乙酰肝素酶与绒毛膜癌侵袭能力的关系

目的 通过研究乙酰肝素酶（Hpa）在绒毛膜癌高、低侵袭力细胞系及正常早孕绒毛组织中的表达情况,探讨Hpa与绒毛膜癌侵袭能力的关系。方法 通过Matrigel体外侵袭实验检测不同侵袭力绒毛膜癌细胞系JEG-3和JAR的体外侵袭能力;应用免疫细胞化学方法及蛋白印迹法（westem blot）检测Hpa蛋白在不同绒毛膜癌细胞系及正常早孕绒毛组织中的表达,并进行相关性分析。结果 （1）JEG-3细胞的穿膜细胞数[（191±17）个]较JAR细胞的穿膜细胞数[（106±13）个]明显增多,两者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）Hpa蛋白在绒毛膜癌细胞JEG-3、JAR中均有表达,且主要定位于细胞质。（3）在正常早孕绒毛组织、JEG-3细胞和JAR细胞中均可检测到Hpa蛋白,JEG-3细胞中Hpa蛋白的表达量（1．560±0．180）明显高于JAR细胞Hpa蛋白的表达量（0．610±0．170）,绒毛膜癌细胞系中Hpa蛋白的表达量又显著高于正常早孕绒毛组织Hpa蛋白的表达量（0．190±0．008）,两两比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（4）相关性分析显示,Hpa蛋白的表达量与绒毛膜癌细胞体外侵袭能力呈正相关关系（r=0．89,P〈0．05）。结论 Hpa蛋白在绒毛膜癌细胞中表达较正常绒毛组织高;Hpa蛋白在滋养细胞中的表达随滋养细胞侵袭能力的增加其表达上调;滋养细胞产生过量的Hpa对基底膜蛋白的水解作用在绒毛膜癌的侵袭、转移中发挥重要作用。     

DAPT抑制妊娠滋养细胞肿瘤Notch信号通路对细胞增殖和EMT影响的研究

目的:探讨Notch信号通路在人妊娠滋养细胞肿瘤发生发展过程中的重要作用,及其与EMT之间的关系。方法:采用γ-分泌酶抑制剂DAPT处理JAR和JEG-3两种人绒毛膜癌细胞株,MTT法检测两种细胞株的增殖情况,q PCR法检测Notch1 mRNA表达。Western blot法检测DAPT阻断Notch信号通路后JAR细胞中EMT相关蛋白E-cad的表达情况。结果:DAPT能抑制JEG-3、JAR细胞生长,10μmol/L和15μmol/L DAPT作用48h开始分别抑制JEG-3和JAR细胞生长(P0.05),且抑制作用呈时间和浓度依赖关系。JEG-3细胞中,1μmol/L和10μmol/L DAPT作用组中Notch1 mRNA表达下调,两组比较差异无统计学意义(P0.05);JAR细胞中,10μmol/L和15μmol/L DAPT作用组中Notch1 mRNA表达下调,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。DAPT能上调JAR细胞中E-cad表达。结论:Notch信号通路和EMT与妊娠滋养细胞肿瘤的发生发展有关;γ-分泌酶抑制剂DAPT或可成为妊娠滋养细胞肿瘤治疗的一个新靶点。     

华蟾素与子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的实验研究

目的：探讨华蟾素对体外培养的子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的影响和意义。方法：体外培养内膜癌HHUA细胞,以0.25、2.5和25 g/L的华蟾素干预后,四唑盐比色试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应检测CD44s表达,transwell小室分析细胞的体外侵袭力。结果：华蟾素对内膜癌HHUA细胞的半数抑制浓度（IC50）为华蟾素生药（0.79±0.21） g/L。对照组CD44s mRNA表达为1.31±0.25、侵袭细胞数为60.50±2.52;0.25 g/L华蟾素对内膜癌HHUA细胞CD44smRNA表达和侵袭力无影响（均P＞0.05）;2.5 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44s mRNA表达为1.02±0.23、侵袭细胞数为30.50±3.95,与对照组比较差异有统计学意义（均P＜0.05）;25 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44s mRNA表达为0.97±0.39、侵袭细胞数为22.50±4.22,与对照组比较差异有统计学意义（均P＜0.05）;25 g/L和2.5 g/L华蟾素2个浓度组差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论：2.5 g/L华蟾素可抑制内膜癌HHUA细胞的侵袭性生长。     

低氧对JEG-3细胞HLA-G表达及滋养细胞生物学行为的影响

目的:通过常氧及低氧条件下培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,检测低氧环境对滋养细胞人类白细胞抗原-G(HLA-G)的表达及增殖、侵袭行为的影响,探讨HLA-G参与低氧条件下子痫前期发生的分子机制。方法:根据氧浓度和处理时间进行分组,分为常氧组(20%O_2+5%CO_2+75%N_2)和低氧组(1%O_2+5%CO_2+96%N_2)的12小时、24小时、48小时和72小时,利用实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western Blot)检测两组JEG-3细胞中HLA-G mRNA及蛋白水平的表达,噻唑蓝法(MTT)及小室侵袭法(Transwell)检测各组细胞增殖活性和侵袭能力。结果:低氧组在48小时及72小时,JEG-3细胞中HLA-G mRNA及HLA-G蛋白水平较常氧组明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与常氧组相比,低氧组在48小时及72小时的细胞增殖活性明显降低,差异有统计学意义(P0.05);低氧组在72小时细胞侵袭能力较常氧组减弱明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论:低氧环境影响JEG-3细胞HLA-G mRNA及蛋白水平的表达。JEG-3细胞经低氧处理后增殖活性及侵袭能力下降可能与细胞中HLA-G表达下降有关。低氧环境下HLA-G表达下降可能通过影响滋养细胞增殖活性及侵袭能力参与子痫前期的发生。     

ABCG2在人绒毛膜癌耐药细胞株中的表达研究

目的:研究多药耐药基因ABCG2在人绒毛膜癌亲本细胞株(JEG-3)及耐药细胞株(JEG-3/VP16)中的表达情况,探讨ABCG2在绒毛膜癌耐药性中所起的作用.方法:用逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)检测ABCG2的mRNA表达,用蛋白质印迹法(Western blot)检测ABCG2的蛋白质水平的表达,并采用流式细胞技术测试出两种细胞株中ABCG2阳性细胞的比例.结果:RT-PCR和Western blot结果显示:在JEG-3细胞及JEG-3/VP16细胞中均可检测到ABCG2mRNA和蛋白的表达,但JEG-3/VP16细胞中ABCG2 mRNA的表达(1.74±0.07)和蛋白的表达(1.13±0.09)水平要明显高于JEG-3细胞(0.86±0.06和0.64±0.05),差异有统计学意义(P＜0.01);流式细胞检测结果示:ABCG2在JEG-3/VP16细胞中的阳性表达率(50.66±3.82)％要明显高于在JEG-3细胞中的阳性表达率(14.78±1.02)％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:ABCG2在耐药性人绒毛膜癌细胞株JEG-3/VP16中高表达,提示ABCG2可能参与了绒毛膜癌的耐药机制.     

人类白细胞抗原G基因表达水平下降对滋养细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因表达水平下降对具有滋养细胞特点的绒毛膜癌(绒癌)细胞株JEG-3细胞增殖和侵袭能力的影响,了解HLA-G基因在子痫前期发生、发展中的作用.方法 采用高表达HLA-G的JEG-3细胞进行体外培养,将培养好的细胞分为实验组(转染HLA.G小分子干扰RNA)、阴性对照组(转染阴性对照小分子干扰RNA)和空白对照组(不进行细胞转染,仅转染脂质体)3组进行细胞转染.应用RT-PCR技术和蛋白印迹法检测转染后各组JEG-3细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞技术、穿膜小室侵袭实验分别检测转染后各组JEG-3细胞增殖能力、细胞周期、凋亡抑制率和侵袭能力的变化.结果 (1)转染后JEG-3细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平,实验组分别为0.0013±0.0014、0.0163±0.O007.分别与空白对照组(分别为0.1923 ±0.0384、0.2184 ±0.0153)比较,差异均有统计学意义(P0.05).(2)转染48 h后JEG-3细胞的增殖能力,实验组的积分吸光度(伪)值为0.44±0.04,与空白对照组(O.75 ±0.13)比较,差异有统计学意义(P<0.01);阴性对照组为0.69 ±0.10,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)转染72 h后的细胞周期比例,实验组G2/M期细胞比例为(10.9 ±2.2)%,低于空白对照组[(15.4 ±1.9)%];S期细胞比例为(58.6±0.8)%,高于空白对照组[(52.9 ±2.3)%].两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)转染72 h后的细胞凋亡率,实验组为(14.5±2.7)%,高于阴性对照组[(5.3 ±1.1)%]和空白对照组[(4.7 ±0.6)%],差异均有统计学意义(P<0.01).(5)转染72 h后穿膜小室中的穿膜细胞数,实验组为(121±12)个,低于空白对照组[(452 ±17)个],差异有统计学意义(P<0.01).结论 HLA-G基因表达水平的下降可以影响滋养细胞的增殖、凋亡、侵袭和细胞周期.HLA-G基因可能通过调节滋养细胞增殖、侵袭等过程参与子痫前期的发生.     

HLA-E介导孕激素对绒毛膜癌JEG-3细胞血管内皮生长因子表达的调节作用

目的:研究人类白细胞抗原E(HLA-E)是否参与孕激素对JEG-3细胞VEGF基因表达的调节作用。方法:JEG-3细胞分为5组,接受不同处理:空白对照(组1)、孕激素处理(组2)、转染HLA-E siRNA慢病毒后孕激素处理(组3),HLA-E siRNA慢病毒转染(组4)以及慢病毒阴性对照转染(组5)。48小时后收集细胞,分别采用Real-time PCR和Western blot方法检测JEG-3细胞血管内皮生长因子(VEGF) mRNA及蛋白表达水平。结果:组2 JEG-3细胞的VEGF mRNA和蛋白表达较组1增高,差异有统计学意义(P0.05);沉默HLA-E基因(组4)导致VEGF mRNA和蛋白表达降低,与组1比较,差异有统计学意义(P0.05)。组3 JEG-3细胞经HLA-E siRNA慢病毒转染、沉默HLA-E表达后再接受孕激素处理,VEGF mRNA及蛋白表达水平与组1比较差异无统计学意义(P0.05)。组5与组1比较,VEGF mRNA及蛋白水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:HLA-E介导孕激素对JEG-3滋养细胞VEGF表达的上调,孕激素对JEG-3细胞VEGF的上调作用被HLA-E基因的沉默消除。     

小分子干扰RNA对绒毛膜癌细胞人类白细胞抗原G 基因表达的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)对绒毛膜癌(绒癌)细胞中人类白细胞抗原G(HLA-G) 基因表达的影响,了解HLA-G基因在绒癌发生、发展中的作用.方法设计并合成HLA-G siRNA,分为两组.实验组以不同浓度(分别为1.0、 2.5、 5.0 μg/L,下同)的HLA-G siRNA转染HLA-G基因高表达的绒癌细胞系JEG-3细胞,对照组以等量阴性对照siRNA转染JEG-3细胞.实时荧光定量RT-PCR技术检测转染后JEG-3细胞中HLA-G mRNA的表达,HLA-G mRNA的表达以PCR循环数阈值(Ct值)表示;蛋白印迹法测定JEG-3细胞中HLA-G蛋白的表达;显微镜观察并计数转染后存活的JEG-3细胞数.结果 HLA-G siRNA转染JEG-3细胞后,明显下调JEG-3细胞中HLA-G mRNA及蛋白的表达水平.实验组不同浓度的HLA-G siRNA转染后,JEG-3细胞的Ct值[分别为(20.67±0.02)、(21.37±0.03)、(21.43±0.02)个循环数],分别与对照组[分别为(20.33±0.01)、(20.37±0.02)、(20.40±0.03)个循环数]比较,差异有统计学意义(P<0.05).上述浓度转染后,实验组JEG-3细胞的HLA-G蛋白表达水平[分别为0.42±0.03、0.37±0.02、0.12±0.04],分别与对照组[分别为1.69±0.23、1.62±0.31、1.36±0.22]比较,差异有统计学意义(P<0.01).实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制(P<0.05).结论 HLA-G siRNA可以下调HLA-G mRNA及蛋白的表达水平,抑制细胞生长,表明HLA-G基因在绒癌的发生、发展中具有重要作用.     

雌、孕激素通过腺苷A_(2B)R通路调节JEG-3绒癌细胞系上调MMP-2的表达

目的:观察雌、孕激素对人绒癌细胞系JEG-3腺苷受体表达的影响,探讨它对JEG-3侵袭性的影响。方法:JEG-3细胞在含雌、孕激素环境中培养24h,设MRS1706(A2BR阻断剂)干预组及空白对照组;用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-PCR技术检测JEG-3细胞腺苷受体mRNA水平。结果:RT-PCR结果显示,JEG-3细胞表达腺苷A1R、A2AR及A2BR3个亚型,未检测到A3R的表达;雌激素和(或)孕激素处理组A2BRmRNA含量显著高于对照组(P<0.05);明胶酶谱检测发现雌、孕激素联合处理显著上调JEG-3细胞MMP-2的分泌水平(P<0.05),但对MMP-9无显著影响;阻断A2BR信号途径显著下调JEG-3MMP-2表达,并能抑制雌、孕激素对MMP-2的上调效应(P<0.05)。结论:雌孕激素能改变JEG-3绒癌细胞腺苷受体的表达模式,呈A2BR优势表达,A2BR信号通路参与雌孕激素对JEG-3细胞侵袭性的调节。     

miR-10b对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭功能的影响

目的:研究人微小RNA-10b(microRNA-10b,miR-10b)对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭力的影响.方法:通过化学方法合成成熟型人miR-10b,以脂质体包裹miR-10b并转染JEG-3细胞为miR-10b转染组,无关序列转染组及空白转染组分别为阴性对照组与空白对照组;RT-PCR检测各组miR-10b的表达.应用Transwell chamber法检测各组细胞侵袭能力的差别.结果:RT-PCR结果提示miR-10b转染组miR-10b的表达量与阴性对照组和空白对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell chamber法检测miR-10b转染组细胞的侵袭率与阴性对照组、空白对照组相比均有升高,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组与空白对照组的侵袭率差异无统计学意义(P>0.05).结论:miR-10b能显著上调JEG-3细胞的侵袭力,有望作为滋养细胞疾病的治疗靶点.     

活性氧介导P62蛋白激活参与甲氨蝶呤耐药绒癌发病机制研究

目的 探讨甲氨蝶呤（MTX）耐药绒癌的发生机制。方法 2012年5月至2013年1月于北京协和医院以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的MTX耐药绒癌JEG-3/MTXR细胞为研究对象,采用免疫印迹、RT-PCR法检测MTX处理后细胞内P62的变化。流式细胞仪检测MTX诱导后JEG-3/MTXR细胞内活性氧(ROS)变化,采用ROS清除剂MnTmPyP检测MTX作用后JEG-3/MTXR细胞内P62蛋白水平的变化。RNA干扰法沉默P62基因免疫印迹法和流式细胞仪检测MTX诱导后JEG-3/MTXR耐药细胞内PARP蛋白的表达和凋亡率的变化。结果 MTX可诱导耐药绒癌 P62蛋白和mRNA表达水平呈时间依赖性上调。MTX可诱导耐药绒癌ROS表达水平升高,MnTmPyP降低P62蛋白的表达。P62-siRNA可促进JEG-3/MTXR细胞内MTX诱导的凋亡反应蛋白PARP的切割和激活,流式细胞仪检测RNA干扰联合药物组细胞凋亡率（14.4±1.02）%,高于单纯药物应用组（9.1±1.34）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ROS介导P62蛋白激活参与MTX耐药绒癌发生机制,为耐药绒癌临床靶向治疗提供新思路。     

E-钙黏蛋白(E-cadherin)对人滋养细胞侵袭能力及妊娠结局的影响

目的:探讨黏附分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达对人滋养细胞侵袭能力的调控及其与自然流产发生的关系。方法:分别以过表达或小干扰RNA(siRNA)的方法上调或下调人绒毛膜癌细胞株Bewo及JEG-3内源性E-钙黏蛋白表达,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭行为的改变,并应用Western blotting比较4例正常妊娠妇女及4例自然流产妇女绒毛组织内E-钙黏蛋白的表达水平。结果:转染野生型E-钙黏蛋白质粒的Bewo及JEG-3细胞随着E-钙黏蛋白表达的提高,细胞的侵袭能力显著下降(P<0.05);而转染E-钙黏蛋白siRNA的Bewo及JEG-3细胞,随着E-钙黏蛋白表达的下降,细胞侵袭能力显著提高(P<0.05)。自然流产妇女较正常妊娠妇女的绒毛组织E-钙黏蛋白的表达水平不同程度出现升高。结论:E-钙黏蛋白参与调控滋养细胞的侵袭能力,其表达水平可能与妊娠结局密切相关。     

Interferon-gamma receptors on human gestational choriocarcinoma cell lines: quantitative and functional studies.

OBJECTIVES: This study was performed to further define the effects of interferon-gamma on choriocarcinoma cell lines and to determine whether variations in response among cell lines are attributable to quantitative differences in interferon-gamma receptors. STUDY DESIGN: Interferon-gamma receptors were quantified on BeWo, JEG-3 and Jar choriocarcinoma cell lines by a radiolabeled interferon-gamma ligand binding assay. The response of these cell lines to interferon-gamma was measured in two functional assays: a cell proliferation assay and a cell lysis assay after exposure to interferon-gamma with and without actinomycin-D. RESULTS: The number of interferon-gamma receptors on BeWo, Jar, and JEG-3 cells did not differ significantly (650, 560, and 420 interferon-gamma receptors per cell, respectively). Proliferation of all three choriocarcinoma cell lines was significantly inhibited to a similar extent by interferon-gamma. After treatment with interferon-gamma actinomycin-D, each choriocarcinoma cell line exhibited dose-dependent cell lysis; lysis of Jar was significantly less than that of either BeWo or JEG-3. CONCLUSION: These data further document variations in the response of choriocarcinoma cell lines to interferon-gamma and indicate that these differences are not the result of interferon-gamma receptor number but of postreceptor mechanisms.     

细胞自噬在甲氨蝶呤耐药绒癌中的保护性作用

目的：通过检测耐药绒癌细胞内自噬的变化,以及评估抑制自噬或敲除自噬相关基因后细胞凋亡情况,探讨细胞自噬在耐药绒癌中的作用。方法：以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的甲氨蝶呤（MTX）耐药绒癌JEG-3／MTXR细胞为研究对象。采用透射电镜、免疫荧光法观察MTX处理后细胞内自噬的变化;Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Bec]in-1的表达变化。RNA干扰法沉默自噬相关基因LC3后,采用Westernblot法和Annexin-V／PI双染法流式细胞仪检测MTX作用后JEG-3／MTXR耐药绒癌细胞凋亡的变化。结果：透射电镜和荧光显微镜下均可观察到MTX处理后JFG-3、JEG-3／MTXR细胞内自噬小体的产生;Icm浓度MTX处理后,两种细胞内自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达水平上调。相同浓度MTX处理后,JEG-3细胞内LC3、Beclin-1表达下调。沉默自噬相关基因LC3后,沉默LC3联合MTX组的JEG-3／MTXR和JEG-3细胞内凋亡相关蛋白caspase-9表达上调,凋亡率显著增多。结论：MTX可诱导耐药绒癌产生保护性自噬。     

绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究

目的 :采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系 ,比较不同药物引起耐药机制的差异。方法 :采用浓度梯度递增法和间歇诱导法 ,分别用 5 FU ,MTX ,VP 16诱导绒癌细胞系JEG 3,建立相应耐药细胞系 ,采用MTT法测定耐药细胞系对5 FU、MTX、KSM、VP 16和Taxol的耐药指数 ,用RT PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白 (LRP)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、谷胱甘肽转移酶 (GST π)、二氢叶酸还原酶 (DHFR)和多药耐药基因 (MDR 1)的mRNA表达 ,比较各种细胞生长曲线 ,细胞群体倍增时间。结果 :JEG 3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST π、DHFR的共表达 ,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化。诱导耐药前JEG 3细胞无MDR1的表达 ,用VP 16、5 FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR 1表达 ,且耐药指数增加。结论 :JEG 3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST π、DHFR表达的关系不密切 ,而与MDR1的表达有关。     

转导人肿瘤坏死因子α基因对耐药性绒毛膜癌裸鼠移植瘤耐药性的逆转作用

目的　探讨转导人肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor α,TNF α)基因 ,对耐药性绒毛膜癌 (绒癌 )裸鼠移植瘤耐药性的逆转作用。方法　将绒癌细胞系JEG 3(A细胞系 )、耐药性绒癌细胞系JEG 3/VP2 (B细胞系 )和转导TNF α基因的耐药性绒癌细胞系JEG 3/VP2 /TNF α(C细胞系 )接种于裸鼠颈背部皮下 ,建立绒癌裸鼠移植瘤模型。每种细胞系移植瘤模型均分为对照组 (腹腔注入生理盐水 )和化学药物治疗 (化疗 )组 [腹腔注入鬼臼乙叉甙 (VP 1 6) ] ,观察移植瘤的生长特点、组织学结构以及对化疗药物的敏感性 ;用逆转录聚合酶链反应方法和免疫组织化学方法 ,检测转导TNF α基因的耐药性绒癌裸鼠移植瘤中多药耐药 (multidrugresistance ,MDR1 )基因在mRNA和蛋白水平表达的改变。结果　移植成瘤率均为 1 0 0 % ,潜伏期 1 0～ 1 4d ;移植瘤组织学特征符合绒癌特点 ;C细胞系移植瘤的生长速度最慢 ,明显低于A、B两个细胞系的生长速度 (P均 <0 0 5) ;C细胞系对照组裸鼠的移植瘤[体积 (4 2± 0 5)cm3,重量 (0 95± 0 1 2 )g]比B细胞系对照组 [体积 (7 9± 0 3)cm3,重量 (1 60± 0 0 6)g]明显减少 (P <0 0 5) ,应用同样剂量的化学药物作用后 ,C细胞系化疗组肿瘤的抑制率 (41 0 %～42 5 % )接近A细胞系化疗组 (46     

Down-regulation and promoter methylation of tissue inhibitor of metalloproteinase 3 in choriocarcinoma

OBJECTIVE: To assess the differential gene expression in neoplastic and normal trophoblastic cells and evaluate the effect of methylation on tissue inhibitor of metalloproteinase 3 (TIMP3) expression in choriocarcinoma (CCA) cells. METHODS: The Atlas Human Cancer 1.2 Array (Clontech) was used to compare differential gene expression in a trophoblastic cell line (B6) established from first term placenta with two choriocarcinoma cell lines (JAR and JEG-3). The differentially expressed candidate genes in the placental and malignant trophoblastic cells in these cell lines were confirmed by real-time polymerase chain reaction (PCR), Western blotting and immunohistochemistry. Differential expression of a specific gene, TIMP3, was confirmed by immunohistochemistry using clinical specimens of choriocarcinoma and placenta. The involvement of promoter methylation in suppression of TIMP3 expression in choriocarcinoma was examined using methylation-specific PCR (MSP) and demethylation treatment. RESULTS: Differential expression of 23 genes was observed in choriocarcinoma cell lines compared to the placental trophoblastic cells using the cDNA array analysis (Atlas Human Cancer Array, Clontech). Among these differentially expressed genes, down-regulation of TIMP3, PLAB, IGFBP3 and up-regulation of CCNB1 were confirmed by real-time PCR determination. Reduced expression of TIMP3 was further confirmed in clinical samples of choriocarcinoma by immunohistochemical staining. Methylation of TIMP3 promoter was detected in choriocarcinoma cell lines and clinical samples of choriocarcinoma. Treatment with a demethylation drug, 5-aza-2'-deoxycytidine, in choriocarcinoma cell lines restored TIMP3 expression. CONCLUSION: Down-regulation of TIMP3, PLAB, IGFBP3 and up-regulation of CCNB1 were observed in choriocarcinoma cells compared to placental trophoblasts. Down-regulation of TIMP3 expression was confirmed in clinical specimens of choriocarcinoma and may play a role in its pathogenesis. Promoter methylation of the TIMP3 is involved in suppression of TIMP3 expression. Differentiation expression of TIMP3 in choriocarcinoma may have potential application in clinical diagnosis and patient treatment.