重组腺病毒介导反义2型基质金属蛋白酶抑制人肝癌细胞株浸润的实验研究

目的构建携带反义2型基质金属蛋白酶(MMP2)的重组腺病毒并探讨它对人肝癌细胞株HepG2侵袭细胞基底膜的抑制作用。方法从新鲜肝癌组织中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应法合成MMP2cDNA序列中5'端转录起始位点附近长约500bp的基因片段,将此片段反义克隆到腺病毒载体系统的多克隆位点,经转染293细胞包装生成携带反义MMP2基因的重组腺病毒Ad-MMP2AS;利用侵袭小室模型,检测Ad-MMP2AS对肝癌细胞株(HepG2细胞)体外侵袭能力的影响。结果成功构建并生成携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad-MMP2AS,病毒滴度达1×108;体外细胞实验中Ad-MMP2AS能明显抑制HepG2细胞穿透人工重组基底膜的能力。结论重组腺病毒介导反义MMP2基因可望有效抑制肝癌细胞的浸润和转移,为肝细胞癌的基因治疗提供新的方法。     

基于PCR和位点特异性引物延伸反应的SNP检测方法的建立

目的建立一种基于聚合酶链反应(PCR)、位点特异性引物延伸反应(ASE)和核酸试纸条检测技术的单核苷酸多态性(SNP)检测方法。方法先通过PCR对包含SNP位点的特异基因序列进行扩增;然后通过带有A标记的ASE引物针对SNP位点的不同基因类型进行特异性延伸;延伸后的产物可以与B标记的探针进行杂交结合,形成同时携带A和B标记的杂交产物;而该杂交产物可以通过核酸试纸条进行目视化检测,从而完成对SNP基因型的检测。结果通过对10倍浓度梯度稀释的人类基因组DNA进行检测,PCR-ASE的检测敏感性为88 ng/反应;通过在同一条核酸试纸条上针对同一SNP位点2种不同基因型的检测,达到了多重检测的目的;PCR-ASE对19名志愿者的5个不同SNP位点的检测结果与基因测序法完全一致。结论 PCR-ASE是一种简单、准确的SNP基因型检测方法。     

人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤模型的建立以及维生素C保护作用的观察研究

目的研究氧化应激状态下维生素C作为抗氧化剂对视网膜色素上皮细胞的保护作用。方法外源性过氧化氢(H_2O_2)梯度浓度为0、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L作用于ARPE-19细胞,观察细胞形态变化。MTT方法检测细胞活力,2'7'-二氯荧光乙酰乙酸钠(DCFH-DA)荧光探针检测12 h或24 h细胞内活性氧(ROS)的生成,确定H_2O_2的适合作用浓度(100μmol/L)。梯度浓度(0、20μmol/L、100μmol/L、500μmol/L)的维生素C作用于氧化应激下的ARPE-19细胞,检测细胞存活率、细胞凋亡和细胞内ROS的改变。结果外源性H_2O_2作用下,ARPE-19细胞生存力下降且呈剂量依赖性及时间依赖性,同时ARPE-19细胞内ROS水平上升,提示H_2O_2处理后可诱导ARPE-19细胞的氧化应激损伤。考虑到人体自然状态下,RPE所受到的氧化应激损伤是低强度、长时间的累积效应,所以H_2O_2的适合作用浓度确定为100μmol/L。维生素C处理后,中等浓度(100μmol/L)的维生素C显著提高了ARPE-19细胞氧化应激下的生存率,同时显著降低细胞内ROS水平以及细胞凋亡率。而低浓度和高浓度的维生素C无此作用。结论外源性H_2O_2可诱导人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞发生氧化应激反应,导致细胞损伤。适当浓度的维生素C可降低细胞内氧化应激水平,减少ARPE-19细胞损伤及凋亡,起到抗氧化损伤的保护作用。     

2型糖尿病患者外周血液指标的变化及其与颈动脉硬化的相关性

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)、小而密低密度脂蛋白(sd LDL)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)的变化及与患者发生颈动脉粥样硬化的关系。方法选取确诊的单纯T2DM患者60例(T2DM组)、60例T2DM合并颈动脉粥样硬化患者(CAS组)、60例健康对象(对照组),检测并比较三组研究对象的NLR、RBP4、sd LDL、ANGPTL4。结果 CAS组患者的RBP4、sd LDL测定值显著的高于T2DM组、对照组(均P0.05),CAS组患者的血清ANGPTL4、NLR显著的低于T2DM组、对照组(均P0.05);T2DM组患者的RBP4、sd LDL测定值显著的高于对照组(均P0.05),T2DM组患者的血清ANGPTL4、NLR显著的低于T2DM组、对照组(均P0.05);CAS组患者的RBP4、sd LDL测定值与内膜中层厚度(IMT)呈显著的正相关关系(P0.05),CAS组患者的ANGPTL4测定值与IMT呈显著的负相关关系(P0.05),CAS组患者的NRL测定值与IMT无明显的相关关系(P0.05)。结论 2型糖尿病患者血清RBP4、sd LDL、ANGPTL4水平变化与其IMT增厚有关。     

睡眠监测数据管理平台的搭建及临床应用

目的:探索解决不同型号多导睡眠监测数据间兼容、统一管理的数据管理系统,提高睡眠数据管理的工作效率。方法:针对睡眠中心工作人员的要求设计开发数据管理系统,后台数据库解析并识别文字和表格数据,存储在数据库中,实现智能检索。数据管理分临床用睡眠监测数据与科研用数据两部分。本系统的硬件平台选择遵循通用的标准和协议。结果:睡眠监测数据库管理平台能成功解析和识别睡眠报告中的文字和表格的数据信息,并存储在数据库中,能够对数据进行智能检索。结论:本研究管理系统能解析并识别不同型号睡眠监测数据,读取数据并保存到数据库中,方便资料查阅、工作量统计以及科研数据检索,省时省力,方便快捷,大大提高了睡眠中心工作效率。     

髋关节X线测量指标在评价脑瘫患儿髋关节半脱位中的应用

目的：探讨髋关节X线片测量指标与脑瘫患儿髋关节发育的相关性,评价其在该类疾病所致髋关节半脱位中的价值与作用。方法回顾性分析2012年5月—2014年5月在我中心检查治疗的60名脑瘫患儿骨盆平片中的120个髋关节,测量其骨结构的X线指标,包括：髋臼指数（acetabular index,AI）、股骨头偏移百分比（migrarion percentage,MP）、颈干角（neck-shaft angle,NSA）。结果 AI （21.05±3.83）°、MP （18.05±13.74）%、NSA（150.54±8.41）°。结论大部分脑瘫患儿存在髋关节骨骼发育异常,并导致髋关节半脱位改变。股骨头偏移百分比测量可以较客观地反映髋关节半脱位情况及其严重程度,具有较高的临床实用价值。     

糖尿病患者白蛋白尿与心脏病变的关系

一般认为 ,白蛋白尿是预测糖尿病患者发生糖尿病肾病的敏感指标。近年来文献报道 ,无论是 1型或 2型糖尿病患者 ,白蛋白尿与心血管疾病的发生、发展和预后密切相关。为此 ,本文对糖尿病患者白蛋白尿与心脏病变的关系进行探讨。1　研究对象和方法本组 91例均为 2 0 0 1～ 2 0 0 2年本科住院病人 ,均按WHO( 1998)标准诊断为糖尿病 ,肾功能均正常。按尿白蛋白排泄量将病人分为 3组 :正常白蛋白尿组 ( 2 4h尿白蛋白<3 0mg)、微量白蛋白尿组 ( 2 4h尿白蛋白 3 0～ 3 0 0mg)和大量白蛋白尿组 ( 2 4h尿白蛋白 >3 0 0mg)。尿白蛋白排泄量测定方法 …     

粮尿病和冠心病患者之脂蛋白和载脂蛋白A1水平

本文在国内首次建立了载脂蛋白A1(ApoA1)的放射免疫测定法,并比较非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)病人、冠心病病人与年龄、体重相当的对照组脂蛋白及ApoA1 水平.与对照组比较,NIDDM组及冠心病组TG显著升高,HDL-C、HDL-C与LDL-C的比值及ApoA1水平显著降低,糖尿病与冠心病组之间的脂蛋白及ApoA1水平无显著差别,提示糖尿病患者脂蛋白及ApoA1的异常与其有较高的冠心病患病率有关。     

青海省果洛地区喜玛拉雅旱獭鼠疫疫源地的基本特点

青海省果洛地区喜玛拉雅旱獭鼠疫疫源地的基本特点王祖郧，南忠，旦正才让，荣德胜（青海省地方病防治研究所西宁８１１６０２，果洛州卫生防疫站，果洛州地方病防治所）青海省果洛藏族自治州开展鼠疫自然疫源地的流行病学调查工作始于ｌ９５９年，至今已有三十多年。自１...