急慢性砷染毒的肝细胞L-02的基因芯片分析

目的用基因芯片分析急慢性砷染毒时人正常肝细胞(L-02细胞)基因表达谱的变化。方法6omol／L的亚砷酸钠染毒L-02细胞2，15，24h，4μmol／L的亚酸钠染毒L-02细胞2周，分别与未染毒的L-02细胞抽提RNA作表达谱基因芯片杂交。结果急性和慢性砷诱导细胞基因表达谱截然不同。染砷后首先激活的是解毒功能相关的基因和一些蛋白质合成相关的基因。长期染砷后与肿瘤发生及氧化还原有关的基因表达量升高。结论细胞短期染砷毒后，应激和解毒功能有关的蛋白表达上调，长期染砷后与肿瘤有关的基因表达上调，急慢性砷刺激下细胞以不同的方式抵抗砷毒。     

砷对大鼠肝脏多药耐药相关蛋白2影响的研究

目的　研究砷中毒大鼠肝脏膜转运蛋白多药耐药相关蛋白 2 (multidrugresistance associ atedprotein 2 ,MRP2 )表达水平的变化及其作用。方法　 30只健康Wistar大鼠随机分为 6组 :2周染毒组 ,4周染毒组 ,6周染毒组 ,分别设 3个对照组。用亚砷酸钠 2 0mg kg体重灌胃 ,隔天 1次。原子吸收分光光度法测定胆汁中和全血中的总砷含量。蛋白印记法测定肝细胞膜上MRP2的含量改变。结果　染毒期间 ,全血和胆汁中总砷含量明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,尤其是染毒第 2和第 4周胆汁砷的排泄更加明显 ,分别为对照组的 16 .8和 13.8倍。MRP2的表达增加 (与同期对照组相比 ,P <0 .0 5 ) ,从第 2周到第 6周分别增加 36 .6 1%、32 .36 %、12 .73%。MRP2的表达和胆汁砷的含量呈正相关 (r=0 .713,P <0 .0 5 )。结论　胆汁是砷及其代谢产物排泄的重要途径之一 ,肝细胞膜上的转运蛋白MRP2的表达增加可能在早期促进砷及其代谢产物胆汁排泄中发挥了重要作用。     

叔丁基对苯二酚对Chang肝细胞无机砷甲基化代谢的影响

目的探讨叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)对Chang肝细胞无机砷甲基化代谢的影响。方法将Chang肝细胞密度调整为1×105个/ml,采用25μmol/L tBHQ溶液预处理24 h后,再用5μmol/L的tBHQ溶液和0.1、0.5、1.0和5.0μmol/L亚砷酸钠溶液联合染毒24 h;并采用0.1、0.5、1.0和5.0μmol/L亚砷酸钠溶液单独染毒24 h;并设溶剂对照(三蒸水)。采用超低温捕集-氢化物发生-原子吸收分光光度法分别测定细胞内和培养液中的无机砷(inorganicarsenic,iAs)、一甲基砷(monomethylated arsenic,MMA)和二甲基砷(dimethylated arsenic,DMA)含量,并计算一甲基化率(primary methylation index,PMI)和二甲基化率(secondary methylation index,SMI)。结果随着亚砷酸钠染毒剂量的增加,亚砷酸钠单独染毒组和tBHQ+亚砷酸钠染毒组Chang肝细胞内tAs和iAs含量及Chang肝细胞和培养液中的总MMA含量均升高;亚砷酸钠单独染...     

长链非编码RNA-ROR与Nrf2在亚砷酸钠慢性染毒人支气管上皮细胞中的表达与关系

目的 以亚砷酸钠慢性染毒人支气管上皮(HBE)细胞,观察长链非编码RNA-ROR(lncRNA-ROR)与核转录因子-E2类相关因子2(Nrf2)在砷慢性染毒细胞中的变化规律,并分析二者的相关性。方法 以2.5 μmol/L 亚砷酸钠染毒HBE细胞共40代,分别用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹实验检测染毒0代(P0)、10代(P10)、20代(P20)和40代(P40)细胞中lncRNA-ROR的表达水平和Nrf2的蛋白表达水平,并用Pearson相关检验分析lncRNA-ROR和Nrf2的相关性。结果 在亚砷酸钠慢性染毒HBE细胞的过程中,lncRNA-ROR水平逐渐增加,Nrf2蛋白表达水平逐渐降低。lncRNA-ROR在P10细胞中的表达为P0细胞的1.17倍(P>0.05),在P20和P40细胞中的表达分别为P0细胞的1.61倍和2.18倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Nrf2在P10、P20和P40细胞中的表达分别为P0细胞的0.85倍、0.68倍和0.56倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。lncRNA-ROR的表达水平与Nrf2的蛋白表达水平呈负相关,相关系数r=-0.966。结论 亚砷酸钠慢性染毒能持续抑制Nrf2的蛋白表达水平,进而激活lncRNA-ROR的表达,提示lncRNA-ROR与Nrf2可能共同参与了砷致肿瘤的发生发展。     

急性亚砷酸钠暴露对小鼠主动脉Nrf2通路的影响

目的研究急性亚砷酸钠暴露对小鼠主动脉NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)通路的影响。方法选择健康成年清洁级雄性野生型C57BL/6小鼠作为实验动物。将15只小鼠按体重随机分成4组,分别为0(对照,n=3)及2、6、12h亚砷酸钠染毒组(n=4)。采用腹腔注射方式给予5 mg/kg亚砷酸钠溶液。将10只小鼠按体重随机分成3组,分别为对照(磷酸盐缓冲溶液,n=3)组和1.25 mg/kg(n=4)、5 mg/kg(n=3)亚砷酸钠染毒组。采用腹腔注射方式染毒6 h。检测小鼠主动脉中Nrf2及其下游基因谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚单位(GCLM)以及NAD(P)H醌氧化还原酶(NQO1)m RNA的表达水平。结果与对照组相比,5 mg/kg亚砷酸钠染毒2 h小鼠主动脉GCLC m RNA的表达水平及染毒6 h小鼠主动脉GCLM、NQO1 m RNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);而亚砷酸钠染毒不同时间小鼠主动脉Nrf2 m RNA的表达水平无明显变化。且随着亚砷酸钠染毒时间的延长,小鼠主动脉Nrf2、GCLC、GCLM及NQO1 m RNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,5 mg/kg亚砷酸钠染毒6 h小鼠主动脉GCLC、GCLM及NQO1 m RNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);而各剂量亚砷酸钠染毒6 h小鼠主动脉Nrf2 m RNA的表达水平均无明显改变。且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,小鼠主动脉Nrf2、GCLC、GCLM及NQO1 m RNA的表达水平均呈上升趋势。结论急性亚砷酸钠处理能激活小鼠主动脉Nrf2通路,提示急性无机砷暴露引起主动脉内发生氧化应激。     

砷化物对人类金属硫蛋白-3cDNA基因表达的影响

目的 探讨砷化物对人类正常肝细胞金属硫蛋白(Metallothionein,MD-3cDNA基因表达的影响。方法 利用SMART方法克隆cDNA基因,生物信息学分析克隆基因的同源性、染色体定位、基因结构和对该基因编码蛋白质进行分析并对该蛋白质进行跨膜信息分析,基因芯片方法检测染砷L-02细胞MT-3基因的表达。结果 成功克隆MT-3cDNA基因,经生物信息学分析可知,该基因定位在人16号染色体16q13区段,跨膜信息分析发现MT-3基因编码蛋白质可以穿出生物膜,基因芯片结果证实染砷的人正常肝L-02细胞在染砷早期MT-3基因表达增高。结论 该研究发现人类MT-3基因是砷化物作用的一个相关基因,早期参与了砷代谢解毒。     

砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响

目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关。     

亚砷酸钠对人正常肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人正常肝(L-02)细胞凋亡及Bax、Bcl-2 m RNA和蛋白表达的影响。方法将L-02肝细胞分别暴露于含0(对照)、50、100、150μmol/L亚砷酸钠的培养基中暴露24 h。采用MTT法检测L-02肝细胞的存活率,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率,采用RT-PCR的方法检测Bax、Bcl-2 m RNA相对表达情况,采用Westernblotting方法检测L-02肝细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率均较低,凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率上升趋势。与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞中Bcl-2、Bax m RNA和蛋白的表达水平均较高,100μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值也较高,而150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值及50、150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2蛋白/Bax蛋白值均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可抑制L-02肝细胞的生长,诱导细胞凋亡的发生;其机制可能与Bcl-2家族的激活有关。     

急性砷暴露对小鼠脾脏核转录因子NF-E2相关因子2信号通路的影响

目的探讨急性砷暴露小鼠脾脏核转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)及其下游血红素单加氧酶-1(HO-1)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)蛋白的表达。方法将48只健康8周龄清洁级昆明雌性小鼠按体重随机分为4组,分别为对照(生理盐水)组和5、10、20 mg/kg亚砷酸钠染毒组,每组12只。给予小鼠一次性灌胃亚砷酸钠24 h后,测定脾组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及Nrf2、HO-1和GST蛋白的表达水平。结果与对照组相比,各剂量亚砷酸钠染毒组小鼠脾组织中MDA含量均增加,差异有统计学意义(P0.05);20 mg/kg亚砷酸钠染毒组小鼠脾组织中SOD活力和10、20 mg/kg亚砷酸钠染毒组小鼠脾组织中GSH-Px活力均减少,差异有统计学意义(P0.05)。且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,小鼠脾组织中SOD和GSH-Px活力均呈下降趋势,而MDA含量呈上升趋势。与对照组相比,各剂量亚砷酸钠染毒组小鼠脾组织中HO-1和GSTO1/2蛋白的表达水平及10、20 mg/kg亚砷酸钠染毒组小鼠脾组织中Nrf2蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,小鼠脾组织中Nrf2、HO-1和GSTO1/2蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论急性砷暴露在导致小鼠脾脏发生氧化损伤的同时,能够活化Nrf2信号通路,诱导下游抗氧化相关酶类蛋白表达,这可能是砷暴露刺激机体产生的一种防御应答反应。     

亚砷酸钠对Chang肝细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨亚砷酸钠对正常人Chang肝细胞体外增殖及凋亡的影响.方法 采用0(对照)～100 μmol/L亚砷酸钠分别处理细胞24、48、72、96 h.采用MTT比色法检测细胞活力;采用流式细胞术检测染毒48 h时的细胞凋亡率.结果 仅0.2μmol/L亚砷酸钠染毒24 h的细胞活力略高于对照组,但差异无统计学意义;且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高和染毒时间的延长,Chang肝细胞存活率均呈下降趋势,并具有剂量-效应和时间-效应关系.与对照组相比较,5～100 μmol/L亚砷酸钠染毒组Chang肝细胞凋亡率均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,Chang肝细胞的凋亡率呈显著升高趋势,并具有剂量-效应关系.结论 亚砷酸钠有明显的细胞毒性,能抑制Chang肝细胞的增殖,这可能与其诱导细胞凋亡有关.     

HOXA11与多囊卵巢综合征的相关性研究

目的:探讨HOXA11基因在卵巢颗粒细胞内的异常表达与PCOS的相关性。方法:采用免疫荧光法、RT-PCR法、Western-blot法检测颗粒细胞中HOXA11的表达水平。结果:①在PCOS组中,镜下细胞内见明显的红色荧光主要定位于细胞核,细胞液中可见少许微弱红色荧光;对照组中,细胞核和细胞液中可见更强的红色荧光。PCOS组与对照组比较,细胞核和细胞液中HOXA11的表达都明显减少(P<0.05)。②PCOS组HOXA11 mRNA的表达水平较对照组低(P<0.05)。③Western-blot结果显示,PCOS组与对照组的颗粒细胞中均有HOXA11蛋白表达。PCOS组表达较弱,对照组表达较强(P<0.05)。免疫荧光、RT-PCR、Western-blot均提示PCOS组颗粒细胞中HOXA11表达水平较对照组低(P<0.05)。结论:HOXA11在PCOS组的颗粒细胞中表达降低,提示其可能在PCOS发生发展过程中起着重要作用。     

HOXA11在根治性宫颈切除术患者术后子宫内膜中的表达

目的：探讨根治性宫颈切除术（radical trachelectomy,RT）患者术后同源盒基因A11（HOXA11）的表达对子宫内膜容受性的影响。方法：应用实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测RT术后不孕症患者（n=16）与正常生育能力女性（n=16）分泌期子宫内膜组织中HOXA11基因的mRNA表达水平,并应用蛋白质印迹法（Western blotting）分别检测2组患者分泌期子宫内膜组织中HOXA11、整合素β3（Integrin-β3）以及β-catenin、Dickkopf-1（DKK1）蛋白的表达水平。结果：HOXA11基因在RT组和对照组的分泌期子宫内膜中均有表达,但RT组低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;HOXA11、Integrin-β3以及β-catenin、DKK1蛋白在RT组的表达也低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。且HOXA11与Intergin-β3蛋白、β-catenin蛋白及DKK1蛋白的表达强度均呈显著正相关（P分别为0.006、0.004和0.007）。结论：在RT术后不孕可能由于宫颈组织的缺失从而影响宫腔内HOXA11基因的正常表达,并相应调节Integrin-β3及Wnt/β-catenin通路的表达,从而干扰子宫内膜容受性的形成,导致胚胎着床失败而不孕。     

亚砷酸钠对Chang肝细胞鸟苷三磷酸环化水解酶及6-丙酮酰四氢蝶呤合成酶的mRNA表达水平的影响

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO_2)对Chang肝细胞鸟苷三磷酸环化水解酶I型(GTPCH)及6-丙酮酰四氢蝶呤合成酶(PTPS)的mRNA表达水平的影响.方法 分别以不同浓度NaAsO_2(0、50、200及400 μmol/L)染毒人类Chang肝细胞株12 h.以MTT法测定细胞活力,以RT-PCR法测定GTPCH和PTPS mRNA的表达水平.结果 50 μmol/L剂量组细胞活力与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),其他两组细胞活力均显著低于对照组(P<0.05);50、200及400 μmol/L剂量组GTPCH和PTPS的mRNA表达水平与对照组相比均显著下降(P<0.05),且呈剂量.效应关系.结论 NaAsO_2暴露引起Chang肝细胞四氢生物蝶呤(BH4)合成酶GTPCH和PTPS的mRNA表达水平下降可能与砷致色素代谢异常有关.

Abstract：

Objective To study the effects of sodium arsenite on the mRNA expression of GTP cyclohydrolase (GTPCH) and 6-pyruvoyl-tetrahydropterin synthase (FTPS) in Chang liver cells. Methods Human Chang liver cells were cultured with sodium arsenite at doses of 0,50, 200 and 400 μmol/L for 12 hours. Cell viability was tested by MTT assay, and the expression of mRNA of GTPCH and PTPS was detected by RT-PCR. Results Cell viability in 50 μmol/L group was almost the same as that in control, while the viability in the other two groups were significantly lower than that in control. All of the mRNA expression levels in the three groups were significantly lower than that in control with dose-dependent manner. Conclusion The down-regulated expression of GTPCH and PTPS, the main enzymes of the synthesis of BH4, induced by sodium arsenite exposure may be related with arsenic related skin depigmentation.     

亚砷酸钠对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨亚砷酸钠对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖与凋亡的影响。方法取处于对数生长期的HSC-T6细胞,调整细胞密度为4×10~4/ml,分别暴露于含终浓度为0(对照)、5、15、25μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基24、48、72 h。采用MTT比色法检测细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率。结果随染毒剂量和时间增加,5μmol/L组的细胞增殖活性高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),25μmol/L组的细胞增殖活性低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。HSC-T6细胞形态由染毒前的椭圆形和不规则形转变为染毒后的索条形,有纤维化倾向。随着染毒时间延长,染毒剂量升高,HSC-T6细胞早期凋亡率随之增高,差异有统计学意义(P0.05),具有剂量-效应和时间-效应关系。结论低剂量亚砷酸钠暴露促进肝星状细胞增殖,高剂量亚砷酸钠暴露抑制肝星状细胞增殖,会改变细胞形态,促进细胞凋亡,具有明显的细胞毒性。     

二巯基丙磺酸钠对氯化汞中毒大鼠肾脏基因表达的影响

[目的]运用基因芯片技术分析二巯基丙磺酸钠（DMPS）驱汞治疗对肾脏基因表达的影响,为进一步研究无机汞肾损伤及治疗的分子机制提供理论依据。[方法]健康雄性SD大鼠30只,随机分成3组,每组10只,阳性对照组和治疗组大鼠皮下注射氯化汞溶液建立亚慢性汞中毒肾脏损伤大鼠模型,阴性对照组大鼠皮下注射0．9％NaCl注射液,模型建好后治疗组大鼠肌肉注射DMPS驱汞治疗,阴性对照组和阳性对照组大鼠肌肉注射0．9％NaCl注射液,治疗结束后用基因芯片方法筛选大鼠肾脏差异表达基因,并用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法验证部分差异表达基因。[结果]阳性对照组与阴性对照组比较筛选出差异基因385个;治疗组与阴性对照组比较筛查出差异基因183个;治疗组与阳性对照组比较筛查出差异基因223个。DMPS治疗有效基因中明显差异表达基因23个,其功能涉及毒物、异物代谢,氧化应激应答,炎症应答,转录调节,离子转运和信号转导,细胞增殖与凋亡,胶原纤维、软骨的形成,神经递质代谢,糖类、脂类、氨基酸代谢等方面,并得到RT-PCR方法的验证。[结论]DMPS驱汞治疗可使汞中毒肾脏损伤差异基因得到明显恢复,这些明显恢复的基因可能在汞中毒肾脏损伤的发生和DMPS治疗中发挥重要作用。     

氢醌诱导下肝细胞XPV基因mRNA表达规律的研究

目的研究氢醌(HQ)对L-02肝细胞XPV基因mRNA表达的影响及其规律,探讨XPV基因在HQ所致肝细胞毒性过程中分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导后,采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点(6、12、24和48h)XPV基因mRNA的表达;并检测不同剂量(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)HQ诱导24h后,各浓度组XPV基因mRNA的表达。结果在24h的时间范围内,XPV基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是正常对照组,均具有随时间的延长而增加的趋势;到24h时,相对表达量达到最大值,当培养时间达到48h时,该基因的表达则有所下降;此外,在各时间处理组(6h、12h、24h和48h)中,染毒组L-02肝细胞内XPV基因在mRNA水平上的表达均高于正常对照组。各剂量HQ作用24h后,L-02肝细胞内XPV基因mRNA的表达在0～80μmol/L范围内随着剂量的增加而增加,以正常对照组XPV基因的相对表达量为1,各染毒剂量组内XPV基因mRNA的相对表达量分别增至1.20、2.02、2.37、2.67、4.40和2.32倍;80μmol/L时其相对表达量达到峰值,160μmol/L的HQ作用后,其表达却有所下降,但仍高于正常对照组。结论HQ可以诱导XPV基因mRNA的表达变化,并且呈现一定的时间和剂量依赖性,提示XPV基因可能参与了肝细胞对HQ的应答过程。     

多药耐药相关蛋白2与谷胱甘肽共转运体系对肝脏砷代谢的影响

目的 用谷胱甘肽（GSH）合成酶抑制剂丁硫氨酸亚甲矾胺（BSO）抑制大鼠GSH合成,探讨多药耐药相关蛋白2（MRP2）与GSH共转运体系在肝脏砷代谢过程中的作用.方法 30只健康Wistar大鼠随机分为5组：第1组为对照组,给予生理盐水;第2～4组为染砷组,分别给予4、10和20mg/kg体重的亚砷酸钠溶液,隔天染毒1次,2周后将动物处死.第5组为BSO干预组,在实验结束的前3 d,每天大鼠预先腹腔注射2 mmol/kg体重BSO溶液,4 h后再经口给予20 mg/kg体重的亚砷酸钠溶液,其他处理同上.原子吸收分光光度法测定胆汁、肝组织和全血中的总砷含量.蛋白印记法测定肝细胞膜上MRP2的含量改变.结果 和对照组比较,各砷染毒组胆汁、肝脏和血砷含量均明显增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;而3个染毒组间血砷差异无统计学意义（P＞0.05）.随着染砷剂量增加,MRP2表达有增加的趋势,且MRP2表达量与胆汁砷的含量呈正相关（r=0.986,P＜0.05）.大鼠经BSO预处理后再给予20 mg/kg体重的亚砷酸钠溶液,胆汁砷含量明显高于对照组,而低于高剂量组;肝脏和血砷水平明显高于对照组和高剂量组,差异有统计学意义（P＜0.05）;MPR2表达量比高剂量组减少.结论 亚砷酸钠可以诱导MRP2的表达,随染砷剂量增加,MRP2表达量增加.MRP2在砷及其代谢产物的胆汁排泄过程中发挥了重要作用.MRP2转运砷及其代谢产物的作用与细胞内GSH水平相关,BSO通过抑制GSH合成,导致MRP2-GSH共转运功能减弱,砷在肝脏内蓄积增加.     

锌对缺血再灌注大鼠肝脏金属硫蛋白-1基因表达的影响

目的　研究锌对肝脏缺血再灌注损伤 (HIRI)保护作用的分子机制。方法　采用RT- PCR技术 ,检测分析金属硫蛋白 - 1 (MT- 1 )基因在 HIRI大鼠肝组织中的表达和锌对其表达的调节。结果　各组大鼠肝组织均有MT- 1基因表达 ;缺血 30 min、再灌 90 min大鼠肝组织中 MT- 1m RNA较对照组显著降低 (P<0 .0 1 ) ;灌胃补锌后 ,HIRI大鼠肝 MT- 1 m RNA转录水平较对照组明显增高 (P<0 .0 1 ) ,单纯补锌亦可上调其组织中 MT- 1基因表达 (P<0 .0 1 )。结论　在锌对HIRI产生保护作用的分子机制中 ,调节其肝组织中 MT- 1转录水平的表达可能是一条重要途径。