模拟微重力条件下奥金肽对MC3T3-E1前成骨细胞增殖的影响

目的：研究模拟微重力（simulated microgravity,SMG）条件下奥金肽（osgentide, OST）对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖功能的影响。方法在正常细胞培养环境下,利用MTT法检测6种OST化合物对MC3T3-E1细胞增殖的影响,从中筛选出有效作用浓度的化合物,进一步利用 MTT 实验及流式细胞术分别检测 SMG 条件下1 nmol／L OST5对MC3T3-E1细胞的增殖效应及细胞周期的分布。结果在正常细胞培养环境下,1 nmol／L OST5对MC3T3-E1细胞的增殖具有显著促进作用（P＜0．01）。 MTT实验结果表明,与正常细胞培养环境相比,MC3T3-E1细胞在SMG条件下其增殖受到显著抑制。在SMG条件下,用1 nmol／L OST5处理MC3T3-E1细胞（ OST-SMG）3 d,流式细胞术检测结果表明,SMG促使更多的MC3T3-E1细胞进入G1期。1 nmol／L OST5处理MC3T3-E1细胞后S期比例比SMG条件下显著提高（P＜0．05）,表明OST5能够促进DNA合成。结论在SMG条件下,OST5能够促进成骨细胞的增殖,为研究OST5对模拟微重力相关的骨丢失防治提供了理论依据。     

丝素蛋白对表皮细胞生长的影响

目的：了解丝素的生物学性能和丝素对表皮细胞生长的影响。方法：试验组采用培养液ＤＭＥＭ 加５％ 丝素蛋白原液,对照组采用培养液ＤＭＥＭ 加５％ 生理盐水的方法,对表皮细胞培养结果进行比较观察;观察指标为表皮细胞形态、细胞生长曲线、３Ｈ－ 胸腺嘧啶核苷测定等。结果：培养后３ 天试验组大量细胞贴壁生长,而对照组在培养后５ 天才大量贴壁生长;试验组细胞数在５ 天明显增多,对照组在７ 天才迅速增加;３Ｈ－ 胸腺嘧啶核苷测定试验组及对照组的增殖活力均在第７ 天达高峰,但同一时相点试验组增殖活力明显高于对照组。结论：丝素蛋白对表皮细胞生长具有促进作用。     

表皮细胞培养最佳条件的探索

目的：研究表皮细胞培养的最佳条件,为进一步将其作为皮肤组织工程种子细胞奠定基础。方法：以DMEM作为基础培养液,改变培养条件后,计数2周内克隆形成数,检测细胞增殖能力,确定最佳条件。结果：表皮细胞以分离酶分离可得到大多数基底细胞,在培养液pH值为7．0－7．2,钙离子浓度为0．4mmol/L,血清浓度为18％,温度为36℃,CO2浓度为6％时,表皮细胞克隆形成数量高。结论：在最佳培养条件下,表皮细胞生长状态良好,为人工表皮的构建奠定了基础。     

含表皮细胞的无细胞真皮复合皮的构建及生长活性研究

为探讨体外构建复合皮的可能性，制备来源于猪皮的无细胞真皮基质，在其表皮面种植表皮细胞于体外培养，定期消化分离无细菌真皮上的表皮细胞，采用细胞计数法和增殖试验观察表皮细胞增殖活力，并分别于1周和2周后通过组织切片HE染色、扫描电镜观察细胞生长状况。结果显示，表皮细胞随培养时间延长，数量明显增多，且仍具有一定的增殖潜力。培养1周、2周后分别形成单层细胞膜片及含3－6层细胞的复层膜片。提示以异种无细菌真皮为载体，可于体外成功构建含表皮细胞层的活性复合皮。     

近日节律基因Period2对紫外线损伤NIH3T3细胞的影响

目的 探讨Period2(Per2)基因对紫外线损伤NIH3T3细胞的影响.方法 将Per2基因插入pcDNA 3.1,构建Per2基因的真核表达质粒,采用脂质体包裹法转导入NIH3T3细胞内.以紫外灯照射Per2基因过表达(pcDNA 3.1-Per2)的NIH3T3细胞、pcDNA 3.1空白组(pcDNA 3.1-vector)细胞和空白对照组细胞;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的NIH3T3细胞的凋亡、生长情况;采用单细胞凝胶电泳技术检测Per2过表达对DNA损伤后修复的影响.结果 紫外线照射后Per2阳性表达的NIH3T3细胞较其对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少,单细胞凝胶电泳实验表明紫外线照射后,各组细胞均表现出明显的DNA损伤,但是pcDNA 3.1-Per2转染组均较pcDNA 3.1-vector及空白对照组细胞的彗星细胞出现率和拖尾细胞DNA迁移长度低.结论 节律基因Per2能抑制紫外线对细胞的损伤,其机制可能与Per2促进DNA修复作用有关.     

MEC-1、Mc3细胞的生长抑素受体表达及其与放射配基结合特性的研究

目的　探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系 (MEC 1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体 (SSTR) 2种亚型 (SSTR1、SSTR2 )的表达 ,及两者与SSTR的放射配基1 2 5I RC 16 0的结合差异。方法　①采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC 1及Mc3细胞株生物学特性 ;②以原位杂交法检测MEC 1、Mc3细胞株SSTR1及SSTR2亚型的表达情况 ;③以放射配基结合分析法分析MEC 1、Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0结合情况。结果　①MEC 1、Mc3细胞生长稳定 ,Mc3细胞较MEC 1生长速度略快 ,克隆形成率高 ;②MEC 1细胞高度表达SSTR1及SSTR2 ,表达率分别为 82 .6 %和 81.7% ;Mc3细胞未见 2种亚型表达 ;③MEC 1和Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0的特异结合率分别为 (2 3.8± 9.4 ) %和 (3.2± 2 .3) % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　MEC 1高度表达SSTR1及SSTR2 ,其与SSTR配基RC 16 0的特异结合率显著高于Mc3细胞。     

染料木素7,4’-硝氧基丁酸酯的合成及其对MC3T3-E1细胞的增殖作用

目的为改善染料木素的治疗效果,对其进行结构修饰。方法通过成酯、硝基化反应,在染料木素的7-位,4’-位进行修饰,得到一个硝基酯类化合物;并考察得到的化合物对MC3T3-E1细胞的促增殖作用。结果得到的化合物经核磁、质谱等结构鉴定与设计目标一致。该化合物能够显著促进MC3T3-E1细胞的增殖,且呈一定的时间、剂量依赖关系。结论染料木素7,4’-硝氧基丁酸酯较母体药物更好地促进成骨细胞的增殖,为骨质疏松症治疗药物的开发提供新的参考。     

细胞电穿孔联合低浓度顺铂作用卵巢癌SKOV3细胞体外生长实验研究

目的 探讨细胞电穿孔联合低浓度顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株体外生长作用的影响.方法 选用电场600 V/cm,脉冲个数5个,电容11μF作用于SKOV3细胞株.根据作用不同分为电穿孔＋药物（E＋M）组;电穿孔（E）组,药物（M）组和空白（C）组.每3 d一次观察处理后的生长细胞共24 d.描绘细胞生长曲线,观察各组细胞生长变化.结果 不同方式处理后细胞生长情况表明电穿孔＋药物组对SKOV3细胞的体外生长有良好抑制作用,差异显著（P〈0.01）;单纯电穿孔组对肿瘤细胞的抑制大于单纯药物组,低于电穿孔＋药物组;单纯药物组的低浓度顺铂对卵巢癌SKOV3细胞仅有微弱生长抑制.结论 以电场600 V/cm,脉冲个数5个,电容11μF作为细胞电穿孔参数并同时联合低浓度顺铂作用卵巢癌SKOV3细胞株时,有明显加强非细胞抑制剂量顺铂对体外SKOV3细胞生长的抑制作用.     

PRDX3真核表达载体构建及亚细胞定位

目的：构建带FLAG标签的过氧化物还原酶3（peroxiredoxin3,PRDX3, PRX3）的真核表达载体,并对其在人舌癌SCC15细胞中的定位进行检测。方法以乳腺文库为模板,PCR扩增带有FLAG标签的PRDX3基因片段,并将扩增产物插入到PCDH空载体中,构建成PCDH－FLAG－PRDX3,质粒测序正确后瞬时转染入人胚肾293T细胞, Western免疫印迹检测克隆载体的表达情况,细胞免疫荧光实验检测PRDX3的亚细胞定位。结果双酶切和测序结果表明,PCDH－FLAG－PRDX3真核表达载体构建成功,转染293T细胞后成功表达了FLAG－PRDX3融合蛋白;细胞免疫荧光显示FLAG－PRDX3蛋白定位于舌癌SCC15细胞的细胞质中,不存在于细胞核内。结论成功构建了带FLAG标签的PRDX3真核表达载体,并检测其定位于舌癌SCC15细胞质中,为进一步明确PRDX3在舌癌发生发展中的功能及分子机制奠定基础。     

丝素蛋白牟表皮细胞生长的影响

目的：了解丝素的生物学性能和丝素对表皮细胞生长的影响。方法：试验组采用培养液ＤＭＥＭ加５％丝素蛋白原液,对照组采用培养液ＤＭＥＭ加５％生理盐水的方法,对表皮细胞培养结果进行比较观察;观察指标为表皮细胞形态细胞生长曲线、＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷测定等。结果：培养后３天试验组大量细胞贴壁生长,而对照组在培养５天才大量贴壁生长;试验组细胞数在５天明显增多,对照组在７天才迅速增加;＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷测定试验     

阻断PI3K信号通路显著抑制成骨前体细胞MC3T3-E1的分化

目的：研究PI3K信号通路对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的调控作用。方法：首先通过Western印迹试验检测到PI3K信号通路参与成骨细胞分化的调控。应用PI3K激酶的特异性抑制剂LY294002药物阻断PI3K信号通路的活化，通过碱性磷酸酶(ALP)和von Kossa染色观察成骨前体细胞MC3T3-E1分化的改变。结果：Western印迹试验显示，成骨细胞分化过程中PI3K信号通路明显活化。阻断该信号通路的活化显著抑制成骨细胞碱性磷酸酶的活性，同时降低成骨细胞体外形成骨结节结构的能力。结论：PI3K信号通路参与了成骨细胞分化的调控，而这种调控作用是成骨细胞分化所必需的。     

电离辐射对巨核细胞与白介素3及其受体基因表达的影响

目的 探讨辐射损伤对巨核细胞增殖和细胞周期的影响及其调控因子IL-3及其受体（IL-3Rα）表达的变化。方法 利用MTT法检测辐射损伤后Dami细胞的增殖作用，并通过流式细胞仪检测细胞周期的变化。用RT-PCR方法检测辐射后Dami细胞IL-3和IL-3Rα表达水平的变化。结果Dami细胞在受到不同剂量7射线照射后均发生增殖抑制，并发生明显的G0，G1期阻滞。辐射损伤5、10和15Gv后，IL-3和IL-3Rα在mRNA水平表达均显著低于对照组（P〈0．05），其变化趋势是随照射剂量增加而表达逐渐降低。结论不同剂量辐射所致造血功能障碍与巨核细胞增殖抑制、细胞周期改变和调控因子IL-3和IL-3Rα的异常表达有关。     

3D-Ultraschall (3D-US) in der Diagnostik von Mammaherdbefunden

ZusammenfassungHintergrund Untersucht wurde, ob der 3D-US die Beurteilung von Mammaherdbefunden verbessern kann.Material und Methoden 60 Patientinnen wurden mit 2D- und 3D-US (Logiq 9 der Fa. GE, 14 MHz, multiplanare Rekonstruktionen in 3 Ebenen) untersucht. Die Herdläsionen wurden sonographisch nach BIRADS klassifiziert. Als Referenzmethode stand in allen Fällen das Ergebnis der histopathologischen Untersuchung zur Verfügung.Ergebnisse Bei den 38 malignen und 22 benignen Läsionen ergab sich mit der 2D-US eine Sensitivität/Spezifität von 92/81%, mit der 3D-US von 97/72% und bei der Kombination von 2D- und 3D-US von 97/81%. Bei malignen Tumoren zeigt sich im 3D-US eine sternförmige echoarme Formation mit Retraktion des umgebenden Gewebes.Schlussfolgerung Der 3D-US ermöglicht die mehrdimensionale Darstellung von Mammaherdbefunden, in der als Malignitätskriterium die Retraktion des umgebenden Gewebes eindrucksvoll zur Darstellung kommt.     

[P-CH_3-~3H]-梭曼的合成

本文合成了〔P-CH_3-~3H〕-1,2,2-三甲基丙氧基甲膦酰氟(〔=P-CH_3-~3H〕-梭曼).放射比度1.4ci/mmol,放射化学纯度95%以上.     

红色糖多孢菌M合成3-脱氧-3-羰基-赤酮酸内酯B的限速因子研究

目的探讨红色糖多孢菌KR6基因突变体生物合成3-脱氧-3羰基-赤酮酸内酯B（DOEB）产量显著降低的原因。方法以KR6基因突变体M菌株为研究对象,采用相对实时荧光定量RT-PCR技术、抗原-抗体检测技术和高分辨LC-MS分析技术等,分别从基因的转录水平、翻译水平以及聚酮化合物水平等层面研究了DOEB的生物合成量。结果红色糖多孢菌M菌株与出发菌株A226相比,两者聚酮合酶（PKS）基因簇在转录水平和翻译水平上的表达差异均非造成DOEB产量降低的限速因子;而DOEB的前体转化能力却大幅度降低,因此,DOEB合酶的活力降低是造成生物合成DOEB产量降低的关键因素。结论 DOEB合酶的活力是生物合成DOEB的限速因子,本研究为进一步探讨利用基因工程途径提高新酮内酯类化合物产量奠定了基础。     

FHL3研究进展

4个半LIM结构域蛋白3(four and a half LIM domain protein 3,FHL3)是LIM蛋白质超家族的一个成员,主要存在于骨骼肌中.它含有4个半LIM结构域,并通过这些LIM结构域与肌分化因子MyoD、肌动蛋白、转录因子MZF-1、细胞周期调节因子CDC25B等多种蛋白质发生相互作用,从而对成肌细胞分化、细胞骨架结构、骨骼肌形成以及某些基因的表达起到重要的调控作用.目前,FHL3的功能及其作用机制尚未阐明,深入开展FHIS的研究将可能为人类治疗某些疾病提供新思路.     

EDTA-K3致血小板假性减少症3例

近年来,随着全自动血细胞分析仪的普及,提高了血细胞分析的速度,使全血细胞计数检测结果的精密度和准确度明显提高.实验室血细胞分析的标本留取方式也发生改变,普遍采用静脉血EDTA 抗凝.EDTA盐是国际血液学标准化委员会(ICSH)1993年建议用作血液分析的抗凝剂,使得血液不凝固并保持红细胞、白细胞、血小板体积形态不发生改变,但EDTA盐有时又能促使或诱导血小板发生聚集从而导致血液分析仪做血小板计数时出现假性偏低的现象,即EDTA依赖性血小板假性减少症(EDTA-dependent pseudothrombocytopennia, EDTA-dependent PTCP).我们在临床检验工作中,已发现有EDTA 依赖性假性血小板减少症的病例,检测时需要结合临床、排除干扰因素、选择科学可行的检测方法,才能正确报告血小板计数结果.     

3D-FIESTA和3D-FSE对于跟腱损伤的诊断价值

目的：研究闭合性跟腱撕裂患者的MRI影像特点,比较其在不同MRI序列上的表现,探讨新序列在跟腱撕裂中的诊断价值。方法分析2011年6月-2013年6月间在我院就诊的41例跟腱损伤患者的MRI表现。将41例患者分为A、B两组。A组25例,行常规序列扫描（T1WI＋T2WI＋STIR）,B组16例,行常规序列（T1WI＋T2WI＋STIR）及新序列（3D-FIESTA＋3D-FSE）扫描。MRI检查后,A组11例、B组8例行手术治疗,并将其影像资料与手术结果进行比较,比较A、B组的诊断效能。结果跟腱部分撕裂的MRI表现为跟腱增粗,跟腱内条状或片状高信号。完全撕裂的MRI表现为跟腱损伤处完全分离,断端回缩或完全交错。A组诊断完全撕裂10例均行手术治疗,手术结果9例为完全撕裂。B组诊断完全撕裂7例均与手术证实符合。结论MRI对于诊断跟腱撕裂具有重要价值,新序列（3D-FIESTA,3D-FSE）能提高诊断跟腱完全撕裂的正确率及部分撕裂的检出率。     

红色糖多孢菌A226-YA突变体构建及产物分析

目的：用红色糖多孢菌（前称糖多孢红霉菌）KR6突变体合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B，同时，KR6突变体不合成红霉素。方法：以红色糖多孢菌A226基因组DNA为模板，用重叠PCR技术扩增KR6酶域中Tyr2699密码子TAC突变为A1a密码子GCC的1000bpDNA序列，克隆到载体pWHM3上构建同源重组质粒pWHM3-YA。将pWHM3-YA转化到A226中，并整合到红霉素合成基因座，经染色体二次重组后筛选TAC突变为GCC的突变体A226-YA，再进行突变体A226-YA产物分析。结果：通过染色体同源重组，构建了红色糖多孢菌突变菌株A226-YA，Zabspec Fab质谱分析结果显示A226-YA突变体合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B，而没有检测到红霉素。结论：突变Tyr2699能有效失活KR6，但3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B的产量较低。