calase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子肽的工艺研究

以绿豆为原料,用Alcalase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子多肽。采用单因素及多因素试验方法优化酶解条件,考察酶解过程中绿豆分离蛋白预处理、料液比、酶解温度、加酶量、酶解时间等对小肽得率的影响,测定水解产物的功能特性,并用液质联用技术（LC-MS）考察酶解得到的小肽的分子量分布范围。结果表明：绿豆分离蛋白预处理条件为95℃处理20rain,酶解最佳条件为：65℃、pH8．5、底物浓度9％、加酶量6000U／g、酶解240min,水解度可达35．86％。经液质联用（HPLC-MS）分析证明水解产物的分子量集中在1000u以下,绿豆分离蛋白各功能特性得到很好地改善,表明该酶对绿豆分离蛋白水解效果良好,完全能达到制备多肽的水解度要求。     

Alcalase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子肽的工艺研究

以绿豆为原料,用Alcalase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子多肽.采用单因素及多因素试验方法优化酶解条件.考察酶解过程中绿豆分离蛋白预处理、料液比、酶解温度、加酶量、酶解时间等对小肽得率的影响.测定水解产物的功能特性,并用液质联用技术(LC-MS)考察酶解得到的小肽的分子量分布范围.结果表明:绿豆分离蛋白预处理条件为95℃处理20 min.酶解最佳条件为:65℃、pH8.5、底物浓度9%、加酶量6 000 U/g、酶解240 min,水解度可达35.86%.经液质联用(HPLC-MS)分析证明水解产物的分子量集中在1 000 u以下.绿豆分离蛋白各功能特性得到很好地改善,表明该酶对绿豆分离蛋白水解效果良好,完全能达到制备多肽的水解度要求.     

绿豆抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化活性

为提高绿豆淀粉生产过程中产生的废弃物绿豆蛋白的资源利用率,研究了酶法制备绿豆抗氧化肽的最佳条件,并探究其抗氧化活性。通过选用不同蛋白酶及其复合酶,对绿豆蛋白进行水解,综合考虑反应时间、加酶量等因素,对酶解反应进行优化。通过体外抗氧化实验对水解制得的多肽溶液进行抗氧化能力检测,最终确立了最佳的反应条件,具体如下：选用中性蛋白酶进行酶解,底物质量分数3%,酶解时间3 h,加酶量质量分数2%,pH 7,温度50 ℃。按照该条件所制得的绿豆多肽溶液,质量浓度为5 mg/mL时,DPPH自由基清除率可达（91.58±2.44）%,同时还具有较强的还原能力。经凝胶层析柱分离纯化后得到5个分离组分,其中小分子肽段组分5的抗氧化能力最强,高于其他大分子肽段以及未分离多肽。     

Protex-6L碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白的工艺研究

选用Protex-6L蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解生成肽和氨基酸。以水解度为考察指标,对其酶解工艺进行优化。基于单因素实验,考察了酶解参数:pH、酶解温度、底物浓度、加酶量、酶解时间等对酶解的影响,利用designexpert软件设计响应面对酶解条件进行优化分析,并在最优条件下通过SephadexG-75分析水解产物的分子量分布。结果表明:pH8.85、酶解温度57.34℃、底物质量分数7.00%、加酶量6884.36U/g、酶解时间4.19h,此条件下的绿豆分离蛋白的水解度(DH)为36.60%。水解得到的小肽分子量大部分都小于4000u。     

响应面法优化绿豆抗氧化肽的制备工艺

绿豆是一种药食同源性植物,富含丰富的蛋白质和氨基酸,具有巨大的发展潜力。为了合理利用和开发绿豆蛋白资源,人们开发出了天然无毒的抗氧化肽。实验以绿豆蛋白为原料,对绿豆抗氧化肽的制备工艺进行优化。实验采用单因素与响应面结合的实验方法,以DPPH自由基清除率为优化指标,研究分析了酶解温度、酶解时间、酶浓度、pH对DPPH自由基清除率的影响。结果表明,各个因素对绿豆多肽抗氧化肽的抗氧化性影响的主次顺序为:酶解温度 pH酶浓度酶解时间。优化最佳工艺条件为酶解温度43.47℃、pH9.19、酶解时间2.22h、酶浓度6.51%时,其DPPH自由基清除率达到最高为47.03%,与软件分析出的47.13%相差0.23%。本研究能够为绿豆抗氧化肽的制备工艺优化提供一定的理论依据。     

Flavourzyme蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备低聚肽的工艺研究

本文选用Flavourzyme蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解以制备低聚肽。在单因素考察的基础上,采用四因素、三水平的正交试验设计优化酶解条件。得到最适的工艺条件为:温度60℃、pH7.0、底物浓度9%、酶浓度6000U/g,水解时间180min。在此条件下,绿豆分离蛋白水解度的平均值可达22.77%。     

绿豆蛋白酶解物抗氧化活性与其结构、氨基酸组成的相关性

本试验以碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶四种不同来源的蛋白酶酶解绿豆蛋白,测定酶解物的抗氧化能力,结合傅里叶红外光谱技术（FTIR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、圆二色谱（CD）以及氨基酸分析仪,分析酶解物的氨基酸组成以及抗氧化活性与结构变化的相关性。结果表明,绿豆蛋白4 h中性蛋白酶酶解物抗氧化能力最强,其DPPH自由基清除率、羟自由基清除率分别达到71.03%、51.94%,TBARS值达到0.4045 mg/L,Fe2+螯合率达到52.31%;结合SDS-PAGE、FTIR、CD等分析得出:绿豆蛋白酶解物的抗氧化能力与其分子量大小、二级结构构象及氨基酸组成变化紧密相关,与绿豆蛋白相比,绿豆蛋白酶解物的α-螺旋结构含量增加了4.12%、β-折叠结构含量降低了19.99%,而抗氧化活性与其α-螺旋含量的增加、β-折叠含量的降低密切相关;影响抗氧化活性的疏水氨基酸增加了0.208 g/100 g,芳香氨基酸增加了0.207 g/100 g,分子量低于10 kDa的小分子量酶解物具有更好的抗氧化性。综合以上研究结果证实绿豆蛋白酶解物活性与其α-螺旋、β-折叠的相关性较大。     

绿豆多肽的制备工艺及抗氧化作用

以绿豆蛋白为原料,研究碱性蛋白酶酶解剖备绿豆多肽的工艺,以水解度(DH%)为指标,得到酶解最佳条件为:酶与底物比([E]/[S])3.5%,温度55℃,pH值9.0,底物浓度为2%,酶解时间为120 min.抗氧化试验结果表明:绿豆多肽有良好的还原能力,其对羟自由基和超氧阴离子的清除作用的IC50分别是13.96,12.67 mg/mL,抗脂质过氧化能力的IC50为15.77 mg/mL.绿豆多肽在4种抗氧化体系中均表现出较强的抗氧化性.     

碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备多肽的工艺研究

选用Protex-6L碱性蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解生成多肽,以多肽肽得率为考察指标．对其酶解工艺进行研究。基于单因素实验,考察了酶解条件：pH、酶解温度、底物浓度、加酶量、酶解时间等对酶解的影响,利用DesignExpert7．1．1软件设计响应面对酶解条件进行优化分析。结果表明：pH9．37、酶解温度55℃、底物质量分数7．0％、加酶量5000．02U／g条件下酶解4．76h,多肽得率可达到91．37％。     

肾豆分离蛋白酶解液抗氧化性能研究

以肾豆分离蛋白为原料,采用酶法工艺水解,对酶解液的抗氧化性能进行研究,为黔江肾豆的开发利用提供思路和方法。选用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶,分别在各种酶的最适pH和温度下,以相同的酶量对提取的肾豆蛋白进行不同程度的酶解,测定蛋白及其酶解物的还原能力、超氧阴离子自由基清除能力、过氧化氢清除能力。结果表明,木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶对肾豆分离蛋白的酶解作用均能显著提高抗氧化活性,以中性蛋白酶水解1h条件下获得最大活性的抗超氧阴离子自由基酶解产物,同时有较高还原性和过氧化氢清除能力,对应水解程度(DH)2.46。     

骨胶原蛋白的酶解工艺条件

采用胰蛋白酶酶解骨胶原蛋白制备胶原多肽,通过单因素和响应面试验,以水解度为指标,确定胰蛋白酶酶解胶原蛋白的最佳工艺条件。结果表明：最优工艺条件为pH6.91、反应温度60℃、酶添加量200mg/g 胶原蛋白、底物水平0.1/61.5(g/mL)、水解时间为4h;此条件下的胶原蛋白水解度达到29.36%。酶解后胶原蛋白的溶解性及乳化性均显著提高。     

两种来源酶多种方式水解牛骨蛋白

选用两种不同来源的枯草杆菌中性蛋白酶与木瓜蛋白酶,以水解度为特征性指标,采用5种不同水解方式水解牛骨蛋白。结果表明：枯草杆菌中性蛋白酶与木瓜蛋白酶同步水解,效果优于木瓜蛋白酶与枯草杆菌中性蛋白酶分步水解两种方式,最佳酶体系反应条件为pH7.05、温度51℃、加酶总量7000U/g(枯草杆菌中性蛋白酶与木瓜蛋白酶用量比1:1)、150r/min 振荡水解6h,水解度可达27.54%。     

鸡肉蛋白钙离子螯合肽酶解工艺的优化研究

本文研究了不同酶解工艺条件对鸡肉蛋白酶解产物钙螯合力的影响。研究了木瓜蛋白酶酶解时间对钙螯合力的影响,结果表明酶解时间在3 h时,酶解产物有最大钙螯合力。对比了木瓜蛋白酶单酶酶解,木瓜蛋白酶、风味蛋白酶双酶同步酶解,及双酶分步酶解三种酶解方式,发现风味蛋白酶的加入有助于提高产物钙螯合力,且分步酶解法的对产物螯合力提升效果优于同步酶解。针对双酶分步酶解法,研究了木瓜蛋白酶酶解时间、风味蛋白酶酶解时间、木瓜蛋白酶添加量、风味蛋白酶添加量四个因素对酶解产物钙螯合力的影响,并以木瓜蛋白酶酶解时间、木瓜蛋白酶添加量、风味蛋白酶添加量为自变量,酶解产物的钙螯合力为响应值,设计了三因素三水平响应面实验,得到最佳酶解工艺条件为:木瓜酶酶解时间定为3.5 h,风味蛋白酶酶解时间为2.84 h,风味蛋白酶添加量为0.18%。在该条件下酶解产物含有较多的酸性氨基酸及碱性氨基酸,有利于螯合反应的发生。     

糖化酶水解大豆异黄酮

研究了糖化酶水解大豆异黄酮的技术工艺,利用糖化酶水解大豆异黄酮粉得到大豆异黄酮苷元。通过单因素试验对水解过程中的不同影响因素进行考察,运用正交试验优化了糖化酶水解大豆异黄酮的反应条件,优化结果为:水解温度55℃,pH值4.8,时间7 h,水解率可达98.18%。     

响应面法优化紫贻贝蛋白酶解工艺条件

分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶7种蛋白酶对紫贻贝蛋白的酶解工艺条件进行研究。根据水解度和感官评定的结果,确定中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶可以作为紫贻贝蛋白酶解的外加蛋白酶。将上述4种蛋白酶进行两两复配,通过试验确定复合蛋白酶与中性蛋白酶按1:1进行复配,可作为紫贻贝蛋白酶解的最适复配酶。采用响应面优化分析得出复配蛋白酶最佳酶解条件为酶解时间2h、pH7、酶解温度50℃、酶添加量0.4%,在此条件进行实验,测得水解度为70.25%,游离氨基酸总量增加了388.46%。     

凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

酶法从芝麻中提取短肽

以黑芝麻为原料,用乙酸乙酯、异丙醇、石油醚3 种溶剂脱脂,再用碱提酸沉法提取出芝麻蛋白;利用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶对其进行水解制备短肽,以水解度为考察指标优选出最佳单酶,通过正交试验对工艺条件进行优化并确定最佳水解条件。结果表明：乙酸乙酯脱脂效果最好,其脱脂率达90.22%;碱性蛋白酶为最佳单酶;在底物质量浓度1.0g/100mL、温度40.0℃、pH9.0、酶与底物质量比(E/S)3.0%、酶解时间4.0h 时水解度为24.10%,总氮回收率为78.28%,所制得短肽的平均肽链长度为2.93。     

猪皮明胶酶解工艺优化及其清除羟自由基能力评价

利用6种不同的蛋白酶水解猪皮明胶并检测所用酶的酶活,根据水解产物对·OH自由基的清除率,筛选最佳的水解蛋白酶为胰蛋白酶.通过单因素试验和L9(34)正交试验对胰蛋白酶解猪皮明胶的条件进行优化,单因素考察了酶料比、水解时间、水解温度、pH值对羟自由基清除率的影响.得到最佳酶解工艺条件为水解温度34℃,酶解时间3.0h,pH值7.0,酶料比6.0％.在此条件下,木瓜蛋白酶水解产物对·OH自由基的清除率为98.80％.     

大豆粕蛋白酶酶解条件和产物分析研究

以水解度为衡量指标,通过正交试验设计,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和As1.398蛋白酶酶解大豆粕的最佳水解条件进行了筛选.试验结果表明:木瓜蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度60℃、时间5 h、酶浓度5%.胰蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%;As1.398蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH6.5、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%.对酶解产物进行超滤和SDS-PAGE电泳分析表明,因酶解条件不同,大豆粕酶解产物中蛋白质和肽的组成及其数量也不同;酶的种类不同,大豆粕酶解产物组成也不同;大豆粕水解度越高,其酶解产物中小分子肽数量越多.     

Protamex蛋白酶水解大豆蛋白研究

研究了Protamex酶对大豆蛋白的有限水解作用 ,分析了酶浓度、pH值、温度、底物浓度、反应时间等因素对大豆蛋白酶水解的影响 ,给出了Protamex酶水解大豆蛋白的较佳条件 ,并采用凝胶层析过滤色谱分析了不同水解时间水解物分子量的变化 ,发现大豆分离蛋白中存在一些Pro tamex不容易水解成分 ,大豆分离蛋白的Protamex水解过程是一个不均匀的过程。