miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其作用与机制

背景与目的 miR-200a-3p参与了多种肿瘤的生物学过程的调控,但在不同肿瘤中起着不同的作用（促癌基因或抑癌基因）。目前,其在胆囊癌中的作用尚不清楚。因此,本研究探讨miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生物学功能的影响与机制。方法 采用qRT-PCR法测定32例胆囊癌及癌旁组织、胆囊癌细胞系（GBC-SD、SGC-996、NOZ）及正常人胆囊上皮细胞系HGBEC中miR-200a-3p的表达。采用Lipofectamine? 3000试剂盒将GBC-SD及NOZ细胞系分别转染miR-200a-3p模拟物（miR-200a-3p过表达组）、miR-200a-3p抑制物序列（miR-200a-3p沉默组）及阴性对照序列（阴性对照组）。MTT实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞侵袭能力,MiRBD/Targetscan7.2/starBase2.0/miRtarbase网站预测miR-200a-3p的下游靶基因,并采用荧光素酶实验验证。Western blot检测上述3组细胞中靶基因与上皮间质转化（EMT）相关分子蛋白（E-cadherin、vimentin）的表达。结果 qRT-PCR结果显示,胆囊癌组织中miR-200a-3p表达量低于癌旁组织,所有胆囊癌细胞系中miR-200a-3p表达量低于正常人胆囊上皮系HGBEC（均P<0.05）。GBC-SD及NOZ细胞系转染后,与各自的阴性对照组比较,两种细胞的miR-200a-3p过表达组miR-200a-3p表达量明显升高、增殖与侵袭能力明显减弱,两种细胞的miR-200a-3p沉默组miR-200a-3p表达量明显降低、增殖与侵袭能力明显增强（均P<0.05）。在线网站预测显示,miR-200a-3p和Notch2存在潜在结合位点;荧光素酶实验显示,miR-200a-3p导致Notch2野生型质粒pmirGLO-Notch2-3''UT WT荧光素酶活性明显降低,而miR-200a-3p对Notch2突变型质粒pmirGLO-Notch2-3''UTR MUT的荧光素酶活性没有影响。Western blot结果显示,两种细胞的miR-200a-3p过表达组与各自的阴性对照组比较,E-cadherin蛋白表达量升高、vimentin蛋白与Notch2蛋白表达量降低,而3种蛋白在两种细胞的miR-200a-3p沉默组则呈相反的变化（均P<0.05）。结论 miR-200a-3p在胆囊癌中表达降低,并可能起了抑癌基因的作用,其抑制胆囊癌细胞增殖和侵袭的机制可能与靶向下调Notch2从而抑制EMT过程有关。     

miR-542-3p对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响及其靶基因预测

目的 明确miR-542-3p对骨肉瘤细胞系HOS和SAOS2细胞侵袭能力的影响,通过生物信息学建立miR-542-3p靶基因调控网络,并探讨其潜在作用靶点。方法 使用miR-542-3p mimics转染HOS和SAOS2细胞,同时设立正常组（未转染）及阴性对照组（转染miR-neg mimics）,Transwell小室试验检测转染后细胞的侵袭能力。通过美国国立生物信息中心（NCBI）基因表达共享数据库（GEO）联合GEO2R平台,获取并分析miRNA-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的基因表达谱数据及其差异表达基因,进而使用miRNA预测数据库及Cytoscape软件,预测并建立miR-542-3p靶基因调控网络。实时荧光定量PCR验证miR-542-3p转染HOS和SAOS2细胞后,部分预测目标靶基因的mRNA表达水平变化。结果 miR-542-3p干预组HOS和SAOS2细胞的侵袭能力较正常组和阴性对照组明显降低（P均＜0.05）。数据库差异基因分析表明,miR-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的表达差异基因共有417个,其中185个基因表达下调。miRNA预测数据库预测的266个靶基因中,有14个与差异基因分析中得到的表达下调基因重合。实时荧光定量PCR分析得出,ILK、TBPL1、ETS1这3个预测靶基因在miR-542-3p干预组中的表达水平显著低于阴性对照组,差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 miR-542-3p通过下调ILK、TBPL1、ETS1显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭能力。     

长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一，研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达，进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程；膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调，促进恶性表型的发生，并可能受上游miR-342-3p的调控。因此，本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物），用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达；MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖；进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡；Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）；双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型，验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较，Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较，LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05），miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）；与LINC00313 siRNA组比较，共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中，LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达，miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示，与无处理的Li-7细胞移植瘤比较，LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低，肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低，而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调，LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达，进而促进HCC细胞的恶性表型。     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的: 研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法: 采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中(分别为过表达组和抑制剂组),并设置miR 阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果: 与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达(P<0.05),而HOXB4在骨肉瘤中高表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞减少(P<0.05)。敲低miR-181a-5p促进骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于S期细胞增加(P<0.05)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因系统验证HOXB4为miR-181a-5p的下游靶基因(P<0.05)。Western blot显示,过表达miR-181a-5p的HOS细胞中,HOXB4蛋白表达低于阳性对照组(P<0.05),而敲低miR-181a-5p的HOS细胞中HOXB4蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论: miR-181a-5p在骨肉瘤细胞中低表达,过表达miR-181a-5p能够抑制骨肉瘤细胞HOS增殖、周期和迁移能力,该作用可能通过靶向HOXB4发挥作用。     

长链非编码RNA MCM3AP-AS1在胆管癌细胞中的表达及其功能

背景与目的 长链非编码RNA MCM3AP-AS1（MCM3AP-AS1）在原发性肝癌、乳腺癌及胶质母细胞瘤等多种肿瘤中发挥癌基因功能,然而MCM3AP-AS1在胆管癌中的表达、功能及作用机制尚知之甚少。因此,本研究观察MCM3AP-AS1在胆管癌细胞中的表达及其对细胞增殖和侵袭的影响,并初步探讨机制。方法 采用qRT-PCR法检测胆管癌细胞株（CCLP、RBE、9810、HuCCT1）及人肝内胆管上皮细胞株（HIBEC）中MCM3AP-AS1的表达。将胆管癌细胞转染MCM3AP-AS1 siRNA后,以转染无义序列的胆管癌细胞为阴性对照,分别用MTT实验和Transwell实验检测细胞增殖与侵袭能力的变化,用Western blot法检测JAK/STAT3信号通路与上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的变化;最后,用JAK/STAT3通路激动剂白血病抑制因子（LIF）行功能拯救实验验证。结果 所有胆管癌细胞系中MCM3AP-AS1表达量均明显高于HIBEC（均P<0.05）。与阴性对照组比较,CCLP细胞转染MCM3AP-AS1 siRNA后增殖能力与侵袭能力均明显减弱（均P<0.05）;JAK1/2与STAT3表达量无明显变化（均P>0.05）,但p-JAK1/2与p-STAT3表达量明显降低（均P<0.05）,同时,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高、vimentin表达降低（均P<0.05）。功能拯救实验结果显示,同时加入LIF后,MCM3AP-AS1沉默对CCLP细胞后的以上作用均被取消,与阴性对照组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 胆管癌细胞中MCM3AP-AS1表达上调,MCM3AP-AS1可能通过活化JAK/STAT3通路与EMT过程而促进胆管癌细胞增殖和侵袭。     

miR-204-5p/TNFRSF12A轴对甲状腺乳头状癌细胞侵袭能力的影响及机制

背景与目的 前期，笔者通过生物信息学分析和验证发现miR-204-5p在甲状腺乳头状癌（PTC）中呈低表达，并可能是PTC发生发展中的关键分子。因此，本研究进一步探讨miR-204-5p对PTC细胞侵袭能力的影响及机制。方法 采用Transwell实验检测miR-204-5p过表达和敲低对PTC细胞系TPC-1细胞的侵袭能力影响；通过miRDB网站预测miR-204-5p下游靶基因，并采用Western blot实验、Transwell实验、GEPIA数据库分析及双荧光素酶报告基因实验验证。结果 Transwell实验结果显示，过表达miR-204-5p的TPC-1细胞侵袭能力明显降低，而miR-204-5p抑制的TPC-1细胞侵袭能力明显增强（均P<0.05）。miRDB网站预测显示，TNFRSF12A可能为miR-204-5p下游靶基因；Western blot结果显示，过表达miR-204-5p的TPC-1细胞TNFRSF12A表达下调，而miR-204-5p抑制的TPC-1细胞TNFRSF12A表达上调；过表达TNFRSF12A的TPC-1细胞侵袭能力明显增强，TNFRSF12A抑制的TPC-1细胞的侵袭能力明显降低；TNFRSF12A可逆转miR-204-5p对TPC-1细胞侵袭能力的影响（均P<0.05）。GEPIA数据库分析显示，TNFRSF12A在PTC组织中高表达。双荧光素酶报告基因实验结果显示，TNFRSF12A是miR-204-5p的靶基因。结论 miR-204-5p可靶向结合TNFRSF12A mRNA的3''UTR抑制TNFRSF12A的表达，而PTC细胞中miR-204-5p表达下调，削弱了其对TNFRSF12A表达的抑制，从而导致PTC细胞侵袭能力增强。     

长链非编码RNA PCAT19对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响及其作用机制

背景与目的 长链非编码RNA PCAT19（lncRNA PCAT19，简称PCAT19）在多种肿瘤中表达上调，且与恶性进展和不良预后密切相关。然而，PCAT19在胰腺癌中的表达、功能及作用机制尚无研究报道。笔者前期通过starBase数据库预测PCAT19可与miR-195-5p互补结合，因此，本研究探讨PCAT19在胰腺癌细胞中的表达与作用，及其与靶基因和相应miRNA的调控关系。方法 用qRT-PCR检测人胰腺导管上皮细胞系（HPNE）和胰腺癌细胞系（PANC-1、SW1990、HS766T、CFPAC-1）中PCAT19及miR-195-5p的表达。用双萤光素酶报告基因分析PCAT19与miR-195-5p的靶向结合作用。将PANC-1细胞分别转染PCAT19沉默序列si-PCAT19（si-PCAT19组）、阴性对照序列（si-NC组）、miR-195-5p抑制序列+si-PCAT19（共转染组）后，用MTT测定细胞增殖能力，Transwell测定细胞侵袭能力，Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 各胰腺癌细胞系中PCAT19表达水平均明显高于HPNE细胞，而miR-195-5p的表达水平均明显低于HPNE细胞（均P<0.05）。双萤光素酶实验显示miR-195-5p是PCAT19的靶miRNA。与si-NC组PANC-1细胞比较，si-PCAT19组PANC-1中miR-195-5p表达水平明显升高，细胞增殖能力与侵袭能力明显降低，β-catenin、c-Myc和cyclin D1表达水平明显下调（均P<0.05），而共转染组以上各项指标与si-NC组差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 PCAT19在胰腺癌细胞中表达升高，其可促进胰腺癌细胞增殖和侵袭，机制可能与调控miR-195-5p并影响Wnt/β-Catenin信号通路有关。     

结直肠癌干细胞中miR-520c-3p的表达及其对丙酮酸代谢的调控机制研究

背景与目的 研究显示,丙酮酸代谢的改变在结直肠癌的发生发展中起重要作用,而结直肠癌干细胞中microRNA（miRNA）表达异常可能与丙酮酸代谢密切相关。笔者前期通过TCGA数据库分析发现,miR-520c-3p在结直肠癌中表达升高,且与预后相关。然而,miR-520c-3p是否参与了丙酮酸代谢尚不清楚。因此,本研究探讨结直肠癌干细胞中miR-520c-3p的表达与丙酮酸代谢的关系。方法 选择人结肠癌细胞株,并从中分离纯化结直肠癌干细胞。检测过表达或敲低miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞及结直肠癌细胞增殖能力、丙酮酸氧化水平、乳酸产量的变化。用_D-［U-¹³C］葡萄糖孵育细胞,质量同位素分析追踪葡萄糖衍生碳的命运。通过miRNA序列分析和遗传学手段分析和鉴定miR-520c-3p的功能底物。结果 过表达miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞的增殖能力明显增强、丙酮酸氧化水平明显下降、乳酸产量明显升高（均P<0.05）;用_D-（U-¹³C）葡萄糖培养后,未标记的柠檬酸盐（m+0）明显增加,而高阶柠檬酸盐标记（m+1、m+4和m+5）明显减少（均P<0.05）。在敲低miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞的上述情况呈反向变化（均P<0.05）。过表达或敲低miR-520c-3p对结直肠癌细胞的上述指标均无明显影响（均P>0.05）。miR-520c-3p可以靶向线粒体丙酮酸载体1（MPC1）mRNA 3''UTR（P<0.05）。过表达miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞中MPC1的mRNA与蛋白水平均明显下降,敲低miR-520c-3p后则相反（均P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,低表达MPC1的结直肠癌患者预后较差（P<0.05）。敲低MPC1后,结直肠癌干细胞的丙酮酸氧化水平明显降低、乳酸产量明显增高、增殖能力均明显增强（均P<0.05）;用_D-［U-¹³C］葡萄糖培养后,未标记的柠檬酸盐（m+0）在敲低MPC1的结直肠癌干细胞中明显增加,而高阶柠檬酸盐标记（m+1、m+4和m+5）明显减少（均P<0.05）。同时敲低miR-520c-3p和MPC1后,结直肠癌干细胞丙酮酸氧化水平、乳酸产量、增殖能力均无明显变化（均P>0.05）。结论 结直肠癌中miR-520c-3p的高表达与较差的预后相关,其机制可能是miR-520c-3p靶向MPC1调控结直肠癌干细胞中的丙酮酸代谢水平,促进了结直肠癌干细胞的增殖。     

肝细胞癌中miR-574-5p的表达与作用及其与预后的关系

背景与目的 研究表明,miR-574-5p与多种肿瘤预后密切相关,但尚未见miR-574-5p与肝细胞癌（HCC）的关系报道。因此,本研究初步探讨miR-574-5p在HCC中表达及其与患者预后的关系。方法 用qRT-PCR检测130例HCC与癌旁组织及HCC细胞系（HepG2、MHCC-97H）与正常肝细胞系（L-02）中miR-574-5p的表达,用X-tile软件在患者生存数据中确定miR-574-5p表达量的最佳截断值后,分析miR-574-5p表达水平与患者临床病理因素于术后生存率的关系。分析HCC患者预后的影响因素。用TargetScan预测miR-574-5p的靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验验证与Western blot实验确证。结果 miR-574-5p表达水平在HCC癌组织中明显高于癌旁组织,在HCC细胞系中明显高于正常肝细胞系（均P<0.05）。miR-574-5p表达与TNM分期（P=0.002）和分化程度（P=0.000）明显有关。miR-574-5p高表达组的总生存率与无瘤生存率均明显低于miR-574-5p低表达组（均P<0.01）。单因素与多因素分析结果显示,miR-574-5p高表达（HR=4.101,95% CI=1.348~8.968,P=0.03）、III~IV期（HR=5.403,95% CI=1.266~13.860,P=0.02）及中低分化（HR=3.655,95% CI=2.165~6.984,P=0.00）是HCC患者总生存率的独立危险因素,miR-574-5p高表达（HR=7.168,95% CI=1.144~18.260,P=0.01）与III~IV期（HR=7.436,95% CI=1.123~20.916,P=0.00）是HCC患者无瘤生存率的独立危险因素。TargetScan软件发现FOG2存在和miR-574-5p直接结合位点,双萤光素酶报告基因实验表明FOG2是miR-574-5p的直接靶基因。Western blot结果显示,FOG2蛋白在HCC组织中的表达量低于癌旁组织;Pearson相关分析表明,HCC组织中miR-574-5p表达水平与FOG2蛋白表达水平呈负相关（r=-0.499,P<0.05）。结论 miR-574-5p在HCC中普遍升高,miR-574-5p高表达可作为HCC患者预后不良的分子标志物,miR-574-5p可能通过下调其靶基因FOG2发挥促癌作用。     

MicroRNA-199a-3p在肾癌中的表达及作用

目的 检测microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)在肾癌细胞株和组织中的表达情况并探究miR-199a-3p在肾癌细胞中的作用.方法 利用实时定量RT-PCR检测miR-199a-3p在肾癌细胞和组织中的表达水平;利用miR-199a-3p模拟物转染肾癌细胞786-0上调miR-199a-3p后,通过CCK-8、克隆形成、Transwell以及细胞周期检测来探究其在肾癌细胞中的作用.结果 miR-199a-3p在肾癌细胞中明显低表达,在78%(14/18)的肾癌组织中亦明显低表达;上调miR-199a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、存活和侵袭并能诱导细胞周期G1期阻滞.结论 我们的研究显示在肾癌中miR-199a-3p明显低表达并参与肾癌的发生、发展,这表明miR-199a-3p具有作为肾癌诊断和治疗靶点的潜能.     

SIX4和miR-103a-3p在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探究SIX同源盒蛋白4（SIX4）、微小RNA（miR）-103a-3p在胆囊癌组织中的表达情况,以及二者对胆囊癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 胆囊癌组织及癌旁组织取自永州市中心医院2019年10月至2021年9月32例接受手术治疗的胆囊癌患者,并将体外培养的胆囊癌细胞系GBC-SD分为对照组、mimic NC组、miR-103a-3p mimic组、miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组、miR-103a-3p mimic+SIX4组。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测SIX4 mRNA、miR-103a-3p水平;蛋白印迹法检测SIX4、增殖细胞核相关抗原Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）以及基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况。双荧光素酶验证SIX4 mRNA 3’UTR与miR-103a-3p的结合作用。结果 与癌旁组织相比,胆囊癌组织中SIX4 mRNA水平升高,miR-103a-3p水平降低（P<0.05）。miR-103a-3p靶向负调控SIX4。与对照组、mimic NC组比较,miR-103a-3p mimic组细胞中SIX4 mRNA和蛋白水平,OD₄₅₀,侵袭数量,Ki-67、PCNA、MMP2、MMP9蛋白水平降低,miR-103a-3p水平升高（P<0.05）;与miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组比较,miR-103a-3p mimic+SIX4组上述各项指标均被逆转。结论 胆囊癌组织中SIX4水平升高、miR-103a-3p水平降低,过表达miR-103a-3p可能通过靶向抑制SIX4表达,从而抑制胆囊癌细胞增殖、侵袭。     

MicroRNA-106a-5p alleviated the resistance of cisplatin in lung cancer cells by targeting Jumonji domain containing 6

BackgroundCisplatin (DDP) is used for lung cancer therapy. MicroRNAs, small non-coding RNAs, may contribute to tumorigenesis as well as to drug resistance. We examined regulatory functions of miR-106a-5p in DDP-resistant lung cancer cells.MethodsDifferentially expressed miRNAs were provided by Gene Expression Omnibus (GEO) datasets and RT-qPCR examined RNA levels of miR-106a-5p and Jumonji domain-containing protein 6 (JMJD6), an enzyme causing lysine hydroxylation and arginine demethylation. Bindings were determined by luciferase reporter assay. Additionally, the half maximal inhibitory concentration (IC₅₀) of DDP was determined through Cell Counting Kit-8 (CCK-8) after treated by DDP (0, 6.25, 12.5, 25, 50 and 75 μM) and apoptosis rates were analyzed using flow cytometry. Besides that, migratory ability and invasiveness were examined by transwell. Western blot was for measuring protein levels of Bcl-2, Bax in apoptosis and E-cadherin, N-cadherin in epithelial-mesenchymal transition (EMT).ResultsThe IC₅₀ value of DDP-resistant A549 (A549/DDP) cells was higher, so were migration, invasion and N-cadherin in EMT while the apoptosis and E-cadherin in EMT were lower versus the parental A549 cells (no DDP resistance). MiR-106a-5p was low expressed in A549/DDP cells while its overexpression caused decreased migration, invasiveness and EMT but promoted apoptosis. JMJD6 was directly targeted and negatively regulated by miR-106a-5p. Inhibited JMJD6 decreased migratory ability, invasion and EMT but improved apoptosis. Moreover, knockdown of miR-106a-5p induced high level of JMJD6, migration, invasiveness and EMT but low apoptosis rates, which were restrained by JMJD6 suppression.ConclusionMiR-106a-5p/JMJD6 axis accelerated cell apoptosis and suppressed invasiveness, migration and EMT in A549/DDP cells.     

MiRNA-199a-3p in Plasma as a Potential Diagnostic Biomarker for Gastric Cancer

Background

MicroRNA (miRNA) has been shown the potential of cancer diagnosis. We investigated whether plasma miRNA expression could discriminate between patients with and without gastric cancer.

Methods

This study was divided into three steps: (1) miRNA microarray profiling on plasma samples from 20 gastric cancer patients and 20 healthy controls; (2) miRNA selection by real-time qRT-PCR on 30 pairs of plasma from patients and controls; and (3) qRT-PCR validation on an independent set of plasma from 180 gastric cancer patients, 80 healthy controls, and 20 patients with gastric precancerous diseases.

Results

Of the 959 human miRNAs analyzed by microarray, 37 up-regulated miRNAs and seven down-regulated miRNAs were found in gastric cancer plasma. Of the seven discrepant miRNAs validated on the plasma from 30 gastric cancer patients and 30 healthy controls, both miRNA-199a-3p and miRNA-151-5p were significantly elevated (p < 0.05) and were significantly reduced after surgery (p < 0.05) in gastric cancer patients. Further large-scale validation showed that these two miRNAs expressions in plasma were significantly higher in gastric cancer patients than healthy controls and patients with gastric precancerous diseases, respectively. However, only the expression of miRNA-199a-3p in plasma was significantly associated with tumor invasion and with lymph node metastasis and tumor, node, metastasis stage. This marker yielded an area under the receiver operating characteristic curve area of 0.837 with 80 % sensitivity and 74 % specificity in discriminating gastric cancer patients from healthy controls. In gastric cancer tissue, miRNA-199a-3p was expressed in the cytoplasm of tumor cells.

Conclusions

miRNA-199a-3p in plasma could be a novel potential diagnostic biomarker for gastric cancer detection.

     

长链非编码RNA 909靶向调控miR-194-5p/DACH1轴对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景与目的:长链非编码RNA 909(LINC00909)是一个新发现的长度约为2 kb的长链非编码RNA(lncRNA),在胶质瘤和白血病中被报道发挥癌基因的作用.然而LINC00909在胰腺癌中的作用鲜有报道.本研究旨探讨LINC00909在胰腺癌中的表达及其对患者预后的影响,以及LINC00909与其调控网络对胰...     

Involvement of the insulin-like growth factor I receptor and its downstream antiapoptotic signaling pathway is revealed by dysregulated microRNAs in bladder carcinoma

ObjectiveUrothelial carcinoma is one of the most common pathological types of bladder cancer. Several studies have shown that dysregulated microRNAs (miRNAs) play an important role in bladder cancer progression. We performed the present miRNA microarray analysis in samples of urothelial carcinoma of the bladder and adjacent normal bladder tissue from Taiwanese patients to investigate dysregulated miRNAs.Materials and methodsTo detect dysregulated miRNAs in urothelial carcinoma of the bladder, samples of tumor and adjacent normal tissues were collected from 10 patients. Tissue samples from three patients were subjected to miRNA microarray analysis, and the remaining tissue samples from the other seven patients were used to validate the results obtained from the microarray data. Potential targets of these dysregulated miRNAs were identified using online databases, including MicroCosm and TargetScan.ResultsA panel of 30 differentially expressed miRNAs with at least fourfold differences in expression compared with normal controls, including 19 upregulated and 11 downregulated miRNAs, was generated. The expression levels of miR-30a-5p, miR-30a-3p, miR-99a, miR-130b, miR-133b, miR-135b, miR-145, miR-195, miR-204, and miR-214 were experimentally verified using real-time RT-PCR analysis. Using an online miRNA target database, we discovered that these dysregulated miRNAs potentially control components of the insulin-like growth factor 1 receptor (IGF1R) signaling pathway.ConclusionOur results indicate that dysregulated miRNAs may be involved in bladder cancer pathogenesis and are potential biomarkers.