甲胎蛋白促人肝癌Bel7402细胞增殖的机制研究

目的:观察甲胎蛋白促肿瘤细胞增殖的信号转导方式。方法:用从人脐带血清中提取的甲胎蛋白,作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,运用MTT染色计数法,流式细胞仪测定细胞周期和3H-脱氧胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入法等指标检测细胞增殖状况;放射受体分析细胞膜上甲胎蛋白受体存在和数目;免疫结合法检测细胞内cAMP浓度;Westernblot分析P21ras蛋白的表达。结果:甲胎蛋白(10～80mg·L-1)作用24h后,人肝癌Bel7402细胞有不同程度的促增殖作用;在人肝癌Bel7402细胞膜上存在2种不同的解离平衡常数(Kd)的甲胎蛋白受体,Kd分别为Kd1=1.3×10-9mol·L-1(89400位点/细胞)和Kd2=9.9×10-8mol·L-1(582000位点/细胞)。AFP能显著提高Bel7402细胞内的cAMP浓度,对P21ras的表达也有明显的促进作用。甲胎蛋白的单克隆抗体能阻断这种作用。结论:甲胎蛋白具有促人肝癌Bel7402细胞增殖的作用,这种作用是由受体介导的cAMP信号转导途径实现的。     

甲硫氨酸脑啡肽对NIH 3T3细胞和人肝癌Bel 7402细胞生长具有抑制作用

目的 :研究甲硫氨酸脑啡肽对体外培养的NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞增殖的影响。方法 :MTT微培养染色法检测不同质量浓度的甲硫氨酸脑啡肽对NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞的作用以及一定质量浓度的纳洛酮、阿片δ受体单克隆抗体、5 氟脲嘧啶对这种作用的影响。结果 :(1) 10mg·L-1至 80mg·L-1的甲硫氨酸脑啡肽对这 2种细胞均有不同的抑制效应 (NIH3T332 %～ 6 6 %与Bel740 2 36 %～ 6 4% ) ;(2 )纳洛酮能阻断甲硫氨酸脑啡肽对细胞抑制效应 ,阿片δ受体单克隆抗体没有这种阻断能力 ;(3) 5 氟脲嘧啶 (10mg·L-1)和甲硫氨酸脑啡肽 (5 0mg·L-1)有协同作用。结论 :甲硫氨酸脑啡肽能抑制细胞增殖。提示NIH3T3细胞和Bel 740 2细胞胞膜上可能存在阿片 ζ受体介导。     

甲胎蛋白对NIH3T3细胞和人肝癌Be17402细胞增殖的促进作用

目的观察甲胎蛋白对细胞增殖的影响。方法用从人脐带血清中提取的甲胎蛋白，作用于体外培养的NIH3T3细胞和人肝癌Be17402细胞，运用MTT染色计数法，细胞周期时相测定和3H脱氧胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入法等指标检测细胞增殖状况。结果甲胎蛋白(10～80 mg．L(-1))作用24 h后，对NIH3T3细胞、人肝癌Be17402细胞均有不同程度的促增殖作用，甲胎蛋白的单克隆抗体能阻断这种作用。结论甲胎蛋白是促进某些新生细胞或肿瘤细胞增殖的内源性物质。     

TGF-β1通过促进自噬相关基因Beclin 1表达抑制肝癌细胞增殖

目的：探讨TGF-β1对人肝癌细胞增殖的影响及其与Beclin 1表达的关系.方法：常规培养人肝细胞株L-02和人肝癌细胞株Bel7402,MTT法检测TGF-β1对Bel7402细胞增殖的影响,RT-PCR和Western-blot检测TGF-β1对Bel7402细胞Beclin 1表达的作用.结果：TGF-β1明显抑制了Bel7402细胞的增殖,该作用可被TGF-β1受体阻断剂LY364947解除.Bel7402细胞Beclin 1表达低于L-02细胞,给予TGF-β1后,Bel7402细胞Beclin 1表达明显增加,该作用可被LY364947抑制.结论：TGF-β1抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与促进Beclin 1表达有关.     

甲胎蛋白对人肝癌Bel7402细胞Ca~(2+)浓度的影响

目的:研究甲胎蛋白(alpha-fetoproteinAFP)对人肝癌细胞信息传递物质Ca2+浓度的影响。方法:采用由脐带血血清中提纯的AFP作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,通过共聚焦显微镜扫描,观察不同时间细胞内Ca2+浓度的变化。结果:在AFP作用4min时能显著提高Bel7402细胞内Ca2+浓度,与对照组比较升高204.1%,随后缓慢下降,到作用10min时降到正常水平。结论:AFP能通过改变细胞Ca2+浓度从而调节人肝癌Bel7402细胞内信息传递。     

整合素αvβ3受体靶向的MR分子探针制备及体外成像

目的: 构建结缔组织生长因子多肽(CTGFP)超微超顺磁氧化铁粒子(USPIOs)磁共振(MR)分子探针,以显示高表达整合素αvβ3受体人肝癌Bel7402细胞.方法: 用免疫细胞化学方法检测Bel7402细胞αvβ3受体表达情况;用邻苯二马来酰亚胺(OPDM)将USPIO和CTGFP偶联;将USPIO-CTGFP、USPIO分别与Bel7402细胞孵育,同时设立多肽竞争组及对照组,行普鲁士蓝染色显示铁颗粒,体外磁共振成像(MRI)观察在T2WI上T2弛豫时间变化.结果: Bel7402细胞αvβ3受体表达阳性;普鲁士蓝染色可见USPIO-CTGFP组铁颗粒分布在细胞膜,而USPIO组及竞争组细胞膜上和细胞内铁颗粒极少;体外MRI显示USPIO-CTGFP组T2弛豫时间低于USPIO组、竞争组及对照组(P＜0 05).结论: USPIO-CTGFP对αvβ3受体具有较好靶向作用,可通过MRI显示高表达整合素αvβ3受体Bel7402细胞.     

全反式维甲酸和丁酸钠对人肝癌细胞的诱导分化作用

探讨了10μmol／L全反式维甲酸、25μmol／L丁酸钠及两者联台作用对人肝癌细胞Bel—7402的增殖和甲胎蛋白分泌量的影响，结果表明维甲酸和丁酸钠及两者联合作用均能明显抑制Bel—7402细胞的增殖，明显降低甲胎蛋白的分泌量，联合作用强于单独作用。     

靶向性融合基因对人肝细胞性肝癌治疗作用的体外研究(摘要)

目的观察由人甲胎蛋白(AFP)启动子调控的单纯疱疹病毒II型胸苷激酶基因(HSV-Ⅱ-tk)与血管生成抑制素基因(Angio)的融合基因对人肝细胞性肝癌的体外治疗作用·方法通过PCR技术,从临床肝癌标本中克隆AFP启动子;通过基因重组技术,构建的真核表达载体pcDNA3/AFP/tk/Angio;通过阳离子脂质体Liofectamine介导,体外转染人肝细胞性肝癌细胞株SMMC-772l和Bel7402加入GCV,细胞培养·用RT-PCR、光镜、透射电境、MTT,流式细胞仪等方法检测HSV-Ⅱ-tk和An-giostatin基因在SMMC-7721和Bel 7402细胞中的表达及其对该细胞的杀伤作用·结…     

受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用

目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10～80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。     

甲胎蛋白对人肝癌Bel7402 细胞 Ca2+浓度的影响

目的研究甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)对人肝癌细胞信息传递物质Ca2+浓度的影响.方法采用由脐带血血清中提纯的AFP作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,通过共聚焦显微镜扫描,观察不同时间细胞内Ca2+浓度的变化.结果在AFP作用4 min时能显著提高Bel7402细胞内Ca2+浓度,与对照组比较升高204.1%,随后缓慢下降,到作用10 min时降到正常水平.结论AFP能通过改变细胞Ca2+浓度从而调节人肝癌Be17402细胞内信息传递.     

益气活血方药理血清对大鼠贮脂细胞增殖作用研究

研究益气活血方药理血清对大鼠贮脂细胞增殖作用机制。通过制备 3周、5周、7周的肝纤维化模型大鼠血清、正常大鼠血清和益气活血复方药物血清 ,培养肝星形细胞HSC(Hepaticstellatecells)和肝Bel74 0 2瘤株 ,采用MTT法观察和分析HSC的增殖作用。结果表明 :①益气活血方剂血清能抑制 5周、7周模型血清培养的继代HSC的增殖 ,P <0 .0 5。②益气活血方剂血清可促进 3周模型血清培养的继代HSC和模型血清培养的原代HSC的增殖 ,P <0 .0 5。③益气活血方剂血清和3周模型血清共同作用促进培养的Bel74 0 2的增殖 ,P <0 .0 5。提示益气活血方剂能够对HSC和Bel74 0 2细胞的增殖产生影响。HSC的生活状态 ,即HSC发育时相是决定益气活血方剂具有抑制或促进增殖作用的关键事件     

白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡及其作用机制

目的：探讨Bc l-2、Fas基因在白毛藤总苷诱导人肝癌Bel7402细胞凋亡中的作用。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡作用情况,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果：白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡,并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论：白毛藤总苷能促进Bel7402细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2表达有关。     

P27RF-Rho基因沉默对肝癌Bel7402细胞增殖的影响

目的:构建靶向新分子P27RF-Rho基因的慢病毒RNA干扰载体,研究P27RF-Rho基因对肝癌Bel7402细胞增殖能力的影响。方法:将合成的寡核苷酸片段克隆入RNAi载体,并转染肝癌Bel7402细胞,以沉默P27RF-Rho基因表达。实验分为空白对照Bel7402组、阴性对照Scramble-siRNA组和P27RF-Rho-siRNA组。荧光显微镜观察细胞转染情况;RT-PCR法检测各组Bel7402细胞中P27RF-Rho基因沉默效果;绘制生长曲线,检测转染细胞的增殖情况;平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力;RT-PCR法检测细胞增殖能力相关基因P16、Cyclin E、MMP-9和CDK-5 mRNA的表达水平。结果:P27RF-Rho-siRNA组P27RF-Rho基因表达水平明显低于空白对照Bel7402组和阴性对照Scramble-siRNA组(P<0.01)。P27RF-Rho-siRNA组肝癌细胞的生长速度明显低于空白对照Bel7402组和阴性对照Scramble-siRNA组(P<0.05)。与2个对照组比较,P27RF-Rho-siRNA组细胞中CyclinE、MMP-9和CDK-5 mRNA表达水平降低(P<0.01),P16 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。结论:抑制P27RF-Rho基因的表达能够降低肝癌细胞的增殖能力。     

4—硒硫酸酯多糖对人肝癌细胞Bel／7402DNA RNA及蛋白质合成的影响

目的 研究4－硒硫酸酯多糖体外给药对人肝癌细胞Bel/7402DNA.RNA及蛋白质的抑制作用。方法 肿瘤细胞与不同浓度的药物培养24h后,用同位素掺入实验,观察药物对肿瘤细胞DNA、RNA及蛋白质合成的影响。结果 4－硒硫酸酯多糖可抑制肿瘤细胞DNA、RNA及蛋白质合成。结论 4－硒硫酸酯多糖对瘤细胞生长的抑制作用,可能与抑制瘤细胞DNA、RNA及蛋白质合成有关。     

Galectin-3重组真核表达载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达

目的:构建半乳糖凝集素-3(Gal-3)的真核表达载体,在NIH/3T3细胞中表达,并检测其表达?方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人肿瘤细胞克隆Gal-3基因,插入真核表达载体pEGFP-N1中,通过酶切和测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pEGFP-Gal-3瞬时转染NIH/3T3细胞,经荧光和Western blot方法检测Gal-3表达,MTT法检测Gal-3对NIH/3T3细胞增殖的影响?结果:限制性内切酶鉴定和核酸序列测序证实成功构建含Gal-3的重组真核表达载体pEGFP-Gal-3?以重组质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,检测到Gal-3蛋白表达,并证实Gal-3蛋白促进NIH/3T3细胞增殖?结论:成功构建的pEGFP-Gal-3真核表达载体在小鼠NIH/3T3细胞中成功表达,并促进NIH/3T3细胞增殖?     

甲胎蛋白新功能:调节HeLa细胞生长的信号转导机制

目的:观察甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)调节HeLa细胞生长的细胞内信号转导机制。方法:用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞,通过MTT计数、3H-TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖;放射免疫结合法检测在AFP作用下,HeLa细胞第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)活性的改变;用共聚焦显微镜观测细胞内Ca2+浓度的变化;用Westernblotting分析法分析P21ras表达。结果:①表明AFP(浓度大于10mg/L)对HeLa细胞增殖有明显的促进作用。②在AFP(20mg/L)作用下,PKA活性升高达122.6%,而Ca2+浓度升高达125.71%;P21ras蛋白表达在作用24h时增高112.6%。③抗甲胎蛋白单克隆抗体能有效地阻断AFP对HeLa细胞信号转导的影响。结论:①AFP能促HeLa细胞生长;②AFP可能通过cAMP-PKA和Ca2+途径调节HeLa细胞生长。