染料木黄酮通过PI3K/AKT途径抑制雄激素非依赖性LNCaP细胞

目的 利用LNCaP细胞建立去势抵抗前列腺癌细胞模型,研究染料木黄酮(GEN)对去势抵抗前列腺癌细胞生长的影响及可能的机制.方法 在无激素的血清环境下长时间培养LNCaP细胞,获得稳定生长的雄激素非依赖性 LN-CaP前列腺癌细胞,并鉴定细胞.以不同浓度的 GEN(0、6. 25、12. 5、25、50、100、200 μmol/L)分别作用于雄激素依赖性LNCaP和雄激素非依赖性LNCaP细胞24、48、72 h ,利用CCK-8法检测细胞增殖活性,Western blot法检测前列腺特异性抗原(PSA)、P53抑癌基因、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原( PCNA)在雄激素非依赖LNCaP细胞中的表达水平. Western blot法检测其对PI3K/AKT信号通路的调节作用.结果 GEN对雄激素非依赖性LNCaP细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖关系. Western blot显示雄激素非依赖性前列腺癌细胞内PCNA、Cyclin D1随着GEN浓度的增加逐渐下调,P53随着GEN浓度的增加逐渐上调(P＜0. 05). GEN抑制了PI3K和AKT的磷酸化.结论 GEN可以在体外抑制雄激素非依赖性LNCaP细胞的增殖,其作用可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路,进而抑制细胞增殖实现的.     

阿比特龙治疗转移性去势抵抗性前列腺癌的有效性和安全性初步评价

目的：收集并整理在我院泌尿外科治疗中心应用阿比特龙联合泼尼松治疗确诊为去势抵抗型前列腺癌（castration re－sistant prostate cancer,CRPC）的患者临床资料,分析包括PSA缓解率、药物不良事件以及无进展生存时间等早期疗效情况,为后续治疗提供经验。方法：本研究共纳入2015年10月至2017年10月接受阿比特龙联合泼尼松治疗12周以上的55例有效CRPC患者的临床资料,长期随访并记录治疗期间血清特异性前列腺抗原（PSA）、血清睾酮水平以及复查全身骨显像等其他影像学检查资料来动态观察患者疾病变化情况,分析其中。结果：数据分析后,按照PSA工作组（PSA workgroup,PSAWG）标准,55例患者PSA总体缓解率56.4%,低于国际多中心随机双盲对照实验COU-AA-302所报道的未经化疗的患者PSA缓解率（68%）,有明显PSA缓解的31例患者均出现血清PSA值下降超过基线值50%,部分患者甚至下降达到90%以上,而临床症状也得到明显改善。按照基线情况不同分为：PSA基线值的不同可以分为PSA＜20 ng/mL、20~80 ng/mL、＞80 ng/mL,其PSA缓解率分别为63.6%、59.1%、55.6%;Gleason评分不同分为＜8分、8分、＞8分,其PSA缓解率为30.7%、58.1%、81.8%;有效内分泌治疗时间的不同可分为＜18个月、18~36个月、＞36个月,其PSA缓解率为63.2%、52%、54.5%。另外在早期使用阿比特龙的初期,我院泌尿外科治疗中心共观察并记录到15例（15/51,27.2%）患者出现PSA Flare现象。将患者分为缓解组和未缓解组,生存分析得出使用醋酸阿比特龙联合泼尼松治疗的CRPC患者PFS明显获益（17.06个月vs. 11.68个月）。结论：大部分使用醋酸阿比特龙联合泼尼松治疗的CRPC患者都在其中受益,临床症状明显改善,生活质量提高。除Gleason评分外,不同基线值患者的预期疗效并无关联,使用醋酸阿比特龙联合泼尼松治疗的CRPC患者PFS明显获益,并且发现PSA Flare现象会在一定程度上使肿瘤对药物的应答产生更积极的反应,影响患者达到PSA缓解的水平,对于不良事件的发生也应该严密监测,辅助治疗。     

醋酸阿比特龙治疗去势抵抗性前列腺癌的安全性与患者基线之间相关性的早期分析

目的分析我院泌尿外科治疗中心确诊为去势抵抗型前列腺癌(CRPC)的患者在应用醋酸阿比特龙联合泼尼松治疗的早期出现的不良反应现象,探索患者部分基线值情况对不良反应出现概率的影响。方法本研究分析纳入2015年10月至2017年10月接受醋酸阿比特龙联合泼尼松治疗用药12周以上的55例CRPC有效病例患者的临床资料,长期随访并记录治疗期间患者疾病变化情况。结果 55例接受治疗的患者中,发生不良反应的患者共14例,占比25.5%。按年龄、Gleason评分、基线PSA值、骨转移情况以及是否行二线内分泌治疗的基础情况不同,人数分布也具有较大差异,通过统计学计算方法得出上述基线值对于不良反应发生概率并无显著影响。同时与COU-AA-302对比后,不良反应发生的概率有部分差异。结论对于醋酸阿比特龙联合泼尼松治疗CRPC患者来说,不良反应的出现不受患者年龄、PSA基线值、Gleason评分等基线不同情况的影响,不良反应的总体发生率呈较低水平且可控。     

阿比特龙治疗转移性去势抵抗性前列腺癌1 例

2009年9月至2014年12月在中南大学湘雅三医院泌尿外科收治1例转移性去势抵抗性前列腺癌(metastatic castration-resistant prostate cancer,mCRPC)患者,服用阿比特龙后,患者体能状态较好,疼痛较前稍缓解;复查结果示 总前列腺特异抗原(total prostate specific antigen,tPSA)、游离前列腺特异抗原(free prostate specific antigen,fPSA)明显降 低,tPSA暂波动在30~50 ng/mL,fPSA暂波动在10~20 ng/mL;复查MRI示肿瘤左侧外周带结节较前缩小;MRI及全身骨 扫描示骨转移较前无明显变化,未见明显新发病灶,提示阿比特龙治疗转移性去势抵抗性前列腺癌患者,不仅可显著 降低前列腺特异抗原(prostate specifi c antigen,PSA)水平,缩小肿瘤体积,而且明显减缓骨转移进展,减轻疼痛症状。     

阻滞Hedgehog信号通路及自噬协同抑制去势抵抗性前列腺癌细胞生长的实验研究

目的探讨阻滞Hedgehog信号通路及抑制自噬对去势抵抗性前列腺癌细胞生长的影响及可能的机制。方法设立对照组、GANT61（5、10、25、50μmol/L）、3-MA（0.2μmol/L）及两者联合组分别给药48～72h后采用MTT实验检测去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞及22RV1细胞增殖能力; 22RV1细胞4组分别处理72h后流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期、Western blot检测细胞中Gl I1、p62以及Bax蛋白的表达水平。结果 （1）GANT61抑制前列腺癌PC-3细胞及22RV1细胞增殖呈时间和剂量依赖性,加入自噬抑制剂3-MA后细胞生长抑制增强;（2）GANT61使22RV1细胞凋亡增加,加入自噬抑制剂3-MA后细胞凋亡进一步增加;（3）GANT61对前列腺癌22RV1细胞周期明显阻滞于G1期,加入3-MA后使细胞周期于G1期进一步增加;（4）GANT61使GLI1蛋白及p62蛋白表达水平降低,使Bax蛋白表达水平增加,加入自噬抑制剂3-MA后Bax蛋白表达水平进一步增加,p62蛋白表达水平较单用GANT61组有所增加。结论抑制Hedgehog信号通路及自噬协同抑制去势抵抗性前列腺癌细胞生长。     

醋酸阿比特龙联合强的松治疗去势抵抗型前列腺癌的疗效分析

目的 分析去势抵抗型前列腺癌(castration resistant prostate cancer,CRPC)患者接受醋酸阿比特龙(abiraterone acetate,AA)联合强的松(prednisone,P)治疗的疗效及安全性,为后续治疗提供经验。方法 筛选2018年7月至2021年4月首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿外科共计46例CRPC患者,选择使用AA+P治疗,最后共计37例患者纳入研究。分析37例患者的基本资料,参照前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)工作组2(PSA Working Group 2, PSAWG2)标准计算PSA缓解率,按照实体瘤的疗效评价(response evaluation criteria in solid tumors,RECIST)标准评估患者治疗期间的影像学结果,同时分析行多西他赛化疗、PSA闪烁现象以及基线PSA水平、肿瘤T分期、Gleason评分等指标对AA+P治疗的PSA缓解率的影响差异。结果 37例CRPC患者接受AA+P治疗,中位随访时间9.7个月。在接受AA+P初始,有5例患者发生了PSA闪烁现象,其PSA达峰再次下降至基线水平以下的中位时间为3.0(2.0,4.5)个月。37例患者PSA总体缓解率为59.5%,其中13例患者达到缓解后又发生了PSA复发,其中位复发时间为7.0个月。参照RECIST标准,37例CRPC患者中,有7例患者发生了影像学进展,而5例有明确的影像学缓解。6例达到PSA缓解后出现复发的患者将强的松转换为地塞米松,其中2例PSA再次缓解,PSA缓解率为33.3%。化疗失败后接受AA+P的患者PSA缓解低于未行化疗的患者(20.0% vs 65.6%,P=0.076)。此外,有PSA闪烁现象的PSA缓解率低于无此现象的患者(20.0% vs 65.6%,P=0.076)。醋酸阿比特龙的总体耐受性较好,药物不良反应少。结论 CRPC患者口服醋酸阿比特龙联合强的松疗效确切,安全性高,对于不愿意选择或不能耐受化疗的患者,有较高的PSA缓解率。PSA闪烁现象在AA治疗过程中并不少见,这部分患者达到PSA缓解的比例较低。PSA缓解后的中位复发时间为7.0个月,部分PSA进展患者用地塞米松替换强的松可重新达到PSA缓解,可恢复对阿比特龙治疗的敏感性。     

宫颈癌Ki-67及PCNA表达的比较研究

目的研究Ki-67及PCNA两种增殖抗原在宫颈癌组织中的表达特点，了解其表达的相关性。方法采用免疫组化方法（S—P法）对57例宫颈癌（包括原位癌，早期浸润癌及浸润癌）组织切片进行Ki-67及PCNA染色，并对两者进行相关性分析，同时检测9例慢性宫颈炎作为对照研究。结果9例慢性宫颈炎中Ki-67均表达阴性，而PCNA有8例基底细胞阳性；在宫颈癌中PCNA抗原表达强度明显高于Ki-67（P〈0．005）。结论在宫颈癌组织中PCNA抗原表达较强，几乎涵盖了所有Ki-67的增殖信息。     

Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖的作用及机制的探讨

目的:研究植物雌激素染料木黄酮对人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制. 方法:应用MTT法检测不同浓度染料木黄酮对3AO细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞的超微结构改变,TUNEL法确定凋亡,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,免疫细胞化学技术检测雌激素β受体的表达. 结果: 3AO细胞经不同浓度染料木黄酮处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用随时间延长及浓度增高而增强,10 mg/L和20 mg/L染料木黄酮作用72 h后,抑制率分别达到54.24%和65.99%. 染料木黄酮阻断3AO细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性. 电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征. TUNEL法观察到大量阳性凋亡细胞. 免疫细胞化学法检测到用药后,ERβ表达明显加强. 结论:染料木黄酮对3AO细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,并诱导其发生凋亡. 染料木黄酮可能通过雌激素β受体途径发挥药理作用,诱导卵巢癌细胞发生凋亡.     

水飞蓟宾对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其机制研究

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,Slybin)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抗增殖作用及其机制.方法 MTT法观察水飞蓟宾对细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构的变化.结果水飞蓟宾可明显抑制HepG2的增殖,经水飞蓟宾作用后PCNA及Ki-67的表达显著减弱(P<0.01);水飞蓟宾可使实验组细胞阻滞于G2/M期,并产生明显凋亡(P<0.05);光镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,电镜可见凋亡及凋亡小体.结论水飞蓟宾可通过下调HepG2中PCNA及Ki-67蛋白的表达,改变细胞周期进程,诱导细胞凋亡来发挥其增殖作用.     

烷氧染料木黄酮衍生物的合成及其抗癌活性研究

目的研究烷氧染料木黄酮衍生物的体外抗癌活性。方法在催化剂的作用下,染料木黄酮与卤代烃发生取代反应,生成了一系列染料木黄酮衍生物,并通过MTT法检测其对人急性粒细胞性白血病（HL-60）细胞、人结肠癌（HT-29）细胞和人胃癌（SGC-7901）细胞的增殖抑制作用。结果合成了4个烷氧取代染料木黄酮衍生物,其中化合物3a（4′,5,7-三甲基染料木黄酮）对HL-60、HT-29和SGC-7901细胞增殖的抑制作用均强于5-氟尿嘧啶（5-Fu）。结论染料木黄酮衍生物3a具有潜在的抗癌活性。