蛇葡萄素通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导人宫颈癌细胞SiHa自噬

目的 研究蛇葡萄素(ampelopsin, AMP)诱导人宫颈癌细胞SiHa发生自噬及其可能的作用机制。方法 单丹磺酰胺(monodansylcadaverine, MDC)染色法观察AMP对SiHa和C-33A细胞自噬的影响；透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察经AMP干预的SiHa和C-33A细胞超微结构的变化；自噬双标腺病毒转染(mRFP-GFP-LC3)法检测SiHa细胞自噬流强度；Western blot法对SiHa细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin-1、Atg13及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的表达情况进行检测。结果 MDC染色结果显示，随着AMP浓度的升高，代表自噬小体的亮绿色逐渐增多；TEM实验结果表明，与空白对照组相比，AMP组细胞线粒体嵴溶解消失，同时可见自噬小体和自噬溶酶体；mRFP-GFP-LC3实验结果提示，随着AMP浓度的升高，细胞内自噬小体和自噬溶酶体增多，提示自噬流增强；同时发现LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg13蛋白表达上调，P62、p-PI3K、p-AKT、...     

土槿乙酸诱导的卵巢癌细胞HO-8910自噬及其机制

目的探讨土槿乙酸诱导的人卵巢癌细胞系HO-8910细胞自噬蛋白的表达及PI3K/Akt信号转导通路的变化,以及自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)对自噬相关蛋白的影响。方法不同浓度的土槿乙酸作用HO-8910细胞,采用台盼蓝染色检测细胞的存活率,Western blot分析检测自噬相关蛋白及PI3K/Akt通路相关蛋白的变化,分别用3-MA和RAPA处理HO-8910细胞后检测自噬相关蛋白的变化。结果土槿乙酸能够诱导卵巢癌细胞HO-8910自噬,增加LC3-Ⅱ和自噬调节因子Beclin-1的表达;3-MA可以抑制土槿乙酸诱导的HO-8910细胞自噬相关蛋白的表达,而RAPA促进了土槿乙酸诱导的HO-8910细胞自噬相关蛋白的表达,且土槿乙酸能抑制PI3K/Akt通路蛋白的表达。结论土槿乙酸可通过抑制PI3K/Akt通路诱导HO-8910细胞自噬。     

黄连素下调NRAV和PI3K/AKT通路减轻RSV感染致HEp-2细胞的损伤

目的 探讨长链非编码RNA NRAV(LncRNA NRAV)和PI3K/AKT通路在黄连素(berberine, BE)减轻RSV感染致HEp-2细胞损伤中的机制。方法 将HEp-2细胞感染RSV,并用BE、PI3K激活剂740Y-P处理或过表达NRAV。qRT-PCR检测NRAV、RSV-F、NS2表达水平;CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;ATP检测试剂盒检测ATP水平;Western blot检测细胞PI3K、AKT、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达;MitoSOX染色检测细胞线粒体ROS(mtROS);ELISA检测细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平。结果 过表达NARV细胞凋亡率、RSV活性增加,敲低后结果相反;BE能显著抑制NRAV和PI3K/AKT通路(P<0.05),改善线粒体功能、诱导线粒体自噬,提高细胞的活性、降低凋亡率（P<0.05）,并降低NLRP3炎性小体活化水平和IL-1β、IL-6、IL-8...     

钙络合剂BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响及其可能机制

目的观察BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外使用胰酶-Ⅱ型胶原酶消化法分离提取大鼠关节软骨细胞,分为正常组(p H 7.4)、酸化组(p H 6.0)、以及分别经BAPTA-AM处理的正常组和酸化组,激光共聚焦技术检测软骨细胞胞内钙离子变化,实时荧光定量PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3的表达,吖啶橙染色分析细胞自噬溶酶体形成情况。结果与p H 7.4正常组比较,p H 6.0酸化刺激明显增加大鼠关节软骨细胞内Ca2+的浓度,且自噬标志物Beclin-1、ULK1 mRNA及LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高,酸性自噬溶酶体形成增多,同时酸化刺激能引起Ca MKKβ及pAMPK蛋白表达水平增高,磷酸化蛋白p-m TOR水平明显降低。BAPTA-AM酸化组自噬水平和Ca MKKβ及p-AMPK表达明显降低,p-m TOR表达明显升高。结论 BAPTA-AM能明显减弱胞外酸化诱导软骨细胞自噬作用,其机制可能与抑制胞内Ca2+有关。     

蛇床子素通过PINK1/Parkin通路诱导HeLa细胞自噬

目的 探讨蛇床子素促进宫颈癌HeLa细胞发生自噬的潜在作用机制。方法 不同浓度蛇床子素(0、10、20、40、80、160、240、320 mg·L^-1)作用于HeLa细胞,MTT法检测蛇床子素对HeLa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察经蛇床子素干预的HeLa细胞形态;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)染色检测自噬水平;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western blot分析线粒体相关蛋白MFN1、DPR1表达水平;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;建立裸鼠宫颈癌体内移植瘤模型探讨蛇床子素对宫颈癌的抑制作用;Western blot检测PINK1、Parkin和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平。结果 蛇床子素能明显抑制HeLa细胞增殖;通过透射电镜观察,经蛇床子素干预的HeLa细胞有典型的自噬小体形成;MDC染色荧光强度增强,细胞发生自噬;线粒体融合蛋白MFN1表达下调,分裂蛋白DRP1表达上调;JC-1显示线粒体膜电位下降;流式细胞术检测结果显示细胞内ROS水平升高,且能被自噬...     

积雪草酸通过改变自噬作用促进胶质瘤细胞T98G凋亡的实验研究

目的研究积雪草酸对T98G细胞凋亡及自噬的影响。方法 MTT法分析积雪草酸对T98G细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞自噬;Western blot检测凋亡和自噬通路相关因子的表达。结果积雪草酸对T98G细胞增殖有抑制作用,IC50值为46.3μmol·L-1。Annexin-V/7-AAD双染和Western blot结果显示,积雪草酸可引起Akt表达下调、线粒体膜电位下降和Caspase-3激活,进而诱导T98G细胞凋亡。同时,AA可抑制T98G细胞自噬,表现为降低MDC荧光强度,抑制Beclin-1、LC3-Ⅱ、Atg表达。通过氯喹上调Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,积雪草酸抑制自噬作用被阻断,同时促凋亡作用也明显降低。结论积雪草酸可同时诱导T98G细胞凋亡和抑制自噬,并且抑制自噬作用能够促进细胞凋亡,进而抑制T98G细胞增殖。     

内皮-单核细胞激活多肽对人U118胶质瘤细胞自噬的影响及机制

目的研究内皮-单核细胞激活多肽(EMAP-Ⅱ)对人U118脑胶质瘤细胞自噬的影响及可能机制。方法 EMAP-Ⅱ处理人U118胶质瘤细胞后,采用MTT检测细胞活力;用免疫荧光法检测自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)在U118细胞的分布;Western blot方法检测LC3-Ⅱ、自噬降解底物p62/SQSTM1和自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平。结果与EMAP-Ⅱ0 h组相比,0.05 nmol.L-1剂量以上的EMAP-Ⅱ可明显抑制人U118胶质瘤细胞的活力,降低线粒体膜电位(MMP),在EMAP-Ⅱ作用0.5 h时效果最明显;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)能够阻断EMAP-Ⅱ的作用,使细胞活力和线粒体膜电位基本恢复;EMAP-Ⅱ作用0.5 h后自噬标记物LC3在胞质内呈点状分布,荧光表达明显增强,并且LC3-Ⅱ的蛋白表达水平明显上调;同时伴有自噬降解底物p62/SQSTM1的表达下降;此外,自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平明显上调。结论 EMAP-Ⅱ能明显抑制人U118胶质瘤细胞活力,诱导U118细胞发生自噬,其机制可能与自噬相关蛋白Beclin1上调有关。     

基于NLRP3-IL-1β-NF-κB信号轴研究野菊花总黄酮对 脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响

摘要：目的 探究野菊花总黄酮（TFC）对脂多糖（LPS）诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响,并初步探究其可 能的作用机制。方法 体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,将细胞分为阴性对照（Control）组、LPS处理（LPS）组、TFC 预处理（TFC）组、NLRP3激活预处理（4-MET）组、TFC联合4-MET预处理（TFC+4-MET）组。CCK-8法检测细胞增殖 情况;Hoechst 33342染色观察各组细胞形态变化;免疫印迹法检测各组细胞核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）、凋 亡相关斑点样蛋白（Asc）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（caspase-1）、p-IκB、IκB、自噬相关蛋白（Beclin1）、微管相关蛋 白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、LC3Ⅰ、蛋白表达情况;ELISA法检测细胞中白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平;透射电镜观察细胞 自噬情况。结果 与Control组相比,LPS组细胞增殖率降低,细胞核破碎情况加重,细胞凋亡率升高,NLRP3、Asc、 caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低 （P＜0.05）。与LPS组相比,TFC组细胞增殖率升高,细胞核破碎减轻,细胞凋亡率降低,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白 表达降低、IκB蛋白磷酸化水平降低,IL-1β、IL-18水平降低,细胞自噬程度增加,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达升 高;4-MET组细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,细胞核破碎情况加重,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋 白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,细胞自噬程度降低,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低（P＜0.05）。 TFC+4-MET组细胞增殖率、细胞自噬程度、LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达高于4-MET组,细胞核破碎情况减轻, 细胞凋亡率、NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达、IκB蛋白磷酸化、IL-1β、IL-18水平低于4-MET组（P＜0.05）。结论 野菊花总黄酮可能通过抑制NLRP3-IL-1β-NF-κB信号通路活化,进而抑制脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应,诱导 细胞自噬     

补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用

目的 探究补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用。方法 大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(Sham)、模型组(Model)、补阳还五汤组(BYHWD)、PI3K抑制剂组(LY294002)与溶媒剂组(Vehicle)。除Sham组外,其余各组均缺血2 h,再灌注72 h造模处理。Zea Longa评分评估神经缺损、TTC检测脑梗死体积、HE观察脑部缺血半暗带（ischemic penumbra,IP）损伤、免疫荧光检测LC3B、Western blot检测PI3K/AKT通路与自噬标志蛋白。结果 BYHWD组与Model组相比,大鼠神经功能评分降低、脑梗死体积减小、脑部IP病理损伤减轻,PI3K与p-AKT/AKT表达增加,LC3Ⅱ/Ⅰ降低,p62升高（P<0.05）;BYHWD的调控作用被LY294002减弱（P<0.05）。结论 补阳还五汤通过激活PI3K/AKT通路抑制细胞自噬,从而减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤。     

酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其机制研究

目的研究酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion chan-nel 1a)在体外培养的酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其可能机制。方法Ⅱ型胶原酶消化法分离大鼠关节软骨细胞,鉴定后传代培养,观察在不同pH条件下诱导的细胞自噬情况以确定胞外酸化条件;将软骨细胞分为pH7.4环境下培养的正常组、pH 6.0的酸化组、以及经ASIC1a非特异性阻断剂Amiloride和特异性阻断剂PcTX1处理的酸化组,RT-PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3及ERK1/2、p38MAPK磷酸化蛋白的表达,透射电子显微镜法(TEM)观察自噬小体数量的变化;通过使用ERK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂(PD98059、SB203580),采用RT-PCR和Western blot法观察ERK1/2及p38MAPK对酸诱导的软骨细胞自噬的影响。结果 pH 5.5和pH 6.0胞外酸化刺激均能明显升高软骨细胞自噬水平(P<0.01);与pH 7.4组比较,酸化组软骨细胞Beclin-1 mRNA及LC3、磷酸化的ERK1/2和p38MAPK蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),且自噬小体数量增多,ASIC1a阻断剂组自噬水平及ERK1/2、p38磷酸化蛋白表达水平较酸化组明显降低(P<0.01),且自噬体数量减少;与pH 6.0组相比,ERK1/2磷酸化抑制剂处理后,Beclin-1 mR-NA和LC3蛋白的表达均下调(P<0.05,P<0.01),而p38磷酸化抑制剂组自噬水平则无明显变化。结论胞外酸化环境下能诱发软骨细胞自噬,阻断ASIC1a能明显减弱酸化诱导的软骨细胞自噬,其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。     

Baicalin mitigated IL-1β-Induced osteoarthritis chondrocytes damage through activating mitophagy

Mitophagy is related to chondrocyte homeostasis and plays a key role in the progress of osteoarthritis (OA). Baicalin has a protective effect on OA chondrocytes, the aim of this study was to explore whether the effect of Baicalin on IL-1β-induced chondrocyte injury is related to the regulation of mitophagy. The expression of collagen II in chondrocytes was detected to identify chondrocytes. The effects of different concentrations of Baicalin (10, 20 and 40 μM), autophagy inhibitor (3-Methyladenine), autophagy activator (rapamycin) and Baicalin combined with PI3K agonist (740Y-P) on the viability (cell counting kit 8), apoptosis (flow cytometry), autophagy activation (Monodansylcadaverine staining) and mitochondrial membrane potential (JC-1 kit) of IL-1β-induced chondrocytes were evaluated. The co-localization of autophagosome and mitochondria was determined by immunofluorescence. Apoptosis-, autophagy-, PI3K/AKT/mTOR pathway- and mitophagy-related proteins were detected by western blot. Our result revealed that Baicalin and rapamycin facilitated cell viability, autophagy and mitophagy, elevated mitochondrial membrane potential and suppressed apoptosis of IL-1β-induced rat chondrocytes. In addition, Baicalin and rapamycin upregulated the levels of Bcl-2, Beclin 1, LC3-II/LC3-I, p-Drp1, PINK1 and Parkin as well as downregulated the levels of Bax, cleaved caspase-3, P62, p-PI3K/PI3K, p-mTOR/mTOR and Drp1 in IL-1β-induced rat chondrocytes. However, 3-Methyladenine did the opposite effects of Baicalin and 740Y-P reversed the effects of Baicalin on IL-1β-induced rat chondrocytes. In conclusion, Baicalin activated mitophagy in IL-1β-induced chondrocytes by inhibiting PI3K/AKT/mTOR pathway and activating PINK1/Parkin and PINK1/Drp-1 pathway, thereby reducing the chondrocyte injury.     

Cornin protects astrocytes against autophagy induced by cerebral ischemia-reperfusion via PI3K/Akt/mTOR pathway

OBJECTIVE The purpose of this study was to investigate the effect of cornin against astrocytes autophagy induced by cerebral ischemia-reperfusion and its mechanism. METHODS In vitro, U87 cells were used to establish oxygen glucose deprivation/reperfusion(OGD/R) as a cerebral ischemia model. In vivo, a SpragueDawley(SD) rat middle cerebral artery occlusion(MCAO) model was used to evaluated the effects of cornin against autophagy in astrocytes. RESULTS The results demonstrated that cornin was able to increase the ratio of apoptosis regulator Bcl-2/Bax and decrease the level of cleaved-caspase-3 protein. Similarly, cornin reduce the rate of apoptotic cells by flow cytometry. In addition, cornin(100 nmol·L~(-1)) decreased the expression of microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3 B(LC3-Ⅱ) and Beclin-1 protein, increased the level of p62,and upregulated phosphorylated protein kinase m TOR(m TOR), phosphorylated(p) RAC α serine/threonine protein kinase(Akt) in OGD treated U87 cells. However,following PI3 K inhibitor LY294002 and m TOR si RNA reversed this result. Cornin(10 mg · kg~(-1)) significantly reduced the cerebral infarction volume and the leakage rate of blood-brain barrier(BBB). The expression of autophagy proteins(LC3-Ⅱ, Beclin-1, P62) and apoptosis-associated proteins(Bcl-2/Bax, cleaved caspase-3) in brain tissue showed the similar results as in cells. Similarly, PI3 K inhibitor LY294002 was able to reversed the protective effect of cornin and upregulate autophagy-associated proteins. In addition, immunohistochemistry staining was applied for Neu N, GFAP, LC3 B and Beclin-1, and cornin could alleviated pathological injury 24 h after ischemiareperfusion. CONCLUSION These results indicated that cornin against astrocytes autophagy induced by cerebral ischemia-reperfusion through PI3 K/Akt/m TOR signaling pathway.     

AKT/TSC2/p70S6K signaling pathway is involved in quinocetone-induced death-promoting autophagy in HepG2 cells

Quinocetone (QCT, 3-methyl-2-quinoxalin benzenevinylketo-1, 4-dioxide) is widely used as a veterinary drug and animal feed additive in China. Although it promotes growth and improves feed efficiency, QCT’s in vitro and in vivo toxicities remain uncertain. This study was conducted to explore the mechanism of QCT-induced autophagy in HepG2 cells. By the results obtained from monodansylcadaverine (MDC) staining, ultrastructural observation by transmission electron microscopy (TEM), as well as Western blotting analysis for LC3, p62, and Beclin-1, it was demonstrated that QCT induced autophagy in HepG2 cells. Furthermore, PI3K/AKT inhibitor significantly enhanced QCT-induced autophagy, while TSC2 knockdown attenuated this process. In addition, inhibition of autophagy by pharmacological approach remarkably increased the viability of QCT-treated cells detected by MTT assay, suggesting that QCT-triggered autophagy may play as a promotion mechanism for cell death. Meanwhile, apoptosis was markedly downregulated after autophagy blockage, and evaluated by flow cytometry and Western blotting analysis for caspase-3 cleavage. Consequently, these results suggested that QCT-induced autophagy was mediated by AKT/TSC2/p70S6K signaling pathway, and inhibition of autophagy promoted QCT-treated cell survival by attenuating apoptosis.     

苍附导痰丸含药血清调控大鼠卵巢颗粒细胞自噬的作用

目的:研究苍附导痰丸含药血清调控大鼠卵巢颗粒细胞(GCs)自噬的作用。方法:将3月龄SD大鼠分为生理盐水组(生理盐水,灌胃)、卵巢刺激素(FSH)注射组(10.71 IU/kg,皮下注射)和苍附导痰丸高、中、低剂量灌胃组[0.5、1、2 mg/g(以生药量计),灌胃],每组6只,每天皮下注射/灌胃给药1次,连续3天;末次给药后,于腹主动脉采血,获取各组大鼠的含药血清。将大鼠GCs分为空白对照组、模型组、FSH组(阳性对照)和苍附导痰丸高、中、低剂量组,除空白对照组直接加入生理盐水组大鼠血清100μL外,其余各组均先给予丙酸睾丸酮诱导以复制自噬模型,然后模型组加入生理盐水组大鼠血清100μL,各给药组分别加入对应药物组含药血清100μL。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中雌二醇(E2)、孕激素(P)的含量,采用Western blot法检测各组GCs中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白的相对表达量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组细胞中PI3K、Akt、mTOR和自噬相关因子Beclin 1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62 mRNA的相对表达量。结果:与空白对照组比较,模型组细胞上清液中E2含量以及细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.01),Beclin 1、LC3Ⅰ、LC3ⅡmRNA的相对表达量均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,FSH组和苍附导痰丸中、高剂量组细胞上清液中E2含量显著升高,细胞中Beclin 1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62 mRNA的相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);各给药组细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:苍附导痰丸可能是通过激活PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白及其mRNA的表达,从而抑制GCs的自噬。     

PD-L1过表达在DENV-2诱导血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用机制

目的　探讨PD-L1过表达在Ⅱ型登革病毒（DENV-2）影响血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用及机制。方法　以血管内皮细胞EAhy926为研究对象,以含梯度DENV-2（1×108~2×109 pfu/L）的无血清培养基处理细胞24 h和48 h,同时以无血清培养基处理细胞作为对照组,无血清培养基加入空白孔作为调零孔,MTT法检测细胞增殖活力。以PD-L1过表达慢病毒液和空载慢病毒液处理细胞,分别设空载对照组和转染组。DENV-2（1.2×109 pfu/L）处理细胞12、24、48 h作为DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组,同时设置对照组（无血清培养基处理）;另以DENV-2处理空载对照组和转染组48 h,以蛋白印迹法检测LC3B、Beclin-1及Bcl-2蛋白表达变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果　1×108~2×109 pfu/L DENV-2可剂量依赖性抑制EAhy926细胞增殖,DENV-2 24 h和48 h的半数抑制浓度（IC50）分别是1.8×109 pfu/L和1.2×109 pfu/L。与对照组比较,DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,细胞总凋亡率增加（均P＜0.05）。与空载对照组比较,转染组PD-L1蛋白表达上调（P＜0.01）。DENV-2处理48 h,与空载对照组相比,转染组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,细胞总凋亡率降低（均P＜0.01）。结论　DENV-2通过上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达及下调Bcl-2蛋白表达,从而诱导EAhy926细胞自噬和凋亡,而过表达PD-L1可抵抗DENV-2的诱导效应。     

积雪草酸联合奥沙利铂对结肠癌HCT116细胞凋亡、自噬和焦亡的调控作用研究

目的:探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)联合奥沙利铂(oxaliplatin,OXP)对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、自噬和焦亡的调控作用.方法:采用CCK8法检测AA、OXP、AA与OXP联用对HCT116细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;JC-1染...     

脂多糖对肺泡巨噬细胞自噬水平的影响

目的观察脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞(NR8383)后,对细胞自噬水平的影响。方法 将体外培养的NR8383细胞分成LPS处理组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,培养8h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白水平,自噬体检测:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞LC3 mRNA的转录水平、采用Western blot检测细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平。结果 LPS处理组细胞培养上清液中TNF-α含量(pg/ml)较PBS对照组明显升高(639.20±43.49 vs 6.47±1.23,P<0.01),细胞LC3 mRNA转录水平较PBS对照组上调(3.4±0.36倍,P<0.01),细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PBS对照组升高(1.03±0.15 vs 0.53±0.12,P<0.01)。结论 LPS刺激NR8383细胞后,细胞自噬体形成增多,其可能参与了NR8383肺泡巨噬细胞的炎症反应调控。     

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^-1 ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。