抑制NF-κB激活的策略

NF-κB是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子。它可以参与机体的炎症反应、免疫反应、细胞分化与凋亡及其他应激反应。NF-κB启动基因的表达涉及到IKK的激活、IκB磷酸化和泛素化、IκB裂解、NF-κB向核内的迁移、NF-κB与DNA的结合等过程。NF-κB的过度激活会引起一系列的疾病，如哮喘、类风湿性关节炎、肠炎等，利用药物或通过转基因方法来抑制以NF-κB为核心的信号转导途径可能会成为防治某些疾病的途径。     

硫化氢抑制p38MAPK和NF-κB p65信号通路活性改善糖尿病心肌纤维化的作用和机制

目的 研究外源性硫化氢(H2S)对糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的改善作用及其机制.方法 24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(ALX组)、低剂量NaHS治疗组(ALX+LDNaHS组)、高剂量NaHS治疗组(ALX+HDNaHS组),每组6只.采用四氧嘧啶(ALX)200mg/kg腹腔注射建立糖尿病小鼠模型,造模成功后,NC组和ALX组每天自由饮用自来水,ALX+LDNaHS组和ALX+HDNaHS组自由饮用浓度分别为30μmol/L和90μmol/L的NaHS(H2S供体)溶液.喂养8周后取材,采用HE染色观察心肌组织形态学变化,Real-time PCR检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65) mRNA的表达,Western blotting检测p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果 与NC组比较,ALX组心肌组织胶原表达量增加,心肌间质出现纤维化,p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达明显增加(P＜0.01),同时p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白表达也明显增高(P＜0.01).经硫化氢干预后糖尿病小鼠心肌纤维平行排列,心肌组织胶原表达量明显减少,心肌间质有少量结缔组织;p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达明显减少(P＜0.01),p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白表达明显下降(p＜0.01),且ALX+HDNaHS组较ALX+LDNaHS组明显改善(P＜0.05).结论 H2S可改善糖尿病小鼠心肌纤维化,可能与调节p38MAPK和NF-κB p65介导的炎症反应有关.     

IL-1β诱导人气道上皮细胞hBD-2表达及其分子机制

目的观察白介素-1β(IL-1β)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及抑制因子I-κBα蛋白、核转录因子κB(NF-κB)活性的变化,探讨人气道上皮hBD-2表达的分子机制. 方法用IL-1β和(或)NF-κB抑制剂PDTC处理人原代气道上皮细胞,RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot检测胞浆I-κBα蛋白,凝胶迁移实验(EMSA)检测NF-κB活性的变化. 结果加入IL-1β 1μg/L刺激0.5h,可见I-κBα活性降低;刺激1.5h可见hBD-2 mRNA表达.NF-κB抑制剂PDTC可抑制hBD-2 mRNA的表达,EMSA显示NF-κB的异型二聚体p65-p50参与了hBD-2表达的转录.结论一定剂量的IL-1β可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,NF-κB p65/p50异型二聚体参与了IL-1β诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达的转录调控.     

核因子κB降低小鼠胚胎成纤维细胞中Lmp2基因转录

目的 研究在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中,核因子κB(NF-κB)对Lmp2基因转录的影响.方法 利用NF-κB荧光素酶报告基因检测MEF和c-abl/arg缺失株(DKO)中内源性NF-κB活性;构建包含Lmp2启动子序列和NF-κB结合序列突变体的荧光素酶报告基因,通过双荧光素酶报告系统,研究NF-κB对Lmp2启动子转录活性的调控,并应用定量PCR、Western印迹比较Lmp2基因在MEF和DKO细胞中表达水平.结果 DKO细胞中内源性NF-κB活性上调;DKO细胞中Lmp2基因启动子的转录活性发生下调,并且NF-κB结合序列突变后,其转录活性升高;定量PCR和Western印迹结果表明,DKO细胞中Lmp2基因mRNA和蛋白表达水平比较MEF细胞均发生下调.结论 MEF中内源性NF-κB可负调控Lmp2基因转录,并降低其蛋白表达水平.     

电离辐射对肠上皮细胞NF-κB p65和Akt表达的影响

目的 观察电离辐射对肠上皮细胞PI3K/Akt通路和NF-κB通路的激活模式。方法 将对数生长期的IEC-6细胞用无血清培养基培养24h后进行60Co γ射线12Gy照射,检测IEC-6细胞辐照前后不同时间Akt磷酸化水平和胞浆、胞核NF-κB P65蛋白水平变化。结果 辐射可使肠上皮细胞受照20 min后迅速诱导p65的核转位,但检测不到明显的Akt磷酸化;肠上皮细胞Akt磷酸化的高峰于受照后1 h才出现。结论 电离辐射诱导的NF-κB p65快速核转位早于辐射诱导Akt的磷酸化。     

核因子-κB/p65 siRNA对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期及迁移能力的影响

目的 研究下调核因子-κB(NF-κB)/p65的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖、周期及迁移能力的影响,并探讨其相关的分子机制.方法 应用脂质体2000将NF-κB/p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测p65 mRNA及其蛋白的表达,采用CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测NF-κB/p65 siRNA对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响,Boyden小室法分析其对Tca8113细胞迁移能力的影响.进一步用Real-time PCR和Western blotting技术检测细胞周期相关基因cyclin E和cdk2以及浸润转移相关因子MMP-9 mRNA和蛋白表达的变化.结果 NF-κB/p65 siRNA能有效下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中NF-κB/p65 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),明显抑制Tca8113的细胞增殖(P<0.05),诱导细胞静止在G0/G1期,并降低Tca8113细胞的迁移能力.NF-κB/p65转染Tca8113后的48h,cyclin E、cdk2及MMP-9的表达均显著降低(P<0.05).结论 NF-κB/p65在舌鳞状细胞癌细胞周期及浸润转移中起重要作用,这可能与相关基因表达的改变有关.     

NF-κB在脑损伤后脑损害和脑保护中的双重作用

核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在炎性及免疫反应中起着重要的作用,创伤性脑损伤后NF-κ表达已在实验动物及临床观察中得到肯定,但对伤后NF-κB的作用仍存在不同的争议.NF-κB活化的机制目前仍不十分清楚.笔者就近年来创伤性脑损伤后NF-κB的研究进行如下综述,着重阐明脑损伤后NF-κB活化的变化机制及其双重作用性.     

三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷（As2O3）诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝（台盼蓝）拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基（p65、p50）的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝(台盼蓝)拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基(p65、p50)的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导NB4细胞凋亡及对NF-κB/I-κB蛋白的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病NB4细胞凋亡及对NF-κB、I-κB蛋白的影响。方法以NB4细胞为研究对象,以电镜下细胞超微结构改变、细胞凋亡率以及NF-κB、I-κB蛋白的表达为检测指标,观察不同浓度PSO和(或)不同照射时间波长为360 nm的UVA对NB4细胞的作用。结果 PUVA处理后的NB4细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变;PSO、UVA及PUVA均可使细胞凋亡率增加,PUVA的作用显著强于前两者;凋亡率增加的同时上调了NF-κB、I-κB蛋白的表达。结论 PUVA可诱导NB4细胞凋亡,过程中上调了NF-κB、I-κB蛋白的表达。     

急性缺氧暴露对豚鼠耳蜗热休克蛋白90表达的影响

目的:观察热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP 90)在急性缺氧后早期豚鼠耳蜗中的表达变化特点。方法:利用自制缺氧舱使实验动物缺氧,应用免疫组化SABC法结合图象分析技术检测正常和急性缺氧后早期豚鼠耳蜗HSP 90 的表达。结果:HSP 90在正常和缺氧损伤后豚鼠耳蜗各回均有不同程度的染色,主要阳性部位是螺旋神经节、螺旋器、血管纹和螺旋韧带。但缺氧损伤后早期HSP 90在耳蜗各阳性部位的表达均有增强,其中在螺旋神经节和螺旋器的表达增强最明显(P<0．01)。结论:HSP 90在正常和缺氧豚鼠耳蜗组织均有表达,缺氧可明显诱导HSP 90在耳蜗组织的表达增强。HSP 90可能对缺氧损害后耳蜗功能的恢复起作用。     

诱生型一氧化氮合成酶在豚鼠内淋巴积水耳蜗的表达

观察诱生型一氧化氮合成酶（iNOS）在豚鼠内淋巴积水耳蜗的表达。将20只豚鼠随机分为正常对照组和实验组，破坏实验组豚鼠内淋巴囊以造成内淋巴积水模型。采用免疫组织化学的方法检测iNOS在内淋巴积水耳蜗的表达。结果显示，iNOS在内淋巴积水耳蜗的表达阳性，且以血管纹和螺旋神经节细胞的表达较强。提示一氧化氮参与了内淋巴积水的病理生理过程。     

急性缺氧对豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的影响

目的探讨急性缺氧条件下豚鼠耳蜗热休克蛋白(HSP70)表达的变化。方法利用气管插管辅助呼吸并给予不同浓度低氧气体建立动物模型,利用免疫组化的方法,观察了在正常及不同程度的急性缺氧条件下,豚鼠耳蜗HSP70的表达。结果正常豚鼠耳蜗有HSP70的表达,主要分布在螺旋神经节、Corti’s器及齿间细胞,缺氧条件下上述各个部位HSP70的表达显著增强,增强的程度与缺氧程度无关。结论急性缺氧可以诱导豚鼠耳蜗HSP70表达增强,表达部位与正常耳蜗组织相同,不同程度的缺氧对其表达的强度没有影响。HSP70在豚鼠耳蜗的表达,可能对内耳组织的结构和功能有一定的保护作用。     

Smad5基因在小鼠耳蜗中的表达及定位

目的 了解Smad5基因在小鼠耳蜗中的表达及定位。方法 应用RT-PCR检测Smad5基因的表达,用原位杂交法检测耳蜗中Smad5 mRNA的表达部位,用免疫组织化学方法确定Smad5蛋白在耳蜗中的定位。结果 Smad5基因在小鼠耳蜗中有高表达,表达部位在毛细胞、螺旋神经节细胞、支持细胞、血管纹、基底膜等。结论 Smad5在耳蜗中存在,是耳蜗中众多蛋白中的一种。它可能在耳蜗的形成、毛细胞的分化过程中起着重要的作用。     

单核细胞趋化蛋白-1诱导人主动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶-9及相关通路研究

目的 观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响及其相关机制.方法 将HASMCs细胞分为两部分,一部分分别加入0(对照组)、10、50、100ng/ml MCP-1干预48h,采用Western blotting法测定HASMCs细胞MMP-9、NF-kB p65的蛋白表达;另一部分先加入100ng/mlMCP-1,再分别加入0(对照组)、10、50、100μ mol/L的NF-kB特异性抑制剂吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC),培养48h,采用Western blotting法检测HASMCs细胞MMP-9蛋白的表达情况.结果 MCP-1以剂量依赖方式刺激HASMCs细胞内MMP-9蛋白和NF-kB p65蛋白的表达,与对照组比较,加入10、50、100ng/ml MCP-1可使MMP-9蛋白的表达分别增加70.0％、118.3％和125.0％,使NF-kB p65蛋白的表达分别增加32.0％、52.0％和89.0％(P＜0.01).加入PDTC后,与对照组比较,10、50、100μmol/L的PDTC分别使MMP-9蛋白的表达降低了22.1％、28.9％和36.7％,均有显著性差异(P＜0.01).结论 MCP-1可诱导HASMCs表达MMP-9.NF-kB通路是MCP-1刺激MMP-9表达的调控通路之一.     

强次声波对豚鼠Corti器外毛细胞脱氢酶活性的影响

目的 观察强次声波暴露后豚鼠Corti器外毛细胞（OHC）的脱氢酶活性变化及形态变化。方法 将20只豚鼠随机等分为对照组和4个实验组（每组4只）,置于频率8Hz、强度为135dB的次声声场中连续暴露90min。采用“Adobe Photoshop”软件测定豚鼠耳蜗OHC琥珀酸脱氢酶（SDH）显色灰度值（GSV）,比较强次声波暴露前、后8h、2d、5d和21d时OHC的SDH的活性变化,并在光镜下观察耳蜗损伤情况。结果 次声暴露后各组动物耳蜗OHC的SDH显色灰度值明显高于正常对照组（P＜0．01）,光镜下观察发现散在性或局限性OHC肿胀及缺失,细胞境界不清,SDH染色浅谈,且部分OHC的缺失为永久性改变。结论 强次声波能影响OHC的能量代谢,从而明显降低耳蜗OHC的功能,并可导致豚鼠耳蜗OHC永久性的损伤。     

强噪声引起的豚鼠耳蜗基底膜微血管白细胞嵌顿及对血流的影响

了解噪声暴露后耳蜗微血管内白细胞是否参与微循环障碍的形成。用１６只豚鼠暴露１１５ｄＢ（ＳＰＬ）的４ｋＨｚ窄带噪声４ｈ,２天或４天后处死。耳蜗行：①台盼蓝染色,标记血管内失活的白细胞;②Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２荧光染色标记毛细胞核。部分动物处死前行静脉注射ＦＩＴＣ－右旋糖酐,标记血浆,处死后观察血管充盈状态。结果：耳蜗基底膜微血管发生失活的白细胞,嵌顿于血管内或分布于血管周围,造成红细胞聚集,管径增宽。ＦＩＴＣ－右旋糖酐标记的血浆未出现在白细胞嵌顿的血管内,表明血液被阻断。白细胞嵌顿与毛细胞损伤虽都主要出现在耳蜗一回和二回,但二者并不一定发生在同一解剖部位。有趣的是白细胞嵌顿只出现在基底膜微血管,而在血管纹微血管内无此病变。提示噪声后白细胞参与耳蜗微循环障碍的形成,它对噪声引起的损伤和修复过程的其它影响值得进一     

64层螺旋CT对指导儿童人工耳蜗植入术的临床意义

目的探讨64层螺旋CT对面神经隐窝径路解剖通道术前影像学评估在儿童人工耳蜗植入术中的临床价值。方法对49例双耳重度感音性耳聋拟行人工耳蜗植入术患儿行64层螺旋CT容积扫描,对外耳、中耳、内耳解剖结构行MPR及VR立体重建,模拟显示面神经隐窝手术路径,分别测量面神经管垂直段距外耳道后壁及面隐窝底距面神经管的距离。结果MPR清晰显示听小骨长轴,半规管、前庭、前庭窗、耳蜗、蜗窗和内听道的骨性解剖结构;MPR图像可同层显示面神经管的鼓室段和垂直段;VR三维立体图像直观显示半规管、前庭、前庭窗、耳蜗、蜗窗、面神经、面神经隐窝和内听道的膜性立体图像。在MPR图像上面神经管垂直段距外耳道后壁的平均距离左、右侧分别为4．46mm、4．53mm;面隐窝底距面神经管的平均距离左、右侧分别为1．02mm、1．03min。结论64层螺旋CT扫描可清晰显示人工耳蜗植入术面神经隐窝径路重要解剖学标志,面神经隐窝周围解剖结构测量结果可为临床手术提供重要参考数据,对人工耳蜗植入术具有极佳的临床指导价值。