海洋细菌抗菌筛选及深海独岛枝芽胞杆菌A493活性物质分离鉴定

以水稻黄单胞菌等植物病原菌为指示菌,采用平板对峙法对411株海洋细菌进行了抗菌筛选,初筛获得具有抗菌活性的海洋菌株81株,复筛获得具有稳定抗菌活性的菌株7株,最后通过测定抗菌谱,得到1株抗菌谱特异并且稳定拮抗水稻黄单胞菌的深海独岛枝芽胞杆菌（Virgibacillus dokdonensis）A493.对水稻白叶枯病害的温室生防实验表明,经过A493无菌发酵上清波处理,水稻生长20 d后对水稻白叶枯病害的防治效果达到了66.7％,且对水稻的正常生长无不良影响.通过离子交换色谱法提取,再经2次薄层层析硅胶板回收分离,得到了纯化活性物质,经过ESI-MS＂分析,初步判断活性物质分子量为317 Da.Doskochilova系统纸层析结果显示活性物质很可能为新的氨基糖苷类物质.     

血管活性肠肽的固相合成及其体外抗菌活性研究

采用Na-芴甲氧羰基（FMOC）作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成了血管活性肠肽,以最小抑菌浓度（MIC）评价其体外抗菌活性。高效液相色谱和质谱分析表明,所合成的血管活性肠肽的纯度为95.2%,相对分子质量为3326.5。血管活性肠肽对几种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有不同程度的抑制活性,其中对E.coli和P.aeruginosa的抑制效果最好。     

深海独岛枝芽孢杆菌A493产活性物质特性与发酵条件优化研究

以一株抗菌谱较窄并且稳定拮抗水稻黄单胞菌的深海独岛枝芽孢杆菌(V.dokdonensis)A493为研究对象,研究了其产活性物质特性及发酵条件的优化。A493产抗菌活性物质可以耐受100℃的高温,在pH值4～10和紫外照射环境中活性稳定,可以通过3kDa的超滤管,对蛋白酶不敏感,只能溶解于水和甲醇。酸沉淀和硫酸铵沉淀实验结果排除了活性物质是脂肽类物质的可能性,初步研究显示该活性物质可能是极性较强的水溶性活性小分子新化合物。确定A493最佳发酵条件为:接种菌龄12h、接种量1%、发酵时间48h、发酵温度28℃、培养转速180r·min-1、250mL锥形瓶中的装液量为70mL。优化后,其单位体积发酵液抑菌效果提高了18.7%,活性物质对水稻黄单胞菌的抑菌效价相当于15.6μg·mL-1的标准链霉素。     

载铜蒙脱石对水产病原菌的抗菌活性及其机理

通过阳离子交换反应,合成载铜蒙脱石,并研究它对水产病原菌的抗菌效果。X射线衍射分析显示：载铜反应前后,蒙脱石的（001）面网间距从原先的1．544nm增加到了1．588nm,表明铜是以水合阳离子或复合阳离子形式进入蒙脱石晶格层间位置。体外抗菌试验表明：蒙脱石未显抗菌活性,而载铜蒙脱石对所试水产病原菌均有很强的抑制和杀灭作用,它对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌的最小抑菌浓度分别为150,150,75mg／L,最小杀菌浓度分别为600,600,300mg／L。载铜蒙脱石的抗菌能力是两方面因素的协同作用：一方面是其表面剩余正电荷能从水介质中大量吸附表面带负电荷的细菌;另一方面是矿物释放的铜离子对细菌的抑制和杀灭作用。     

含氮姜黄素类似物的合成及其酪氨酸酶抑制效应

通过芳香醛与4-乙酰基吡啶在酸碱条件下催化缩合,合成了4个单羰基姜黄素类似物A1～A4,并研究了其对酪氨酸酶的抑制活性。结果表明,3-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-(4-吡啶基)-2-烯-1-酮对酪氨酸酶具有强抑制活性,半数抑制浓度（IC50）为45.1μmol/L,是姜黄素（IC50= 97.1μmol/L）的抑制活性的2.2倍。抑制动力学研究表明,3-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-(4-吡啶基)-2-烯-1-酮对酪氨酸酶的抑制作用类型属于竞争性抑制。     

氰基苯氧氟酰胺的合成及其抗柑橘霉菌活性

为了挖掘新型的抗柑橘霉菌活性先导物，以邻羟基苯甲腈、溴氟乙酸乙酯和胺为原料，设计、合成了15个氰基苯氧氟酰胺化合物，通过1HNMR、13CNMR和MS鉴定了产物结构；采用菌丝生长速率法测定了这些化合物对柑橘青霉菌（Penicillium italicum）和绿霉菌（Penicillium digitatum）的抑制活性。结果表明，这些化合物对所测菌种均有一定的抑制活性。其中，化合物Ⅰa〔2-（2-氰基苯氧基）-2-氟-N-苯基乙酰胺〕、Ⅰf〔N-（2-噻唑基）-2-（2-氰基苯氧基）-2-氟乙酰胺〕等6个化合物在200 mg/L质量浓度下对两种菌的抑制活性达到80% ~ 100%；化合物Ⅰh的抗菌活性最高，在50 mg/L质量浓度下对青霉菌和绿霉菌的抑制率分别为60.96%和53.95%，25 mg/L质量浓度下的抑制率也有30%以上。2-氰基苯氧氟酰胺化合物的抗柑橘青、绿霉菌活性均优于2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）。     

水稻黄单胞菌生物抑制剂的发酵及条件优化

本研究通过分析不同的培养基条件下海绵放线菌对水稻黄单胞菌的抑菌效果,以获取最优的发酵培养基配方。研究发现7种培养基中,ISP2培养基是最优的海绵放线菌的发酵培养基,添加不同种类和浓度的附加碳源和氯化钠对发酵液的抑菌效果没有明显的改善。由实验结果可知,添加15 g/L硫酸铵的ISP2培养基是用于产活性物质抑水稻黄单胞菌生长的海绵放线菌发酵培养的最佳配方。     

一种转葡萄糖苷酶基因的克隆表达及其生物催化合成α-熊果苷

通过一步法克隆试剂盒将来自野油菜黄单胞菌的转葡萄糖苷酶基因与表达载体pET28a同源重组,构建质粒pET28a-agl,并转化到不同感受态细胞中,筛选出高效表达转葡萄糖苷酶的基因工程菌E.coli BL21 Gold(DE3)plysS pET28a-agl,以催化合成α-熊果苷。利用IMAC亲和层析,获得转葡萄糖苷酶用于其酶学性质的研究。催化合成α-熊果苷的较佳反应条件为:转葡萄糖苷酶的质量浓度0.272 5 g/L,对苯二酚质量浓度11 g/L,麦芽糖浓度1.1 mol/L,磷酸盐缓冲液浓度100 mmol/L(pH=6.5),30℃下摇床反应3 h。研究发现,反应产物α-熊果苷对转葡萄糖苷酶反应有轻微的抑制作用;1 mmol/L K~+对转葡萄糖苷酶的相对酶活有提高作用,1 mmol/L Cu~(2+)几乎能完全抑制该酶活性。     

水杨醛双Schiff碱与其铜配合物的合成与抗菌活性研究

文章首先合成了水杨醛双SchiffN,N’-双（2-水杨醛亚胺基乙基）-2,6-吡啶二甲酰胺（Iia）,并以它为配体合成了铜配合物,通过波谱分析对其结构进行了表征。并采用固体培养基抑菌圈法和液体培养基比浊法对了Schiff碱及其铜配合物进行抗菌活性的测定。结果表明,水杨醛双Schiff碱及其铜配合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抗菌活性,并且水杨醛双Schiff碱铜配合物的抗菌活性比水杨醛双Schiff碱的抗菌活性强。     

1,3-二苯基-3-（苯胺基）-1-丙酮衍生物对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

利用Mannich反应合成了24个1,3-二苯基-3-（苯胺基）-1-丙酮衍生物（其中8个为新化合物）,通过测定该系列化合物对α-葡萄糖苷酶活性半抑制浓度来评定其抑制活性,探索化合物分子中苯环上取代基对α-葡萄糖苷酶催化活性的影响。结果表明：新化合物24对α-葡萄糖苷酶的抑制活性稍好,IC50值为57.9μmol.L-1,其余大部分化合物对α-葡萄糖苷酶的IC50值大于100μmol.L-1,说明新化合物24苯环上取代基种类、数目和位置对α-葡萄糖苷酶抑制活性有明显的影响。动力学分析表明该系列化合物为α-葡萄糖苷酶的非竞争性抑制剂。     

Ozone for Plant Pathological Applications

The effect of ozone on Xanthomonas oryzae pv. oryzae, a bacterium causing leaf blight disease in Paddy (Oryza sativa), was studied in culture. Viability of this pathogen was lost by flushing ozone at a flow rate of 300 ml/min for 3 minutes in culture condition. The inhibitory effect was dependant on cell concentration and time. With a cell concentration of 0.008 OD at 540 nm, the inhibition of the bacterium was total and no growth was observed in nutrient agar plates even after 36 hrs. With higher concentrations of cells (0.08 OD and above) the bacterium survived, though there was a bacteriostatic effect initially. Conductivity of the cell suspension increased after ozone treatment owing to altered cell membrane permeability and subsequent release of cellular contents. As the bacterium is seed borne, washing the paddy seeds with ozonized water would help control the bacterial blight of rice, the most serious disease of rice in Asia.     

Effect of l-cysteine modified ZnS quantum dots on the growth of Aspergillus oryzae

l-cysteine (L-cys) modified ZnS (LZS) quantum dots (QDs) were synthesized by a two-step way. The effects of LZS QDs on the phenotype, biomass, morphology and extracellular protein content of Aspergillus oryzae (A. oryzae) were studied in detail for the first time. The results illustrated that both uncoated and coated QDs had a cubic blend ZnS structure, and the particle size was about 4.0 and 4.3 nm, respectively. It was found that LZS QDs acted as an activator to stimulate the growth of A. oryzae in both solid and liquid media, and the biomass with 50 μg/mL (25 μg/mL) QDs in solid (liquid) medium was the highest and was about 1.65 (3.74) times higher than that in control medium (without QDs). The data of ultraviolet–visible (UV–Vis) revealed that the protein concentration of A. oryzae was 824.904 and 467.748 μg/mL relating to liquid medium with and without QDs, respectively. This work can provide a new way to increase the production of A. oryzae or microorganisms.     

聚乙烯醇丝固定化米根霉发酵产L（+）-乳酸

以聚乙烯醇(PVA)丝为吸附材料的立体载体,固定化米根霉菌种As3.3462发酵生产乳酸。与游离发酵相比,摇瓶单批固定化发酵乳酸的最终质量浓度提高了25%,发酵时间缩短了33%。分别在摇瓶和鼓泡式反应器中进行了载体的稳定性研究,摇瓶中可稳定发酵10批次,平均转化率为65%,平均产率为1.1g/(L.h);1L鼓泡式生物反应器的放大实验中进行了9批半连续发酵实验,乳酸质量浓度最高达到55.68g/L,转化率69.60%。     

米曲霉菌体光学拆分N-乙酰-DL-苯甘氨酸的动力学研究

用液相培养基培养的米曲霉菌体直接拆分N 乙酰 DL 苯甘氨酸,并对该酶促反应进行了初步研究。考察了反应温度、pH值、金属离子、底物浓度、产物浓度等因素对反应的影响。结果表明,酶促反应的最适反应温度和pH值分别为52℃和7.0,当底物浓度小于200mmol·L-1时,反应符合Michaelis Menten方程,当底物浓度大于200mmol·L-1时,反应存在底物抑制现象。进一步研究发现水解反应也存在着产物抑制现象。     

米曲霉果糖基转移酶催化合成蔗糖-6-乙酸酯

对来自于米曲霉(Aspergillus oryzae)的果糖基转移酶催化蔗糖(s)与葡萄糖-6-乙酸酯(g-6-a)生成蔗糖-6-乙酸酯(s-6-a)的反应进行了研究。考察了底物质量比m(g-6-a)∶m(s)、反应温度、反应时间、pH、酶的质量浓度对反应的影响。单因素实验结果表明,最优的催化反应条件为:反应温度50℃、pH=6.2、m(g-6-a)∶m(s)=1∶3、反应时间48 h、酶的质量浓度为4.0 g/L。在该条件下,g-6-a的摩尔转化率可达26.69%。     

Aspergillus oryzae SAICAR合成酶基因的克隆及反义表达载体的构建

目的 构建Aspergillus oryzae新的红色表现型菌株用于天然色素生产。方法 构建Aspergillus oryzaeRIB40 cDNA文库,应用BLAST网络服务对Aspergillus oryzae RIB40 cDNA文库的EST数据进行同源性比较,从EST克隆扩增Aspergillus oryzae类SAICAR合成酶基因(sh1919f片段),反向插入pUSA真核表达载体。结果 完成反义表达载体的构建。Aspergillus oryzae类SAICAR合成酶氨基酸序列与Pichia jadinii、Saccharomyces cerevisiae和Schizosac-charomyces pombe的SAICAR合成酶氨基酸序列具有高度同源性。结论 类SAICAR合成酶基因反义表达载体的构建为其转染入Aspergillus oryzae菌株筛选红色突变菌株奠定了实验基础。     

应用KMnO_4滴定法快速检测米根霉发酵液中富马酸含量

应用KMnO4滴定法快速检测米根霉发酵液中富马酸含量,通过研究富马酸滴定体系下的酸度以及发酵培养基中的葡萄糖和代谢副产物如乳酸、苹果酸、乙醇、草酰乙酸、丁二酸等对KMnO4滴定结果的影响,发现应用KMnO4滴定法测定米根霉发酵液中富马酸的含量,与HPLC检测法测定的含量误差在3%以内,平均回收率为96.86%,相对标准偏差(RSD)为0.27%.以上结论表明,KMnO4滴定法可有效应用于快速检测米根霉发酵液中富马酸的含量.     

霉菌细胞壁多糖对镍、铁重金属离子的生物吸附

This paper reports on the adsorption characteristic of heavy metal ions (Ni^2 and Fe^3 ) using a novel biosorbent, prepared from cell walls of Rhizopus oryzae. The optimum operating conditions are investigated in both single ion system and binary system.