抗乳腺癌单抗CDI 315B可变区基因的序列分析

目的：克隆抗乳腺癌ＣＤＩ３１５Ｂ单抗可变区基因,并对其进行序列分析。方法：利用前导肽序列设计引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从分泌抗人乳腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＣＤＩ３１５Ｂ分离克隆了抗体轻重链可变区基因,用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定扩增的ＣＤＩ３１５Ｂ单抗的ＶＫ和ＶＨ基因的序列,对其进行序列分析。结果：和国际标准的小鼠Ｋａｂａｔ分类体系进行对比分析,ＣＤＩ３１５Ｂ单抗的ＶＫ属于第４或第５组的     

肝癌单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析

目的：获取抗人原发性肝癌单克隆抗体重、轻链可变区基因。方法：从分泌高亲和力的抗人原发性肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＳＭ８．１１中提取细胞的总ＲＮＡ，以随机引物反转录合成ｃＤＮＡ，以特异引物进行ＰＣＲ，扩增了单抗的重链可变区（ＶＨ）及轻链可变区（ＶＬ）基因，并进行了序列分析。结果：ＶＨ基因片段长度为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸残基；ＶＬ基因片段长度为３２４ｂｐ，编码１０７个氨基酸残基。两者均有４个     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

抗人胃癌单克隆抗体3H11可变区基因的克隆及序列分析

采用通过引物及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，从分泌抗胃癌单克隆抗体的杂交瘤细胞３Ｈ１１总ＲＮＡ中分别扩增轻重链可变区基因并克隆入相应载体。序列分析表明３Ｈ１１ＶＬ属ＶＫＩＶ亚群，Ｊ源于ＪＫ４。３Ｈ１１ＶＨ属ＶＨＩＩＢ亚群，Ｊ及Ｄ区分别来自ＪＨ４及ＤＳＰ２。     

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与？…

获得抗血管内皮生长因子１６５抗体的轻重链可变区基因。方法从分泌具有中和抗血管皮生长因子１６５活性的单抗杂交瘤细胞株Ｖｍｄ１１中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆该单抗的轻，重链可变区基因并进行序列分析。     

抗人胃癌单克隆抗体3H11可变区基因的克隆及序列分析

采用通用引物及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，从分泌抗胃癌单克隆抗体的杂交瘤细胞３Ｈ１１总ＲＮＡ中分别扩增轻重链可变区基因并克隆入相应载体。序列分析表明ＳＨ１１ＶＬ属ＶｋＩＶ亚群，Ｊ源于ＪＫ４。３Ｈ１１ＶＨ属ＶＨＩＩＢ亚群，Ｊ及Ｄ区分别来自ＪＨ４及ＤＳＰ２。     

一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制

目的 研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法 采用重组人促红细胞生存素（ｒｈＥＰＯ）为抗原,常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经细胞融合、ＥＬＩＳＡ筛选、有妻稀释亚克隆获得抗人ＥＰＯ杂交瘤,以免疫印迹和快速Ｉｇ亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果 经筛选获得１株稳定分泌的抗ｒｈＥＰＯ单抗的杂交瘤细胞株（１Ｄ１）。亚型鉴定为ＩｇＧ２ｂ,轻链为ｋ链,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析证实该单抗为ｒｈＥＰＯ特异性识别。结论 成功获得１株可分泌特异性识别ｒｈＥＰＯ的单克隆抗体的杂交瘤。     

一组抗HCV核壳蛋白的单克隆抗体的制备及鉴定

目的 获取ＨＣＶ核壳蛋白抗原结构新的信息。方法 以基因重组的ＨＣＶ核壳蛋白区抗原免疫Ｂａｉｂ／ｃ小鼠,利用小鼠杂交瘤技术。结果 建立了４２株分泌抗ＨＣＶ区单克隆抗体（单抗）的杂交瘤细胞株。其抗体类别均为ＩｇＧ。经免疫印迹提示本组单抗与ＨＣＶ核壳蛋白有反应。结论 ＩＦＡ（免疫荧光）证实本组单抗能识别天然ＨＣＶ核壳蛋白抗原决定簇。     

食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定

目的 制备抗原食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体，用于寻找肿瘤的标志物和癌的病理诊断。方法 以食管癌组织核基质为抗原，采用足垫法免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，运用杂交瘤技术建立分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，制备食管癌细胞抗原片和食管癌冰冻切片，采用免疫组化检测并采用蛋白印迹法分析，鉴定是否为特异性单克隆抗体。结果 获得一细胞株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，１－７／Ｅ能与食管癌细胞和其他１０种癌细胞的核仁反应，不     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２轻链可变区（ＶＬ）基因并测定其核苷酸序列。方法用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。结果ＶＬ基因全长３３６ｂｐ，属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类（ＳｕｂｇｒｏｕｐⅡ），由种系基因的ＶＫ及Ｊ基因的ＭＵＳＪＫ２重排而成。该ＶＬ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｅｓｉｏｎＮｏ．ｇｂＡＦ０４４０７７）。结论该ＶＬ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２功能性轻链可变区基因。     

抗HSV－糖蛋白（gp30）单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

目的：获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白（ｇｐ３０）单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。方法：从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序列分析．结果：基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，含有维持抗体结构的半胱氨酸，序列内无终止码．结论：所克隆基因具备小鼠抗体重链可变区基因结构特征，与已确认的小鼠抗体ＶＨ基因有较高的同源性，隶属于Ｋａｂａｔ分类体系中的小鼠抗体重链（Ａ）亚组．     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5a蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立及应用

制备抗丙型肝炎（丙肝）病毒（ＨＣＶ）－ＮＳ５ａ重组蛋白的单克隆抗体（单抗），并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法通过常规细胞融合技术制备分泌单抗的杂交瘤细胞株，用含该杂交瘤细胞的腹水对石蜡包埋肝组织细胞中的ＨＣＶ－ＮＳ５ａ抗原进行免疫组化测定，同时用抑制法检测６７例丙肝血清中的ＨＣＶＮＳ５ａ和ＮＳ３抗体分布，并与ＮＳ３单抗的结果进行比较。结果融合后的阳性克隆中筛选出４株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，命名为８Ｂ２，６Ｆ１１，４Ｃ６和７Ｄ９。这４株单抗与ＮＳ５ａ抗原有良好的反应性；与ＨＣＶ核心区多肽，ＮＳ３区表达多肽及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的表面抗原均无反应。免疫组织化学检测显示，在ＨＣＶ感染肝组织中，ＮＳ５ａ抗原阳性占５４．９％（１７／３１），而ＮＳ３抗原阳性占５１．６％（１６／３１），抗原分布多呈包涵体分布，少数病例为胞浆型，１例ＮＳ５抗原呈核型表达。在６７例抗ＨＣＶ阳性血清中，ＮＳ５抗体阳性４０例，占５９．７％，而ＮＳ３阳性４７例，占７０％。结论此法制备的单抗有强特异性，在开展ＨＣＶ免疫组织化学研究上具有广阔应用前景。     

抗CD4单克隆抗体可变区基因克隆及测序

目的：获取抗ＣＤ４单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因，为构建抗ＣＤ４嵌合抗体打下基础。方法 从分泌抗人ＣＤ４ ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系中提取总ＲＮＡ，用家族特异性引物进行逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分别扩增出重链可变区（ＶＨ）基因及轻链可变区（ＶＬ）基因。将ＰＣＲ产物克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体，然后转化ＪＭ１０９细菌。并用全自动 ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ及ＶＬ基因序列进行测定。结果：ＶＨ基因为３５１     

鼠源性抗人成骨肉瘤抗体轻链基因克隆及其结构分析

目的 扩增与人成骨肉瘤细胞特异结合的鼠源性单克隆抗体轻链基因。并对其基因序列进行分析。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法从分泌鼠源抗入成骨肉瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞（７Ｆ６Ｂ）扩增出抗体轻链基因，克隆ｐＧＥＭ－Ｔ载体，以全自动测序仪测定其轻链基因序列并对其结构进行分析。结果 ７Ｆ６Ｂ轻链基因由６５６ｂｐ组成，编码２１８个氨基酸，序列分析证实该基因可变区序列符合小鼠Ｉｇ轻链基因的氨基酸序列特征。结论 区得的鼠     

抗HSV—糖蛋白（gp30）单克隆抗体重键可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序分析。     

CD23单克隆抗体的研制及其鉴定

目的：制备高度特异性和高纯度的抗ＣＤ２３单克隆抗体（ＣＤ２３ＭｃＡｂ）。方法：用ＥＢＶ感染的人Ｂ淋巴细胞（ＲＰＭＩ－８８６６）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,采用杂交瘤技术,细胞ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ等方法制备、纯化和鉴定了ＣＤ２３ＭｃＡｂ。结果：筛选出了强分泌抗Ｂ细胞膜ＣＤ２３分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（２Ｂ６）。结论：该单抗对Ｍｒ４５×１０３的ＣＤ２３分子反应具有高度特异性。     

抗人精浆蛋白单克隆抗体轻,重链可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗人精浆蛋白单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础。方法；从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＸＲ分离获得了γ－Ｓｍ－ＭｃＡｂ轻链可变区基因和重链可变区基因，分别克隆入ｐＵＣ１９质粒中，用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ，ＶＬ基因序列进行了分析。     

抗登革病毒Ⅰ～Ⅳ型特异性单克隆抗体的研制

用登革病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞，经ＰＥＧ融合处理，共获得９０株分泌登革病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。按照单抗质量标准，对杂交瘤细胞进行了严格的鉴定，筛选出１９株具有型特异的细胞株，再从中选出４个血清型的型特异的单抗组成诊断盒，可用于登革病毒的准确的鉴定和分型。     

一株抗独特型人单抗轻链可变区基因的克隆及序列测定

目的：探索抗独特型抗体模拟抗原的分子机理。方法：利用反转录－ＰＣＲ方法，从分泌肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗的杂交瘤细胞系（Ｃ８），成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ Ｉｄ人单抗轻链可变区基因，并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中，测定了此轻链可变区基因全序列。结果：经计算机分析，基因全长共３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，氨基酸序比较性分析发现所得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋     

直接分型检测单纯疱疹病毒PCR方法的研究

作依据单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ聚合酶基因的核苷酸序列，设计三个引物，一个上游ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性引物，一个下游ＨＳＶ－１型特异性引物和一个下游ＨＳＶ－２型特异性引物，建立分型检测ＰＣＲ的方法，ＨＳＶ－１的扩增产物是４７７ｂｐＨＳＶ－２扩增产物为３９９ｂｐ，扩增产物的克隆及序列分析表明，该方法特异，用此方法对ＢＡＬＢ／ｃ幼鼠中枢神经系统ＨＳＶ感染的脑标本进行了检测，进一步证实直接分型