苦丁茶叶制虫茶粗多酚对HepG2人肝癌细胞的凋亡诱导效果

茶多酚是茶叶中的功能性成分。虫茶作为传统饮品也含有这些化合物,这些多酚类物质的抗癌效果有待科学的研究。本研究对苦丁茶叶制虫茶粗多酚(CPKMI)的癌细胞凋亡诱导作用进行了测定。采用MTT法对CPKMI对癌细胞的体外生长抑制作用进行了分析,然后进一步采用RT-PCR检测对CPKMI的癌细胞凋亡诱导效果进行了实验。经过25、50和100μg/m L的CPKMI处理癌细胞48h,Hep G2人肝癌细胞的增殖被抑制,其中100μg/m L的CPKMI表现出最高的抑制率(72.8%)。CPKMI也可以通过上调caspase-3、caspase-9、p53、p21、E2F1、p73和下调HIAP-1,HIAP-2基因的mRNA的表达对Hep G2癌细胞起到显著的凋亡诱导效果(p0.05)。由此可见,CPKMI表现出强的体外癌细胞凋亡诱导效果。     

γ-生育三烯酚对体外培养的人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用

为了探讨γ-生育三烯酚对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,采用MTT、分裂指数、集落形成、形态学观察法测定细胞活力,Hoechst 33258荧光染色法和DNA ladder法检测检测细胞凋亡。结果表明:γ-生育三烯酚能够显著抑制HT-29细胞的增殖(P0.05),且存在剂量-效应关系,其48 h半数抑制浓度(IC 50)为35.45μmol/L;形态学观察和DNA ladder结果显示受试物能够诱导HT-29细胞凋亡。γ-生育三烯酚对人结肠癌HT-29细胞具有生长抑制作用,此作用可能与其凋亡诱导效应有关。     

凤丹籽油对肝癌HepG2细胞抑制作用的研究

采用气相色谱-质谱联用仪(GC/MS)分析凤丹籽油脂肪酸成分,并通过质谱库检索,结合保留指数验证,采用峰面积归一化法测定其相对含量;运用CCK-8法检测凤丹籽油体外抑制HepG2增殖活性,并绘制出不同剂量凤丹籽油抑制作用下的HepG2细胞生长曲线。结果表明,凤丹籽油主要含有α-亚麻酸(60.694%)、亚油酸(30.424%)等,不饱和脂肪酸相对质量分数高达91.494%。从细胞生长曲线可以看出,随着凤丹籽油添加量的增加癌细胞数量普遍降低,且高剂量组急剧减少甚至呈现负增殖。凤丹籽油对HepG2细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现出一定的时间和剂量效应。结果表明,凤丹籽油主要含有α-亚麻酸、亚油酸,具有较强的体外抑制肝癌细胞的生理活性。     

金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱导人结肠癌 HT-29 细胞凋亡

目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内活性氧水平、线粒体膜电位、细胞周期和细胞凋亡率变化;蛋白免疫印迹检法测蛋白Caspase-3,9和胞内细胞色素C的表达。结果:金钗石斛脂溶性生物碱提取物能降低HT-29结肠癌细胞存活率,呈剂量和时间效应,48 h半数抑制浓度(IC50)为0.72 mg/m L;金钗石斛脂溶性生物碱提取物能诱导HT-29细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G2期;金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱使线粒体膜电位降低,胞内活性氧浓度升高;激活型Caspase-9,3与胞内细胞色素C表达水平增高。结论:金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29结肠癌细胞的生长具有抑制作用并诱导细胞凋亡,其可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。     

金莲花总黄酮诱导人HT-29结肠癌细胞凋亡机制的研究

本文研究了金莲花总黄酮乙醇提取物(TFETC)诱导人HT-29结肠癌细胞凋亡的作用机制。MTT法测定TFETC对HT-29细胞增殖的影响,200μg/mL浓度TFETC对癌细胞的抑制率达到81%。通过4,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)法和流式细胞术检测到金莲花总黄酮乙醇提取物可以诱导癌细胞凋亡,200μg/mL浓度TFETC处理的癌细胞通过显微镜观察出现凋亡,亚G1期DNA含量达到28.9%。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定TFETC对HT-29细胞内Bcl-2,Bcl-xL,Bax,caspase-9,caspase-3和COX-2等基因表达的影响。TFETC在mRNA水准上下调抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xL,上调促凋亡基因Bax,caspase-9和caspase-3的表达。此外,TFETC还可抑制HT-29细胞内COX-2基因的表达,并呈剂量效应关系。本研究结果显示金莲花总黄酮乙醇提取物可以通过内源性线粒体途径诱导人HT-29结肠癌细胞的凋亡,同时金莲花总黄酮乙醇提取物还可通过下调COX-2基因的表达抑制HT-29细胞的增殖。     

蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2增殖及凋亡的影响

为探讨蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2 增殖和凋亡的影响,采用MTT 法检测蜂胶醇提物对Hep G2 细胞增殖的抑制作用,用荧光倒置显微镜和流式细胞仪分析蜂胶醇提物对Hep G2 细胞凋亡的影响。结果表明：12.5～200μg/mL 质量浓度的蜂胶醇提物作用24、48h 后,均能不同程度地抑制Hep G2 细胞的增殖,呈明显的时间、剂量依赖关系,半数抑制质量浓度(IC50)分别是115、78μg/mL。作用8h 后,Hep G2 细胞出现不同程度的凋亡,凋亡率由6.36% 上升到21.9%,呈现出剂量依赖关系。故蜂胶醇提物可显著抑制人肝癌细胞Hep G2 的生长,诱导其凋亡。     

溶剂法提取火龙果籽油工艺优化及其理化性质

以火龙果籽(H.polyrhizus)为原料,采用索氏抽提法提取火龙果籽油,通过单因素实验研究了抽提溶剂、干燥时间、液料比、抽提温度、抽提时间等因素对油脂提取率的影响,响应面优化实验确定了溶剂抽提火龙果籽油的最佳工艺条件,并分析了火龙果籽油的理化性质及其脂肪酸组成.结果表明,石油醚抽提法提取火龙果籽油的最佳条件为:液料比7∶1 (mL∶g),抽提温度78℃,抽提时间3h,在此条件下油脂提取率31.47％;火龙果籽油的酸值、过氧化值等指标达到食用油脂的国家标准;GC-MS分析结果表明火龙果籽油中含8种脂肪酸,主要为亚油酸(47.98％)、油酸(28.13％)、棕榈酸(16.77％)、硬脂酸(5.02％);通过面积归一化法计算可知其不饱和脂肪酸占油脂总量的77.58％,因而是一种具有较高的开发潜力的营养油脂.     

嗜酸乳杆菌胞外蛋白的分离纯化及抑制HT-29细胞增殖作用的研究

为探讨嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)分泌的相关蛋白质及其促进肠道稳态的功能作用,本研究以L.acidophilus作为研究对象,固体培养获得胞外蛋白粗提液,采用Sephadex G-100凝胶层析纯化,收集胞外蛋白各组分,用考马斯亮蓝法和SDS-PAGE方法分别测定各蛋白组分的含量及分子量,然后采用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)鉴定各蛋白组分抑制HT-29细胞增殖的能力。研究显示,分离L.acidophilus胞外蛋白获得两个蛋白峰,分子量分别为67 ku和37 ku,含量分别为0.066 mg/m L和0.021mg/m L,不同浓度(0.001μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L和1μg/m L)的67 ku和37 ku胞外蛋白分别对HT-29细胞作用12 h、24 h、48 h和72 h,均显示抑制细胞增殖的作用,且呈现明显的量效关系和时间依赖效应,其中1μg/m L的67 ku和37 ku胞外蛋白对HT-29细胞作用48 h的抑制率分别为(38.41±1.94)%和(45.06±1.58)%。综上所述,固体培养L.acidophilus可获得两种胞外蛋白(即37 ku和67 ku),其对HT-29细胞增殖具有不同程度的抑制作用,其中37 ku胞外蛋白的抑制作用较强。     

响应面法优化超临界CO2萃取火龙果籽油工艺

采用响应面法优化超临界二氧化碳萃取工艺提取火龙果籽油,用Design Expert软件对试验数据进行分析,并用气相色谱-质谱法对萃取所得火龙果籽油进行成分分析。结果表明:萃取时间、萃取压力、萃取温度对火龙果籽油超临界CO2萃取工艺影响显著,其最佳提取工艺参数为萃取压力25MPa、萃取温度40℃、萃取时间3.5h,火龙果籽油萃取得率为30.21%。火龙果籽油中脂肪酸主要成分以不饱和脂肪酸为主,占总脂肪酸含量的74.64%,其中亚油酸及其异构体为46.91%,油酸及其异构体为25.36%;饱和脂肪酸以棕榈酸为主,棕榈酸及其异构体占总脂肪酸含量的21.10%。火龙果籽油可以作为一种食品保健油进行开发。     

人工神经网络优化火龙果籽油的超临界CO_2萃取工艺

采用超临界CO2萃取火龙果籽油,通过单因素试验研究了干燥时间、原料粒度、CO2流量等因素对油脂得率的影响,利用JMP 7.0软件中的人工神经网络平台,建立了超临界CO2萃取火龙果籽油的人工神经网络模型,并优化了萃取过程的工艺条件。试验结果表明:火龙果籽晒干后经(80±1)℃干燥1 h,稍粉碎过40目筛,CO2流量为20 L/h,萃取压力30 MPa,萃取温度55℃,萃取时间3 h,油脂得率达31%以上;超临界CO2萃取的火龙果籽油酸值、过氧化值都较低,不饱和程度较高,是一种具有较高的开发潜力的植物油脂。     

乳源酪蛋白糖巨肽对结肠癌HT-29细胞中COX-2、iNOS、GST-π表达的影响

目的:研究乳源酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)对人结肠癌HT-29细胞增殖及细胞中环氧合酶-2(cyclooxyenase-2,COX-2)、诱导性一氧化氮合酶(induc ible nitric oxide synthase,iNOS)及谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione-S-transferaseπ,GST-π)表达的影响,为探讨CGMP作为功能性食品提供可靠的依据。方法:采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验测定不同剂量CGMP作用12、24、48 h对结肠癌HT-29细胞增殖的抑制情况;在不同剂量CGMP作用HT-29细胞24 h后,通过逆转录聚合酶链反应扩增细胞中提取的COX-2 mRNA、iNOS mRNA、GST-πmRNA,用凝胶成像自动分析系统检测各扩增带COX-2 mRNA、iNOS mRNA、GST-πmRNA水平。结果:1)CGMP组对细胞的增殖均有抑制作用,其中10-4 mg/mL抑制效果最强,且呈现时间依赖性。2)低剂量的CGMP(10-5、10-4、10-3 mg/mL)可显著降低3种基因的表达。结论:CGMP可在一定程度上抑制HT-29细胞的增殖,并呈时间依赖性,同时CGMP能在mRNA水平上抑制COX-2、iNOS、GST-π的表达,进而降低3种基因蛋白的表达,从而进一步改善结直肠癌。     

副干酪乳杆菌X12肽聚糖的理化性质及其对HT-29细胞增殖的抑制

本文对副干酪乳杆菌X12肽聚糖的理化性质进行分析,并研究其对结肠癌HT-29细胞的抑制作用。采用SDS-PAGE分析其蛋白分子量,HPLC法检测其氨基酸组成,电镜观察其形态,最后检测其对HT-29细胞增殖的抑制作用。结果显示,副干酪乳杆菌X12肽聚糖蛋白分子量低于14.4 kDa,蛋白氨基酸共有15种,其中丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸和赖氨酸含量较高,而电镜结果显示肽聚糖保留了原菌体细胞的骨架结构,并具有抑制HT-29细胞增殖的能力,肽聚糖高剂量组(160 μg/mL)抑制HT-29细胞增殖率可达21.02%。     

抑制人结肠癌HT-29细胞增殖乳酸菌有效成分的筛选

以鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）GG（LGG）为阳性对照,4株具有潜在抗结肠癌功效的乳酸菌为研究对象,提取其细胞壁及细胞质,通过3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法初步筛选具备抑制HT-29细胞增殖能力的成分,再通过分析提取成分对HT-29细胞DNA损伤、细胞死亡及周期的影响,获得具有抗结肠癌作用的有效成分。结果表明,与阳性对照LGG相比,乳酸菌X11、X12、M5、K14的细胞壁和乳酸菌M5、K14的细胞质对HT-29细胞增殖能力有显著抑制作用（P＜0.05）;HT-29细胞经乳酸菌细胞壁或细胞质（蛋白质含量为80 μg/mL）处理48 h后,脱氧核糖核酸（DNA）出现了明显的弥散拖尾形态;乳酸菌X12、M5和K14细胞壁诱导HT-29细胞凋亡,并调控癌细胞周期分布。通过筛选最终获得乳酸菌X12、M5和K14的细胞壁成分具有抗结肠癌作用。     

Effects of hypoxia/hypercapnia on the metablism of Callosobruchus chinensis (L.) larvae

Insects that are pests of stored products are highly tolerant to low O₂ levels (hypoxia) and high carbon dioxide levels (hypercapnia) for long periods, but the underlying mechanism remains unclear. In the present study, we investigated the metabolic profiles of Callosobruchus chinensis (L.) larvae held under 2% O₂+18% CO₂ (both v/v) for 24, 48, and 96 h using gas chromatography–time-of-flight mass spectrometry (GC-TOF-MS), their corresponding control groups under normoxia were also investigated simultaneously. We found that the relative quantity of 91, 24, and 48 metabolites were altered at these three time periods, respectively. The metabolites were principally carbohydrates, organic acids, amino acids, and free fatty acids, 30 of these metabolites with high accuracy of qualitative identification and biological functions were chosen for further analyses. These were intermediates of the citric acid cycle, glycolysis, fatty acid synthesis, and amino acid metabolism. Based on our results, levels of organic acids increased, while levels of amino acids decreased, suggesting that metabolism was shifting from aerobic to anaerobic. Lipid metabolism may be relatively less important; the number of fatty acids exhibiting significant changes in level was quite small. The metabolic profiles changed dynamically over time, with the largest changes evident for 24 h of hypoxia/hypercapnia, followed by 96 h, and only a little change has been shown on 48 has revealed by heatmap and pathway topological analysis. Therefore, we present direct evidence that the metabolism of insect pests of stored products is influenced by complex environmental stressors.     

Antioxidant activity versus cytotoxic and nuclear factor kappa B regulatory activities on HT-29 cells by natural fruit juices

The antioxidant activity (free radical scavenging ability and lipid oxidation inhibitory activity) and the activity in cell culture [influence on HT-29 human colon cancer cell viability and nuclear factor kappa B (NF-κB) activation] of natural fruit juices from red grape, strawberry, cherry and sour cherry were investigated in vitro. Analysis of polyphenolic composition of fruit juices showed the dominant presence of anthocyanins (cyanidin-3-glucoside, cyanidin-3-rutinoside, peonidin-3-rutinoside, pelargonidin-3-glucoside), anthocyanidins (procyanidins B1, B2 and B3), flavonoids (glucosides of myricetin, quercetin and kaempferol), and phenolic acids (neochlorogenic acid, chlorogenic acid, ellagic acid, p-coumaroylquinic acid) in juices. DPPH test and β-carotene bleaching method indicated that grape, strawberry, cherry and sour cherry natural juices (at the concentration of 2.5%) showed very strong free radical scavenging (75–92%) and antioxidant activity (71–94%). In addition, at the concentration of 0.01% they showed complete inhibition of copper-induced oxidation of human LDL (low density lipoprotein). In contrast, selected fruit juices did not show cytotoxic effects on HT-29 cells and NF-κB inhibitory activity (at the concentrations of 0.5 and 2%). Results of this study showed no correlation between the antioxidant activity of natural fruit juices from red grape, strawberry, cherry and sour cherry and their effect on HT-29 cell viability and NF-κB inhibitory activity.     

菠萝蜜多糖体外酵解特征研究

本文旨在研究菠萝蜜多糖(JFP-Ps)的体外酵解行为,通过收集新鲜的人体粪便建立体外酵解模型,电位法测定多糖酵解产物中pH值、铁氰化钾法分析还原糖含量变化、苯酚-硫酸法分析总糖含量变化以及气相色谱法分析短链脂肪酸(SCFA)组分和含量变化。研究结果显示,在体外酵解过程中,JFP-Ps酵解产物的p H值从5.78(0h)降低至4.48(48h),还原糖含量从16.63%±3.03%(0h)增加至49.57%±1.65%(1h),后持续降低至9.37%±2.22%(48h),总糖含量从64.51%±0.86%(0h)下降至16.98%±0.58%(48h),总SCFA、乙酸、丙酸以及正丁酸的含量均显著提高。结果表明,JFP-Ps可被人体粪便微生物利用,酵解产物降低了反应体系的pH值和酵解产生乙酸、丙酸和正丁酸3种短链脂肪酸,研究结果可为菠萝蜜多糖源"益生元"产品的开发提供理论依据。     

具有保护肠上皮细胞HT-29免受大肠杆菌和H2O2损伤潜力的植物乳杆菌的筛选

益生菌可在肠道定植从而发挥抗炎或抗氧化活性,有利于宿主肠道健康.本实验研究了从新疆传统发酵乳制品中分离得到的8株植物乳杆菌对大肠杆菌侵袭和过氧化氢刺激肠上皮细胞HT-29的保护作用.结果表明:在8株植物乳杆菌中,植物乳杆菌35具有最高的黏附能力.植物乳杆菌35可通过取代、竞争、排阻的方式抑制大肠杆菌对HT-29细胞的黏...     

酸笋中具有抗炎活性乳酸菌的筛选及鉴定

从柳州采集的3 份酸笋发酵液样品中分离筛选得到46 株疑似乳酸菌菌株,通过耐酸、耐胆盐、模拟胃肠道实验以及体外黏附HT-29细胞和NO实验进行益生特性和抗炎活性研究,筛选得到1 株具有优良抗炎活性菌株SS-31,经16S rRNA基因序列测序鉴定为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）。结果表明：菌株SS-31具有较强耐酸能力,0.1%牛胆盐处理3 h后活菌数为107 CFU/mL,存活率高达90.02%;模拟人工胃液消化2 h后存活率为80.28%,模拟人工肠液处理2 h后存活率为3.63%;SS-31在体外对HT-29细胞有较高黏附性,黏附率为4.47%,略低于对照菌鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LGG（4.95%）;在体外脂多糖刺激RAW264.7细胞炎症中,与模型组相比,SS-31组显著下调炎性物质NO分泌量（P＜0.05）;此外,SS-31能显著下调炎症因子白细胞介素（interleukin,IL）1β、IL-6的含量（P＜0.05）。从酸笋发酵液中筛选得到1 株具有优良益生特性的发酵乳杆菌SS-31,初步证明了乳酸菌SS-31在治疗炎症中具有潜在应用和开发价值。     

蔓菁对小鼠肠道菌群的影响

目的:探究不同剂量蔓菁对小鼠粪样中肠道菌群和短链脂肪酸的影响。方法:选取BalB/C雄性小鼠(18~22 g)48只按体重随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组4组,三个剂量组分别饲喂不同剂量(1、2、4 g/kg·BW·d)的蔓菁粉,对照组正常喂养,连续干预14 d,分别在干预第0 d、第7 d、第14 d称重并无菌收集新鲜粪样。采用平板计数法检测肠道菌群数量,气相色谱-质谱联用法检测短链脂肪酸的含量,并用SPSS 21.0对结果进行数据分析。结果:蔓菁可增加肠道益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌和中性菌肠杆菌的数量(p<0.05),减少中性菌肠球菌和致病菌产气荚膜梭菌的数量(p<0.05),中剂量(2 g/kg·BW·d)作用最为明显,且肠杆菌数量增加幅度低于乳酸杆菌和双歧杆菌增加幅度。蔓菁还可增加肠道乙酸、丙酸、正丁酸、异丁酸的含量(p<0.05),提高短链脂肪酸总含量,高剂量(4 g/kg·BW·d)作用最为明显。结论:蔓菁可促进小鼠肠道有益菌的增殖,抑制致病菌的增殖;蔓菁可促进小鼠肠道短链脂肪酸的产生。     

The anticarcinogenic potential of essential oil and aqueous infusion from caper (Capparis spinosa L.)

The present study assessed the influence of essential oil and aqueous infusion from wild-grown caper (Capparis spinosa L.) on cell growth, NF-κB activation, apoptosis and cell cycle in the human colon carcinoma cell line, HT-29. Methyl isothiocyanate (92.06%), a degradation product of glucosinolate glucocapparin, was detected as major component of essential oil from caper leaves and flower buds. Aqueous infusion of caper showed an interesting and variegate compositional pattern containing several phenolic compounds, among which a flavonol glycoside, rutin (quercetin 3-O-rutinoside, 50.7%) and 5-caffeoyl-quinic acid (chlorogenic acid, 17.5%) were detected as dominant. Caper essential oil and aqueous infusion showed time- and dose-dependent high inhibitory effect on HT-29 cell proliferation. In addition, they induced the inhibition on nuclear factor κB (NF-κB) activity in a dose-dependent manner, while they did not show any effect on apoptosis in HT-29 cells. Flow cytometric analysis indicated that treatment with caper essential oil and aqueous infusion resulted in G₂/M cell cycle arrest in a dose-dependent manner. Presented results suggest that caper contains volatile and non-volatile compounds which potentially can play an important role in colon cancer prevention.