肉品中β-受体激动剂类药物残留检测技术研究进展

肉品中β-受体激动剂类药物残留问题严重影响着人体健康。近几年来暴露出来的肉品中β-受体激动剂类药物残留事件层出不穷,为了加强监控,越来越多的检测方法被建立起来,极大地提高了肉品中β-受体激动剂类药物残留检测的效率。本文综述了检测肉品中β-受体激动剂类药物残留的色谱法、酶联免疫法、胶体金法和其他一些新方法的研究进展,以及我国现行的β-受体激动剂类药物残留标准检测方法。对现有的检测方法的优缺点和发展阶段作了归纳总结,并对β-受体激动剂类药物残留检测方法发展的方向提出了一些展望。未来的发展主要是一些特异性和灵敏度更高的快检方法和样品前处理更加简化的液质色谱联用法。     

食源性动物组织中β-受体激动剂研究进展

β-受体激动剂是一类苯乙醇胺类药物,化学结构和生理功能类似于肾上腺素和去甲肾上腺素,常用于防治人和动物支气管哮喘等疾病。由于β-受体激动剂类药物可促进动物体内蛋白质合成并抑制脂肪沉淀,使动物体内营养成分再分配,所以此类药物常被添加到动物饲养过程中用于提高瘦肉率,继而造成药物在动物体内残留,人类食用后会引发急性中毒而威胁健康。虽然大多数国家已经明令禁止在动物饲养中使用此类药物,但是仍然存在非法使用的情况。为了加强动物源性食品安全,各国已经展开了对β-受体激动剂类药物的研究,已建立多种快速准确的检测方法。本研究主要对β-受体激动剂的结构和性质、在动物源性食品中代谢消除规律和β-受体激动剂检测技术3个方面进行阐述,并对β-受体激动剂药物残留检测的未来研究方向进行展望。     

动物源性食品中β-受体激动剂分类及检测方法研究进展

动物源性食品中的β-受体激动剂兽药残留检出对人体健康存在潜在威胁,对β-受体激动剂残留进行有效监控,建立可靠、灵敏和实用的检测方法至关重要。本文对近10年来β-受体激动剂的常用检测方法进行综述,重点阐述其在色谱-质谱联用技术研究进展,并对未来检测技术的发展方向提出了展望。     

液相色谱-串联质谱法检测猪尿中26种β_2-受体激动剂类药物残留

目的建立了一种在猪尿中检测26种β_2-受体激动剂兽药残留的液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。方法样品经β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶酶解后,用正丁醇及甲基叔丁基醚混合液萃取,过混合阳离子(MCX)固相萃取柱净化。采用0.1%甲酸溶液(A)和0.1%甲酸.乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱(ESI+)采用多离子检测模式(MRM)对β_2-受体激动剂的定量离子和定性离子进行监测。结果本方法在15 min内完成26种目标化合物的分析,实现高通量检测,可有效地提高β_2-受体激动剂检测效率。26种β_2-受体激动剂在5、10和20μg/kg添加水平的回收率为65.0%~105.3%,相对标准偏差小于11.5%(n=6),方法检出限为0.04~1.02μg/kg。结论该方法快速、准确、灵敏,适合测定猪尿中的β_2-受体激动剂类药物残留。     

液相色谱-串联质谱法检测饲料中26种β2-受体激动剂类药物残留

目的建立一种饲料中26种β2-受体激动剂兽药残留的液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。方法样品经盐酸甲醇提取液提取,醋酸铅沉淀蛋白后,过混合阳离子(MCX)固相萃取柱净化。采用0.1%甲酸(A)和0.1%甲酸-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱(ESI+)采用多离子检测模式(MRM)对β2-受体激动剂的定量离子和定性离子进行监测。结果本方法在15 min内完成26种目标化合物的分离分析。26种β2-受体激动剂在20、50和100μg/L添加水平的回收率为71.9%~102.9%,相对标准偏差小于11.8%(n=6),方法定量限为10μg/kg。结论该方法快速、准确、灵敏,适合测定饲料中的β2-受体激动剂类药物残留。     

液相色谱-串联质谱法检测猪尿中26种β2-受体 激动剂类药物残留

目的 建立了一种猪尿中26种β2-受体激动剂兽药残留的液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。方法 样品经β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶酶解后,用正丁醇及甲基叔丁基醚混合液萃取,过MCX固相萃取柱净化。采用0.1%甲酸(A) 和0.1%甲酸-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱(ESI )采用多离子检测模式(MRM)对β2-受体激动剂的定量离子和定性离子进行监测。结果本方法在15 min内完成26种目标化合物的分离分析。26种β2-受体激动剂在5、10和20μg/L添加水平的回收率为65.0%~105.3%,相对标准偏差小于11.5%（n=6）,方法检出限为0.04 μg/ kg ~1.02 μg/kg。结论 该方法快速、准确、灵敏,适合测定猪尿中的β2-受体激动剂类药物残留。     

利用Thermo Scientific全新高分辨台式、四极杆静电场轨道阱Q-Exactive分析19种β-受体激动剂

β-受体激动剂,又称为β-兴奋剂,大家近期所熟知的瘦肉精—克伦特罗,莱克多巴胺等就是这一类兴奋剂。其是一类含氮激素中的苯乙胺类药物,苯乙胺类药物具有苯乙醇胺结构母核,苯环上连接有碱性的β-羟胺侧链。由于发现在饲料中添加β-受体激动剂可以促进营养再分配作用,提高瘦肉率,减少饲料使用,使肉品提早上市,降低成本。因此,β-受体激动剂被人     

高效液相色谱串联飞行时间质谱法 快速检测饲料中多种β-受体激动剂

建立了一种快速筛查饲料样品中11种β-受体激动剂的高效液相色谱-飞行时间质谱的检测方法。样品经过酸性乙腈提取后直接进样分析。结果表明:11种β-受体激动剂得到良好的色谱分离和定性,方法的检测限和定量限分别为2μg/kg和5μg/kg,该方法在β-受体激动剂类药物的靶向和非靶向筛查检测中都有很好的应用前景。     

酶联免疫法检测乳与乳制品中的β-激动剂

β-受体激动剂类药物在动物饲养过程中具有促进动物生长和动物营养再分配的功效,但其易在动物体内及可食性组织中残留,影响动物源性食品安全并危害人体健康.β-受体激动剂类药物在我国和欧盟等国家和地区已被禁止用作动物促生长剂β-激动剂,本方法使用β-激动剂EIA微孔板含12个板条,每个板条8孔.用羊抗兔抗体IgG包被.特异性抗体(兔抗沙丁胺醇和兔抗克伦特罗)、辣根过氧化物酶标记的沙丁胺醇(酶结合物)和沙丁胺醇标准品或样品被加入到微孔后,经过1h孵育,特异性抗体被牢固地结合在板条上的羊抗兔抗体IgG上,与此同时,游离的β-激动剂(存在于标准溶液或样品中)和酶结合物相互竞争与特异性抗体的结合位点结合(即竞争性酶联免疫检测).然后在洗涤过程中除去未结合的酶结合物试剂,加入色原底物(四甲基联苯胺TMB),结合的酶结合物将无色的底物转化为蓝色的产物.滴加终止液(硫酸)终止显色反应,颜色由蓝色变为黄色,在450nm波长下检测吸光度,吸光度值与样品中β-激动剂浓度成反比.本方法为半定量检测,乳及乳制品中β-激动剂灵敏度是0.06ng/mL(ppb),本方法为快速检测方法,检测结果超出标准,必要时,需用国家标准中规定的仲裁方法进行验证.     

分子对接技术研究热休克蛋白27与β受体激动剂的相互作用

利用分子对接技术,研究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)与β受体激动剂类药物的结合能力,探究HSP27用于检测β受体激动剂的可能性。将人工表达的HSP27和β₂肾上腺素受体(β₂ adrenergic receptor,β₂AR)分别与β受体激动剂类药物进行分子对接,比较它们的结合能力的差异性,并对对接结果进行酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)验证。对接结果显示,15种β受体激动剂类药物中有9种药物与HSP27对接的总评分值高于β₂AR。ELISA的结果显示,HSP27可以与HRP-克伦特罗、HRP-非诺特罗和HRP-莱克多巴胺特异性结合,OD值分别为0.685、0525、0.662,这与分子对接结果基本一致。结论:HSP27与β肾上腺素受体激动剂类药物具有较强的结合能力,可以用于检测 β肾上腺素受体激动剂的可能性较大。     

QuECHERS结合LC-MS/MS检测动物源食品中的9种β-受体激动剂

<正>β-受体激动剂是一类动物兴奋剂，具有促进蛋白质合成、加速脂肪分解等生理作用，但却会严重影响畜产品质量安全，食用β-受体激动剂污染的食物可能会引起食物中毒，甚至侵害人体的心血管及神经系统。因此，β-受体激动剂残留检测十分重要。β-受体激动剂的检测手段多样，常见方法包括免疫分析法、毛细管电泳法、液相色谱法、气相色谱串联质谱法、液相色谱串联质谱法等。其中，免疫分析法检测快速、操作简便，但其结果假阳性率高；毛细管电泳法操作简单，     

羊奶及奶粉中27种β-受体激动剂类药物残留UPLC-MS/MS检测方法

采用超高效液相色谱串联质谱建立羊奶及奶粉中吡布特罗、丙卡特罗、瑞普特罗、克伦普罗、奥达特罗等27种β-受体激动剂类药物残留检测方法。样品经过1%甲酸乙腈提取、Oasis PRi ME HLB柱净化后,经Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,多通道MRM信号采集模式,27种β-受体激动剂类药物能在10.5 min内出峰完好,在1.0~100.0μg/L浓度范围内,27种β-受体激动剂类药物线性良好,相关系数均在0.993以上;羊奶中最低定量限均低于0.5μg/kg,通过0.5、2.5、5.0μg/kg三个浓度的加标回收实验表明,回收率为65.7%~119%,批内变异系数为0.79%~10.4%,批间变异系数为2.13%~15.7%。奶粉中最低定量限均低于2.0μg/kg,通过2.0、10.0、20.0μg/kg三个浓度的加标回收实验表明,回收率为60.5%~109%,批内变异系数为1.91%~12.4%,批间变异系数为3.06%~17.2%。所建立方法为一种高通量检测羊奶及奶粉中β-受体激动剂类药物残留确证分析方法。     

人工表达β_2肾上腺素受体的β激动剂多残留检测

为提高人工表达的β_2肾上腺素受体(β_2adrenergic receptor,β_2AR)蛋白的活性并对其进行活性鉴定,利用分子对接技术将β_2AR与15种β受体激动剂进行柔性分子对接,依据筛选出的与β受体激动剂结合力较好的β_2AR分子结构,人工合成和改造β_2AR基因,构建重组表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),表达出具有活性的受体蛋白。SDS-PAGE鉴定结果显示,受体蛋白大小在47 ku左右。活性鉴定结果显示,与克伦特罗、莱克多巴胺及非诺特罗均能够特异性结合,OD值分别为0.45、0.32、0.36,受体蛋白与激动剂的结合力与其活性鉴定结果基本一致。标准检测曲线结果显示,受体蛋白对β受体激动剂类药物具有一定检测能力。利用分子对接技术,成功获得一定活性的β_2AR受体蛋白,为β_2AR在β受体激动剂多残留检测中的应用奠定了基础。     

2018—2020年菏泽市猪、牛、羊肉中β-受体激动剂残留风险评估

目的:了解2018—2020年菏泽市猪、牛、羊肉中β-受体激动剂残留状况并开展暴露风险评估,为加强监管提供科学依据.方法:2018—2020年,连续3年采集农贸市场、超市及冷鲜肉专卖店的猪牛羊肉样品共532份,进行克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林4种β-受体激动剂的检测,并使用安全限值法(Margin of S...     

β-受体激动剂的性质及其残留量测定时的关键点

β-受体激动剂俗称"瘦肉精",是具有典型芳香基团、β-羟基和脂肪族氮的一类合成化合物。β-受体激动剂的基本化学结构为苯乙醇胺,其功能与肾上腺素和去甲肾上腺素功能相似,是一种非法的饲料添加剂。综述了β-受体激动剂的性质,同时概括了β-受体激动剂残留量检测中的关键点,以期为建立更加科学准确的β-受体激动剂残留量检测方法提供理论依据。     

超高压液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法测定猪肉食品中8种β-受体激动剂

目的 采用超高压液相色谱-电喷雾串连四极杆质谱同时测定猪肉食品中8种β-受体激动剂残留。方法 试样中β-受体激动剂残留经酶解后超声提取, 低温离心后, 上清液用MCX固相萃取柱净化, Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱分离, 以甲醇?0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱, 最后用液相色谱-质谱/质谱进行测定。结果 该方法的平均回收率为75.6%~118.7%, 相对标准偏差小于25.0%, 方法的定量限为0.1~0.2 μg/kg。结论 该方法操作简单, 灵敏度高, 重现性良好, 适用于猪肉食品中β-受体激动剂残留的定性与定量检测。     

QuEChERS法用于动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量测定

目的:建立QuEChERS-超高效液相色谱三重四级杆法测定动物源性食品中β-受体激动剂.方法:使用QuEChERS前处理方法,采用UPLC-MS/MS分析技术.经过QuEChERs EMR-Lipid法处理过的β-受体激动剂类药物在1.0～10.0 ng/mL的线性关系良好,r为0.942～0.999,回收率为58.5...     

基质分离固相萃取-液相色谱-串联质谱法快速测定牛肉中4种β2-受体激动剂类兽药残留

目的 建立脂质分离固相萃取包快速测定牛肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林等4种β2-受体激动剂类兽药类兽药残留。与通过性固相萃取柱净化法进行方法比对。方法 样品经葡萄糖醛苷酶/硫酸酯酶酶解,盐析后经CNW 兽药定量检测分散固相萃取纯化法净化,UPLC-MS/MS电喷雾正离子模式,多反应监测采集(MRM)测定。同样步骤改用传统固相萃取柱法净化,上机测定。结果 4种β2-受体激动剂类兽药化合物空白样本加标水平在2.5、12.5、50 mg/kg,回收率在95.39%-106.46%之间,RSD在0.98%-13.26%之间。4种目标化合物的检出限在0.1-0.3 mg/kg之间,定量限在0.3-1.0 mg/kg之间。针对市售66件牛肉样品中目标化合物进行检测,结果均未检出。结论 CNW 兽药定量检测分散固相萃取法可用于牛肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林4种β2-受体激动剂类兽药残留快速检测,兽药定量检测分散固相萃取纯化法优于传统固相萃取法。     

超高效液相色谱-串联质谱方法同时测定猪肉中7种β-受体激动剂残留量

建立同时测定猪肉中苯乙醇胺A、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、西马特罗和氯丙那林7种β-受体激动剂残留量的超高效液相色谱-串联质谱方法（UPLC-MS/MS）。样品采用1%甲酸-乙腈一次性振荡提取,用β-受体激动剂专用固相萃取柱净化、多反应监测（MRM）、内标法定量。结果表明：7种β-受体激动剂检出限均为0.2μg/kg,定量限为0.5μg/kg。空白猪肉中添加1、2、10μg/kg水平,7种β-受体激动剂总体平均回收率72.2%～116.9%,总体相对偏差均小于2.5%。该方法不需要酶解,分析速度快,灵敏度高,重现性好,各项技术指标均满足国内外相关法规要求,可用于猪肉中7种β-受体激动剂残留的快速检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测动物血液中6种β-受体激动剂类药物残留

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法检测动物血液样品中6种β-受体激动剂类药物残留的分析方法。方法 样品经乙腈提取, 经Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱分离, 以乙腈?0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱, 电喷雾正离子(electrospray ionization, ESI+)模式电离, 多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)扫描模式检测。结果 6种化合物在0.2~50 ng/mL范围内均呈现良好的线性关系, 相关系数(r)均大于0.990。检出限为0.04~0.11 μg/kg, 猪血液样品中3个浓度添加水平平均回收率为86.2%~99.2%, 相对标准偏差为3.2%~8.4%。结论 本方法操作简便, 回收率高, 适用于动物血液样品中6种β-受体激动剂类药物同时定性、定量分析。