NS-398对HGF诱导的HepG2细胞增殖及MMP-2、TIMP-2 mRNA表达的影响

目的研究选择性COX-2抑制剂对HGF诱导的肝癌细胞株增殖及MMP-2、TIMP-2 mRNA表达的影响,探讨药物与肿瘤转移之间的关系.方法肿瘤细胞培养于不含有和含有30ng/ml HGF的2?S DMEM培养基中,MTT法检测NS-398对肝癌细胞株增殖的影响,RT-PCR法检测NS-398对肝癌细胞株MMP-2、TIMP-2 mRNA表达的影响.结果在含有30ng/ml HGF的2?S DMEM培养基中肿瘤细胞出现数量增多.浓度低于60μmol/L的NS-398不影响HGF诱导的肝癌细胞株的增殖,但抑制细胞内MMP-2、TIMP-2 mRNA表达.浓度高于90μmol/L的NS-398抑制肝癌细胞株的增殖.结论选择性COX-2抑制剂能够上调肝癌细胞株内TIMP-2/MMP-2的mRNA比值,并可能具有降低肿瘤细胞运动性的潜在作用,且具有抑制肿瘤细胞增殖的作用.     

环氧化酶-2抑制剂NS398对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨环氧化酶-2(Cyelooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-0增殖和凋亡的影响.方法:不同浓度NS398作用体外培养的786-0细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96 h后肾癌细胞786-0的增殖活性.终浓度为30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72 h后,免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;RT-PCR法检测COX-2mRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型.RT-PCR法检测显示NS398作用后能降低COX-2mRNA表达.免疫细胞化学结果显示NS398作用后能降低COX-2蛋白表达.流式细胞仪检测表明,30、180 μmol/L NS398处理组凋亡率分别为14.3%±1.4%、31.5%±2.1%,与对照组凋亡率2.1%±0.4%比较,凋亡率显著上升(P<0.05).结论:NS398可能通过降低COX-2表达,抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡.     

非类固醇类消炎药对胃癌细胞形态学及蛋白表达的影响

目的观察3种非类固醇类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)阿司匹林、消炎痛、NS-398对人胃低分化腺癌细胞株MKN-45的影响,探讨非类固醇类消炎药预防胃癌的机制.方法采用光镜、电镜、免疫细胞化学等技术,研究NSAIDs对胃癌细胞MKN-45的形态学变化以及对COX-1,2、hMLH1、hMSH2蛋白表达的影响.结果不同NSAIDs对细胞形态的影响不同.扫描电镜检查发现MKN-45细胞表面的分泌泡有脱失现象.免疫细胞化学研究发现正常MKN-45细胞COX-2、 hMLH1、hMSH2表达,COX-1不表达.30μmol/L NS-398作用于MKN-45细胞后COX-2表达缺失.结论 COX-2选择性抑制剂NS-398在一定浓度可以抑制COX-2表达,对治疗胃癌有一定作用.     

丹皮酚逆转内质网应激诱导的HepG2细胞凋亡抵抗

目的 探讨丹皮酚逆转内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞凋亡抵抗的作用机制.方法 采用MTT及末端双脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)观察内质网应激诱导剂衣霉素对正常人肝细胞株HL-7702及人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖抑制及凋亡作用;Western blot法测定内质网应激诱导剂衣霉素对正常肝细胞HL-7702及肝癌细胞HepG2的环氧合酶-2(COX-2)表达的影响;采用Western blot法及TUNEL法观察COX-2的选择性抑制剂塞来昔布对内质网应激下的肝癌细胞HepG2 COX-2的表达及凋亡的影响;采用MTT及TUNEL法观察丹皮酚对内质网应激下的HepG2肝癌细胞的增殖抑制及凋亡作用;Western blot法观察丹皮酚对内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞 COX-2表达的影响:结果与正常肝细胞HL-7702相比,在 TM诱导的内质网应激作用下肝癌细胞HepG2的增殖抑制率及凋亡率减少(P＜0. 05),并且内质网应激可诱导肝癌细胞HepG2产生COX-2蛋白.而丹皮酚可下调内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞中COX-2的表达,并使内质网应激诱导的肝癌细胞的凋亡增加.结论 丹皮酚可通过下调COX-2的表达从而逆转内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞凋亡抵抗.     

NS-398依赖Apaf-1,Caspase3路径和影响VEGF分泌诱导骨髓瘤细胞凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在人类多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和PCM6中的表达及其抑制剂NS-398对骨髓瘤细胞的凋亡诱导及其作用机制。方法体外培养人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和PCM6细胞,通过Western-blot法检测骨髓瘤细胞株中COX-1和COX-2蛋白质的表达。NS-398作用各细胞不同时间后,利用MTT比色法检测对细胞增殖的影响;通过流式细胞仪分析法检测RPMI8226细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)的变化;采用Western-blot法检测了凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease-activating factor-1,Apaf-1)表达,采用比色法和ELISA法检测半胱氨酸酶3(Caspase3)、前列腺素E2(PGE2)和血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平的变化。结果①两种骨髓瘤细胞株中均有COX-1和COX-2蛋白质的表达;②NS-398对RPMI8226和PCM6细胞增殖均具有抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0·05),对RPMI8226细胞的增殖抑制作用较PCM6明显;③经NS-398处理48h后,RPMI8226和PCM6细胞均出现凋亡,对RPMI8226的凋亡影响较PCM6明显,在NS-398浓度为10,25,50μmol/L时,RPMI8226低膜电位细胞比例分别为19·6%,29·1%和41·8%(对照组为16·3%)(P<0·05);④RPMI8226细胞经NS-398处理48h后,Apaf-1蛋白表达和Caspase3的活性显著增加的同时,PGE2和VEGF的分泌水平明显下降。结论NS-398诱导骨髓瘤细胞株发生凋亡,其抗肿瘤作用机制可能是通过拮抗COX-2的活性进而耗散细胞线粒体跨膜电位和活化存在于线粒体信号传导通路下游的Apaf-1和Caspase3凋亡因子,并且抑制骨髓瘤细胞分泌PGE2和VEGF途径诱导细胞凋亡。NS-398将来可能成为作为多发性骨髓瘤(MM)治疗和化疗的重要工具。     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS-398抗结肠癌机制及对5-氟尿嘧啶化疗的辅助作用

目的 研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398的抗结肠癌作用机制及其在5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗中的辅助作用。方法 (1)用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测结肠癌HT-29、SW480细胞COX-2 mRNA表达后,将NS-398作用于两株细胞,用ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)水平。(2)将NS-398、5-Fu、NS-398 5-Fu分别作用于两株细胞,24、48和72h后用MTT法检测细胞增殖状态。以流式细胞技术观察药物对细胞凋亡的影响。结果 (1)HT-29细胞中COX-2 mRNA呈高表达,NS-398作用后PGE2表达水平明显降低;SW480细胞中COX-2 mRNA表达呈阴性,NS-398作用后PGE2水平无明显变化。(2)NS-398、5-Fu呈剂量依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡;NS-398 5-Fu抗增殖的作用较单一用药时更明显,而凋亡诱导作用与单一用药差异无显著意义。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398具有抗结肠癌作用;NS-398抗结肠癌作用可能不依赖于COX-2和PGE2的表达水平;NS-398与5-Fu具有协同的抗增殖作用。     

环氧合酶-2抑制剂调控Stat5信号转导通路抑制结肠癌细胞增殖的分子机制

目的观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对结肠癌细胞系SW480中Stats与PPAR8信号转导通路的影响,以期初步阐明选择性COX-2抑制剂抗结直肠癌非COX-2依赖性的作用机制。方法应用RT—PCR检测结肠癌细胞系SW480中COX-2 mRNA表达水平,用选择性COX-2抑制剂NS-398处理结肠癌细胞系SW480,Western印迹检测Stats与PPAR8信号转导通路成员表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡情况。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX-2 mRNA表达,NS-398（75μmol／L）作用于SW480细胞72h后,G1期细胞比率由31．2％上升至40．6％,S期细胞比率由52．8％下降至41．2％,细胞增殖受抑制。Stats、PPAR8、细胞周期蛋白D1与Bcl—x1表达水平随NS-398作用时间延长而下降。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过非COX-2依赖途径影响结肠癌细胞的增殖。     

NS398通过环氧化酶-2依赖途径诱导肾癌细胞786-O凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-O增殖和凋亡的影响及其机制。方法同浓度NS398作用体外培养786-O细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96h后肾癌细胞786-O的增殖活性。30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72h后,RT-PCR法检测COX-2 mRNA表达;免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR法和免疫细胞化学检测显示NS398作用后能降低COX-2 mRNA和蛋白表达。ELISA检测显示NS398作用后PGE2释放水平呈下调趋势;流式细胞仪检测表明,30、180μmol/L NS398处理组凋亡率分别为(14.3±1.4)%、(31.5±2.1)%,与对照组凋亡率(2.1±0.4)%比较,凋亡率显著上升(P<0.05)。结论NS398可能通过COX-2依赖性途径抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用.方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用.卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率.流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P＜0.05).NS-398(200 μmol/L)作用Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).而卡铂(80 mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用.NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关.NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用.     

环氧合酶-2选择性抑制剂对乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2(COX-2)的特异性抑制剂NS-398对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡作用,及其对阿霉素(ADM)诱导的MCF-7细胞凋亡作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析NS-398对MCF-7细胞的生长抑制作用,进一步用NS-398和ADM单独及联合作用于MCF-7细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Pax的表达。结果40μg／ml的NS-398就可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,下调Bcl-2蛋白表达;和ADM联用凋亡率显著增高。结论NS-398可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,并且和阿霉素有协同作用,其诱导凋亡与Bcl-2表达下调有关。     

抗人胸腺细胞单克隆抗体2G_2B_2和2G_2C_2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现,它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应;免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞;与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示,单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类,腹水效价达１：１２８０００,所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ,无抗原调变作用。故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似ＯＫＴ１０的抗ＣＤ３８单抗,但竞争抑制结果表明三者分别作用于不同的抗原决定簇,即２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是两个抗ＣＤ３８新单抗。     

CHADS_2/CHA_2 DS_2-VAS_C评分的应用

临床上CHADS2评分和CHA2DS2-VASC评分主要用来对非瓣膜性心房颤动(房颤)血栓栓塞的风险进行评估。由于CHA2DS2-VASC评分系统更为全面,并能筛选出不需要抗凝治疗的"真正的低危患者",因此现多应用此评分系统。然而,两种评分系统所包含的危险因素同样适用于其他心血管疾病,两者也可以被用来对房颤风险、左心房功能进行评估,同时也可对非房颤患者进行预后评估。     

评价房颤CHADS2评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值

目的：探讨房颤评分系统CHADS2(欧洲)评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值。方法纳入2013年1月1日-2013年12月1日就诊于本院心血管内科怀疑冠心病并行冠状动脉造影检查的连续病例429例,根据其造影结果分为对照组(n=51)及冠心病组(n=378)。根据患者的临床资料计算其CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分,根据其冠状动脉造影结果计算Gensini积分评价其病变严重程度,并对3种评分的冠心病预测能力进行评价。结果 CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分与病变支数(r=0.317,P＜0.01;r=0.332,P＜0.01;r=0.330,P＜0.01)及Gensini积分均有一定相关性(r=0.240,P＜0.01;r=0.274,P＜0.01;r=0.295,P＜0.01)。截断点分析显示, CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病的预测价值最高,其灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.860、0.804、0.832(95%CI：0.766~0.898)。结论 CHADS2及其衍生评分对冠心病有一定的预测价值,尤其是CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病有较高的预测价值。     

论互补性在医护关系中的核心作用

医生和护士无论在职业特点还是在工作内容上都是两个独立的职业,相互不能替代,在医疗过程中也都不能缺少。但医护工作分工不分家,如何处理好医护关系,则要求护士与医生之间既分工又合作,协调配合,相互帮助,相互尊重,从而体现了互补性在医护关系中的核心作用。１互...     

Li_2O-Na_2O-Al_2O_3-SiO_2系玻璃中的Na~+自扩散

应用放射性同位素法,研究了xLi_2O·(31.8-x)Na_2O·5.8Al_2O_3·62.4SiO_2(mol%)系玻璃中的Na~+自扩散温度范围为250～450℃。从实测数据,用数值法与图解法求得Na~+的自扩散系数D_(Na)~*。根据玻璃的组成和扩散温度,D_(Na)~*值变化于8.8×10~(-8)～1.1×10~(-11)cm~2s~(-1)。随着玻璃中Na_2O含量的减少,D_(Na)~*逐渐降低,显示明显的双碱效应。由不同碱离子的Dietzel场强之差,讨论了这种双碱效应。D_(Na)~*随温度指数上升,符合Arrhenius方程。据此方程,应用最小二乘法,获得扩散活化能E和指数前项D_o,E值约为79～91kJ/mol。     

HgI_2-Ag_2S-As_2S_3硫系玻璃离子选择电极

研究了适合作为离子选择电极的HgI_2-Ag_2S-As_2S_3和HgS-Ag_2S-As_2S_3系统的玻璃形成区。通过对这些玻璃性质与结构分析,发现xHgI_2·(100-x)(0.5Ag_2S·0.5As_2S_3]系列玻璃是很好的传感膜材料。采用该系列玻璃制成了对Ag~+离子10~(-6)～10~(-1)mol/L浓度范围具有能斯特响应斜率60mV/mol·L~(-1)和对Hg~(2+)离子10~(-6)～10~(-1)mol/L浓度具有能斯特斜率30mV/mol·L~(-1)的电极。这些电极具有优良的电化学性能。结合非晶态固体电解质的离子迁移模型,提出了这类硫系玻璃屯极的响应机理。     

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用

目的:探讨低剂量过氧化氢(H2O2)对人肝癌细胞株HepG2的促增殖作用及该作用与NF-κB和细胞周期的关系. 方法: 不同剂量H2O2直接作用于培养的HepG2细胞;20 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)预处理细胞2 h, 50 μmol/L的H2O2作用HepG2细胞;50 μmol/L H2O2分别作用于G1, G2/M, S期细胞,MTT法测定细胞增殖活性. 结果: 50 μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用,此作用可以被PDTC抑制;50 μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长. 结论: 低剂量H2O2可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.     

2－EHA促癌性及慢性二步致癌实验

建立了Ｓｋｈ／ＨＲ－１裸鼠皮肤慢性二步致癌实验模型。实验鼠在一次涂抹发癌剂ＤＭＢＡ之后，连续１９周涂抹阳性促癌对照物（ＴＰＡ）及试验促癌物（２－ＥＨＡ），经过４０周实验观察，ＴＰＡ促癌作用得以复制；２－ＥＨＡ在１％，５％，１０％，２０％浓度范围内，表现明显的剂量－反应关系，各组动物平均患瘤数和患瘤率显著高于阴性对照组，在高剂量组，发生皮肤小瘤恶变为鳞状上皮癌。     

吸光系数法测定二氯二茂钛原料药的含量

采用吸光系数法对二氯二茂钛原料药进行含量测定。３９１ｎｍ处测得Ｅ１％１ｃｍ＝９８．３２,平均回收率为９８．７７％～１０１．７４％。相对标准差ＲＳＤ＝０．１２％～０．６６％。测定不同温度,湿度下放置不同时间原料药的含量。与工作曲线法相比。两者之间无显著性差异。