脑梗死后对成年小鼠室管膜下区神经发生的观察

目的 探讨脑梗死对成年小鼠室管膜下区(SVZ)神经发生的影响.方法 将48只小鼠随机分为假手术组和脑梗死组(各24只),建立局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.采用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记神经干细胞,用免疫组化法观察脑梗死后7、14、21及28 d时,损伤侧SVZ区、纹状体、皮质BrdU阳性细胞数及BrdU分别与微管相关蛋白Doublecortin(DCX)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核心抗原(NeuN)双染细胞数的变化.结果 MCAO术后7d,脑梗死组损伤侧SVZ区、纹状体、皮质BrdU阳性细胞明显增多,假手术组与脑梗死组分别为45.0±5.6和245.0±26.l、0和201.9±21.3、0和159.3±16.4,14d后开始下降(P＜0.05).脑梗死组MCAO术后7和14d,可在小鼠损伤侧SVZ区、纹状体观察到BrdU和DCX阳性细胞;术后28 d,损伤侧纹状体可见BrdU和NeuN阳性细胞,数量均显著多于假手术组(P＜0.05),BrdU和GFAP阳性细胞数差异无统计学意义.结论 脑梗死可促进成年小鼠损伤侧SVZ区、纹状体及皮质的BrdU阳性细胞数增多,并诱导SVZ区干细胞向纹状体迁移且分化为神经细胞,从而促进SVZ区的神经发生.     

局灶性脑缺血后神经干细胞增殖及GDNF表达变化的实验研究

目的研究局灶性脑缺血后大鼠脑内神经干细胞(NSCs)增殖情况及与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达变化的关系。方法将24只SD大鼠随机分为假手术组和模型1组、模型2组、模型3组各6只,后三组用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,分别于术后3、7、14 d处死;假手术组除不以尼龙线阻塞大脑中动脉起始部外,其他操作与模型1组相同。采用免疫组化染色法观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的细胞及巢蛋白(Nestin)、GDNF阳性细胞表达,BrdU/Nestin免疫荧光双标法观察NSCs变化。结果模型2组损伤侧脑室下层(SVZ)BrdU阳性细胞显著多于假手术组(P<0.05),模型3组与假手术组相似;模型2、3组皮层梗死灶周围BrdU阳性细胞均显著多于假手术组(P<0.01、0.05);模型1、2组皮层梗死灶周围Nestin阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.01),BrdU/Nestin免疫荧光双标显示BrdU阳性细胞几乎均为Nestin阳性;模型2、3组皮层梗死灶周围GDNF阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血后3～14 d内源性NSCs增殖加快,GDNF表达增加可能对其起促进作用。     

脑心通对实验性脑缺血大鼠梗死体积和神经巢蛋白的影响

目的观察缺血再灌注损伤(IRI)后大鼠不同时间点梗死体积、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的阳性细胞和神经巢蛋白(Nestin)的表达,探讨脑心通对其影响。方法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定大鼠脑缺血再灌注(IR)后梗死体积;免疫组化法测定第3、7、14天和21天缺血侧BrdU标记的阳性细胞和Nestin的平均荧光强度值。结果 TTC染色发现IR后第7天大鼠脑梗死体积最大,不同剂量的脑心通实验组与模型组间差异显著(P<0.01);IR第3天,模型组、不同剂量脑心通组海马齿状回颗粒下层(SGZ)及室管膜下区(SVZ)已出现BrdU阳性细胞和Nestin表达,第7天时其平均荧光强度值最高,各组内不同时间点BrdU阳性细胞和Nestin平均荧光强度值差异显著(P<0.01);而组间比较无差异(P>0.05)。结论脑心通胶囊对减轻IR损伤后实验鼠梗死体积有一定的促进作用;但未发现脑心通胶囊对SVZ、SGZ区域BrdU阳性细胞和Nestin表达有促进作用。     

二氯化钴预处理对大鼠脑梗死体积及SDF-1α/CXCR4表达水平的影响

目的观察二氯化钴预处理对大鼠脑梗死体积百分比、基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)/趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响;探讨缺氧缺血环境中SDF-1α/CXCR4生物轴对脑的保护作用。方法将168只成年雄性SD大鼠随机分为缺氧预处理组(n=84)、模型组(n=84)。按缺血后再灌注时间不同分为再灌注6 h、24 h、3天、5天、7天、14天6个亚组。采用改良Longa方法制备局灶性脑缺血模型。观察缺氧缺血后脑组织病理学改变,通过氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑缺血后再灌注两组大鼠脑梗死体积百分比的变化;免疫组织化学法检测大鼠脑组织皮层区各个时间点SDF-1α及CXCR4的表达变化。结果 TTC染色显示,缺氧预处理组及模型组大鼠6 h时即可见明显梗死灶,24 h脑梗死体积趋于稳定。两组大鼠24 h、3天、5天、7天、14天5个时间点脑梗死体积百分比比较,差异无统计学意义(P0.05);缺氧预处理组各时间点脑梗死体积百分比均明显小于模型组(P0.05)。免疫组织化学法结果显示,两组于脑缺血再灌注6 h皮层区SDF-1α、CXCR4表达明显增加,7天表达至高峰,随后表达逐渐减少,14天仍有表达。缺氧预处理组各时间点皮层区SDF-1α、CXCR4的阳性细胞数均显著多于模型组(P0.05)。结论二氯化钴预处理能缩小脑梗死体积,其可能通过上调SDF-1α、CXCR4的表达水平,诱导脑缺氧耐受,促进间充质干细胞向缺血组织迁移,发挥脑保护作用。     

成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞增殖分化的比较

目的 比较成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞(NSCs)的增殖与分化,探讨脑出血后NSCs的变化规律.方法 制作大鼠脑出血模型,5-溴脱氧尿核苷(BrdU)腹腔注射标记增殖细胞,用免疫组化法检测大鼠海马齿状回BrdU、神经元核抗原(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数的变化.结果 正常组和假手术组大鼠海马齿状回均可见BrdU阳性细胞,成年大鼠明显多于老年大鼠.脑出血后成年和老年大鼠各时间点的BrdU阳性细胞均较正常组和假手术组明显增加,7d组达到峰值,成年大鼠各时间点均明显高于老年大鼠.正常大鼠海马齿状回可见少量BrdU/NeuN和BrdU/GFAP双标阳性细胞,脑出血后成年和老年大鼠海马齿状回双标阳性细胞数均较正常组明显增加,且老年大鼠BrdU/NeuN双标细胞明显少于成年大鼠.结论 脑出血后大鼠海马齿状回NSCs增殖明显,成年大鼠明显强于老年大鼠,且新生细胞分化为神经元的比例也明显高于老年大鼠.     

大鼠脑梗死后内源性神经干细胞的增殖及迁移

目的研究成年大鼠脑梗死后内源性神经干细胞增殖及迁移。 方法制作大鼠脑梗死模型,将其分成梗死后1、3、7、14、28 d组,对照组为假手术组。免疫组织化学方法动态检测大鼠脑内5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)、巢蛋白(Nestin)的表达。 结果与正常对照组相比,室下区及海马BrdU和Nestin阳性细胞在脑梗死后1 d开始增加(P<0.05),7d达到高峰,14 d后开始下降,但仍高于正常水平(P<0.05),28 d后接近正常水平;室下区及海马BrdU和Nestin阳性细胞经胼胝体向对侧迁移。 结论脑梗死可激活内源性神经干细胞原位增殖及迁移。     

电针联合脂肪源性干细胞移植对脑缺血/再灌注大鼠SDF-1和CXCR4表达的影响

目的探讨电针联合脂肪源性干细胞(ADSC)移植对大鼠缺血/再灌注损伤后趋化因子SDF-1及其受体CXCR4的影响。方法成年大鼠随机分为模型组、电针组、ADSC移植组、电针+ADSC组。线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)2h再灌注模型,电针组取大椎穴和内关穴行电针治疗。ADSC组尾静脉注射PKH26标记的ADSC细胞悬液,电针+ADSC组联合电针和AD-SC移植治疗。缺血7d后行神经功能损害评分(NSS),采用Western bolt法及实时荧光定量PCR检测海马区SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达。结果电针+ADSC组海马区PKH-26标记的细胞个数高于ADSC组(P<0.05)。与模型组比较,电针组、ADSC组和电针+ADSC组NSS评分均显著降低,海马区SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达增加(P<0.05)。其中电针+ADSC组较电针组和ADSC组NSS评分显著降低,而SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论电针联合脂肪源性干细胞移植促进脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复作用优于单独治疗组,其机制可能与电针上调脑海马区SDF-1和CXCR4表达,促进移植的ADSC迁移和存活有关。     

急性心肌梗死大鼠心肌组织SDF-1/CXCR4表达的变化

目的观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和CXC族细胞因子受体4(CXCR4)在大鼠急性心肌梗死局部区域表达变化情况。方法64只SD大鼠随机分为试验组及假手术对照组,试验组32只SD大鼠结扎冠状动脉左前降支制备急性心肌梗死模型;对照组32只只开胸,不结扎冠状动脉。两组术后1、7、14、28 d时各处死8只大鼠,通过RT-PCR、免疫激光共聚焦方法定性及定量测定SDF-1和CXCR4在心肌内的变化。结果免疫组织化学及激光共聚焦显示,正常心肌及心梗后心梗局部组织均有SDF-1和CXCR4表达,SDF-1和CXCR4在心梗局部心肌中表达明显升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。随时间变化SDF-1和CXCR4在试验组心肌内无明显变化(P>0.05)。激光共聚焦图片提示SDF-1和CXCR4在梗死周边区域及局部血管壁高表达。结论心肌梗死可上调局部心肌组织内SDF-1和CXCR4表达。     

大脑中动脉闭塞大鼠神经功能可塑性物质基础及电针作用的研究

目的探讨高血压大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）及电针对不同时间点神经功能影响及可能机制。方法采用易卒中型肾性高血压大鼠（RHRSP）,电凝法制备MCAO模型。随机分为MCAO假手术组、模型组、电针组。MCAO后各组分别于1d、7d、14d、28d进行神经前体细胞（NPCs）标记、神经功能缺损评分及电针治疗,在相应时间点处死取脑行病理学处理及免疫组化检查,并观察各组各时间点病灶周围5-溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）、神经上皮干细胞蛋白（Nestin）、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）及生长相关蛋白43（GAP-43）的阳性细胞数。结果电针组7d、14d神经功能评分均高于模型组（P〈0.05）,两组均于28d恢复正常。急性脑梗死灶周增殖细胞数目明显增加,且梗死灶边缘Nestin、GAP-43及GFAP细胞在7d为高峰期。各时间点电针组BrdU、Nestin及GAP-43细胞数明显增加（P〈0.05）,1周末达到高峰。MCAO后各时间点病灶周围GFAP细胞数均增加（P〈0.05）,7d时电针组明显低于模型组（P〈0.05）,仍在1周时细胞数最多。结论急性脑梗死大鼠神经功能障碍在4周可恢复,电针治疗1～2周有促进作用。脑梗死及电针治疗后神经前体细胞、神经干细胞及生长相关蛋白以及星形胶质细胞发生相应变化,构成神经功能可塑性的物质基础,可能是各种治疗措施发挥作用的前提。     

C-X-C趋化因子受体4增强Toll样受体2在肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化病变形成中的作用

目的]探究C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)在肺炎衣原体(C.pn)感染促进动脉粥样硬化(As)病变形成中的作用。 [方法]以高脂饮食为基础,建立C.pn感染诱导ApoE－/－、ApoE－/－＋Toll样受体2(TLR2)－/－、ApoE－/－＋TLR2－/－＋AMD3100小鼠As模型,ELISA检测ApoE－/－小鼠血清C.pn IgG、IgM抗体水平,PCR检测肺组织C.pn特异性DNA,油红O染色和HE染色观察主动脉及主动脉根部脂质沉积和As病变面积,比色法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平,ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)含量。 [结果]ApoE－/－小鼠C.pn感染模型成功建立。与对照组相比,C.pn感染后ApoE－/－小鼠主动脉及主动脉根部脂质沉积量增加89.08%和71.83%,As病变面积增加34.12%(均P＜0.05);与C.pn感染组相比,TLR2－/－＋C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少46.16%和75.73%,As病变面积减少63.37%(均P＜0.05);与TLR2－/－＋C.pn感染组相比,TLR2－/－＋AMD3100＋C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少26.19%和56.94%,As病变面积则减少22.24%(均P＜0.05)。与对照组相比,C.pn感染后血清TC、TG和LDLC水平分别升高0.62倍、1.43倍和1.34倍,血清IL-1β和IL-6含量分别增加4.10倍和6.00倍(均P＜0.05);与C.pn感染组相比,TLR2－/－＋C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低56.96%、50.41%和66.64%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少66.72%和69.54%(均P＜0.05);与TLR2－/－＋C.pn感染组相比,TLR2－/－＋AMD3100＋C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低52.18%、58.56%和60.61%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少28.84%和43.18%(均P＜0.05)。 [结论]CXCR4可增强TLR2在升高血脂水平及炎症因子含量中的作用,进而参与C.pn感染诱导的As病变形成。     

枸杞多糖对癫痫大鼠神经的保护作用及机制

目的探讨枸杞多糖(LBP)对癫痫大鼠神经细胞的保护作用。方法选择健康5周龄雄性SD大鼠75只,随机分为对照组、癫痫组和LBP干预组各25只,LBP干预组灌服50 mg/kg LBP,癫痫组和LBP干预组大鼠癫痫模型制备采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品法,对照组给予等剂量生理盐水。大鼠海马组织由溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记,并进行免疫荧光染色,对比各组BrdU阳性细胞数量、抗兔微管相关蛋白(MAP)-2及抗小鼠神经元核抗原(NeuN)阳性神经元细胞周长及分化率。结果与对照组相比,癫痫组BrdU阳性细胞数量显著增加(P<0.05);LBP干预组BrdU阳性细胞数低于癫痫组(P<0.05);癫痫组大鼠MAP-2、NeuN阳性神经元周长及分化率低于对照组(P<0.05),LBP干预组大鼠MAP-2、NeuN阳性神经元周长及分化率显著高于癫痫组(P<0.05)。结论 LBP对癫痫模型大鼠进行干预后,大鼠海马齿状回颗粒层Brd U阳性细胞数、MAP-2和NeuN阳性神经元细胞表达均出现一定程度改善,具有较好的神经保护作用。     

艾灸补髓促进老年学习记减退大鼠海马神经发生

目的 观察艾灸补髓能否促进老年学习记忆减退大鼠海马神经发生.方法选取督脉"百会"和"命门"两穴对学习记忆减退SD老年大鼠进行艾灸治疗,腹腔注射5溴-2脱氧尿苷(BrdU)后以免疫荧光双标记技术观察BrdU阳性和BrdU与神经丝巢蛋白(Nestin)双阳性的细胞,结合细胞增殖与NSCs特异性标志物表达评价海马神经发生.结果艾灸能增加老年学习记忆减退大鼠海马BrdU阳性细胞的数量,提高BrdU和Nestin双阳性细胞的表达.结论提示艾灸具有促进老年学习记忆减退大鼠海马神经发生的作用.     

二氯化钴预处理对脑梗死大鼠基质细胞衍生因子1α和趋化因子受体4表达的影响

目的探讨缺氧缺血环境中基质细胞衍生因子(SDF-1α)和趋化因子受体4(CXCR4)生物轴对脑保护作用及二氯化钴预处理的影响。方法选择成年雄性SD大鼠168只,随机分为干预组84只,模型组84只。按缺血后再灌注时间分为再灌注6、24h、3、5、7、14d6个时间点。采用改良Longa方法制备局灶性脑缺血模型,通过免疫组织化学法及Western blot法观察2组大鼠脑组织皮质区脑缺血后再灌注各个时间点SDF-1α及CXCR4表达变化。结果干预组于脑缺血再灌注6h皮质区SDF-1α、CXCR4阳性细胞表达明显增加,7d表达至最高水平,随后表达逐渐减少,14d仍有阳性表达。干预组各时间点皮质区SDF-1α、CXCR4阳性细胞表达明显高于模型组(P0.05)。模型组及干预组大鼠皮质区脑组织6h时SDF-1α、CXCR4蛋白表达即明显增加,7d达高峰,14d仍有阳性表达;干预组各时间点CXCR4蛋白表达明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论二氯化钴可能通过上调SDF-1α、CXCR4表达水平,诱导脑缺氧耐受,促进间充质干细胞向缺血组织迁移,发挥脑保护作用。     

SDF—1α／CXCR4对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管内膜修复的影响

目的观察基质细胞衍生因子1α（stromal derived factor-1,SDF-1α）与其受体CXCR4（CXC chemokiner receptor4）间的相互作用对血管损伤后内膜修复的影响。方法雄性SD大鼠分成对照组（C组,12只）、损伤组（S组）和AMD3100（octahydrochloride hydrate）干预组（A组,AMD3100200ng／kg,腹腔注射）,S组和A组大鼠均进行左侧颈总动脉球囊损伤术。S组和A组又分成术后即刻（So/Ao组,各12只）、术后1dS1d／A1d组,各12只）、术后4d（S4d／A4d组,各12只）、术后7d（S7d／A7d组,各12只）和术后1月（S1m／A1m组,各12只）,S组和A组大鼠均进行左侧颈总动脉球囊损伤术。所有大鼠均采血,应用流式细胞仪检测外周血CD34^＋CXCR4^＋细胞,应用ELISA法检测血浆SDF—1α水平,同时取左侧颈总动脉进行SDF-1α和CXCR4的mRNA和蛋白表达的检测,并应用免疫组化法检测损伤后血管内膜中CXCR4的表达。结果（1）在S组和A组中均发现损伤后外周血循环中CD34^＋CXCR4^＋细胞显著增加（P〈0．01）,以手术后即刻上升最明显,随后逐渐下降,在术后第7天恢复到基础水平,A0和A1d组的细胞数量多于So和S1d组。（2）ELISA法结果显示：S组和A组大鼠在颈总动脉球囊损伤术后,血浆内SDF—1α水平急剧上升,在术后1d达峰值（P〈0．01）,随后迅速下降,至术后7d已回复至术前水平（P〉0．05）。（3）在S组和A组中均可见到SDF—1α和CXCR4mRNA的表达,其中SDF-1α在损伤后即刻就有表达,在术后第7天表达减弱,CXCR4mRNA则在术后第4天开始出现,在术后1m时仍有表达,但是S组中CXCR4mRNA的表达强于A组;C组中无SDF—1α和CXCR4mRNA的表达。（4）在S组和A组中均可见到CXCR4蛋白的表达（67kD）,但是S组的蛋白表达是A组的1．05～1．36倍,C组中未见CXCR4蛋白的表达。（5）应用CXCR4抗体与新生内膜中的CXCR4受体结合,发现S组中颈总动脉损伤后第1天,损伤内膜处已有CXCR4抗体与相应受体结合的阳性反应,随后反应逐渐增强,而A组中直至第4天起才发现损伤内膜处有CXCR4抗体与相应受体结合的阳性反应。结论血管损伤后,损伤部位的SDF—1α表达增加,并吸引CD34^＋CXCR4^＋细胞定植于损伤处,参与损伤血管内膜的修复,应用CXCR4的受体拮抗剂AMD3100后可减少这一效应,说明SDF—1α／CXCR4之间的相互作用在血管损伤后修复、新生内膜的形成中具有重要的作用。     

SDF-1α/CXCR4信号促进骨髓间充质干细胞对海水吸入性肺损伤的治疗作用

目的探讨骨髓间充质肝细胞(BMMSCs)对海水吸入性肺损伤的修复及SDF-1α/CXCR4信号在其中的作用。 方法分离培养BMMSCs并建立大鼠海水吸入性肺损伤模型，Transwell实验检测BMMSCs迁移，采用CXCR4阻断剂AMD3100预处理BMMSCs和SDF-1α肺部给药调控SDF-1α/CXCR4信号，采用real-time PCR和western blot检测肺组织SDF-1α和CXCR4表达，行肺组织活检HE染色和肺湿干比检测肺损伤。 结果BMMSCs可改善海水吸入引起的肺组织渗出、水肿和炎症细胞浸润，降低肺湿干比，AMD3100预处理可抑制BMMSCs的上述治疗作用。体外SDF-1α可促进BMMSCs的迁移，而SDF-1α肺部给药可促进BMMSCs对海水吸入性肺损伤的修复。 结论BMMSCs可有效治疗海水吸入性肺损伤，SDF-1α/CXCR4信号可促进BMMSCs向损伤肺组织迁移、定植，进而促进海水吸入性肺损伤的修复。     

康脑液对脑缺血大鼠5-溴脱氧尿嘧啶核苷及巢蛋白表达的影响

目的进一步探讨康脑液治疗缺血性脑血管病(ICVD)的可能机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及康脑液高、中、低剂量组各24只,五组均于术前7 d开始灌胃,其中康脑液高、中、低剂量组分别予24、12、6 g/(kg.d)康脑液,假手术组及模型组给予等量蒸馏水,1次/d、直至处死;模型组及康脑液各组均以线栓经右侧颈外动脉插线法建立右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,假手术组仅切开动脉、不阻断;术后24 h五组均开始腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液50 mg/kg,1次/d、直至处死。缺血再灌注后3、7、14、21 d采用免疫组化检测各组BrdU、巢蛋白(Nestin)表达。结果假手术组大脑皮质、海马部位有少量BrdU、Nestin阳性细胞;余四组再灌注7 d时BrdU、Nestin阳性细胞开始增多,14 d达高峰、21 d开始下降,但各时间点均显著高于假手术组(P<0.05或0.01);与模型组比较,康脑液各组BrdU阳性细胞数量在再灌注后各时间点均显著升高(P<0.05或0.01),Nestin阳性细胞数量在再灌注后7、14、21 d显著升高(P<0.05)。结论康脑液可通过上调BrdU、Nes-tin表达促进脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖,此为其治疗ICVD的重要机制之一。     

Wistar大鼠心肌梗死造模后SDF-1/CXCR4的表达

目的检测基质细胞来源因子-1（SDF-1）和其受体CXCR4在心肌梗死后不同部位心肌组织的表达，研究SDF-1／CXCR4轴在心肌梗死后血管新生中的作用，为近一步的研究进行基础研究。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支复制的心肌梗死大鼠模型术后，分别于0．5h，7d，14d，28d处死后提取总RNA和总蛋白，分别用RT—PCR，PCR和Westem印迹检测心肌组织正常区，边缘区，梗死区在梗死后0．5h，7d，14d，28d时SDF-1、CXCR4在mRNA和蛋白水平表达变化情况。结果假手术组和对照组比较，SDF-1在心肌梗死后大鼠的心脏组织中表达有明显的增高（P〈0．01），一直持续到14d以后，在不同心肌部位的表达有明显的差异；CXCR4在心肌梗死后大鼠的心脏组织中表达有明显的增高（P〈0．01）。结论SDF-1／CXCR4轴在心肌梗死后修复中有着重要的作用。     

RNA干扰阻断CXCR4基因对胰腺癌AsPC-1细胞侵袭转移的影响

目的:观察针对CXCR4基因慢病毒Lentiviral(LV)介导的RNAi转染胰腺癌细胞株As PC-1后细胞增殖、迁移、侵袭的影响,探讨可能机制.方法:人CXCR4基因干扰靶点设计后成功转染人胰腺癌细胞系As PC-1细胞,然后分为转染组(LV-si CXCR4-1)、阴性对照组(As PC-1-LV-con)和空白对照组(AsP C-1细胞),实验组加入基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α),MTT法检测细胞增殖,迁移实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞的体外侵袭,Western blot检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质蛋白金属酶(matrix metalloproteinases,MMP)2和MMP9的表达.结果:在SFM或10%NCS培养条件下,SDF-1α均可刺激As PC-1细胞、As PC-1-LV-Con细胞增殖(P0.01),对LV-si CXCR4-1增殖均无明显促进作用;SDF-1α可促进As PC-1、As PC-1-LV-C o n细胞迁移和侵袭(P0.01),对LVsi CXCR4-1无明显促进作用;在SDF-1α作用下,LV-si CXCR4-1细胞的MMP9及VEGF的蛋白表达低于As PC-1、As PC-1-LV-Con细胞(P0.01).结论:CXCR4基因RNAi可显著抑制SDF-1α引起的As PC-1细胞的增殖、体外迁移和侵袭,进一步证实SDF-1/CXCR4受体配体系统参与了胰腺癌的增殖、侵袭及转移,通过RNAi技术可抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及转移.     

大鼠脑组织上清液诱导脂肪来源干细胞分化为神经细胞的实验研究

目的 观察正常大脑、脑梗死对侧及梗死侧大脑脑组织上清液对脂肪来源干细胞(ADSCs)向神经元样细胞分化的影响.方法 取SD大鼠腹膜后脂肪组织进行ADSCs分离培养;用正常脑组织上清液、脑组织梗死侧及对侧脑组织上清液对ADSCs进行诱导,免疫荧光法检测神经细胞标志物的表达,荧光显微镜下观察细胞阳性率.结果 (1)脑梗死侧组诱导组神经元特异性烯醇酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达率均高于其他组(P＜0.05).(2)脑梗死对侧组及正常对照组诱导组NSE、MAP-2、GFAP表达率均高于未干预组(P＜0.05).结论 脑梗死侧及脑梗死对侧组织上清液均能诱导大鼠ADSCs分化为神经元样细胞,表达神经细胞标志物,但前者作用更为明显.     

肿瘤坏死因子受体1对脑缺血小鼠神经血管发生的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFRI)在脑缺血小鼠血管发生和神经发生中的作用.方法 24只野生型和24只TNFR1基因敲除小鼠随机分为假手术组和局灶性脑缺血组(每组12只),在脑缺血和假手术后第3天腹腔注射5-溴脱氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU).脑缺血后第7和第28天,应用葡萄糖载体-1(glucose transporter-I,Glut-1)/BrdU免疫荧光染色双标记评价梗死周围区新生血管,标记BrdU检测侧脑室下区神经干细胞增殖,分别采用双皮质素(doublecortin,DCX)/3rdU和神经元核抗原(neuronal nuclei antigen,NeuN)/BrdU双标记检测神经干细胞迁移和存活.结果 在正常情况下,野生型(418.000±28.404)和TNFR1基因敲除(528.000±60.597)小鼠血管发生和室管膜下区(subventricular zone,SVZ)的BrdU阳性细胞数无显著性差异(t=-1.644,P=0.131);脑缺血后第7天,TNFR1基因敲除小鼠Glut-I/BrdU阳性细胞数量显著少于野生型小鼠(14.833±2.182对27.500±4.209;t=2.672,P=0.023),DCX/BrdU阳性细胞数也显著少于野生型小鼠(163.000±11.106对257.168±12.213;t=5.705,P=0.000);脑缺血后第28天,TNFR1基因敲除小鼠NeuN/BrdU阳性细胞数显著少于野生型小鼠(6.000±0.577对11.000±1.571;t =2.988,P=0.014).结论 TNFR1可能在脑缺血后期的神经血管再生中起着促进作用.