实验动物皮肤病原真菌多重PCR检测方法的建立与初步应用

目的 建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法 根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、dNTP、TaqDNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化,建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后,对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果 所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌,产生192 bp(Tm)、460 bp(Mg)、290 bp(Mc)和602 bp(As)的目的片段,最低检测限分别为5.9 pg/μL、6.6 pg/μL、9.5 pg/μL和5.1 pg/μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确,260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论 所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测,具有较高的应用价值。     

白介素-6化学发光检测方法的建立

目的:建立一种快速、准确和灵敏的基于微孔板化学发光免疫分析平台的白介素-6(IL-6)定量检测方法并评估其性能。方法:以链霉亲和素包被微孔板,加入待检血清样本,偶联生物素和辣根过氧化物酶的配对抗体建立分析体系,采用双抗体夹心模式,建立IL-6抗原定量检测方法,并对其进行条件优化和性能评估。结果:生物素化抗体和酶标抗体的工作浓度分别为2.00μg/mL和1.75μg/mL,孵育时间选为12.5 min,分析灵敏度为2.00 pg/mL,检测范围为2.5～2 000 pg/mL,样本回收率在(100±10)%以内,重复性<8%,中间精密度<10%,116份临床血清样本测值与罗氏测值相关性较高(R²=0.987 7),不同疾病患者血清IL-6水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论:建立了IL-6微孔板化学发光定量检测方法,且各项性能指标良好,可满足临床检测的需要。     

应用酶联免疫吸附法检测乙肝核心抗体设定灰区在结果判读中的意义

目的 探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝核心抗体(Anti-HBc)设定灰区在样本判读中的意义.方法 应用ELISA法检测Anti-HBc,对108例检测结果(S/CO)处于边缘值(0.50～1.50)的样本应用罗氏电化学发光法和雅培酶免疫化学发光法进行复检.同时对3种方法检测结果进行相关性分析.结果 罗氏与雅培的检测结果显著相关(r=0.621,P＜0.01).108份样本,应用其他两种方法复检,可以得到70例确证结果.通过乙肝PCR或既往乙肝标志物检测结果分析,复检结果全部阳性和不确定样本皆存在既往感染,全部阴性者未有既往感染.结论 ELISA法检测Anti-HBc在判读上缺乏足够的敏感性和特异性.实验S/CO值在0.56～1.36范围内判读同样存在假阳性和假阴性.实验室应根据自身条件设定检测灰区,并以"灰区"出具报告并建议定期复检,以免造成误诊或漏检.     

用PCR-RFLP技术检测皮肤感染性肉芽肿组织中的分支杆菌

目的:探讨用聚酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法快速检测皮肤感染性肉芽肿组织中的分支杆菌.方法:皮肤感染性肉芽肿患者的组织标本5份,提取组织DNA进行巢式PCR扩增,对PCR产物分别用Hha Ⅰ、Mbo Ⅰ、BstU Ⅰ3种限制性内切酶进行酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行RFLP分析,并与培养结果进行比较.结果:从2份临床诊断为游泳池肉芽肿的组织标本中检测出海分支杆菌,从1份诊断为皮肤感染性肉芽肿的标本中检测出结核分支杆菌,此3例结果与培养鉴定结果完全一致.另两份标本分别检测出结核分支杆菌和偶发分支杆菌.结论:用PCR-RFLP方法可以快速鉴定皮肤感染性肉芽肿中的分支杆菌,可协助临床进行疾病的早期诊断和及时治疗.     

实验犬布氏杆菌的多重PCR检测与分型鉴定

目的建立实验犬及相关生物制品布氏杆菌的多重PCR检测与分型鉴定方法。方法选择布氏杆菌Omp2基因同源性较高的区域设计引物对布氏杆菌进行多重PCR扩增,扩增结果一致的样本进行酶切以区分不同型,同时进行序列测定,以确定该方法的准确性;然后验证该方法的特异性和敏感性。结果成功扩增得到目的条带,并通过酶切区分五种布氏杆菌;PCR产物与布氏杆菌DNA序列同源性达到99%,并验证了该方法的检测结果。实验结果证明该方法特异性较好,灵敏性为1.8×10-7μg/mL。结论成功建立布氏杆菌多重PCR检测与分型鉴定方法,所建立的方法特异性好,灵敏度高。本研究对保证实验犬群的质量,保护饲养人员、实验人员的身体健康具有重要意义。     

猴副流感病毒SV5 PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。方法根据GenBank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。结果利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccⅢ限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。结论初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。     

双抗体夹心二步法检测甲胎蛋白后带现象

目的探讨用双抗体夹心二步法检测甲胎蛋白(AFP)出现"后带现象"而造成检测值偏低的发生原因及解决方法。方法把2份临床诊断为原发性肝癌但AFP测定结果较低的标本按原液至1∶400手工倍比稀释后,在ABBOTT公司的Architecti2000 System自动免疫化学发光分析仪上采用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)测定,然后对结果进行分析。结果测定结果分别为194μg/L和284μg/L的2份样本原液,经手工倍比稀释后上机检测,前者检测结果约为10万μg/L,后者检测结果约为8万μg/L。结论双抗体夹心二步法(CMIA,雅培)检测高浓度的AFP也存在"后带现象",须经稀释后才能得到可靠结果。     

青光眼患者房水中转化生长因子-β2的定量研究

目的:通过检测青光眼患者房水中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的水平,探讨TGF-β2在青光眼发病机制中的作用.方法:在手术中收集了31份青光眼患者房水样本,其中原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)11眼、原发性闭角型青光眼(primary angle-closure glaucoma,PACG)10眼、青少年型青光眼(juvenile glaucoma,JG)10眼.另收集10份白内障患者的房水样本作为对照.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测房水中TGF-β2的含量.结果:POAG和JG组房水中成熟(有生物活性)TGF-β2的浓度分别为256.7±93.3 pg/ml和277.0±103.8 pg/ml,比PACG组151.4±81.0 pg/ml和白内障组136.9±57.7 pg/ml有显著性升高(P＜0.01).而POAG组、JG组和PACG组TGF-β2的总量(有生物活性的+潜活的)分别为1677.5±564.6 pg/ml、1739.4±592.0 pg/ml和1499.2±490.4 pg/ml,各组间比较无显著性差异(P＞0.05),它们与白内障组1004.9±372.1 pg/ml比较均有显著性差异(P＜0.05).结论:POAG和JG患者房水中成熟TGF-β2的水平明显增高,高水平的成熟TGF-β2可能在POAG和JG的发病机制中起着重要作用.     

猴副流感病毒SV5的PCR检测方法建立及初步应用

[目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。[结果]利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccIII限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。[结论]本文首次初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …