抗人精浆蛋白单克隆抗体轻,重链可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗人精浆蛋白单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础。方法；从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＸＲ分离获得了γ－Ｓｍ－ＭｃＡｂ轻链可变区基因和重链可变区基因，分别克隆入ｐＵＣ１９质粒中，用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ，ＶＬ基因序列进行了分析。     

肝癌单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析

目的：获取抗人原发性肝癌单克隆抗体重、轻链可变区基因。方法：从分泌高亲和力的抗人原发性肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＳＭ８．１１中提取细胞的总ＲＮＡ，以随机引物反转录合成ｃＤＮＡ，以特异引物进行ＰＣＲ，扩增了单抗的重链可变区（ＶＨ）及轻链可变区（ＶＬ）基因，并进行了序列分析。结果：ＶＨ基因片段长度为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸残基；ＶＬ基因片段长度为３２４ｂｐ，编码１０７个氨基酸残基。两者均有４个     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2重链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的：分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法：用反转录ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２ＶＨ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与ＧｅｎｅＢａｎｋ及已发表的抗体序列比较。结果：ＶＨ基因全长３５４ｂｐ，属鼠免疫球蛋白重链混杂亚类（ｓｕｂｇｒｏｕｐｍｉｓｃｅｌａｎｅｏｕｓ），由种系基因的ＶＨ，Ｄｓｐ２．５及ＭＵＳＪＨ４重排而来。该ＶＨ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏＡＦ０４５０２３）。结论：该ＶＨ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２功能性重链可变区基因。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２轻链可变区（ＶＬ）基因并测定其核苷酸序列。方法用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。结果ＶＬ基因全长３３６ｂｐ，属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类（ＳｕｂｇｒｏｕｐⅡ），由种系基因的ＶＫ及Ｊ基因的ＭＵＳＪＫ２重排而成。该ＶＬ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｅｓｉｏｎＮｏ．ｇｂＡＦ０４４０７７）。结论该ＶＬ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２功能性轻链可变区基因。     

鼠抗人TNF-α单域抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

ＲＴ－ＰＣＲ法获得鼠抗人肿瘤坏死因子－α单克隆抗体Ｅ６轻,重链可变区基因序列,分别构建融合表达载体ｐＧＥ６ＶＨ和ｐＧＥ６ＶＬ,利用大肠杆框图 系统表达ＶＨ和ＶＬ单域抗体蛋白。方法：将ＲＴ－ＰＣＲ法获得的Ｅ６ＶＨ和Ｅ６ＶＬ基因分别克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中,使它们受控于Ｐｔａｃ启动子,转化大肠杆菌ＤＨ５α,经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导,１００ｇ／ＬＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达     

60例散发性急性病毒性肝炎的病原学分型

对６０例已排除甲型、乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的急性病毒性肝炎患者，以酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测抗－ＨＣＶ、抗－ＨＥＶ、抗－ＨＥＶ－ＩｇＭ、ＨＤＶ－Ａｇ、抗－ＨＤＶ－ＩｇＭ，抗－ＨＤＶ、抗－ＣＭＶ－ＩｇＭ及抗－ＥＢＶ－ＩｇＭ，同时应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果表明：１３．３％（８／６０）为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染，６１．７％（３７／６０）为戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染，     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

乳酸脱氢酶同工酶C4与男性不育的关系

用自制的抗人乳酸脱氢酶同工酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）单克隆抗体（ＭｃＡｂ），以免疫荧光，ＢＡ－ＥＬＩＳＡ及聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）等方法，测定了１１０例正常及各种不育症患者精子及精浆中ＬＤＨ－Ｃ４的含量。结果表明：不明原因性不育症，少精症及无精症患者精液中ＬＤＨ－Ｃ４的含量明显低于正常对照组，与正常组比较Ｐ值均〈０．００１，有极显著性差异；免疫荧光还发现不育症组伴有各种畸形精子。ＬＤＨ－Ｃ４含…     

一株抗独特型人单抗轻链可变区基因的克隆及序列测定

目的：探索抗独特型抗体模拟抗原的分子机理。方法：利用反转录－ＰＣＲ方法，从分泌肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗的杂交瘤细胞系（Ｃ８），成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ Ｉｄ人单抗轻链可变区基因，并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中，测定了此轻链可变区基因全序列。结果：经计算机分析，基因全长共３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，氨基酸序比较性分析发现所得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋     

CD23单克隆抗体的研制及其鉴定

目的：制备高度特异性和高纯度的抗ＣＤ２３单克隆抗体（ＣＤ２３ＭｃＡｂ）。方法：用ＥＢＶ感染的人Ｂ淋巴细胞（ＲＰＭＩ－８８６６）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,采用杂交瘤技术,细胞ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ等方法制备、纯化和鉴定了ＣＤ２３ＭｃＡｂ。结果：筛选出了强分泌抗Ｂ细胞膜ＣＤ２３分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（２Ｂ６）。结论：该单抗对Ｍｒ４５×１０３的ＣＤ２３分子反应具有高度特异性。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。