不同类型RNA与癫(癎)关系的研究

癫(癎)发病机制十分复杂,不同类型的RNA与癫(癎)有关,是国内外研究的热点.文中综述不同类型RNA与癫(癎)的关系,探讨不同类型RNA可能作用的靶向基因、信号转导通路和代谢途径,为癫(癎)诊治提供新的理论依据.     

短发卡RNA特异性抑制Survivin基因在U251细胞中的表达

目的构建针对人Survivin基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其在人脑胶质母细胞瘤U251细胞中对Survivin基因表达的抑制作用.方法根据Survivin cDNA编码序列,设计并合成针对Survivin基因的特异性RNA干涉片断,将其克隆入pWH1质粒载体,构建Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR.通过脂质体介导将pWH1-SR载体和空载体pWH1分别转染入U251细胞,经G418筛选,建立稳定转染的细胞系U251-SR和U251-P.采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测Survivin mRNA和蛋白在U251、U251-P和U251-SR细胞中的表达水平.结果成功构建了Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR,经酶切鉴定证实克隆正确.获得了稳定转染pWH1-SR载体和空载体pWH1的细胞系U251-SR和U251-P.U251-SR细胞Survivin mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,抑制率分别达87%和91%;U251-P细胞Survivin基因表达水平无明显变化.结论特异性shRNA能够明显抑制Survivin基因在U251细胞中的表达,这为进一步研究Survivin在U251细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.     

RNA干扰及其在胶质瘤基因治疗中的应用

RNA干扰（RNA interference。RNAi）是双链RNA（double—stranded RNA，dsRNA）降解特异性靶基因转录出的mRNA。从而抑制靶蛋白表达的现象。自从二十世纪九十年代发现RNAi这一现象以来，RNAi已被广泛应用于研究基因功能、信号转导通路和基因治疗等方面。随着分子生物学、分子遗传学等学科的发展．发现了许多与肿瘤发生、发展和预后密切相关的基因。经过大量临床前期试验表明，针对特异性靶基因的小干扰RNA（short／small interfering RNA．siRNA）治疗胶质瘤是行之有效的。为基因治疗胶质瘤提供了新的思路。[第一段]     

简便快速抽提大鼠少量脑组织总RNA的改良

目前抽提组织中总ＲＮＡ的方法很多 ,但步骤均较复杂 ,且时间较长、费用较高、收得率低、本方法在Ｃｈｏｍ ｃｚｙｓｋｉ等介绍的异硫氰酸胍 酚 氯仿一步法的基础上 ,结合自己的实验体会 ,提出了一种在抽提少量脑组织 (约 10 0ｍｇ)标本时仍能得到完整的、纯度较高的总ＲＮＡ的改良方法 ,且总ＲＮＡ的收得率也较高。1　材料与方法1.1　主要试剂　焦碳酸二乙酯 (ＤＥ ＰＣ) :系Ｓｅｒｖａ公司产品 ,用于灭活ＲＮＡ酶的活性。贮存液 :4Ｍ异硫氰酸胍 ,2 5ｍＭ柠檬酸钠 (ｐＨ7.1) ,0 .5 %十二烷基肌酸钠。用于 0 .2 2 μｍ微孔滤膜过滤。Ｄ溶液…     

RNA干扰技术及其应用

RNA干扰可抑制双链RNA同源基因的表达。目前RNA干扰已变成了一种强有力的新兴基因工具并具有广阔的应用前景。本文概述了RNA干扰的机制和生物化学方面的表现及其用途。     

RNA干涉技术在胶质瘤基因治疗研究中的进展

RNA干涉(RNA interfernce,RNAi)机理为利用双链RNA(dsRNA)特异性地降解相应序列的mRNA成为siRNA,从而特异性地阻断靶基因的表达,最近对其在应用于胶质瘤基因治疗方面的研究也有进展。本文介绍了RNA干扰的分子机制、技术应用及在胶质瘤基因治疗方面的进展和广阔的发展前景。     

RNA干扰技术及其应用

RNA干扰可抑制双链 RNA同源基因的表达。目前 RNA干扰已变成了一种强有力的新兴基因工具并具有广阔的应用前景。本文概述了 RNA干扰的机制和生物化学方面的表现及其用途     

脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制真核表达载体构建及最佳短发夹样RNA分子筛选

目的构建并筛选大鼠胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达抑制短发夹样RNA（shRNA）真核表达载体。方法针对GFAP基因全编码序列设计并合成三对9bp茎环结构、19bp干扰序列特异性shRNA模板，体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体；通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型，脂质体介导RNA干扰分子转染，实时荧光定量RT—PCR及Wesem blot技术观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果．筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体。结果序列测定证实GFAP—shRNA重组质粒真核表达载体构建成功，三对shRNA模板在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81％、63％、56％。结论高效率的GFAP—shRNA真核表达载体在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP基因表达，为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗中的应用奠定了前期基础。     

RNA干扰及其在神经变性性疾病研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是指生物体内利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS)的现象，它可以通过抑制蛋白表达模拟基因敲除技术。RNAi主要通过dsRNA被核酸酶Dicer切割成21～25nt的小干扰RNA(siRNA)，由siRNA介导识别并靶向切割同源mRNA分子而实现。随着研究的不断深入，RNAi的作用机制将逐步被阐明，其技术也将日趋完善和成熟，并将得到广泛的应用。本文就RNAi技术的研究进展及其在阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性性疾病研究中的应用作一综述。     

小干扰RNA在哺乳动物脑组织中的递送

背景：作为一种能够下调基因表达的新的基因治疗方法，RNA干扰在神经科学疾病的治疗中有很大的潜能。通过引入与内源靶基因具有相同序列的小干扰RNA，可以人为地诱导序列特异性的mRNA降解，达到阻止该基因表达的目的。 目的：针对RNA干扰在神经科学疾病治疗方面的应用，探讨小干扰RNA在哺乳动物脑组织中的递送情况。 方法：以“siRNA，delivery，brain”和“siRNA, delivery，vivo”为检索词，计算机检索PubMed home，按纳入和排除标准对文献进行筛选和质量评价，共纳入27篇文章。从小干扰RNA合成、脑组织中的递送及其抑制效率和不良反应3方面进行总结。 结果与结论：近来RNA干扰研究中，高精度预测小干扰RNA的方法能合成出高特异性的小干扰RNA；小干扰RNA在脑组织中的递送主要采用局部注射的方式，并且在递送载体的帮助下，抑制效率在不断地提高；随着RNA干扰技术研究的深入，其不良反应也逐渐受到人们重视。总之，作为一种新的治疗策略，RNA干扰在神经科学疾病的治疗中有着很大的潜能，并可能给药物研发带来新的变革。     

特异性shRNA干扰人慢病毒载体抑制U251细胞株Chk1、Chk2基因的表达

目的构建针对细胞周期检测点激酶1和2(Chk1和Chk2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,包装成慢病毒,建立稳定转染的细胞株,为探讨抑制Chk1和Chk2基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的Chk1和Chk2基因核苷酸序列,选择设计2条能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,命名为Chk1-shRNA和Chk2-shRNA,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为blank-shRNA。并与pLKO.1-TRC质粒载体连接,转化感受态大肠杆菌,挑取阳性克隆,抽取重组质粒,使用限制性内切酶EcoRⅠ、NcoⅠ酶切电泳,DNA测序鉴定,包装慢病毒。3组重组表达慢病毒载体转染胶质瘤细胞系U251,用嘌呤霉素筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶连反应(RT-PCR)和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测Chk1和Chk2的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌,经酶切琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全正确。嘌呤霉素对U251细胞的筛选浓度为4ug/ml,筛选出稳定转染三种质粒的U251细胞,Chk1-shRNA和Chk2-shRNA组细胞各自Chk1和Chk2的mRNA和蛋白表达水平明显低于blank-shRNA组。结论成功构建了针对Chk1和Chk2基因的shRNA慢病毒表达载体,转染后可抑制ChK1和Chk2基因的表达,为进一步研究Chk1和Chk2基因在脑胶质瘤细胞中的作用奠定了基础。     

EphB4为靶的siRNA抑制脑胶质瘤细胞的体外实验研究

目的探讨EphB4在脑胶质瘤细胞中的生物学作用。方法采用免疫组化的方法检测EphB4在脑胶质瘤细胞中的表达。合成EphB4siRNA,应用脂质体转染U251细胞,RT-PCR、Western-blot检测对EphB4的转录及表达的抑制效果,MTT法检测其对细胞增殖的影响,Transwell试验检测细胞侵袭能力,TUNEL法检测细胞凋亡。结果应用siRNA方法明显降低了EphB4的转录(P0.01)及表达(P0.05),明显减慢了细胞的增殖速度(P0.05),加大siRNA浓度后,肿瘤细胞生长抑制进一步增强。S1组(25nmol/L)、S2组(50nmol/L)、S3组(100nmol/L)与U251组、siRNASCR组相比,侵袭能力明显降低(P0.05),凋亡细胞数量有明显增加(P0.05)。结论EphB4在脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭、凋亡过程中发挥着重要的生物学调节作用。     

血清miR-29联合LncRNA TUG1与ADMA对缺血性脑卒中的鉴别诊断价值

目的 探讨血清微小RNA-29(miR-29)联合长链非编码RNA(lncRNA)TUG1及非对称二甲基精氨酸(ADMA)对缺血性脑卒中的鉴别诊断价值。方法 收集2017年6月-2018年7月本院确诊的缺血性脑卒中患者110例,选取出血性脑卒中患者80例,同期纳入本院的体检健康者100例; 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测血清miR-29和LncRNA TUG1表达水平; 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ADMA水平。结果 与出血性脑卒中组miR-29(60.7±4.3)-log,LncRNA TUG1(16.4±1.4)-log,ADMA(6.3±0.7)mIU/mL和健康对照组miR-29(62.3±4.8)-log; LncRNA TUG1(15.9±1.3)-log; ADMA(6.4±0.6)mIU/mL比较,缺血性脑卒中组血清LncRNA TUG1(43.5±3.5)-log和ADMA(11.4±1.4)mIU/mL水平显著升高,而血清miR-29(31.4±2.1)-log水平显著降低(P<0.05),而出血性脑卒中组和健康对照组血清miR-29、LncRNA TUG1及ADMA水平无明显差异(P>0.05)。Spearman相关性分析显示,血清LncRNA TUG1及ADMA水平与NIHSS评分(LncRNA TUG1:r=0.538,P=0.002; ADMA:r=0.566,P=0.001)呈正相关,而血清miR-29水平与NIHSS评分(miR-29:r=-0.545,P=0.001)呈负相关。血清miR-29、LncRNA TUG1及ADMA区分缺血性脑卒中与非缺血性脑卒中(出血性脑卒中和健康对照者)的AUC分别为0.863(95%CI=0.800～0.944,P<0.001)、0.912(95%CI=0.833～0.977,P<0.001)和0.764(95%CI=0.688～0.887,P<0.001); 敏感度及特异度分别为85.3%/82.1%、94.2%/73.5%和76.8%/81.2%; 对应的临界值分别为48.6-log、33.2-log和9.5 mIU/mL。当联合血清miR-29、LncRNA TUG1及ADMA时区分缺血性脑卒中与非缺血性脑卒中的AUC为0.945(95%CI=0.932～0.998,P<0.001),敏感度为83.8%,特异度为97.3%。结论 联合血清miR-29、LncRNA TUG1及ADMA对缺血性脑卒中具有潜在的鉴别诊断价值。     

RNA干扰在治疗脑胶质瘤中的研究

脑胶质瘤是颅内肿瘤中一类高发病率、高致残率、高死亡率的肿瘤,但目前,其临床治疗效果难以令人满意。如何提高疗效、改善预后是神经外科工作者研究的重点。RNA干扰(RNAi)技术作为一项新的基因治疗技术,因其独特的作用机制和优越性,正越来越受到研究者的重视。近几年,RNAi在治疗脑胶质瘤研究方面不断深入,对多种干扰策略中多个基因靶点的研究都取得了进展,并朝着联合干扰的方向发展,同时在载体和给药途径等技术环节上也有了很大改进。RNAi技术的发展将为脑胶质瘤的治疗带来新的希望。     

急性脑梗死患者血清lncRNA SNHG14和miR-145-5p水平变化及其与疾病发生风险的关系

目的 探讨急性脑梗死患者外周血lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平变化及其与疾病发生风险的关系。方法 选取本院治疗的135例急性脑梗死患者作为研究对象,另选择同期健康志愿者108例作为对照组; 荧光定量反应(qRT-PCR)检测外周血lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平; Pearson相关性分析lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平与病情严重程度的关系; 受试者工作特征(ROC)评估 lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平对急性脑梗死的诊断价值; Logistic回归分析lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平与急性脑梗死发生风险的关系。结果 与对照组比较,急性脑梗死患者血清lncRNA SNHG14表达水平升高,miR-145-5p表达水平降低; 随着病情程度的增加,lncRNA SNHG14表达水平逐渐升高,miR-145-5p表达水平逐渐降低(P<0.05)。SNHG14表达水平与患者NIHSS评分呈显著正相关(r=0.416,P=0.000),miR-145-5p表达水平与患者NIHSS评分、SNHG14表达水平均呈显著负相关(r=-0.318,P=0.029; r=-0.487,P=0.000)。lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平与患者OCSP分型、脑梗死面积、血脂异常有关(P<0.05),lncRNA SNHG14对急性脑梗死诊断的AUC为0.708,敏感性为80.74%,特异性为57.78%; miR-145-5p对急性脑梗死诊断的AUC为0.632,敏感性为77.78%,特异性为50.37%。Logistic多因素回归分析显示血脂异常,lncRNA SNHG14,miR-145-5p表达水平是影响急性脑梗死发生的独立危险因素。结论 急性脑梗死患者外周血lncRNA SNHG14表达水平升高,miR-145-5p表达水平降低,并与患者病情有关,可能是急性脑梗死患者潜在诊断标志物,且是疾病的独立预测因子。     

锌指蛋白A20 RNAi载体的构建及筛选

目的我们前期的实验结果显示A20 mRNA和蛋白在人脑胶质瘤组织及细胞系（U251、U87、BT325）中高表达，本研究拟构建A20RNAi载体，并检测其对U251细胞A20表达的抑制作用。方法构建三种针对人A20基因的真核干涉表达载体，以脂质体法将其分别转染人脑胶质瘤细胞系U251，以RT-PCR、蛋白印迹法检测各干涉载体对U251细胞中A20mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果成功构建三种针对A20基因的RNAi载体，经RT-PCR、蛋白印迹检测筛选出对A20基因干涉效果最佳的载体，命名为pSilencer3．1-A20R1。结论成功构建A20基因干涉载体，为进一步探讨A20与脑胶质瘤恶性增殖、血管形成以及抗凋亡的关系奠定实验基础。     

NA干扰及其在神经变性性疾病研究中的应用

RNA干扰 (RNAi)是指生物体内利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS)的现象 ,它可以通过抑制蛋白表达模拟基因敲除技术。RNAi主要通过dsRNA被核酸酶Dicer切割成 2 1～ 2 5nt的小干扰RNA(siRNA) ,由siRNA介导识别并靶向切割同源mRNA分子而实现。随着研究的不断深入 ,RNAi的作用机制将逐步被阐明 ,其技术也将日趋完善和成熟 ,并将得到广泛的应用。本文就RNAi技术的研究进展及其在阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性性疾病研究中的应用作一综述     

微小RNA调节与阿尔茨海默病的相关性研究

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种内源性非编码蛋白RNA基因,近年来在研究阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病机制中,发现miRNA在AD的血液、脑脊液中含量发生改变,有大量特殊的miRNA失调,参与AD关键基因的调节,表明这些微小RNA可能是AD的生物标志物.本文就miRNA调节与AD的关系作一综述. 1 AD概述 AD是老年人常见的神经系统变性疾病,病理特征为老年斑(neuritic plaque,NP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)和神经元缺失.     

微小RNA与精神分裂症及其治疗的研究进展

对微小RNA与精神分裂症及其治疗的研究进展综述如下。