灵甲方对血瘀型肝纤维化大鼠骨桥蛋白的干预研究

目的：了解灵甲方对血瘀型肝纤维化动物模型的防治肝纤维化作用,从OPN、PAI-1的蛋白表达层面探索其防治肝纤维化的机理。方法：将Wistar大鼠共70只,随机分为4组：正常对照组、灵甲方组、复方鳖甲软肝片组、血瘀组。除正常对照组外,其余3组均采用腹腔注射DMN同时尾静脉注射小牛血清白蛋白和去甲肾上腺素的方法,复制血瘀型肝纤维化大鼠模型共4周。4周后灵甲方组以灵甲方灌胃,每天1次,共治疗8周。复方鳖甲软肝片对照组4周后以复方鳖甲软肝片灌胃,每天1次,共治疗8周。8周结束后,取血检测ALT、AST、Alb、Glb;取肝组织,用Western blot检测OPN与PAI-1的蛋白表达。结果：与血瘀组比,灵甲方及复方鳖甲软肝片治疗后大鼠的ALT明显降低（P〈0.05）,且灵甲方组的AST较血瘀组降低明显（P〈0.01）;与血瘀组比,灵甲方治疗后大鼠的体重明显增加（P〈0.01）,复方鳖甲软肝片治疗后大鼠的体重亦有增加（P〈0.05）;与血瘀组比,灵甲方治疗后肝体比比值显著增高（P〈0.01）,脾体比比值降低（P〈0.05）,且灵甲方组较复方鳖甲软肝片治疗组在治疗后肝体比比值增加更明显（P〈0.05）。灵甲方治疗后OPN及PAI-1的蛋白表达水平均较血瘀组显著降低（P〈0.01）,灵甲方较复方鳖甲软肝片对OPN表达的抑制作用更强,差别有统计学意义（P〈0.05）。结论：灵甲方可能通过抑制OPN的表达间接降低PAI-1的蛋白表达水平,所以表现为对PAI-1蛋白表达水平的降低幅度较OPN大,从而使PAI-1对细胞外基质降解的抑制作用减弱,增加细胞外基质的降解,发挥抗纤维化作用。     

鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化的作用及其机制研究

目的探讨鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用及其机制。方法 SD雄性大鼠90只,随机分6组,每组15只,其中以40%CCl4处理(3 ml/kg)8周复制中毒肝纤维化模型(模型组),复制模型的同时分别用鳖甲煎改良方高剂量组28.4 g/(kg.d)、中剂量组14.2 g/(kg.d)、低剂量组7.1 g/(kg.d)灌胃治疗并且以复方鳖甲软肝片灌胃0.6 g/(kg.d)作阳性对照组治疗6周。以复制模型同样方式与用量于右后腿皮下注射橄榄油及生理盐水灌胃(10 ml/kg.d)作空白对照组。苏木精-伊红(HE)染色观察各组8周后肝纤维化变化程度,RT-PCR检测其转化生长因子β1(transforming growth factor beta one,TGF-β1)、Smad3及Smad7变化,免疫组化(S-P法)观测TGF-β1、smad3、smad7表达情况。结果 8周后,与模型组比较,鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组肝小叶结构破坏明显减轻,部分肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润与少量胶原纤维形成;肝组织TGF-β1与Smad3的mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.01),smad7 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01)且鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组疗效并无显著差异。结论鳖甲煎改良方能显著改善大鼠肝纤维化,其作用机制可能与鳖甲煎改良方调控TGF-β/smad信号通路有关。     

复方鳖甲软肝片对输尿管结扎大鼠肾组织TGF-β1蛋白及其mRNA表达的影响

目的探讨复方鳖甲软肝片对大鼠单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白及其mRNA表达的影响.方法建立UUO肾间质纤维化模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝片低、中、高剂量等7组.手术后4周处死大鼠,无菌取肾,制作冰冻切片,采用免疫组织化学和原位杂交方法,分别检测肾组织TGF-β1蛋白及其mRNA表达,使用图像分析系统对结果进行处理,采用SPSS11.5统计软件统计分析.结果模型组肾小管上皮细胞和肾间质其他细胞浆内,有少量的TGF-β1蛋白及其mRNA棕黄色颗粒状阳性反应物;苯那普利对照组细胞浆中棕黄色颗粒状阳性反应物明显减少,与模型组比,P＜0.01;复方鳖甲软肝片治疗组细胞浆中棕黄色颗粒状阳性反应物明显减少,不同剂量组呈剂量依赖关系,与模型组比,P＜0.01.结论 TGF-β1是导致肾间质纤维化的重要因素,复方鳖甲软肝片可以通过下调TGF-β1蛋白及其mRNA的表达,对UUO肾间质纤维化大鼠肾脏起一定的保护作用.     

肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响研究

探究肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响。方法48 只雄性清洁级SD 大鼠随机分为：正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组及肝纤溶颗粒组,每组各12 只。除正常对照组外各组复制肝纤维化模型。于复制模型后的3 周各组大鼠同时给药,正常对照组与模型对照组大鼠给予生理盐水1.5 ml/kg 灌胃,1 次/d;复方鳖甲软肝片组给予33.3%复方鳖甲软肝片溶液1.5 ml/kg 重灌胃,1 次/d;肝纤溶颗粒组给予33.3%肝纤溶颗粒溶液1.5 ml/kg灌胃,1 次/d。各组连续用药6 周。实验开始后第3、6 和9 周对各组大鼠肝脏病理学、细胞凋亡数量、肝纤维化指标水平以及内质网应激相关指标进行检测。结果与其他各组相比,肝纤溶颗粒组纤维增生程度评分下降（ p<0.05）,肝凋亡数下降（ p<0.05）;透明质酸、层黏连蛋白、血清Ⅲ型前胶原、血清Ⅳ型胶原水平下降（p <0.05）;CHOP、ATF6 蛋白表达水平下降（ p<0.05）。结论肝纤溶颗粒组肝纤维化大鼠细胞凋亡数量和肝纤维化水平较复方鳖甲软肝片组下降,差异有统计学意义（ p<0.05）,肝纤溶颗粒能够改善肝脏病理变化,调节内质网应激相关指标,对临床有指导意义。     

复方鳖甲软肝片对阿霉素肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的:分析阿霉素肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGE)mRNA及蛋白的变化,研究复方鳖甲软肝片的干预怍用及其机制。方法:采用单侧肾切除阿霉素肾病模型。将45只大鼠随机分为5组:正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝片组。用药10周后处死大鼠,观察肾组织病理改变,应用原位杂交和免疫组织化学方法检测肾组织CTGF mRNA及蛋白的表达。结果:正常组及假手术组肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞以及肾间质细胞胞浆内有少量CTGF mRNA及蛋白的黄色颗粒状阳性反应物;模型组上述部位的CTGF mRNA及蛋白的黄色颗粒状反应物呈强阳性表达;复方鳖甲软肝片组CTGF mRNA及蛋白表达较模型组显著减少,与苯那普利组比较,差异无统计学意义。结论:复方鳖甲软肝片可能通过抑制CTGF mRNA及蛋白的过度表达而减缓肾纤维化病程进展。     

复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠的保护作用及其机制*

目的观察复方鳖甲软肝片对肝纤维化的保护作用及其机制。方法将30只清洁级SD大鼠随机分为对照组、模型组以及药物组，每组各10只，模型组及药物组使用橄榄油配制40%CCL4，进行皮下注射造模，每周2次，连续注射6周，对照组大鼠使用等容量橄榄油皮下注射；同时药物组大鼠给予复方鳖甲片灌胃，而对照组与模型组则每天给予等容量生理盐水灌胃，灌胃均为6周。末次给药后，抽取大鼠腹主动脉血，分离血清，检测各组大鼠血清肝功能指标及纤维化指标；取各组大鼠部分肝组织，使用免疫组化法检测大鼠肝组织COX-2、α-SMA蛋白表达情况。结果模型组、药物组大鼠ALT、AST、T-Bil水平较对照组显著升高（P<0.05），但药物组大鼠ALT、AST、T-Bil水平明显低于模型组（P<0.05）；而模型组、药物组大鼠ALB较对照组显著降低（P<0.05），但药物组大鼠ALB水平明显高于模型组（P<0.05）。模型组、药物组大鼠HA、CIV、LN水平较对照组显著升高（P<0.05），但药物组大鼠HA、CIV、LN水平明显低于模型组（P<0.05）。模型组、药物组大鼠COX-2、α-SMA蛋白表达较对照组显著升高（P<0.05），但药物组大鼠COX-2、α-SMA蛋白表达明显低于模型组（P<0.05）。结论复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝功能具有着显著的保护作用，并可有效延缓肝纤维化疾病进程，其可能机制与抑制肝组织COX-2、α-SMA蛋白表达有关。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏Smad2/3表达的影响

目的观察银杏叶提取物(GbE)对肝组织Smad2/3表达的影响,探讨GbE抗肝纤维化的作用机制。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化,同时分别以200、100、50mg/(kg.d)的GbE进行干预,并设复方鳖甲软肝片为对照组,6周后取肝组织,原位杂交及免疫组化技术分别检测肝组织Smad2/3mRNA及蛋白的表达。结果模型组大鼠肝组织Smad2/3mRNA及蛋白的表达正常组明显增高,应用不同剂量的GbE及复方鳖甲软肝片干预后肝组织Smad2/3mRNA及蛋白较模型组显著下降。结论 GbE降低Smad2/3mRNA及蛋白表达可能是其抗肝纤维化作用的重要机制之一。     

化痰行瘀汤抗大鼠肝纤维化作用机制研究

[目的]探究化痰行瘀汤抗大鼠肝纤维化作用的可能机制。[方法]取清洁级健康成年Wistar大鼠60只,随机抽取10只作为正常对照组,剩余50只采用橄榄油溶液皮下注射四氯化碳（CCL4）法制作肝纤维化模型,确认造模成功后按随机数字表法分为5组,即模型对照组、复方鳖甲软肝片组、化痰行瘀汤低剂量组、化痰行瘀汤中剂量组、化痰行瘀汤高剂量组。5组分别以相应药物连续干预6W,6W后比较各组Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）、层黏连蛋白（LN）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、骨桥蛋白（OPN）和转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白、TGF-β1 m RNA的表达。[结果]与正常对照组比较,干预6W后复方鳖甲软肝片组、化痰行瘀汤中剂量组、化痰行瘀汤高剂量组能明显降低C-Ⅳ蛋白的表达（P〈0.05）;化痰行瘀汤各剂量组LN蛋白表达明显下降（P〈0.05）;化痰行瘀汤各剂量组与复方鳖甲软肝片组α-SMA表达都明显下降（P〈0.05）;复方鳖甲软肝片组、化痰行瘀汤低剂量组、化痰行瘀汤高剂量组OPN蛋白表达明显下降（P〈0.05）;化痰行瘀汤各剂量组TGF-β1蛋白表达明显减少（P〈0.05）;化痰行瘀汤高剂量组TGF-β1m RNA表达明显下降（P〈0.05）。[结论]化痰行瘀汤能有效改善肝纤维化,且与剂量存在一定相关性。     

替比夫定联合复方鳖甲软肝片抗纤维化疗效观察

目的:观察替比夫定和复方鳖甲软肝片联合应用治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效。方法:将60例慢性乙肝肝纤维化患者随机分为2组,治疗组用替比夫定和复方鳖甲软肝片治疗,对照组只用替比夫定治疗,疗程均为8个月。观察治疗后2组HBV-DNA及肝纤维化指标(HA、LN、PCⅢ、CⅣ)变化情况。结果:治疗后2组血清HBV-DNA、肝纤维化指标较治疗前均明显下降,治疗组肝纤维化指标明显低于对照组(P<0.01)。结论:替比夫定联合复方鳖甲软肝片可以明显改善慢性乙型肝炎肝纤维化指标。     

复方牛胎肝提取物联合复方鳖甲软肝片治疗乙肝肝硬化临床分析

目的:观察复方牛胎肝提取物联合复方鳖甲软肝片治疗乙肝肝硬化的临床疗效。方法:64例乙肝肝硬化患者随机分为复方牛胎肝提取物联合复方鳖甲软肝片治疗组及对照组。每个3月查肝功1次,肝纤维化等指标,观察其临床表现。结果:6个月后,治疗组及对照组肝功明显恢复,2组比较差异显著,有统计学意义(P<0.05)。治疗组和对照组在治疗后ALT、TBIL、ALB较治疗前明显改善(P<0.05);治疗组肝组织纤维化程度比对照组改善更明显。治疗组患者HA、IV-C、LN及PCIII分别降低了55.58%、44.76%、36.65%、54.89%,对照组上述指标分别降低了33.55%、22.80%、14.77%和13.56%,2组间有显著性差异(P<0.05)。结论:复方牛胎肝提取物联合复方鳖甲软肝片治疗乙肝肝硬化疗效较为理想。     

柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活抑制因子-1影响

目的:探讨柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活抑制因子-1的调控作用。方法:将大鼠随机分为正常组、血瘀组和柔肝组。用酶联免疫吸附法、免疫组化、免疫印迹法等检测血中、肝组织中纤溶酶原激活抑制因子-1(PAI-1)的表达。结果:通过酶联免疫吸附双抗体法、免疫组化、免疫印迹等发现PAI-1在各组大鼠血液中、肝组织中均有表达。PAI-1表达在血瘀组较正常组为高(P<0.01);经柔肝冲剂治疗后PAI-1的表达均有下降(P<0.01)。结论:PAI-1在正常大鼠肝组织中有表达,血瘀型肝纤维化时其在肝组织中蛋白表达增高,柔肝冲剂可降低其表达。柔肝冲剂可能通过影响纤溶酶原激活抑制因子-1起到抗肝纤维化作用。     

肝郁脾虚证肝纤维化大鼠模型研究

目的建立肝郁脾虚证肝纤维化动物模型，为中医药辨证论治肝纤维化提供研究平台。方法采用四氯化碳皮下注射附加夹尾刺激、饥饱失常等制备肝郁脾虚证肝纤维化大鼠模型，根据症状表现记分判断证候的符合率，检测全血粘度、红细胞聚集指数、纤维蛋白原含量等指标确定瘀血程度；肝组织病理学检查判断肝损害状况和纤维化程度；用疏肝健脾活血方加味四逆散进行反证性治疗。结果肝郁脾虚证大鼠证候表现的符合率达82．5％；各组大鼠的全血粘度、红细胞聚集指数、纤维蛋白原含量都有不同程度的升高；治疗组大鼠证候表现、瘀血指标、肝组织损害及纤维化程度有显著改善。结论采用四氯化碳注射附加夹尾刺激、饥饱失常等中医因素可制备出符合率高而典型的肝郁脾虚证肝纤维化动物模型；加味四逆散反证性治疗有；明显疗效，提示证候模型的成功。     

免疫性肝纤维化大鼠血液流变学研究

目的 观察免疫性肝纤维化大鼠血液流变学的变化,探讨肝纤维化"血瘀"的病机特点.方法 建立猪血清致大鼠肝纤维化模型,观察肝纤维化大鼠全血粘度150/s、30/s、5/s、1/s切变率及红细胞压积的变化,同时检测肝纤维化指标及血清转氨酶.结果 肝纤维化模型组的全血粘度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、透明质酸酶、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、谷丙转氨酶、谷草转氨酶与正常对照组相比显著升高;且肝纤维化四项指标与全血粘度的各个切变率呈显著正相关.结论 肝纤维化大鼠血液流变学的变化特点一定程度上反应了肝纤维化"血瘀"的中医病机,为抗肝纤维化"活血化瘀"的治疗提供依据.

Abstract：

Objective To observe the changes in the hemodynamics of rats with immunological liver fibrosis and explore the pathogenesis of "blood stasis" in liver fibrosis. Methods Rat models of liver fibrosis were established by multiple intraperitoneal injections of pig serum. The hematocrit, blood viscosity at the shear rate of 150/s, 30/s, 5/s, and 1/s, serum markers for liver fibrosis, and serum transaminase levels were measured in the control and model rats. Results The hematocrit, blood viscosity at different shear rates, hyaluronic acid (HA), laminin (LN), procolagen type Ⅲ (PCⅢ), type Ⅳ collagen (CIV), glutamic-pyruvic transaminase (ALT) and glutamic-oxaloacetic transaminase (AST) increased significantly in the rats with experimental liver fibrosis appeared as compared with those in the control rats. Positive correlations were noted between blood viscosity at different shear rates and serum concentrations of the fibrosis markers (HA, LN, PCⅢ, and CIV) in the model rats. Conclusion The changes in the hemodynamics in rats with immunological liver fibrosis suggests the role of "blood stasis" in the pathogenesis of liver fibrosis and provide experimental evidence for therapies to "activate the blood circulation and dissipate blood stasis" for treatment of liver fibrosis.     

活血化瘀方药治疗大鼠肝纤维化的组织化学和血清学实验研究

为了探讨活血化瘀方药防治肝纤维化的机理，以猪血清诱发大鼠免疫性肝纤维化为模型，以肝组织ＣＣＯ的活性、血清ＧＰＴ的含量等为观察内容，实验分正常、模型、预防和治疗４组。结果证明：活血化瘀方药有较显著的抗肝纤维化的作用，预防效果尤为明显。     

2型糖尿病血瘀证大鼠模型制备的实验研究

目的:研究建立2型糖尿病血瘀证大鼠模型的方法。方法:应用高脂饲料加链脲佐菌素腹腔注射造成2型糖尿病模型后,用强的松龙和肾上腺素制备中医血瘀证大鼠模型,从而得到2型糖尿病血瘀证大鼠模型。造模完成后对各项指标进行检测。结果:2型糖尿病血瘀证大鼠模型与2型糖尿病大鼠模型空腹血糖比较差异无统计学意义(P0.05),血液流变学各项指标与空白组和2型糖尿病模型组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:本实验方法可以作为动物实验中2型糖尿病血瘀证模型的制备方法。     

多模态超声技术评估活血化瘀法逆转大鼠早期肝硬化的实验研究

[目的]探讨多模态超声技术在评估活血化瘀法对大鼠早期肝硬化逆转的应用价值。[方法]39只Wistar雄性大鼠随机分为正常组和造模组,后者以0.5%二甲基亚硝胺按2μg/g体质量腹腔注射4周复制大鼠早期肝硬化模型。造模成功后将其随机分为:模型组、扶正化瘀组(FZ组)、血府逐瘀组(XF组)、扶正+血府组(FZ+XF组),后3组分别经灌胃给药治疗4周。8周后行超声检查,观察肝实质灌注及门静脉血流等相关参数,分析各组超声参数与治疗效果的相关性。处死大鼠后,经腹主动脉取血,行血清学指标检测;取肝组织固定,行HE、Masson染色。[结果]1)模型组大鼠门静脉内径增大、流速减慢、肝实质峰值强度降低、达峰时间增加、曲线下面积减小,血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)水平升高,与正常组比较均有统计学差异(P<0.05)。2)FZ组、XF组和FZ+XF组大鼠的门静脉内径减小、流速增快、肝实质峰值强度增高、达峰时间减慢、曲线下面积增大,与模型组比较均有统计学差异(P<0.05)。3)FZ+XF组的大鼠门静脉内径减小,FZ+XF组及XF组肝实质达峰时间减慢,与FZ组比较均有统计学差异(P<0.05)。4)3组治疗组的血清LN、PCⅢ、CⅣ及FZ组、FZ+XF组的血清HA水平明显降低,与模型组比较均有统计学差异(P<0.05)。5)肝实质HE及Masson染色显示,活血化瘀疗法可以改善肝细胞变性坏死、抑制胶原纤维增生、减轻肝纤维化程度。[结论]经3组药物治疗后大鼠门静脉高压改善,肝血流灌注增加,且FZ+XF组及XF组明显优于FZ组,与病理相对照说明活血化瘀疗法有助于大鼠早期肝硬化的逆转。利用多模态超声技术评估活血化瘀疗法逆转大鼠早期肝硬化具有一定的应用价值。     

老年2型糖尿病证型与肝脏脂肪浸润相关性研究

目的:研究老年2型糖尿病不同证型与肝脏脂肪浸润的相关性及预后。方法:选取确诊的老年2型糖尿病患者共64例,参照相关诊断分为痰瘀阻络型(31例)、脾肾两虚型(33例),取同期住院的非糖尿病患者41例作为对照组。记录其年龄、性别、血生化等一般资料,评估体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、肝脾CT之比、非酒精性脂肪性肝病肝纤维化评分(NFS),并测量肝纤维化四项、踝肱指数(ABI),行上腹部CT。结果:1与对照组比较,糖尿病脾肾两虚型和痰瘀阻络型HOMA-IR值明显升高;脾肾两虚型HDL值、LN值、肝脾CT比值明显降低、超敏C反应蛋白及NFS值明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);2与痰瘀阻络型比较,脾肾两虚型HA、肝脾CT值之比明显降低、HOMA-IR、NFS值明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:老年2型糖尿病患者易出现肝脏脂肪浸润,其中脾肾两虚型患者易进展出现肝脏纤维化,预后较差。     

Effect of splenectomy on CCl4-induced liver fibrosis in rats

Ｔｈｅｓｐｌｅｅｎｉｓｌｏｃａｔｅｄｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃａｌｙｐｒｉｏｒｔｏｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｔｈｅｌｉｖｅｒｒｅｃｅｉｖｅｓａｌｏｆｔｈｅｂｌｏｏｄｆｌｏｗｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｐｌｅｎｉｃｖｅｉｎ．Ｂｏｔｈｔｈｅｓｐｌｅｎａｎｄｌｉｖｅｒａ...     

补肾益气化瘀解毒法对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的 观察补肾益气化瘀解毒作用的中药复方肝力克对肝纤维化大鼠肝细胞的凋亡及其相关基因的影响,探讨中药治疗肝纤维化的作用机制.方法 以四氯化碳诱导建立大鼠肝纤维化模型,以不同剂量的中药肝力克进行治疗;光镜观察肝组织的病理学变化,采用TUNEL法检测肝细胞的凋亡情况,免疫组化法检测凋亡相关蛋白的表达.结果 中药肝力克能显著改变肝纤维化的病理状态,能减轻肝细胞的凋亡情况,并能调节凋亡相关基因的表达.结论 肝力克抗纤维化作用的机制可能是通过调节肝纤维化大鼠肝细胞的凋亡水平;抑制肝纤维化大鼠肝细胞Fas/FasL、Bcl-2/Bax的表达来实现的.