丁型肝炎病毒RNA巢式逆转录PCR检测

为了提高丁型肝炎病毒的实验室诊断水平，建立一个高敏感性和特异性的丁型肝炎病毒的检测方法。根据ＧＥＮＢＳＡＮＫ中ＨＤＶ的核酸序列设计出巢式引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ方法对４０例肝炎患者进行检测。结果：２０例丁型肝炎病毒抗原阳性的ＨＦＶ ＲＮＡ均为阳性，１０例丁型肝炎病毒抗体阳性中ＨＤＶ ＲＮＡ阳性６例，１０例单纯ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ和ＨＢｄ阳性均未检出ＨＤＶＲＮＡ。     

聚合酶链反应检测血清丁型肝炎病毒核酸

目的为建立一种特异性强、敏感性高的检测丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染的方法，提高丁型肝炎的诊断水平。方法根据ＨＤＶＲＮＡ保守区（６５４～９６３位核苷酸）设计合成两对引物，采用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－“ｎｅｓｔｅｄ”ＰＣＲ）对３５例肝炎患者血清进行检测。结果二次ＰＣＲ扩增的特异性和敏感性均较一次ＰＣＲ高。１９例丁型肝炎抗原阳性者ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，９例丁型肝炎抗体阳性者中有６例阳性，７例单纯ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性者均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论这一检测方法特异性强、敏感性高，可广泛用于临床检测。     

维持性血液透析患者经血液传播嗜肝病毒感染状况

目的：探讨血液透析（血透）患者乙型（ＨＢＶ）、丙型（ＨＣＶ）、丁型（ＨＤＶ）、庚型（ＨＧＶ）和ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｔｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ）等经血液传播性病毒性肝炎感染状况。方法：对８０例血透患者和１２例血透工作人员应用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）法检测ＨＢＶ两对半及ＨＣＶ、ＨＤＶ抗体;逆转录—套式聚合酶链反应（ＲＴｎＰＣＲ）检测血清ＨＧＶＲＮＡ;巢式ＰＣＲ检测ＴＴＶＤＮＡ。结果：８０例长期维持性血透患者中,经血液传播肝炎病毒感染５１例（６３８％）,其中ＨＢＶ阳性２１例（２６２…     

HBV,HCV,HGV重叠感染的回顾性研究

目的 了解１０年前我国ＨＢｓＡｇ阳性献血员ＨＢＶ,ＨＣＶ,ＨＧＶ重叠感染状况。方法 采用逆转录套式ＰＣＲ技术检测血清中ＨＢＶＲＮＡ、ＨＧＶＲＮＡ、免疫ＰＣＲ技术检测ＨＢＶＤＮＡ。结果 发现在ＨＢｓＡｇ阳性献血员中,ＨＢＶＤＮＡ阳性率９０％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率２０％,ＨＧＶＲＮＡ阳性率６％,三重感是性率３％。结论ＨＢｓＡｇ阳性献血员吸较高比例的双重感染,且以ＨＣＶ感染为主。     

西安地区献血员HGV与HBV及HCV混合感染

研究西安地区献血员中庚型肝炎病毒与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）混合感染情况。方法采用ＥＬＩＳＡ方法检测献血员３４２例血清中的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ,用逆转录聚合酶反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶ－ＲＮＡ。结果发现在西安地区ＨＢｓＡｇ与抗－ＨＣＶ均为阴性的献血员中ＨＧＶ－ＲＮＡ,阳性率为３．５０％（７     

维持性血液透析患者庚型肝炎病毒感染状况

目的 探讨庚型肝炎病毒合并其他肝炎病毒在血液透析患者中的感染状况。方法 逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测血液透析患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ,ＥＬＩＳＡ法检测乙肝对半及ＨＣＶ,ＨＤＶ抗体。结果 ８０例血透患者中,ＨＧＶ阳性１５例（１８．７％）,ＨＣＶ阳性１８例（２２．５％）,ＨＢｓＡｇ阳性２１例（２６．２％）,未检出ＨＤＶ阳性。在１５例感染ＨＧＶ的患者中,７例（４６．７％）同时感染其他肝炎     

多重PCR扩增HBVDNA，HCVRNA和HDVRNA方法的建立

多重ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ，ＨＣＶＲＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ方法的建立阎小君，肖乐义，李陕区，苏成芝，郭晏海（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词聚合酶链反应；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；丁型肝炎病毒中图号Ｑ５２３乙型肝炎病毒（ＮＢＶ）和丙型...     

丁型肝炎的分布状况与分析

我们用ＥＬＩＳＡ法检测了６５５例不同类型乙肝病人，２９５例无症状ＨＢｓＳＡｇ携带者和３１７例献血员血清丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＡｇ）和丁型肝炎病毒抗体（抗ＨＤ）。结果表明，９１例丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）标志物阳性病人中，以慢活肝占比数最大，无症状ＨＢｓＡｇ携带者和献血员的感染率分别为５．４％和１．２６％，证实乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和ＨＤＶ同时或重叠感染与肝炎慢性化有密切关系。应注意对无症状ＨＢｓＡｇ携带者或献血员进行ＨＤＶ标志物的检测。     

血液透析尿毒症患者肝炎病毒感染的研究

目的 观察尿毒症血液透析患者乙型,丙型,庚型肝炎病毒感染情况,以及此三型肝炎病毒（ＨＣＶ）多重感染的情况,并探讨其感染的相对危险因素。方法 对３００例血液透析患者的单份血清共３００份,进行ＨＢｓＡｂ,ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｂ,ＨＢｃＡｂ,ＨＢＶ－ＤＮＡ,ａｎｔｉ－ＨＣＶ,ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测,并随机抽取其中的４０份血清以逆转录－巢式ＰＣＲ方法检测ＨＧＶ－ＲＮＡ,以酶联免疫吸附试验方法检测ＨＧＶ抗体（     

不同肝炎病毒感染模式对慢性肝炎病情的影响研究

目的：探讨慢性肝炎病人中ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＧＶ四型肝炎病毒的感染和重叠感染和慢性肝炎的病情及预后的影响。方法：选择慢性肝炎病人１３６例，应用ＰＣＲ方法检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ、ＨＤＵＶＲＮＡ和ＨＧＶＲＮＡ，用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＧＶ其他血清学标志物。结果：上述四型肝炎病毒的感染模式为：：ＨＢＶ、ＨＢＶ＋ＨＣＶ、ＨＢＶ＋ＨＤＶ、ＨＢＶ＋ＨＧＶ、ＨＣＶ和ＨＢＶ＋ＨＣ     

生物素化HDV cDNA探针的制备及其在血清斑点杂交中的应用

运用分子生物学技术,在国内首次成功地制备了生物索标记丁型肝炎病毒cDNA探针,建立了HDVRNA 的血清斑点杂交技术。HDV cDNA 重组质粒对大肠杆菌 HB101的转化率达10~5转化子/μgDNA;生物素化11-dUTP掺入率达33％;斑点杂交检测低限为50pg。在20例虽曾被反复冻融过、HDV感染标志物阳性患者血清中,仍检出5例慢性活动性肝炎患者HDV RNA阳性;其中 3例为抗HD-IgG阳性患者。提示血清中的抗HD-IgG也许并不一定是保护性抗体,出现后仍可能存在HDV病毒的活跃复制。     

套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义

目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）内HCV－RNA与血清中HCV－RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR（RT－nested-PCR)对124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV－RNA进行检测。结果 124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者中,PBMC及血清中HCV－RNA阳性率分别为53．23％（66／124）和64．52％（80／124）,经χ^2检验,两者差异无显著性（P＞0．05）。各慢肝组PBMC与血清HCV－RNA阳性率相比,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中;PBMC中HCV－RNA与血清中HCV－RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV－RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充,而且是HCV肝外感染的直接证据,是导致丙型病毒性肝炎患者易于慢性化的重要原因之一。     

聚合酶链反应检测汉坦病毒感染的实验研究

目的 早期诊断汉坦病毒感染。方法 根据国际标准株（７６－１１８,３９）Ｍ基因Ｇ１区设计两对公有引物和一条探针,按异硫酸氰胍－酚一步法提取汉坦病毒ＲＮＡ,采用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ检测病毒细胞培养上清原液及稀释液、１６份对照组血清、４０份ＨＦＲＳ急性期（１～５天）血清标本中的汉坦病毒ＲＡＮ,所有扩增产物采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ或Ｄｏｔ ｂｌｏｔ证实其特异性。结果 汉坦病毒细胞培养液和４０份     

戊型肝炎患者粪便中病毒RNA的半定量检测

目的探讨戊型肝炎病毒(HEV)RNA半定量检测的意义和可行性,为HEVRNA的定量PCR(多聚酶链反应)检测提供科学依据。方法在逆转录-套式PCR基础上,采用样品倍比稀释法对戊型肝炎患者粪便中病毒RNA作半定量检测。结果20份粪便标本中有14份检测结果阳性,其中病毒RNA拷贝水平为8×105、8×107、8×108、8×109PCR单位·ml-1的分别为2、10、1、1份。对同一标本而言,在不同稀释度时,其PCR产物在量上无显著差异。结论定量PCR技术检测戊型肝炎病毒RNA是可行的,但应以起始模板来定量而不是以终产物定量。     

DNA芯片技术诊断乙、丙型病毒性肝炎的研究

目的：研究病毒性肝炎基因芯片的制备,用肝炎基因诊断芯片,病毒抗原抗体及DNA/RNA（PCR）检测方法对照检测乙型和丙型肝炎血清,比较两种方法的优缺点。方法：血清来自乙型肝炎患者40例,丙型肝炎患者20例和健康人40例,乙型肝炎确诊用雅培设备试剂,荧光微离子法;抗HCV检测丙型肝炎及PCR法检测HCVRNA,确诊后用健康人血清一起进行双盲混合编组,用肝炎基因诊断芯片检测。结果：40例乙型肝炎病毒标志阳性血清,基因诊断芯片检测阳性30例,阴性10列;12例HCVRNA阳性血清,基因诊断芯片检测阳性8例;抗HCV阳性,HCVRNA阴性血清8例,基因诊断芯片检测阳性2例,阴性6例;40例健康人血清,乙型和丙型肝炎基因诊断芯片检测均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可以同时检测乙型和丙型肝炎,诊断乙型肝炎的准确率可达80%,假阳性率低;诊断丙型肝炎的阳性率低,技术有待完善。     

多发性骨髓瘤中人类疱疹病毒8型的定量分析及其相关基因的表达

目的 确定多发性骨髓瘤（MM）骨髓活检标本中是否存在人类疱疹病毒8型（HHV8）感染,病毒负荷量的差异与临床表现之间的关系。方法 实时荧光定量PCR确定骨髓活检标本中的HHV8病毒的负荷量,采用筑巢式PCR扩增患者外周血、骨髓穿刺和骨髓活检标本中HHV8 KS330233Bam片段,用逆转录－PCR方法了解HHV8病毒的致病基因病毒源白细胞介素－6（vIL-6)和病毒源干扰素调节因子－1（vIRF-1)的表达情况。结果 多数MM患者的骨髓活检标本可检出HHV8,荧光定量PCR发现阳性率为69．6％（16／23）;筑巢式PCR时的阳性率为82．6％（19／23）,骨髓穿刺和外周血标本的阳性率分别为4％（1／25）和0。临床分析表明病毒的检出可能与化疗有关。vIRF-1在骨髓活检标本中表达率很高,为83．3％（10／12）, vIL-6的表达率为0。结论 多发性骨髓瘤和HHV8感染有关,高表达的vIRF－1在多发性骨髓瘤发病的过程中可能起一定的作用。     

逆转录巢式聚合酶链反应检测重型肝炎患者血清HGVRNA及分析

采用逆转录巢式聚合酶链反应技术检测重型肝炎患者血清ＨＧＶＲＮＡ，并与临床病死率间关系进行了初步探讨。结果发现２２例重肝患者血清标本中检出６例ＨＧＶＲＮＡ阳性，阳性率２７．３％，其中亚急性重型肝炎１１例，ＨＧＶＲＮＡ阳性４例，阳性率３６．４％，慢性重型肝炎１０例，ＨＧＶＲＮＡ阳性２例，阳性率２０．０％，急性重型肝炎１例未检出。ＨＧＶＲＮＡ阳性６例中，死亡１例，死亡率１６．７％，ＨＧＶＲＮＡ阴性１６例中，死亡６例，死亡率３７．５％。表明川北地区亦存在ＨＧＶ感染，ＨＧＶ感染病例病死率较低，预后好     

用套式RT-PCR法检测肝细胞癌中丙型肝炎病毒基因型

目的　检测人肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型。方法　用ＲＴＰＣＲ法常规检测ＨＣＣ组织和部分患者血清ＨＣＶ,再以巢式ＲＴＰＣＲ法对ＨＣＶ阳性标本中５种ＨＣＶ基因型进行鉴别。对多数标本中ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ也进行了免疫组化和原位杂交检测。结果　ＨＣＣ组织中ＨＣＶ阳性率为５０％（３９／７８）,与ＨＢＶ者（６４．４％）差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）,两者重叠感染率３４％（２０／５９）。在１０例血清ＨＣＶ阴性ＨＣＣ患者中,３例ＨＣＣ冰冻组织检出ＨＣＶＲＮＡ。在ＨＣＣ组织中共检出３种ＨＣＶ基因型,其中２ａ、１ｂ、３ａ和混合型分别为１７例（４３．６％）、９例（２３．１％）、４例（１０．３％）和２例（５．１％）,各基因型间差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）,但２ａ型与１ｂ型间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,２ａ型与ＨＢＶ的重叠感染明显较其他ＨＣＶ基因型者常见（Ｐ＜０．０５）。结论　２ａ型ＨＣＶ是ＨＣＣ组织中最常见的基因型并易与ＨＢＶ重叠感染率,ＨＣＣ患者血清ＨＣＶ检测不一定能准确反映ＨＣＣ组织中的ＨＣＶ感染率,其所示基因型也有所不同。     

实时荧光PCR检测丙型肝炎病毒核酸及其临床意义

目的：探讨实时荧光PCR检测技术在丙型肝炎病原诊断及在监测干扰素-α治疗慢性丙型肝炎早期病毒学应答反应(EVR)中的临床意义。方法：采用一种新的丙型肝炎病毒核酸(HCV—RNA)扩增(PCR)定量检测方法——实时荧光PCR检测HCV—RNA，对96例慢性丙肝(其中20例随机接受Pegasys或Referun-α治疗，每例思者分别采集治疗前后系列血清7份)、30例其它肝病、15例非肝病和86例健康献血员的血清标本进行HCV—RNA检测，部分血清标本与Amplicor(Roche)进行核对。结果：96例慢性丙肝患者血清HCV—RNA检出率85.4％(82／96)、其它肝病、非肝病和健康献血员中均未检出HCV—RNA；部分标本经与Amplicor核对呈较好相关性，r(log)＝0．91。随机接受Pegasys或Referon-α治疗的20例丙肝患者治疗前后EVR显示，前者的EVR似较后者明显，但因病例数太少，无明显统计学差异(G＝4.467,P＞0.05)。结论：实时荧光PCR检出的HCV—RNA载量可较客观地反映丙肝患者体内病毒复制水平，支持干扰素治疗慢性丙型肝炎EVR可用于预测长期疗效。     

乙型肝炎患者血清丁型肝炎病毒标志的研究

目的 研究ＨＤＶ重叠ＨＢＶ感染对乙型肝炎患者病情和血清学指标的影响。方法 采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＤＶ血清标志ＨＤＡｇ、抗ＨＤ、抗ＨＤＩｇＭ和ＨＢＶ血清标志ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｃ、抗ＨＢｃｌｇＭ,ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果 ３１６例乙型病毒性肝炎中６０例重叠ＨＤＶ感染,重叠感染率为１８．９８％;ＣＨ和ＦＨ组ＨＤＶ感染率显著高于ＡＨ,ＦＨ组ＨＤＶ复制指标阳性率显著高于ＣＨ及ＡＨ