＢＣ法作ｐ２７＾ｋｉｐ１和Ｋｉ－６７免疫组化检查。结果 肿瘤细胞中ｐ２７＾ｋｉｐ１免疫组化染色阳性细胞比例大的病例预后较好而阳性细胞比例小的预后较差，其差别有统计学的非常显著性意义（Ｐ〈０．０１）。多因素分析也提示ｐ２７＾ｋｉｐ１为一个独立的前列腺癌预     

外源性p27kip1基因表达对人肝癌细胞生长抑制作用

目的: 研究p27kip1基因对人肝癌细胞的生长抑制作用. 方法: 采用可诱导性真核表达载体pMD-kip1,脂质体转染法将p27kip1全长cDNA转入肝癌细胞系HCC-9204中,通过外加Zn离子诱导目的基因的表达. 免疫印迹分析及RT-PCR检测p27kip1基因在蛋白质和mRNA水平上的表达;细胞活力实验检测转染p27kip1基因对细胞增殖的作用;并将转染的肝癌细胞接种于裸鼠皮下,观察该肿瘤细胞的致瘤情况. 结果: 转染p27kip1的HCC-9204细胞在mRNA和蛋白质水平均显p27kip1高表达. 细胞活力检测显示在外加Zn离子48 h后,细胞生长被抑制35%;转染p27kip1的HCC-9204细胞在裸鼠体内的致瘤能力明显下降[(0.62±0.12) vs (1.31±0.17), P<0.01 )]. 结论: 外源性p27kip1基因表达能够抑制人肝癌细胞的恶性增殖和致瘤性.