高效液相色谱法测定丝氨酸:乙醛酸转氨酶的活性

报道了一种用反相高效液相色谱法(HPLC)测定丝氨酸:乙醛酸转氨酶(SGAT,EC2.6.1.45)活性变化的有效方法。将酶初提液与含有L-丝氨酸和乙醛酸的反应体系在30 ℃下反应1 h,反应终止后进行2,4-二硝基氟苯衍生化,通过HPLC测定酶反应前后甘氨酸的衍生化产物量的变化来分析酶的活性。通过流动相组成和浓度梯度的优化,既节省了流动相的用量,也避免了气泡的产生。研究结果表明,该测定方法的准确度和灵敏度比分光光度法和纸色谱分析法高,且简便易行;对于其他转氨酶活性的测定也有一定的参考价值。