逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附试验在诊断现综合征出？…

目的 寻找一种快速、敏感、特异的诊断肾病综合出血热（ＨＦＲＳ）方法。方法 采用磺化钠－异硫氰酸胍－氧仿法抽提病毒核酸,逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测不 病程中ＨＦＲＳ患血清中的汉坦病毒感染情况,并采用间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测特异性ＩｇＭ抗体。结果 ８４．７％患血清中汉坦病毒核酸检测为生,其中病程为１周内检出率为１００％,１～２周内检出率为１００％,１～２周为６０％,     

肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义

目的 观察病毒血症在病程各期的变化。方法 根据汉坦病毒血清Ⅰ型７６－１１８株及血清Ⅱ型８０－３９株Ｍ基因Ｇ１区设计两对公有引物及一条探针,应用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ方法对５７例９６份肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中ＨＶ－ＲＮＡ检测,所有ＰＣＲ产物用ＤＯＴ－Ｂｌｏｔ证实。结果 ９６份样本中６８份阳性,阳性率７８．８％;在病程第１、２、３周,ＨＶ－ＲＮＡ检测率分别为９４．７％、４７．５％、２５％     

类风湿性关节炎患者IL—1β,IL—及SAA水平的变化及其临床意义

目的 探讨类风湿性关节炎（ＲＡ）患者血清淀粉样蛋白Ａ（ＳＡＡ）,白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）、白细胞介素－６（ＩＬ－６）及Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）水平检测的临床意义。方法 采用酶联免疫吸附实验检测５１例ＲＡ患者及４１例正常对照组血清中ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＳＡＡ和ＣＲＰ水平。结果 ＲＡ患者ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＳＡＡ和ＣＲＰ水平明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）,ＲＡ活动组与ＲＡ稳定组ＩＬ－１β、Ｉ     

人类白细胞抗原—I类抗原的DNA分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原－Ｉ（ＨＬＡ－Ｉ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法 设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物,组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型。结果 所有样本ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型均获得成功,无假阳性和假阴性出现,４０份样本的重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ     

女性类风湿关节炎病人血清中IL-1β和TNF-α水平的研究

用放射免疫分析法检测４０例女性类风湿关节炎患者血清中ＩＬ－１β和ＴＮＦ－α的水平。以３９名健康女性血清为对照。同时检测了ＲＡ病人血沉（ＥＳＲ）及Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）。     

磁式RT—PCR检测肾综合征出血热病毒方法的建立及应用

针对汉坦病毒中国代表株（Ａ９、Ｒ２２）Ｍ基因片段设计分型引物（Ⅰ、Ⅱ型），采用改进的异太氰酸胍酚一步法（胍酚法）提取汉坦病毒ＲＮＡ，套式ＲＴ－ＰＣＲ检测稀释病毒上清模拟病人血清和２０例急性期血清样本。结果：能检测到模拟血清中少至几个ＰＦＵ病毒ＲＮＡ，敏感性５－１０ｆｇ。检测过程可在５ｈ内完成。２０例急性患者血清检测阳性率为１００％，并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交产其特异性。而正常及非ＨＦＲＳ     

PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印普杂交（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３｀寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份传阅耕ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩     

逆转录—半套式聚合酶链反应检测汉坦病毒RNA及其临床初步应用

目的：建立可用于汉坦病毒检测的ＲＴ－ＰＣＲ方法，并对其临床应用进行初步研究，方法：比较７６－１１８株和ＳＲ－１１株Ｓ基因序列，选择其保守区设计半套式引物，通过病毒培养上清及患者血清的扩增检测进行ＰＣＲ方法的敏感性，特异性及临床应用研究。结果所建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法可检出１．２５ＰＦＵ的病毒量；对照组（正常细胞培养上清和正常人血清）经扩增检测为阴性，８６份级ＩＦＡ检测抗ＨＶ－ＩｇＭ阳性的肾综合征出血     

系统性红斑狼疮患者血清IL—1,SIL—2R,IL—6的变化及临床意义

目的 通过检测系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清白细胞介素－１、－６、－８（ＩＬ－１、－６、－８）可溶性白细胞介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）水平,探讨细胞因子和ＳＬＥ活动性的关系。方法 选择４６例活动性ＳＬＥ患者,并将其分成轻,中,重三组及狼疮肾（ＬＮ）和非ＬＮ两类,采用ＥＬＩＳＡ法测定其血清ＩＬ－１,ＳＩＬ－２Ｒ,ＩＬ－８水平。结果 ＳＬＥ患者血清ＩＬ－１,ＳＩＬ－２Ｒ,ＩＬ－８水平显著高于正常对照     

强直性脊柱炎血清可溶性白细胞介素-2受体的临床意义

白细胞介素－２（ＩＬ－２）是参与体内免疫调控的重要细胞因子之一,而白细胞介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）的表达和释放是机体免疫应答及调节的重要环节。笔者于１９９６年６月～１９９８年６月采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测５３例强直性脊柱炎（ＡＳ）患者血清中可溶性白细胞介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）,观察其临床意义。１　材料与方法１．１　病例选择　５３例强直性脊柱炎均符合１９６６年纽约诊断标准［１］。男性４３例,女性１０例,男女比例４．３０∶１,年龄２２．３１±８．６２岁（１５～４０岁）。本组…     

肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义

目的观察病毒血症在病程各期的变化。方法根据汉坦病毒血清Ⅰ型76-118株及血清Ⅱ型80-39株M基因G1区设计两对公有引物及一条探针,应用RT-nestedPCR方法对57例96份肾综合征出血热(HFRS)患者血清中HV-RNA检测,所有PCR产物用DOT-Blot证实。结果96份样本中68份阳性,阳性率70.8%;在病程第1、2、3周,HV-RNA检测率分别为94.7%、47.5%、25%,P<0.05;重型病人持续2周HV?RNA阳性检测率100%,而轻、中型分别为12.5%及42.8%,P<0.05。结论在HFRS病程中,病毒血症是一个急性过程,与发热期相平行,病毒血症持续时间与病情轻重密切相关。     

HFRS患者血清中HV-RNA的PCR检测及扩增产物的测序分析

目的 探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于ＨＦＲＳ临床标本中病毒基因检测的若干影响因素及西安地区近年主要浒汉坦病毒（ＨＶ）毒株的分子流行病学特点。方法 设计合成了两套分别互补于ＨＶ Ｍ基因片段和Ｓ基因片段的引物,建立了检测ＨＦＲＳ患临床血清标本中ＨＶ基因的ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ方法,并对扩增的部分ＨＶ靶基因进行了测序分析和比较,结果 １１９份ＨＦＲＳ患轿清（经临床和ＩＦＡ确诊）经用Ｓ基因片段引物的ＲＴ－ｎ     

汉坦病毒湖北株M片段G1编码区基因变异研究

目的 :探讨近年来汉坦病毒HTN湖北株M基因片段G1编码区部分基因序列的变异情况。方法 :根据汉坦HTNM片段G1编码区核苷酸序列设计引物 ,利用RT PCR方法对 75份病程在 7d以内的肾综合症出血热 (HFRS)患者 (经临床诊断和ELISA确诊 )血清标本进行检测 ,并对扩增出的目的基因片段选用 3种限制性内切酶AluⅠ、RsaⅠ、MboⅠ进行酶切 ,根据限制性片段长度多态性分析筛选出变异毒株 ,继而通过序列测定 ,得到变异毒株G1编码区部分核苷酸序列 ,并与标准株HTN76 118及地方株HTN 114的相应核苷酸序列及氨基酸序列进行比较分析。结果 :75份血清标本通过RT PCR方法进行检测 ,阳性率为 77.3 %。扩增片段用 3种限制性内切酶AluⅠ、RsaⅠ、MboⅠ进行酶切分析 ,发现 4份阳性产物其限制性片段长度多态性与HTN 76 118均不相同 ,但其中 3份阳性产物限制性片段长度多态性与地方株HTN 114基本相同 ,1份与HTN 114株不完全相同。对该扩增产物的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析表明 ,其核苷酸序列与标准株 76 118的同源性为 83.3 % ,与地方株HTN 114的同源性为 96 % ;推导氨基酸序列与HTN 76 118的同源性为 93.2 % ,与地方株HTN 114的同源性为 99%。结论 :①近年来引起湖北地区HFRS的主要毒株仍为HTN地方株。②从分析的病     

PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用

目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。     

汉滩型与希望山型汉坦病毒的体外重组

目的：探明汉坦病毒汉滩型与希望山型之间能否发生巧克力理排，以及发生重排的频率和特点，方法：用汉坦病毒汉滩型76－118株与希望山型PHV株混合感染VeroE6细胞，空斑形成实验挑取子代病毒克隆株，传代培养后用RTPCR方法鉴定子代病毒基因型。结果：子代病毒14／36来源于PHV株；12／36来源于76－118株；5／36汉滩型与希望山型分型引物扩增均为阳性；1株子代病毒L，S片断均来源于76－118株，而M片段两种引物扩增均为阳怀；2株子代病毒L片断来源于76－118株，S片断来源于PHV株，M片段两种引物扩增均为阳性。1株子代病毒L，S片断均来源于76－118株，而M片段来源于PHV株，结论：汉坦病毒汉滩型与希望山型之间可以发生基因片段的重排。     

肾综合征出血热患者流产胎儿分离毒株84FLi的全基因序列分析

目的：克隆和测定汉滩病毒疫苗生产株84FLi的全基因组序列,了解其分子基础。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）,分节段扩增84FLi株L、M和S基因片段的cDNA,直接用PCR产物或克隆人pMD18-T载体后进行测序。结果：84FLi株L、M、S3个片段的全基因组序列为6533,3616和1688个核苷酸,分别编码2151,1135,429个氨基酸。A、C、G、T4种核苷酸分别为3830,2050,2510和3447个,GC含量为38．52％,AT含量为61．48％。序列同源性分析表明84FLi株与分离自广州的RG9株和分离自安徽的Chen4株高度同源。S片段核苷酸的同源性99．6％。与HTNV的国际标准毒株76－118的3个片段核苷酸同源性分别为83．7％、84．0％和87．2％,氨基酸同源性分别为97．5％、96．0％和97．9％。结论：84FLi株属于汉滩型病毒,并与分离自国内的汉滩病毒同源性较高,与中国株Chen4株和RG9株属于同一亚型。     

丁型肝炎病毒RNA巢式逆转录PCR检测

为了提高丁型肝炎病毒的实验室诊断水平，建立一个高敏感性和特异性的丁型肝炎病毒的检测方法。根据ＧＥＮＢＡＮＫ中ＨＤＶ的核酸序列设计出巢式引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ方法对４０例肝炎患者进行检测。结果：２０例丁型肝炎病毒抗原阳性的ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，１０例丁型肝炎病毒抗体阳性中ＨＤＶＲＮＡ阳性６例，１０例单纯ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性的均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论：巢式逆转录ＰＣＲ可以作为丁型肝炎病毒临床检测的一种方法     

汉滩病毒西安分离84FLi的M片段全基因序列测定及分析

目的 测定我国肾综合征出血热患者流产胎儿肝脏分离病毒84FLi株的全M片段基因序列，了解其分子基础。方法 采用反转录－聚合酶链反应（RT－PCR），分节段扩增M基因片段的cDNA，直接用PCR产物或克隆人pMD18-T载体后进行测序。结果 84FLi株的全M基因序列组成为：M片段基因共由3616个核苷酸组成，四种核苷酸的比例分别为A30．92％，C18．03％，G21．18％，T29．87％。GC含量为39．21％，AT含量为60．79％，最大开放读码框为41－3448，共编码1135个氨基酸。核苷酸序列同源性分析表明84FLi株与HTN型同源性高于与其他型汉坦病毒的同源性，其中与中国株的同源性较高，与HV114株的同源性为85．5％。与HTNV的国际标准毒株76－118的核苷酸同源性分别为84．0％，氨基酸的同源性为96．0％。结论 84FLi株属于汉滩型病毒，并与分离自国内的汉滩病毒同源性较高。     

In situ hybridization detection of persistent infection and viral RNA distribution in laboratory rats with hemorrhagic fever

ＩｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｖｉｒａｌＲＮＡｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｌａｂｏｒａｔｏｒｙｒａｔｓｗｉｔｈｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒｗｉｔｈｒｅｎａｌｓｙｎｄｒｏｍｅ...     

原位分子杂交检测大鼠肾综合征出血热病毒隐性感染和病毒RNA的体内分布

目的和方法：用异羟基洋地黄毒苷配基－１１－ｄＵＴＰ随机引物延伸法分别标记肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）汉坦株病毒Ｍ与ＳＲＮＡ全片段ｃＤＮＡ作为探针，用核酸原位分子杂交法检测某动物所一批大鼠ＨＦＲＳ病毒的隐性感染及病毒ＲＮＡ的组织细胞定位和分布．结果：９８只大鼠中８８只病毒ＲＮＡ阳性，阳性率８９．７９％，阳性率最高的脏器是肝脏７９／８５，其次为心脏２２／８３，再次为肾脏１４／７９，其余脏器阳性率较低．阳性部位主要在各脏器的实质细胞胞浆内，呈细颗粒状，未见于核内．结论：结果说明本批大鼠ＨＦＲＳ病毒隐性感染率极高；大鼠ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ的阳性检出率明显高于同批大鼠病毒抗原和血清抗体的阳性检出率，说明原位分子杂交检测病毒ＲＮＡ对确定动物病毒隐性感染具有重要的流行病学意义．病毒ＲＮＡ主要存在于肝脏，提示肝脏可能是病毒的主要潜伏部位，病毒可能主要由粪便排除．