神经端侧缝合后趋化性的神经元逆行示踪研究

目的 应用神经元荧光逆行示踪技术探讨外周神经端侧缝合后神经再生的趋化性问题. 方法 选用雌性SD大鼠40只,随机分为4组,端侧缝合肌皮神经主干标记组、正常肌皮神经主干标记组、端侧缝合肌皮神经肌支标记组和正常肌皮神经肌支标记组,每组10只.端侧缝合的两组切断肌皮神经,尺神经后内侧方外膜开窗,将肌皮神经和开窗的尺神经外膜做端侧缝合,正常对照两组仅显露肌皮神经和尺神经.5个月后采用Fhuoro-Gold荧光逆行示踪技术,标记第一、二组肌皮神经主干和第三、四组肌皮神经肌支,精确计数各组大鼠脊髓C4-T1前角和背根神经节神经元. 结果 在肌皮神经主干标记两组中,端侧组脊髓前角神经元数目占正常组的30.0%(P＜0.01);背根神经节感觉神经元数目占正常组的28.1%(P＜0.01),运动神经元比例为0.36±0.09,与正常组差异无统计学意义(P＞0.05).在肌皮神经肌支标记两组中,端侧组脊髓前角神经元数目占正常组的38.1%(P＜0.01),背根神经节感觉神经元数目占正常组的70.2%(P＞0.05),运动神经元比例为o.40±0.14.与正常组差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 外周神经端侧缝合后神经侧方出芽对特定靶器官的趋化性不明显.     

异丙酚对脊髓兴奋性氨基酸含量的影响

目的 观察异丙酚对兔缺血再灌注损伤脊髓的保护作用以及对兴奋性氨基酸(excitatory amino acid,EAA)的影响.方法 健康新西兰大白兔60只,雌雄各半,体重2.0～2.5 kg.采用左肾下腹主动脉阻断法建立脊髓缺血再灌注损伤模型,阻断开始即泵入灌注液6 mL/kg(不足部分均以10%脂肪乳补充),灌注速度12 mL/(kg·h),30 min后停止灌注,开放腹主动脉.根据灌注液的不同,随机分为生理盐水组(A组)、10%脂肪乳组(B组)、30 mg/kg异丙酚组(C组)、40 mg/kg异丙酚组(D组)、50 mg/Kg异丙酚组(E组)及60 mg/kg异丙酚组(F组),每组10只.分别记录麻醉清醒即刻、再灌注后6、24和48 h兔神经行为学评分;于再灌注后48 h取L4～6节段脊髓组织计数脊髓前角正常神经元;采用高效液相色谱法测定脊髓组织中EAA含量.结果 C、D、E、F组各时间点神经行为学评分明显优于A、B组(P＜0.05),E组评分最高(P＜0.05),A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05).C、D、E、F组脊髓前角正常神经元明显多于A、B组(P＜0.05),且E组多于C、D、F组(P＜0.05).A、B、C、D、E、F组脊髓组织EAA含量均明显高于正常值,其中A、B组最高(P＜0.05),但A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05);E组最低(P＜0.05).谷氨酸、天门冬氨酸含量均与脊髓前角正常神经元计数及再灌注后48 h神经行为学评分成负相关,相关系数分别为-0.613、-0.536、-0.874及0.813(P＜0.01).结论 异丙酚能降低缺血再灌注脊髓组织中EAA含量,减轻脊髓缺血再灌注损伤.     

颈交感神经在臂丛神经慢性卡压伤中的作用

目的 研究颈交感神经在臂丛神经慢性卡压伤中的作用.方法 24只雄性SD大鼠,随机分成A、B、C三组,每组8只.A组:臂丛神经下干慢性卡压模型;B组:臂丛神经下干慢性卡压模型,加颈中交感神经节切除;C组:对照组.3个月后,各组进行神经电生理检测第一骨间肌复合肌肉动作电位(CMAP),记录其波幅和潜伏期;切取臂丛神经下干卡压远侧3 mn神经干和C组臂丛神经下干,行甲苯脓蓝染色,半薄横切片,计数有髓神经纤维;切取C8、T1背根神经节,用RT-PCR方法检测背根节中P物质(SP) mRNA.结果 神经电生理检测CMAP波幅:A组(2.2± 1.1)mV,B组(3.9±1.1)mV,C组(8.6±2.0)mV;A组＜B组＜C组,差异有统计学意义(P＜0.01).潜伏期:A组(4.8±0.9)ms,B组(3.9±0.5)ms,C组(2.8±0.2)ms;A组＞B组＞C组,差异有统计学意义(P＜0.01).有髓神经纤维总数:A组(3583.0±540.0),B组(5098.0±742.0),C组(7934.0±868.0);A组＜B组＜C组,差异有统计学意义(P＜0.01).P物质mRNA表达水平:A组(3.6±0.8)×10-2,B组(2.2±0.7)×10-2,C组(1.2±0.3)×10-2;A组＞B组＞C组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在交感神经作用下,臂丛神经慢性卡压伤的损伤程度加重,背根神经节中疼痛介质P物质表达增强,去交感神经有利于减轻臂丛神经慢性卡压伤损伤程度,有利于减轻因卡压引起的疼痛.交感神经激惹可能是臂丛神经慢性卡压性疾病发展的一个协同因素.     

轻中度颈脊髓压迫患者产生脊髓损害症状与体征的危险因素

【摘要】 目的：探讨轻中度颈脊髓压迫患者产生脊髓损害症状与体征的危险因素。方法：回顾性分析我院脊柱外科2008年11月~2011年11月门诊诊治的68例轻、中度颈脊髓压迫患者的病例资料。男37例,女31例。单节段32例,两节段22例,三节段14例。患者均有颈椎正侧位和过伸过屈位X线平片和颈椎CT及MRI检查图片。根据有无脊髓损害症状与体征,将其分为两组,无脊髓损害症状与体征的30例患者为A组,有脊髓损害症状与体征的38例患者为B组,比较两组患者年龄、性别、病程、病变节段数目,以及最大受压节段颈椎管比率、整体活动范围、节段不稳发生率、C2～C7 Cobb角、脊髓受压方向及脊髓高信号发生率。结果：两组患者年龄、性别、病程、病变节段数目差异均无统计学意义;平均最大受压节段颈椎管比率,A组为90.3%,B组为83.6%（P＜0.05）;平均颈椎整体活动范围A组为47.5°,B组为44.1°（P＞0.05）;颈椎节段不稳发生率,A组为23.3%,B组为65.8%（P＜0.05）;平均C2～C7 Cobb 角A组为14.1°,B组为14.1°（P＞0.05）;脊髓受压方向,A组中央型19例,旁中央型11例,B组中央型17例,旁中央型21例（P＞0.05）;颈椎MRI T2加权像高信号发生率,A组为13.3%,B组为86.9%（P＜0.05）。结论：对于轻、中度颈脊髓压迫患者,颈椎节段不稳和脊髓高信号是导致出现脊髓损害症状与体征的危险因素,而颈椎管比率较大是一种保护因素,尚不能认为脊髓受压方向、颈椎整体曲度和活动范围对出现脊髓损害症状与体征产生影响。     

化学去细胞同种异体神经复合缓释神经生长因子修复周围神经缺损

目的 探讨化学去细胞异体神经复合缓释神经生长因子(nerve growth factor,NGF)修复周围神经缺损的效果. 方法采用药物微球技术制备NGF微球,与生物纤维蛋白胶混合形成NGF复合缓释制剂.取健康雄性SD大鼠20只,体重280～300 g,制备化学去细胞异体神经.取健康雄性Wismr大鼠52只,体重250～300 g,制备大鼠左侧世骨神经10 mm缺损模型.根据修复缺损材料不同,随机分成4组(n=13):自体神经移植组(A组)、化学去细胞异体神经移植加NGF复合缓释制剂组(B组)、化学去细胞异体神经移植组(C组)和化学去细胞同种异体神经移植和纤维蛋白胶组(D组).右侧不作处理作为空白埘照组.术后行大体观察;术后2周测鼍神经轴突生长距离;术后16周行电生理检测,计算术侧坐骨神经运动传导速度恢复率、术侧小腿三头肌收缩力恢复率及湿重恢复率,并行移植神经吻合中段HE和半薄切片甲苯胺蓝染色观察. 结果 所有动物均存活至实验完成,切口愈合良好.术后2周A组神经再生距离较其余3组长(P＜0.05),B组优于C、D组(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后16周,A、B、C、D组术侧坐骨神经运动传导速度恢复率分别为73.37%±7.82%、70.39%±8.45%、53.51%±6.31%、55.28%±5.37%;A、B组与C、D组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).A、B、C、D组术侧小腿三头肌收缩力恢复率分别为85.33%±5.59%、69.79%±5.31%、64.46%±8.49%、63.35%±6.40%:A组与B、C、D组比较筹异有统计学意义(P＜0.05),B、C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、C、D组术侧小腿三头肌湿重恢复率分别为62.54%±8.25%、53.73%±4.56%、46.37%±5.68%、45.78%±7.14%;A组与B、C、D组比较筹异有统计学意义(P＜0.05),B组与C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).组织学图像分析示B组有髓神经纤维数量、轴突直径及髓鞘厚度均优于C、D组(P＜0.05),B组轴突直径小于A组(P＜0.05). 结论 复合缓释NGF的化学去细胞同种异体神经能满意修复一定长度的周围神经缺损,是一种有效的周围神经组织工程修复材料.     

异丙酚腹主动脉灌注和静脉输入在兔脊髓组织内药物浓度的比较

目的 测定腹主动脉灌注与静脉输入异丙酚在缺血再灌注脊髓损伤组织内的药物浓度,探讨其可能的作用部位.方法 取健康4～6月龄新西兰大白兔46只,体重2.0～2.5 kg,随机分为生理盐水组(N组,n=10)、异丙酚腹主动脉灌注组(A组,n=18)、异丙酚静脉输入组(V组,n=18)组.建立肾下腹主动脉阻断脊髓缺血再灌注损伤模型,A组经腹主动脉阻断远端持续泵入异丙酚(50 mg/kg)30 min,N组泵入同等容量的生理盐水,V组经静脉持续泵入异丙酚(50 mg/kg)30 min.测定再灌注即刻A组和V组L4～6节段和T6～8节段的脊髓组织中异丙酚浓度,观察再灌注后48 h 3组动物的神经行为学评分和组织病理学变化,并计数脊髓前角正常神经元.结果 3组在腹主动脉阻断后平均动脉压均有一定程度的降低,其中V组降低幅度最明显,阻断5min后显著低于N组,阻断10min后低于同时间点A组(P＜0.05);A组在阻断15 min后显著低于N组(P＜0.05).N、A组组内不同时间点心率与基础心率比较差异无统计学意义(P＞0.05);V组于阻断期间心率增加明显,于阻断15 min开始心率明显高于同时间点的N组和A组(P＜0.05).A组与N组间心率比较差异无统计学意义(P＞0.05),A组L4～6节段脊髓组织异丙酚浓度为(26 950.5±30 242.3)ng/g,显著高于T6～8节段的(3 587.4±2 479.3)ng/g、V组L4～6节段的(3 045.9±2 252.9)ng/g及T6～8节段的(3 181.1±1 720.9)ng/g,比较差异有统计学意义(P＜0.05).神经行为学观察显示,A组动物术后截瘫率为30%,明显低于N组的80%和V组的100%,差异有统计学意义(P＜0.05);N、V组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A组脊髓前角正常神经元计数为8.4(4.0～11.5),明显多于N组的2.2(0～4.3)和V组的1.9(0～4.0),差异有统计学意义(P＜0.05),N、V组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚腹主动脉灌注较静脉输入能获得更高的靶器官药物浓度,对缺血再灌注损伤脊髓具有更好的保护作用.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤修复的促进作用.方法 用改良Allen法制作大鼠脊髓损伤动物模型.随机分成对照组(A组),脊髓损伤9 d后脊髓内微量注射生理盐水溶液5μl;骨髓间充质干细胞移植组(B组),脊髓损伤9 d后脊髓内注射骨髓间充质干细胞悬液5μl.移植后7、14、28 d采用斜板实验、脊髓运动功能BBB评分法观察大鼠运动功能恢复情况,脊髓诱发电位的检测观察神经功能恢复,苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况,免疫组织化学法观察移植的骨髓间充质干细胞的存活及分化情况,损伤部位神经纤维的再生情况.结果 移植后28 d,两组斜板倾斜角度差异有统计学意义[A组(44.96±5.70)度,B组(53.19±6.51)度,P＜0.05];两组BBB评分差异有统计学意义[A组(6.8±1.2),B组(10.1±3.5),P＜0.05].同时,两组MEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.69±0.47)ms,B组(3.97±0.83)ms,P＜0.05],两组SEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.19±1.97)ms,B组(2.60±0.92)ms,P＜0.05].两组神经轴突计数差异有统计学意义[A组(32.8±6.1)条/mm2,B组(39.0±4.6)条/mm2,P＜0.05].实验组可见明显星形胶质细胞和神经纤维再生,脊髓损伤处的空洞面积明显减小.结论 骨髓间充质干细胞可在脊髓损伤处分化为神经元和神经胶质细胞,能够减小脊髓损伤处的空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复.     

活性巨噬细胞移植促进脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的 探讨活性巨噬细胞移植对脊髓损伤修复的促进作用.方法 用改良Allen法制成大鼠脊髓损伤模型.随机分成对照组(A组),脊髓内微量注射生理盐水20μl;活性巨噬细胞移植组(B组),脊髓内注射活性巨噬细胞悬液20μl.移植后7、14、28 d采用斜板试验、脊髓运动功能BBB(Basse,Beattie and Bresnahan)评分法观察大鼠运动功能恢复情况,脊髓诱发电位检测观察神经功能恢复,HE染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况,免疫组化法观察移植的活性巨噬细胞的存活情况及损伤部位神经纤维的再生情况.结果 术后28 d,两组斜板倾斜角度差异有统计学意义(A组44.96°±5.70°,B组52.72°±6.51°,P＜0.05);两组BBB评分差异有统计学意义(A组6.8±1.2,B组11.8±2.2,P＜0.05).同时,两组MEP潜伏期差异也有统计学意义[A组(4.69±0.47)mg,B组(3.62±1.29)ms,P＜0.05],两组SEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.19±1.97)ms,B组(2.01±0.55)ms,P＜0.05].两组神经轴突计数差异有统计学意义[A组(32.8±6.1)条/mm2,B组(40.8±9.0)条//mm2 P＜0.05].实验组可见损伤区巨噬细胞存在,脊髓损伤处空洞面积减小,有明显神经纤维再生.结论 活性巨噬细胞可在脊髓损伤处存活并减轻脊髓损伤,减小脊髓损伤处空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复.     

C7神经根移位重建截瘫大鼠股四头肌功能的实验研究

目的 比较应用C7神经根移位加自体、异体神经移植修复重建截瘫大鼠股四头肌功能的疗效.方法取16周龄SPF级雄性Wistar大鼠20只制备冷冻坐骨神经.取14周龄SPF级Wistar雄性大鼠36只,于手术显微镜下,显微剪半横断左侧脊髓造成左侧截瘫模型.建模成功后,随机分A、B组(n=18).A组通过C7神经根移位将自体同侧坐骨神经桥接股神经根,B组通过C7神经根移位将同种异体冷冻坐骨神经桥接股神经根.两组分别于术后16、24周各取9只行神经电生理检测、大体观察及组织学观察,计算股四头肌湿重恢复率. 结果 术后16周,A组诱发动作电位幅值(nerve action-evoked potential,NAP)为(1.14±0.07)mV,B组为(0.87±0.06)mV;A组移位神经传导速度(nerve conduction velocity,NCV)为(17.34±2.15)m/s,B组为(11.23±1.45)m/s.术后24周,A组NAP为(1.21±0.07)mV,B组为(0.99±0.05)mV;A组NCV为(19.00 ±3.02)m/s,B组为(12.54 ±1.59)m/s.两组各时间点比较差异均有统计学意义(P＜0.05).术后16、24周,HE染色、Bielschowsky嗜银染色均显示A组再生神经纤维数目较多、轴突排列较整齐规则;B组再生神经纤维数目较少,轴突排列分布较零散.术后24周透射电镜观察示两组移植神经内均有大量再牛有髓神经纤维及少量无髓神经纤维通过.术后16周,A、B组有髓神经纤维数目分别为(438±79)、(196±31)个/视野,有髓神经纤维面积分别为(5 596.00 ±583.94)、(4 022.63 ±615.75)μm2视野;术后24周,A、B组有髓神经纤维数目分别为(642±64)、(321±75)个/视野,有髓神经纤维面积分别为(6 689.50±1142.10)、(4 733.00±982.22)μm2/视野;两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).术后16周,A、B组股四头肌湿重恢复率分别为87.96%±4.93%和86.47%±7.47%;术后24周,A、B组分别为90.10%±4.22%和87.66%±3.14%,两组各时间点比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 C7神经根移位加自体、异体坐骨神经移植均能重建截瘫大鼠股四头肌部分功能,自体坐骨神经移植组效果明显优于异体坐骨神经移植组.     

葡萄糖原合成酶-3β抑制剂促进大鼠脊髓损伤后轴突再生与下肢功能恢复的研究

目的 探讨葡萄糖原合成酶-3β(GSK-3β)的抑制剂噻二唑-8(TDZD-8)对大鼠脊髓损伤后轴突再生与下肢功能恢复的影响. 方法 健康成年雌性SD大鼠108只,均制作T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,并在L4平面蛛网膜下腔插入注药导管后随机分为3组(n=36):TDZD-8治疗组(A组)经注药导管注入1 mg/(kg·d)的TDZD-8,PBS治疗组(B组)经注药导管注入60 μL/d的磷酸盐缓冲液,C组为空白对照组.各组均在瘫痪后lh开始注射,连续注射3周.注射后2 h、4h、8h、24 h、7 d,TUNEL法观察神经元细胞凋亡的表达;注射后7、14、28 d,兔抗生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达;注射后1、2、3、6、8、12周,Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估下肢运动功能恢复情况;注射后8周,采用免疫荧光法观察损伤节段轴突再生情况. 结果 脊髓损伤后2h观察到凋亡细胞,注射后2h、4h、8h、24 h、7 dA组的神经元细胞凋亡数明显低于B、C组,各组细胞凋亡表达在注射后8h达到高峰,此后逐渐减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);注射后7、14、28 d,A组的GAP-43表达面积明显高于B、C组,各组GAP-43表达在损伤后14 d达到高峰,此后逐渐减少,差异均有统计学意义(P ＜0.05);从注射后3周开始,A组的BBB评分明显高于B、C组,差异有统计学意义(P＜0.05).A组有较多再生神经纤维穿过损伤部位,而B、C组只有少许再生神经纤维穿过损伤部位,注射后8周A组阳性标记的皮质脊髓束纤维面积明显高于B组、C组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 TDZD-8能够抑制细胞凋亡,减少继发性脊髓损伤,上调GAP-43的表达,促进轴突再生、延长,促进大鼠后肢功能恢复.     

神经导管联合自体变性肌桥修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的探讨PLGA神经导管联合化学萃取的自体骨骼肌肌桥,修复大鼠坐骨神经缺损的可能性。方法SD大鼠45只,建立大鼠左侧坐骨神经缺损模型。随机分为3组．分别采用自体神经（A组）、PLGA神经导管（B组）和PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥（C组）．来修复神经缺损。术后通过大体观察、坐骨神经功能指数测定、腓肠肌湿质量恢复率测定、组织学观察和图像分析对比等,检测神经缺损修复情况。结果神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥能促进坐骨神经再生．各项指标均优于单纯神经导管移植．但是效果略差于自体神经移植。结论PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥．对大鼠坐骨神经缺损具有良好的桥梁作用和促神经生长的作用。     

静电纺纳米聚乳酸己内酮共聚物导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备的聚乳酸己内酮共聚物[Poly(1-lactide-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]导管,移植修复大鼠周围神经缺损的效果.方法 选取健康SD大鼠54只,随机分成3组,每组18只.先造成坐骨神经1.5cm缺损段,然后分别采用P(LLA-CL)导管桥接(A组)、硅胶管桥接(B组)、自体神经逆行原位移植(C组).分别在术后4、8、12周对大鼠进行大体观察、坐骨神经功能指数检查、神经电生理检查、肌肉湿重、再生有髓神经纤维计数、电镜观察,评价各组神经再生.结果 术后4周时A组再生神经已部分生长到导管的中部;8周时再生神经已通过神经导管,但再生的神经纤细;12周时再生神经粘连较轻,直径较粗.A组的坐骨神经功能指数、神经电生理、肌肉湿重和组织学观察等各项指标均略差于C组,但明显优于B组.结论 纳米聚乳酸己内酮神经导管具有促进神经轴突再生的作用,有望成为自体神经移植的替代材料应用于周围神经缺损的修复.     

同轴共纺复合神经生长因子导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察同轴共纺复合神经生长因子(NGF)导管对大鼠坐骨神经缺损修复的促进作用.方法 以复合NGF的牛血清白蛋白为芯层、乳酸.己内酯共聚物[P(LLA-CL)]为壳层,采用同轴共纺技术制备具有"壳-芯"结构的可降解纳米纤维复合神经导管.取SD大鼠72只,随机分为四组:自体神经移植组(A组),单纯[P(LLA-CL)]导管组(B组),单纯导管内一次性汴射NGF组(C组)和复合NGF导管组(D组),每组18只.制作大鼠坐骨神经10 mm缺损模型,四组大鼠分别采用白体神经移植、单纯[P(LLA-CL)]导管、单纯导管内一次性注射NGF、复合NGF导管桥接修复缺损.于术后第1、2、3个月行大体观察、坐骨神经功能指数、小腿三头肌湿重恢复率测量、电生理检测和组织学检查. 结果术后复合NGF导管逐渐开始吸水膨胀并降解,3个月时,虽然管壁已经出现裂隙,但依然保持良好的外形,没有对再生神经形成卡压.术后1个月,再生神经均已通过缺损,连接两断端,但较细小;随着时间的延长,再生神经逐渐增粗.各组间比较发现,D组再生神经取得了和A组相似的效果,明显优于B组和C组(P<0.05).尽管D组与A组之间比较.差异无统计学意义(P>0.05),甚至D组的有髓神经纤维计数还稍高于A组,但其髓鞘的厚度和直径不如A组,并且坐骨神经功能指数和腓肠肌湿重恢复率也比A纽稍差. 结论同轴共纺复合NGF神经导管具有良好的组织相容性、生物活性和机械强度,能够有效地促进神经再生,效果接近自体神经移植.     

几丁糖/聚乙烯醇神经导管修复猕猴周围神经缺损的实验研究

目的探讨应用几丁糖/聚乙烯醇神经导管修复猕猴周围神经缺损的效果。方法成年猕猴12只,雄性5只,雌性7只,体重3.26～5.35 kg。实验动物随机分成A、B、C 3组,制备左侧桡神经2 cm缺损模型,分别用几丁糖/聚乙烯醇神经导管移植、神经切除旷置和自体神经逆行原位移植处理。实验动物右侧为正常对照。术后8个月,行大体观察、组织学观测及电生理检测评价神经再生效果。结果术后8个月,A组再生神经通过神经导管长入神经缺损的远侧端,再生神经粘连较轻;B组未见再生神经通过神经缺损断端;C组移植神经与周围组织粘连较重。A、C组可检测出肌电图表现,B组未检测到。A、C组间波幅差异无统计学意义(P>0.05),但均不及正常对照侧,差异有统计学意义(P<0.05);C组潜伏期和神经传导速度优于A组,但均不及正常对照侧,差异均有统计学意义(P<0.05)。有髓神经纤维密度:A、C组较正常对照侧小,差异有统计学意义(P<0.05);A、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。有髓神经纤维直径和髓鞘厚度:C组优于A组,但均不及正常对照侧,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论几丁糖/聚乙烯醇神经导管具有促进猕猴神经轴突再生的作用,有望成为自体神经替代材料应用于周围神经缺损修复。     

聚乳酸与聚羟基乙酸共聚物三维神经导管内微丝直径对周围神经缺损修复的影响

目的 应用含有微丝的聚乳酸与聚羟基乙酸共聚物(PLGA)三维神经导管修复大鼠周围神经缺损,最终探寻修复周围神经微丝直径的最佳范围.方法 将60只300～350 g健康、雌雄不拘SD大鼠随机均分为6组.制作大鼠12 mm的左侧坐骨神经缺损模型;A、B、C、D、E组PLGA神经导管内纵形放入20根不同直径(分别是60、80、100、120、140μm)微丝,各组神经导管内均注入层黏蛋白+神经生长因子混合液0.3 ml.F组:自体神经移植组.大鼠左后肢为实验侧,右后肢为对照侧.测量术后12周各实验组神经导管内再生神经的运动神经传导速度,通过免疫组织化学检测再生神经纤维的数目.结果 术后12周,再生神经中1/3段的光镜观察,各组再生神经均有通过神经导管长入远端,神经纤维计数以F组最多,B、C、D组次之,而与A组、E组比较差异均有统计学意义(P<0.05),B组、C组、D组、F组的再生神经纤维数量及成熟程度均要明显优于A组和E组.结论 三维立体管状结构中的微丝直径粗细对周围神经的再生有影响,最佳的直径80～120μm.     

In vitro and in vivo evaluation of a biodegradable chitosan-PLA composite peripheral nerve guide conduit material

Chitosan, a nature biodegradable material, has good biocompatibility but poor physical properties to serve as a nerve conduit. In this study, polylactic acid (PLA) was added to chitosan to form a composite material with improved intensity and elasticity, to be used as nerve conduits. The chitosan-PLA nerve conduits were fabricated with a mold casting/infrared dehydration technique. The constituent ratio of PLA and chitosan of 1:5 (v:v) was chosen to give the composite material both good mechanical properties and good biocompatibility. An in vitro cytotoxicity test showed that the chitosan-PLA material was not cytotoxic. The conduits were proved biodegradable and had many micropores to allow permeability. We evaluated chitosan-PLA nerve conduits as a guidance channel to repair 10 mm gaps in rat sciatic nerves. Nerve autograft and silicon conduits were used as the control. After 12 weeks, the regenerating nerves in three groups succeeded in passing through the nerve gap and reinnervating the muscle. Assessments, including ECG, histomorphometric evaluation, and weighing of triceps calf muscle, showed that the functional recovery of sciatic nerve was better in chitosan-PLA conduit group than in the silicon conduit group (P < 0.05), but the differences between the chitosan-PLA conduit group and the nerve autograft group were not significant (P > 0.05). Therefore, the chitosan-PLA guide proved to be a promising nerve conduit.     

优化法去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的 以优化法去细胞兔臂丛神经，移植修复大鼠坐骨神经缺损，观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况。方法 以优化法处理新鲜取材的新西兰大白兔臂丛神经分支，移植修复成年sD大鼠坐骨神经1．0cm缺损，分别于术后1个月及3个月行功能评价、电生理和组织学检查，观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况。结果 实验组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异，却明显优于新鲜兔神经移植组。3个月取材时的神经再生及功能恢复情况优于1个月取材时。结论 优化法去细胞神经在移植修复异种神经缺损时，可以达到免疫耐受，其早期功能恢复和神经再生情况良好，在修复周围神经缺损时有望作为自体神经移植的一种替代疗法。     

复合神经生长因子的纳米纤维导管促神经再生的初步研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备复合神经生长因子的神经导管的可行性,检测神经生长因子的活性及对神经再生的作用.方法 应用同轴静电纺丝技术制备以可降解生物材料乳酸己内酯共聚物[P(LLA-CL)]为壳层材料、神经牛长冈子(NGF)和牛血清蛋白(BSA)为芯层材料的纳米纤维,纺织成神经导管复合体.模拟体内环境进行体外降解缓释8周,在不同时间点,应用PCI2细胞培养法检测缓释液中NGF的生物活性.构建大鼠坐骨神经10 mm缺损模型.分别采用自体神经移植(A组)、P(LLA-CL)/BSA/NGF导管(B组)、P(LLA-CL)/BSA导管加一次性注射NGF(C组)、P(LLA-CL)/BSA导管(D组)桥接神经断端,术后12周进行再生神经形态学等观察.结果 P(LLA-CL)/BSA/NGF导管在体外8周尚末完全降解.能够持续释放NGF,并保持牛物活性.解剖观察可见再牛神经均通过神经导管,B组再生神经的卣径最均匀一致,达到正常神经的直径.透射电镜图片显示,A组和B组神经纤维数日多、大小均匀、成熟良好,C组和D组纤维结缔组织多、神经纤维细小、髓鞘薄.结论 P(LLA-CL)/BSA/NGF导管具有良好的组织相容性和生物活性,能够诱导并促进神经再生,提高神经再牛的质量,其移植效果接近于自体神经移植.     

Repairing peripheral nerve defects with tissue engineered artificial nerves in rats

Objective： To observe the effect of tissue engineered nerves in repairing peripheral nerve defects （ about 1. 5 cm in length） in rats to provide data for clinical application.
Methods： Glycerinated sciatic nerves （2 cm in length） from 10 Sprague Dawiey （SD） rats （aged 4 months） were used to prepare homologous dermal acellular matrix. Other 10 neonate SD rats （aged 5-7 days） were killed by neck dislocation. After removing the epineurium, the separated sciatic nerve tracts were cut into small pieces, then digested by 2.5 g/L trypsin and 625 U/nd collagenase and cultured in Dulbecco＇ s modified Eagle＇ s medium （DMEM） for 3 weeks. After proliferation, the Schwann cells （SCs） were identified and prepared for use. And other 40 female adult SD rats （ weighing 200 g and aged 3 months） with sciatic nerve defects of 1.5 cm in length were randomly divided into four groups： the defects of 10 rats bridged with proliferated SCs and homologous dermal acellular matrix （the tissue engineered nerve group, Group A）, 10 rats with no SCs but homologous dermal acellular matrix with internal scaffolds （Group B ）, 10 with autologous nerves （Group C ）, and the other 10 with nothing （the blank control group, Group D）. The general status of the rats was observed, the wet weight of triceps muscle of calf was monitored, and the histological observation of the regenerated nerves were made at 12 weeks after operation.
Results： The wounds of all 40 rats healed after operation and no death was found. No foot ulceration was found in Groups A, B and C, but 7 rats suffered from foot ulceration in Group D. The triceps muscles of calf were depauperated in the experimental sides in all the groups compared with the uninjured sides, which was much more obvious in Group D. The wet weight of triceps muscle of calf and nerve electrophysiologic monitoring showed no statistical difference between Group A and Group C, but statistical difference was found between Groups A and B and Groups B and     

甲壳质套管桥接周围神经长度极限的研究

目的 通过采用不同间隙套接修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究,探讨甲壳质套管桥接修复周围神经损伤的长度极限.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠24只,于大鼠右侧坐骨神经分叉处以上5 mm建立坐骨神经离断伤模型,部分切除坐骨神经后使用甲壳质套管桥接修复,使神经断端间留有2、5、8和10 mm间隙.8周后常规锇酸染色,镜下观察套管远端有髓神经纤维数目、轴突平均面积、髓鞘平均厚度及腓肠肌平均湿重,并进行定量组织学分析.结果 术后8周显示2 mm小间隙组神经纤维已有80%再生,再生效果最佳,与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.01).随着间隙距离逐渐增加,神经纤维再生效果逐渐变差;5 mm间隙组再生约60%,效果优于8 mm间隙组(P＜0.01);8 mm间隙组再生约20%,优于10 mm间隙组(P＜0.01);10 mm间隙组只有1%有髓神经纤维成功长入远端,肌肉湿重降至正常的42.9%.结论 使用甲壳质套管桥接修复大鼠坐骨神经损伤时,2 mm左右小间隙套接修复效果最佳,5 mm间隙是修复后周围神经功能得到恢复的极限间隙,10 mm是神经单靠趋化性、营养作用再生的最大间隙.